MICROORGANISMOS AMILASAS.

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

 TECNOLOGÍA  TECNOL OGÍA ENZIMÁTICA ENZIMÁTICA

EVALUACIÓN DE LA CAPACIDAD DEGRADADORA DEGRADADO RA DE ALMIDÓN POR  MICROORGANISMOS DEL SUELO PRESENTADO POR:  Angie

Loza Calderón  Fann S!"a#i"ona Vil"a  Ana$% Illane% &!i%'e  Li%e#( Al)arez Valdez DOCENTE:

 Juan José Pauro Pauro Rou! Rou!

*NDICE GENERAL

RESUMEN++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++ , A-STRACT+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++, I+

INTRODUCCIÓN++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++.

II+

MATERIALES / M0TODOS++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++1 2+3

MATERIALES"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""#

2+3+3

De la4ora#orio"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""#

2+3+2

De "a5'o""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""#

2+3+6

De e%"ri#orio""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""#

$

La'i"ero""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""#

$

C!aderno de a'!n#e%"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""#

$

Regla""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""#

$

L7'iz""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""#

2+2

M8TODOLOG*A""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""#

III+

RESULTADOS+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++39

IV+

DISCUSIÓN+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++33

V+

CONCLUSIONES++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++32

VI+

RECOMENDACIONES++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++32

VII+

REFERENCIA -I-LIOGRFICA++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++32

%

*NDICE DE CUADROS

C!adro 3+ O4%er)a"i;n de enzi5a%+ """""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""# C!adro 2+ Rea""ion de Mi"(aele% Men#en+ """"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""#

&


Fig!ra 3+ Medi"i;n de la )i%#a+"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""'

(

RESUMEN S! ana)*+, )a -ro.u//*,n !n+*012*/a .! 0*/roor3an*s0os .!) su!)o a*s)a.os !n a3ar 0a4+ u2*)*+an.o !) )u3o) /o0o /o0o *n.*/a.or .! )a -r!s!n/*a .! a0*)asas" Co0o 5u!n2! .! a)0*.,n s! u2*)*+, )a 0a*/!na .*su!)2a !n a3ar a3ar -ara o6s!r7ars! )u!3o .!) /u)2*7o -or -un2os !) /r!/*0*!n2o .! /o)on*as u! -or 0!.*o .! )a 5or0a/*,n .! una 8a)o a)r!.!.or !7*.!n/*a6a )a -r!s!n/*a .! 0*/roor3an*s0os .!3ra.a.or!s .! a0*)asas" Pala4ra% "la)e:

A-STRACT =e >ord%:

