Materi Treponema Pallidum Sifilis adalah penyakit yang disebabkan oleh subspesies Treponema pallidum (ssp.) Pallidum. Istilah "aktivitas serologis" dipertimbangkan dalam menggambarkan sifilis, untuk menunjukkan tingkat antibodi terhadap Treponema pallidum ssp. Pallidum dalam darah manusia. Reaksi serologis positif palsu tidak jarang terjadi karena reaksi silang dengan penyakit bersamaan atau kesalahan teknis1-3. Sejak tahun 1990, ada kecenderungan meningkat pada kejadian sifilis yang didapat dan bawaan di negara-negara Eropa, terutama di Eropa Timur. Memang, kejadian sifilis telah meningkat di seluruh dunia, dan fenomena ini jelas terkait dengan pergaulan bebas seksual dan tujuan wisata seksual4. Kej adian sifilis di Latvia telah terjadi Terus menurun dalam beberapa tahun terakhir, namun tetap tinggi dibandingkan dengan negara maju lainnya. Sebagai infeksi sifilis dapat menghasilkan berbagai variabel pada manusia, tes laboratorium sering diperlukan untuk mendiagnosis infeksi secara pasti. Infeksi dimulai saat Treponema P allidum ssp Pallidum memasuki jaringan melalui Microabrasi dermal atau dengan penetrasi Mukosa utuh, biasanya menghasilkan satu Chancre di lokasi inokulasi. Yang utama Chancre berkembang setelah inkubasi rata-rata Jangka waktu 3 minggu Chancre biasanya sembuh secara spontan dalam 4-6 minggu, tapi mungkin begitu Masih dapat dilihat pada sekitar 1 5% pasien di Permulaan sifilis sekunder7. Dalam beberapa jam Setelah inokulasi, dan selama evolusi Tahap utama, Treponema pallidum ssp. Pallidum menyebar luas dan bisa masuk Di or gan manapun Manifestasinya sekunder Sifilis biasanya berkembang dalam waktu 12 minggu Infeksi awal Yang paling umum Manifestasi sifilis sekunder adalah Lesi mukokutan yang disebarluaskan. Itu Lesi sifilis sekunder berangsur-angsur sembuh Secara spontan dalam 12 minggu penampilan. Individu yang tidak diobati memasuki periode variable Infeksi laten, yang tidak bersifat klinis Manifestasi terbukti. Sifilis laten adalah Dibagi menjadi dua tahap: awal (high likelihood Kambuh) atau terlambat (kambuh tidak mungkin), berbasis Pada perkiraan durasi infeksi. Untuk Tahun pertama setelah infeksi, pasien berada Dianggap memiliki sifilis laten awal dan ke atas Sampai 25% pasien mungkin mengalami rekurensi Manifestasi sekunder8 . Sifilis laten akhir Didefinisikan sebagai infeksi asimtomatik untuk a Periode lebih dari satu tahun atau tidak diketahui lamanya. Tes serologis pada akhir laten Tahap positif, tapi t ransmisi seksualnya tidak sepertinya. Organisme bisa menumbuhkan aliran darah Sebentar-sebentar selama sifilis laten dan bias Menginfeksi janin selama kehamilan Skematis Diagram sifilis yang tidak diobati ditunjukkan pada Gambar 1.
