LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI PERTANIAN “Pengecetan Gram dan Pengujian KOH pada Bakteri
NAMA
!
LA O"E #IRMAN
$TAMBUK $TAMBUK
!
"% B% %& '()
KELA$
!
B
PROGRAM $TU"I AGROTEKNOLOGI *URU$AN AGROTEKNOLOGI #AKULTA$ PERTANIAN UNI+ER$ITA$ UNI+ER$ITA$ HALU OLEO ,'%-
I. PEN"AHULUAN
A.
Latar Be/akang
Morfologi bakteri dapat diamati dengan cara membuat preparat mikroskopik dan untuk tujuan tertentu, preparat mikroskopik harus diwarnai. Preparat mikroskopik ada dua macam macam yaitu yaitu prepar preparat at basah basah dan prepar preparat at kering kering.. Prepara Preparatt basah basah yaitu yaitu preparat yang digunakan untuk mengamati jasad renik yang masih hidup dengan menggunakan cairan tertentu. Preparat kering dibuat melalui proses pewarnaan, yaitu untuk untuk mengam mengamati ati mikrob mikrobaa yang yang telah telah diwarn diwarnai ai dengan dengan zat kimia kimia terten tertentu tu yang biasanya berhubungan dengan sifat mikroba tersebut. Bebe Bebera rapa pa cara cara pewa pewarn rnaa aan n atau atau peng pengec ecet etan an yang ang perl perlu u dike diketa tahu huii dala dalam m mengam mengamati ati morfol morfologi ogi terutam terutamaa bakteri bakteri adalah adalah pewarn pewarnaan aan sederh sederhana ana,, pewarn pewarnaan aan gram, pewarnaan acid fast atau pewarnaan negatif. Sebelum melakukan pewarnaan dilakukan pembuatan olesan (smear dan fiksasi pada bakteri yang akan di amati. !leh karena itu, itu, pada praktikum ini akan mengamati mengamati pengecetan pengecetan (pewarnaan (pewarnaan gram dan pengujian "!# pada bakteri. B. Tujuan dan Kegunaan
$ujuan dari praktikum ini yaitu untuk melihat bentuk bakteri dan mempelajari cara pewarnaan. "egunaa "egunaan n dari dari prakti praktikum kum ini yaitu yaitu agar agar prakti praktikan kan dapat dapat memaham memahamii bentuk bentuk bakteri dan cara pewarnaan.
II. TIN*AUAN PU$TAKA PU$TAKA
Praktikum persiapan pembuatan apusan dan teknik pewarnaan gram sangat penting dilakukan karena untuk pengamatan biakan dari koloni mikroba dan biakan jamur dapat dilakukan dengan mudah dan baik. Pewarnaan ini bertujuan untuk memberikan warna pada bakteri pada akhirnya dapat diidentifikasi dengan mudah. Selain itu, ada endospora yang bisa diwarnai. %ndospora adalah organisme yang dibentuk dalam kondisi yang stres karena kurang nutrisi, yang memiliki kemungkinan untuk tetap berlanjut di lingkungan sampai kondisi menjadi baik (Pelczar (Pelczar dan &han, '). *at warna adalah senyawa kimia berupa garam+garam yang salah satu ionnya berwarna. aram terdiri dari ion bermuatan positif dan ion bermuatan negatif. Senyawa Senyawa+se +senya nyawa wa kimia kimia ini bergun bergunaa untuk untuk membeda membedakan kan bakteri bakteri+ba +bakte kteri ri karena karena reaksinya dengan sel bakeri akan memberikan warna berbeda. Perbedaan inilah yang digunakan digunakan sebagai sebagai dasar pewarnaan pewarnaan bakteri. bakteri. Sel+sel Sel+sel warna dapat dibagi menjadi dua golongan yaitu asam dan basa. &ontoh zat warna basa adalah methylen blue, safranin, netral netral red, red, dan lain+l lain+lain ain.. Sedangk Sedangkan an anionny anionnyaa pada umumny umumnyaa adalah adalah &l+, S!- +, &#&!!+, &!!# &!!#&! &!!. !. *at *at warn warnaa asam asam umum umumny nyaa memp mempun unya yaii sifa sifatt dapa dapatt bersenyawa lebih cepat dengan bagian sitoplasma sel sedangkan zat warna basa mudah bereaksi dengan bagian+bagian inti sel (Sugiarti, '/. Bakteri gram negatif memiliki lapisan dinding sel. 0apisan terluar yaitu lipoposakarida (lipid kemungkinan tercuci oleh alkohol, sehingga pada saat diwarnai