9

I+

INTRODUCCIÓN

El ali5en#o e% 'ar#e del e"o%i%#e5a 5i"ro4iano  e% !no de lo% ?a"#ore% 57% i5'or#an#e% @!e de#er5inan la "o5!nidad @!e %e de%arrolla %o4re l B3+ Den#ro del %!%#ra#o lo% "ar4o(idra#o% de%e5'ean !n 'a'el de#er5inan#e B2+ La 5odi?i"a"ión del %!%#ra#o #a54in i5'li"a "a54iar la na#!raleza de lo% n!#rien#e% @!e !#ilizan lo% 5i"roorgani%5o%+ En el engranae del 5e#a4oli%5o "el!lar lo% 5i"roorgani%5o% li4eran al 5edio 'ar#e de %! 4a#er$a enzi57#i"a 'ara !#ilizar lo% %!%#ra#o% di%'oni4le% B6+ En#re la% eoenzi5a% @!e %e li4eran %e en"!en#ran la% a5ila%a% BH+E%#a% de%e5'ean !n 'a'el ?!nda5en#al en la !#iliza"ión del al5idón "o5o ?!en#e energ#i"a B,+ La% enzi5a% %on 'ro#e$na% @!e a"#an "o5o a"eleradore% de la% rea""ione% @!$5i"a% de %$n#e%i%  degrada"ión de "o5'!e%#o% %#a% %e en"!en#ran en #odo% lo% %ere% )i)o%  %on 'ieza% e%en"iale% en %! ?!n"iona5ien#o+ De%de (a"e !na% d"ada% %e di%'one de enzi5a% rela#i)a5en#e '!ra% e#ra$da% ind!%#rial5en#e de 4a"#eria% (ongo% 'lan#a%  ani5ale% "on !na gran )ariedad de a"#i)idade% B.+La% a5ila%a% %on enzi5a% @!e "a#alizan la% rea""ione% (idrol$#i"a% del al5idón dando origen a di)er%o% 'rod!"#o% @!e 'o%een !na gran rele)an"ia 'ara alg!na% o'era"ione%  'ro"e%o% ind!%#riale%+ La% a5ila%a% %on "o5n5en#e (allada% en ani5ale%  'lan#a%J %in e54argo 'ara ?ine% ind!%#riale% la% 57% !#ilizada% %on a@!ella% de origen 4a"#eriano o ?ngi"o+ La% a5ila%a% 'o%een !na gran i5'or#an"ia en la 'rod!""ión de ali5en#o%  de 4io"o54!%#i4le%+ Ta54in 're%en#an gran !#ilidad en la ind!%#ria #e#il+ Se (an !#ilizado% a5ila%a% 'ara la o4#en"ión de ara4e% ?r!"#o%ado%+ La  'rod!""ión de di"(a% enzi5a% %e (a (e"(o a 'ar#ir de -a"ill!% %' +Por lo an %e %ig!en 4!%"ando 5i"roorgani%5o% e%'e"$?i"o% @!e re'or#en 5eore% rendi5ien#o% 'ara o'#i5izar lo% 'ro"e%o% ind!%#riale% B1 La ?lora 5i"ro4iana en el %!elo '!ede #ener %! origen en el %!elo aire ag!a en el 5edio a54ien#e del al5a"n o en la ?a%e de 5ani'!la"ión  ela4ora"ión+ Lo% 5i"roorgani%5o% 're%en#e% en la (arina de 5a$z %on rela#i)a5en#e e%"a%o% 'ero !na )ez @!e (a %ido (idra#ada %e "rean "ondi"ione% de a"#i)idad a"!o%a ?a)ora4le% 'ara el "re"i5ien#o de 4a"#eria% 5o(o%  le)ad!ra%+ E%#o de#er5ina !n 'ro"e%o 57% "o5'leo 'ara o4#ener energ$a el "!al e%#7 de?inido 'or lo% 5i"roorgani%5o% a5ilol$#i"o%+ BK+ Por lo #an#o lo% o4e#i)o% de la 're%en#e in)e%#iga"ión ?!eron: Ai%lar e iden#i?i"ar  5i"roorgani%5o% 'rod!"#ore% de a5ila%a% a 'ar#ir de !na 5!e%#ra de #ierra (5eda en Agar 'a'a  e)al!ar la "a'a"idad degradadora de al5idón a #ra)% de la ?or5a"ión de lo% (alo% generado% 'or  e?e"#o de la% a5ila%a% @!e 'o%een e%#o% 5i"rorgani%5o%+

:

II+

MATERIALES / M0TODOS

II+3 MATERIALES II+3+3 De la4ora#orio $ In"!4adora $ -alanza $ E%#!?a $ Caldo n!#ri#i)o $ Ag!a de%#ilada $ Pla"a% Pe#ri $ Me"(ero $ T!4o% de en%ao $ A%a de %ie54ra $ A!#o"la)e II+3+2 De "a5'o $ M!e%#ra de #ierra $ E#ra"#o de 'a'a $ E#ra"#o de 5a$z II+3+6 De e%"ri#orio $ La'i"ero $ C!aderno de a'!n#e% $ Regla $ L7'iz II+2 M8TODOLOG*A 3+ Se !#ilizó al5idón e#ra$do de H99g de 'a'a re4anado%  "o"ido% en 295l de ag!a de%#ilada+ 2+ Se 'e%ó 9,.gL de agar agar+