Gambar 1 Riwayat alami sifilis yang tidak diobati
Penentuan stadium penyakit ini Penting, karena kepekaan dan Spesifisitas nilai diagnostik yang diterapkan Metode bervariasi sesuai dengan tahapan yang berbeda Dari penyakit dan prognosis dan hasilnya Pengobatan tergantung pada stadium penyakit9, 10. Treponema pallidum ssp. Pallidum Genom, yang diketahui berukuran kecil11, 12, adalah Dikonfirmasi oleh Genome Sequencing P roject Sebagai 1,14 Mb dan mengkodekan 1041 putatif P rotein13. Genom Treponema pallidum Urutan tidak mengungkapkan klasik yang jelas Faktor virulensi yang bisa dipertanggungjawabkan Tanda dan gejala sifilis14. tidak seperti Terkait spirochetes Treponema denticola15 dan Borrelia burgdorferi16, tidak ada sistem genetic Manipulasi Treponema pallidum belum Ada Karena kerapuhan luarnya Membran, manipulasi genetic Treponema pallidum mungkin terbukti tidak mungkin. Ekspresi heterogen pada organisme terkait seperti Treponema denticola mungkin paling banyak Cara praktis untuk mempelajari Treponema pallidum Gen dan memajukan pemahaman kita tentang ini Organisme misterius14
Spirochaete Treponema pallidum ssp. Pallidum Milik keluarga bakteri berbentuk spiral Spirochaetaceae (spirochaetes), dan ada Terkait dengan treponema patogen lainnya itu Menyebabkan penyakit nonkelamin. Treponema itu Subspesies pallidum hampir identic Berdasarkan morfologi mereka, antigenic Properti, dan homologi DNA; meskipun Bukti lebih baru menunjukkan bahwa mungkin ada Menjadi tanda tangan molekuler daripada yang bisa digunakan Membedakan subspesies17. Treponema Pallidum
tidak memiliki lipopolisakarida Endotoksin, yang ditemukan di bagian luar Membran banyak bakteri gram negative Yang menyebabkan demam dan pembengkakan. Namun, Treponema pallidum memang menghasilkan angka Lipoprotein yang bisa me nyebabkan ekspresi Mediator inflamasi melalui tol Reseptor 2 (TLR2) pengakuan18. Antibodi Biasanya diproduksi baik melawan Treponema Pallidum ssp Pallidum atau bagiannya komponen. Antigen dasar, faktor penentu Treponema pallidum ssp. Pallidum adalah Komponen dari lapisan triple di luar dinding dan Dalam kasus terpisah berbentuk kapsul Mucopolysaccharides coupler Yang paling Menyelidiki antigen protein Treponema Pallidum ssp Pallidum, yang mengandung a Fraksi diketahui umum terjadi pada keduanya - Treponema patogenik dan saprofitik, dan Antibodi dinaikkan melawan antigen ini. Mereka juga mengandung pecahan yang spesifik Hanya untuk treponema patogenik. Komponen dari Treponema pallidum ssp. Protein pallidum Memiliki imunogenisitas tinggi. Jahat Treponema pallidum ssp. Pallidum menginduksi Sel endotel berbudaya untuk mengekspresikan Molekul adhesi ICAM-1, VCAM-1 dan Eselection. Ini juga diaktifkan oleh 47-kDa T. pallidum lipoprotein TpN4719. Dibandingkan dengan Kekayaan informasi tentang diseasec ausing Mekanisme banyak bakteri Patogen, sedikit yang diketahui tentang bagaimana T. Pallidum menyebabkan manifestasi protean sipilis. Dengan tidak adanya sitotoksin dan lainnya Faktor virulensi yang diketahui, peradangan dan Selanjutnya respon imun adaptif terhadap Treponema pallidum ssp. Pallidum mungkin Menyebabkan karakteristik kerusakan jaringan I nfeksi sifilis Treponema Spesifik Pallidum ssp Molekul pallidum yang dimilikinya Telah ditunjukkan untuk mer angsang sel dendritic Lipoprotein TpN17 dan TnN47, tidak Terletak di permukaan. Inisiasi dari Lipoprotein sinyal sel dendritik tidak Kemungkinan terjadi sampai organisme itu berada Dirusak, memperlihatkan lipoprotein ke Reseptor TLR2 Teori ini mendukung Pengamatan bahwa waktu yang lebih lama diperlukan untuk Treponema pallidum ssp. Pallidum untuk merangsang Sel dendritik1. Penundaan sel dendritic Pematangan, mengakibatkan inflamasi lebih lambat Respon, bisa memungkinkan diseminasi dini Dari Treponema pallidum ssp. Pallidum, yang mana Memberi kesempatan kepada organisme untuk menembus Organ dan jaringan sebelum aktif Respon inflamasi telah dipasang oleh sang penyelenggara.
Investigasi bakteriologis dalam kasus Syphilis tidak m ungkin dilakukan karena Treponema Pallidum ssp Pallidum tidak tumbuh Media buatan Dua metode dasarnya adalah Diterapkan dalam diagnosis rutin sifilis - Mikroskop (eksudat dari ulkus, erosi atau Tanda baca yang diperoleh dari kelenjar getah bening) menggunakan Bidang visual gelap dan serologi. Mikroskopi Menunjukkan Treponema pallidum ssp. Pallidum di semua Lesi awal dan akhir, tapi tidak dalam laten sipilis. Pada manusia, infeksi dengan Treponema Pallidum ssp Hasil pallidum cepat Produksi dua jenis antibodi (nonspesifik Dan spesifik) di akhir Masa inkubasi atau selama minggu pertama setelahnya Onset ulcus durum. Metode serologisnya Untuk diagnosis sifilis diklasifikasikan sebagai Tidak spesifik (non-treponemal) dan spesifik (Treponemal). Dalam tes non-spesifik, nontreponemal Antigen disebut cardiolipin, yaitu Diambil dari otot jantung sapi yang digunakan. Ini adalah tes flokulasi, dimana Membentuk kompleks "antigen + antibodi" Terdiri dari serpih. Di Latvia yang tidak spesifik Tes, kebanyakan tes Rapid Plasma Reagin (RPR) D igunakan Tes nontreponemal banyak digunakan Untuk skrining, me ski tidak bisa diandalkan Sendiri untuk me ngkonfirmasi diagnosis sifilis. Menurut pedoman Eropa, nontreponemal Tes digunakan untuk pemantauan Aktivitas serologis dan pengobatan Sifilis9.