dengan safranin akan berwarna merah. Bakteri gram positif memiliki selapis dinding sel berupa peptidoglikan yang tebal. Setelah pewarnaan dengan kristal 1iolet, pori+ pori dinding sel menyempit akibat dekolorisasi oleh alkohol sehingga dinding sel tetap menahan warna biru (2itria, '/. Pewarnaan khusus merupakan metode pewarnaan untuk mewarnai struktur khusus atau tertentu dari bakteri seperti bagian spora, kapsul, flagel dan sebagainya. &ont &ontoh oh pewa pewarn rnaa aan n khus khusus us yait yaitu u Pewa Pewarn rnaa aan n %ndo %ndosp spor oraa 3nggot nggotaa dari dari genus genus Clostridium, Desulfomaculatum, Desulfomaculatum, da d an Bacillus adalah adalah bakter bakterii yang mempro memproduks duksii endospora dalam siklus hidupnya. %ndospora merupakan bentuk dorman dari sel 1egetat 1egetatif, if, sehing sehingga ga metabol metabolism ismeny enyaa bersif bersifat at inakti inaktiff dan mampu mampu bertaha bertahan n dalam dalam tekanan fisik dan kimia seperti panas, kering, dingin, radiasi, dan bahan kimia. $ujuan dilakuk dilakukanny annyaa pewarn pewarnaan aan endospo endospora ra adalah adalah membeda membedakan kan endospo endospora ra dengan dengan sel 1egetatif, sehingga pembedaannya tampak jelas. %ndospora tetap dapat dilihat di bawah mikroskop meskipun tanpa pewarnaan dan tampak sebagai bulatan transparan dan sangat sangat refrak refraktil til.. 4amun 4amun jika jika dengan dengan pewarn pewarnaan aan sederh sederhana, ana, endospo endospora ra sulit sulit dibedakan dengan badan inklusi (3ditya, '5.
III. METO"E PRAKTIKUM
A. Tempat dan 0aktu 0aktu
Prakti Praktikum kum ini bertem bertempat pat di labora laborator torium ium 3grote 3groteknol knologi ogi 6nit 6nit Botekno Boteknolog logii 2akultas Pertanian, 6ni1ersitas #alu !leo pada hari 7abu, 8 4o1ember '5-, pukul 58. 9:$3 sampai selesai. B. A/at A/at dan dan Ba1 Ba1an an 3lat yang digunakan pada praktikum ini adalah lampu spritus, mikroskop,
kaca preparat;benda, jarum ose, dan pipet. Bahan yang digunakan yaitu biakan murni, larutan "!# <, alkohol dan isolate 3$ = '5-, 3$ B '5-, 3$ 3 '5-, 3$ '5, 3$ & '5-, 3$ & '5-, ralstonia. 2. Pr34edur Praktikum
Prosedur praktikum adalah sebagai berikut > 5. Mengam Mengambil bil satu satu ose biakan Bacillu Bacilluss dan mencam mencampur purkan kan dengan dengan ' tetes tetes larutan larutan "!# < di atas gelas objek. '. Meng Mengad aduk uk secar secaraa merat merataa deng dengan an jaru jarum m ose, ose, menar menarik ik jarum jarum ose ose ke atas gelas gelas objek dan mengamati pembentukan lendir. ?ika terbentuk lendir mengindikasikan bakteri gram+negatif, jika tidak berlendir mengindikasikan bakteri gram+positif. gram+positif. . Melakukan Melakukan hal yang yang sama (prosedur (prosedur 5 dan dan ' untuk isolat isolat+isol +isolat at bakteri bakteri lainnya. lainnya.
I+. HA$IL "AN PEMBAHA$AN
A. Ha4i/
#asil dari pengamatan pada praktikum ini dapat da pat di lihat sebagai berikut>
4 o 5. '. . -. 8. @.