Figura 1. Pe%ado de agar agar+ 6+ Se 'e%ó 39,gL de agar agar  %e dil!ó en 29 5l de ag!a de%#ilada+

#

Figura 2. Di%ol!"ión de agar+

(" Se lo lle)aron a la a!#o"la)e #odo% lo% 5a#eriale% @!e %er7n !#ilizado% 'ara el "!l#i)o+

Figura 3. Ma#eriale% li%#o% 'ara la e%#eriliza"ión en a!#o"la)e+ ,+ Se 'ro"edió "on la di%ol!"ión de #ierra 3g 'or 39 5l de ag!a de%#ilada+

'

Fig!ra H+ Dil!"ión de la 5!e%#ra de %!elo+ .+ Una )ez e%#erilizado% lo% 5a#eriale% en la a!#o"la)e %e 'ro"edió a )er#er el agar 'a'a en 'la"a% Pe#ri+

Figura 5. Ver#ido de agar 'a'a en 'la"a% Pe#ri+ 1+ /a geli?i"ado el agar 'a'a en la% 'la"a% Pe#ri %e e5'ezó "on la re%'e"#i)a %ie54ra !#ilizando 'ara ello !na 'la"a "on#rol  o#ra% do% 'ara el "!l#i)o+

;

Figura 7. C!l#i)o de 5!e%#ra de %!elo en agar 5a$z+ III.

RESULTADOS

En la e)al!a"ión del "re"i5ien#o de la% 4a"#eria% degradadora% del al5idón %e o4#!)o lo% %ig!ien#e% re%!l#ado%: En la e)al!a"ión de la% 4a"#eria% del %!elo %e54rada% en !n 5edio de "!l#i)o de agar 'a'a de%'!% de %er in"!4ada% a 61C d!ran#e !na %e5ana %e o4%er)ó la "a'a"idad (idrol$#i"a %o4re el al5idón+ E%#a %e de#er5inó e5'leando !na %ol!"ión de odo Bl!gol @!e ?!e )er#ida %o4re la% 'la"a% de5o%#r7ndo%e a%$ la 're%en"ia de la enzi5a a5ila%a 'or la ?or5a"ión de (alo% "laro% @!e no %e "olorea4an "on e%#e rea"#i)o e%#o "lara5en#e no% indi"a4a @!e e%#a% 4a"#eria% %i 're%en#a4an la "a'a"idad de degradar el al5idón+ E%#a "a'a"idad #a54in %e e)iden"ió "on la "o5'ara"ión "on la 'la"a "on#rol la "!al "on#en$a agar 'a'a 5a% no la %ie54ra "on 5i"roorgani%5o% del %!elo  're%en#a4a !na "olora"ión "o5'le#a "on el l!gol de4ido a %! "aren"ia de e%#o% 5i"roorgai%5o% BFig!ra + En la ?ig!ra N  %e '!ede o4%er)ar la ?or5a"ión de (alo 'rod!"ido %o4re el agar 'a'a el "!al indi"a @!e e%#a% 4a"#eria% 're%en#an enzi5a% a5ila%a% degradadora% de al5idón+

<=

Figura 1. A+ Pla"a "on#rol %in 're%en"ia de (alo%+ -  C+ Lo% "$r"!lo% roo% 5!e%#ran la ?or5a"ión de (alo% 'or degrada"ión de al5idón %e e)iden"ian de "olor "laro alrededor de la% "olonia% 4a"#eriana%+ IV.DISCUSIÓN En e%#a 'r7"#i"a %e de#er5inó @!e %i ei%#en 4a"#eria% "on la "a'a"idad de 'rod!"ir enzi5a% a5ila%a% %egn Pea#e no #oda% la% 4a"#eria% %in#e#izan enzi5a%+ Lo% 5i"roorgani%5o% re@!ieren de "ier#o%  e%'e"$?i"o% n!#rien#e% 'ara la 'rod!""ión de enzi5a%  e%#a% de%e5'ean !n 'a'el ?!nda5en#al en la !#iliza"ión del al5idón "o5o ?!en#e energ#i"a  n!#ri"ional 'ara e%#o% 5i"roorgani%5o%+ B,  Bacillus subtilis  e% !n 5i"roorgani%5o 'rod!"#or de a5ila%a% a 'ar#ir de al5idone% de 'a'a !"a 