Antibodi terhadap antigen spesifik Treponema P allidum ssp Pallidum dalam serum darah dan / atau Plasma terdeteksi dengan tes spesifik. Sistem uji c oba yang tersedia secara komersial digunakan Tenggiri Nichol TpN15, TpN17 dan TpN47 Antigen rekombinan dan peptida sintetis TmpA. Antigen rekombinan lainnya seperti Tp0453, Tp92 dan Gpd juga bisa digunakan20, Meskipun sistem uji semacam itu tidak Tersedia secara komersial. Di Latvia, TPHA (Treponema pallidum hemaglutination test) Dan ELISA (Enzim-linked immunosorbent Assay) digunakan baru-baru ini. Yang disebutkan di atas Tes treponema spesifik digunakan untuk mengkonfirmasi diagnosis sifilis dan diferensial Diagnostik9, 21. Secara historis, untuk mengkonfirmasi penyembuhan sifilis, di Selain tes non-treponemal, reaksinya Reaksi pelengkap mengikat (Wasserman) Dan Imobilisasi Treponema pallidum Reaksi (TPIR) atau uji Nelson, keduanya Tes spesifik, digunakan Saat ini tes ini Tidak digunakan secara rutin, meski TPIR itu Diterapkan di laboratorium khusus di Latvia. Nilai diagnostik antibodi non-spesifik Terbatas: pertama, pada awal penyakit primer, Antibodi antilipoidal mungkin tidak dikembangkan Dan pada akhir sifilis (laten dan tersier), naik Sampai 30% individu mungkin kekurangan Antibodi antilipoid dan kedua, nontreponemal Tes sangat sensitive Sifilis sekunder, namun dalam bentuk lain Sensitivitas tidak mencukupi (Tabel 1)10. Oleh karena itu, sangat penting untuk mengetahui dengan sangat baik Tes sensitif dalam memantau serologis Aktivitas dan kemanjuran pengobatan dalam kasus Dari sifilis laten. (Ozoli, Katkovska and Bobojeda, 2009)
Sifilis adalah infeksi menular seksual yang dapat disembuhkan yang disebabkan oleh bakteri Treponema Pallidum; Infeksi juga bisa ditularkan dari ibu ke janinnya saat hamil. Diagnosis sifilis didasarkan pada evaluasi klinis, deteksi organisme penyebab, Dan konfirmasi penyakitnya dengan serodiagnosis. T. pallidum tidak dapat dibudidayakan di Laboratorium, namun dapat diidentifikasi pada lesi dengan menggunakan mikroskop medan gelap atau fluoresensi atau oleh Teknik molekuler. Sebagian besar individu yang terinfeksi tidak memiliki gejala atau mengalami transien Lesi dan oleh karena itu tes serologis harus digunakan untuk menyaring infeksi.