"ode :solat 3$ = '53$ B '53$ 3 '53$ '5 3$ & '5730S$!4:3
#asil Pengamatan 6ji "!# 7eaksi ram Bakteri ram Positif 4egatif Positif 4egatif Positif 4egatif Positif 4egatif Positif 4egatif Positif 4egatif
"eterangan Berlendir Berlendir Berlendir Berlendir Berlendir Berlendir
A. Pem5 Pem5a1 a1a4 a4an an
*at warna adalah senyawa kimia berupa garam+garam yang salah satu ionnya berwarna. aram terdiri dari ion bermuatan positif dan ion bermuatan negatif. Senyawa Senyawa+se +senya nyawa wa kimia kimia ini bergun bergunaa untuk untuk membeda membedakan kan bakteri bakteri+ba +bakte kteri ri karena karena reaksinya dengan sel bakeri akan memberikan warna berbeda. Perbedaan inilah yang digunakan digunakan sebagai sebagai dasar pewarnaan pewarnaan bakteri. bakteri. Sel+sel Sel+sel warna dapat dibagi menjadi dua golongan yaitu asam dan basa. ?ika warna terletak pada muatan positif dari zat warna, maka disebut zat warna basa. ?ika warna terdapat pada ion negatif, maka disebut zat warna asam. &ontoh zat warna basa adalah methylen blue, safranin, netral red, dan lain+lain. Pewarnaan Pewarnaan bakteri bakteri dipengaruhi dipengaruhi oleh faktor+fakt faktor+faktor or seperti seperti fiksasi, fiksasi, peluntur peluntur warna, substrat, intensifikasi pewarnaan, dan penggunaan zat warna penutup. Pada bakteri gram positif menunjukkan warna biru ungu dan bakteri gram negatif berwarna merah. =alam praktikum ini digunakan salah satu pewarnanya yaitu safranin yang
sesuai teori bersifat basa sehingga lebih mudah bersenyawa atau bereaksi dengan bagian+bagian inti sel bakteri. Berdasarkan hasil pengamatan yang terdapat bakteri Bacillus pada biakan murni yang terdapat dalam tanah. Bakteri tersebut tersebut dalam pengamatan uji "!# dapat dilihat dari setiap kode isolat 3$ = '5-, 3$ B '5-, 3$ 3 '5-, 3$ '5, 3$ & '5- dan 7alstonia semua mempunyaireaksi gram positif dan berlendiryang berarti bahwa bakteri ini bersifat gran negatif. #al ini disebabkan karena dinding sel yang tipis sehingga bocor dan tubuh bakteri keluar berbentuk proten sehingga membentuk lendir.
+. PENUTUP
A. Ke4impu/an
Berdasarkan hasil pembahasan di atas, yang terdapat bakteri Bacillus pada biakan murni yang terdapat terdapat dalam tanah. Bakteri tersebut dalam pengamatan uji "!# dapat dilihat dilihat dari setiap kode isolat 3$ = '5-, 3$ B '5-, 3$ 3 '5-, 3$ '5,
3$ & '5- dan 7alstonia semua mempunyaireaksi gram positif dan berlendiryang berarti bahwa bakteri ini bersifat gran negatif. #al ini disebabkan karena dinding sel yang yang tipis tipis sehing sehingga ga bocor bocor dan tubuh tubuh bakteri bakteri keluar keluar berbent berbentuk uk proten proten sehing sehingga ga membent membentuk uk lendir lendir juga juga dapat dapat disimp disimpulka ulkan n bahwa bahwa semua semua kode kode isolat isolat mempuny mempunyai ai reaksi gram positif dan berlendir yang berarti bakteri tersebut bakteri gram negatif. B. $aran
Saran yang dapat saya uraikan dalam praktikum ini agar kedepannya bisa lebih baik lagi dan hati+hati lagi dalam melakukan pengujian "!# pada bakteri.
"A#TAR PU$TAKA
3di 3ditya, tya, Mush Mushof offfa. '5 '5.. $ekni knik Pewa Pewarrnaan naan Bakt Bakter erii. http>;;mushoffaditya. blogspot.com;'5;5;teknik+pewarnaan+bakteri.html. =iakses - 4o1ember '5-.. '5-
2itr 2itriia, Bay Bayu. '/ '/.. Pewa Pewarn rnaa aan n ram ram (r (ram pos positi itif dan dan ram ram 4ega 4egattif. f. http>;;biobakteri.wordpress.com;'/;@;);)+pewarnaan+gram+gram+positif+ dan+gram+negatif. =i akses 8 4o1ember '5-. Pelczar, M. ?., &han, %.&.S. '). %lements of Microbiology. Mc raw #ill Book &ompany. 4ew Aork. Sugiarti. '/. Bakteri ram dan Pewarnaannya. Pewarnaann ya. http>;;rudyregobiz.wordpress.com; bakteri+gram+dan+pewarnaannya+';. =i akses 8 4o1ember '5-.