arroz+ B Se realizaron e%#!dio% %o4re el rendi5ien#o de la a"#i)idad de a5ila%a de Thermoactinomyces thalpophillus en"on#rando a"#i)idad en %!%#ra#o% agr$"ola% "o5o arroz !"a "e4ada %orgo 'a'a  gela#inizado de 'a'a+ B39 V+ CONCLUSIONES Ai%lar e iden#i?i"ar 5i"roorgani%5o% 'rod!"#ore% de a5ila%a% a 'ar#ir de !na 5!e%#ra de #ierra (5eda en Agar 'a'a  e)iden"iar la "a'a"idad degradadora de al5idón a #ra)% de la ?or5a"ión de lo% (alo% generado% 'or e?e"#o de la% a5ila%a% @!e 'o%een e%#o% 5i"rorgani%5o%+

$ Se o4%er)ó el "re"i5ien#o de 5i"roorgani%5o% 'rod!"#ore% de a5ila%a% en Agar 'a'a+ $  No %e logró iden#i?i"ar a e%#o% 5i"roorgani%5o% 'rod!"#ore% de a5ila%a%+ $ Se logró e)iden"iar la "a'a"idad degradadora de al5idón 'or 5i"roorgani%5o% del %!elo  'or 5edio de la ?or5a"ión de (alo% alrededor de la% "olonia% 4a"#eriana%+ VI+RECOMENDACIONES $ Para el 'ro"e%o de "!l#i)o e% ne"e%ario "er"iorar%e de @!e lo% 5edio% de "!l#i)o no (aan %o4re'a%ado %! ?e"(a de )en"i5ien#o+

VII"

REFERENCIA -I-LIOGRFICA

3+ Ecology of Bateria. Hungate R.E. 3.2 T(e -a"#eria T(e P(%iolog o? Gro>#( '7g+ Vol+ IV+ C(a'#er 6+ '+ ,+ 2+ Volatile Fatty Acid Production in Quantitative Aspects of Ruminant igestion and !etabolism. Fran!e ". # Si$$%n& R.C. 36 '7g+ '+ 391+ 6+ "as biotecnolog#as$ desaf#os y promesas. Sa&&%n A. 3KH '7g+ '+ 33+ H+ An overvie% of the microbial &'amylase family. Re$$' N.S. Ni((aga$$a A. # Sa()a&i*a +.R.S. 299H+ '7g+ 3K2+

<<

,+ Advances in microbial amylases. ,an$e' A. Niga( ,. S%!!%- C.R. S%!!%- V.T. Sing D. # /%an R. 2000. 2999 '7g+ 63:36,+ .+ ,eate /. Prod!""ión de enzi5a% a 'ar#ir de 5i"roorgani%5o%+ en(imamicro. En l$neaQ 299K+ (##':enzi5a5i"ro+4log%'o#+"o5+ 1+ CASTRO C. ' %tr%& ' %tr%&. O4#en"ión de a5ila%a% ?ngi"a% a 'ar#ir de A%'ergill!% %'+ ai%lado de %e5illa% de len#ea%+ + En l$neaQ 299K+ (##':>>>+!#adeo+ed!+"oe%+ K+ !icrobiolog#a !oderna de los Alimentos. "a'. 2999+ + R. re)e&%)a L. ,riet% S. /iran$a N. /%ren% D. F-e!a&. Bios#ntesis de amilasa estracelular a partir de cepas de Bacillus subtilis. Colo54ia : %+n+ 39+ O%-% !%-. 36+ 33+ Varga& S. )elecci*n y evaluaci*n de bacterias del g+nero Bacillus productoras de amilasas en cultivo sumergido. UNMSM+ Li5a  Per : %+n+ 2932+ '7g+ 3,1 Te%i% de li"en"ia#!ra+

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