Serologi masih merupakan metode yang paling andal untuk diagnosis laboratorium sifilis, terlepas dari Tahap infeksi. Tes serologis dibagi menjadi tes nontreponemal dan treponemal, Tidak sendirian saja sudah cukup untuk didiagnosis. Diagnosis serologis konvensional menggunakan dua tahap Pendekatan, skrining pertama dengan metode nontreponemal, dan kemudian menggunakan tes konfirmasi Yang menggunakan metode berbasis antigen treponemal untuk mengkonfirmasi hasil tes skrining positif. Uji nontreponemal juga berguna untuk memantau respons pengobatan. Tes serologis pertama untuk sifilis adalah tes Wassermann yang dikembangkan pada tahun 1906. Itu adalah a Tes fiksasi komplemen dan antigen yang digunakan adalah ekstrak hati dari bayi baru lahir yang Te lah meninggal karena sifilis kongenital. Landsteiner menunjukkan bahwa jaringan lain, seperti daging sapi Hati yang diekstrak dalam alkohol, bisa digunakan sama baiknya dengan antigen. Kolesterol dan lesitin Ditambahkan untuk meningkatkan sensitivitas antigen. Pada tahun 1922, Kahn memperkenalkan flokulasi Tes tanpa komplemen yang bisa dibaca makroskopis dalam beberapa jam. Pada tahun 1941, Pangborn diisolasi
dari jantung daging sapi komponen antigenik aktif cardiolipin. Yang murni Fosfolipid cardiolipin dikombinasikan dengan lesitin dan kolesterol bisa distandarisasi Secara kimiawi dan serologis, memastikan reproduktifitas hasil tes yang lebih baik baik di dalam maupun di dalam Antara laboratorium. Pada tahun 1946, Harris, Rosenberg dan Riedel me ngembangkan Penyakit Veneral Laboratorium Penelitian (VDRL) dan Rapid Plasma regain (RPR) dikembangkan pada tahun 1957, Keduanya masih digunakan saat ini. Penambahan kolin klorida dan EDTA ke VDRL Antigen meningkatkan reaktivitas uji dan menstabilkan suspensi antigen (Larsen et Al., 1995). T. pallidum diidentifikasi pada tahun 1905, dan tes pertama mengidentifikasi antibodi treponemal Dikembangkan pada tahun 1949 oleh Nelson dan Meyer. Uji imobilisasi T. pallidum (TPI) menggunakan T.pallidum (strain Nichols) yang tumbuh pada testis kelinci sebagai antigen dan didasarkan pada kemampuan antibodi pasien dan pelengkap untuk melumpuhkan treponema hidup, seperti yang diamati oleh darkfield. mikroskopi. Uji antibodi treponemal fluorescent (FTA) dikembangkan pada tahun 1957, Yang kemudian diperbaiki dengan prosedur penyerapan (FTA-ABS) pada tahun 1964 (Larsen et al.,1995).
Veldkamp dan Visser mengenali potensi tes imunosorben enzim T.pallidum yang otomatis pada tahun 1970an (Veldkamp & Visser, 1975). Sejak itu, beberapa AMDAL menggunakan antigen T.pallidum asli atau rekombinan telah dikembangkan dan banyak tersedia secara komersial. EIA yang dilaporkan dalam literatur telah menggunakan pendekatan yang berbeda untuk menentukan sensitivitas dan spesifisitas. Beberapa penelitian menggunakan panel spesimen positif anti-treponemal dari pasien yang stadium penyakit dan status perawatannya diketahui dan serum negatif dari donor darah kesehatan. Penelitian lain telah mengevaluasi kinerja tes baru dengan membandingkan hasil tes laboratorial konvensional yang digunakan untuk diagnosis sifilis. Secara umum, AMDAL menghadirkan sensitivitas dan spesifisitas yang lebih tinggi. Captia Syphilis G (Trinity Biotech, mantan Centocor) adalah tes tidak langsung untuk deteksi Antibodi treponemal. Tes ini menggunakan pelat microtitration atau strip yang dilapisi dengan antigen T.pallidum sonicated. Antibodi treponema IgG manusia yang bereaksi terdeteksi oleh antibodi monoklonal IgG antihuman yang diberi label dengan streptavidin berlabel biotin dan lobak kuda (HRP) dan diindikasikan oleh substrat tetramethylbenzidine (TMB). Sensitivitasnya berkisar antara 92,4% sampai 100% dan spesifisitas dari 98,2% sampai 99,3% (Halling et al., 1 999; Silletti, 1995; Young et al., 1989; Young et al., 1998). Captia yang lebih baru pilih Syph-G EIA (Trinity Biotech) menggunakan antibodi monoklonal anti-human IgG berlabel HRP sebagai a Konjugat bukan sistem biotin-streptavidin memiliki sensitivitas dan spesifisitas masing-masing 99,0% dan 98,0% (Woznicova & Valisova, 2007). Sifilis Enzygnost (Dade Behring) adalah satu langkah EIA kompetitif dengan antigen ekstrak detergen T.pallidum Nichols. Antibodi spesifik T.pallidum, IgG dan / atau IgM yang terkandung dalam sampel dan konjugasi (antibodi anti-Tp berlabel HRP) bersaing untuk tempat pengikatan antigen T.pallidum yang dilapisi ke pelat mikrotitrasi. Reaksi diwahyukan dengan substrat TMB. Intensitas warna resultan berbanding terbalik dengan konsentrasi antibodi anti-treponemal pada sampel. Enzygnost Syphilis menunjukkan sensitivitas yang bervariasi dari 98,2% sampai 100% dan spesifisitas dari 96,8% sampai
100% (Cole et al., 2007; Gutierrez et al., 2000; Maidment et al., 1998; Marangoni Antonella et al., 2009; Viriyataveekul Et al., 2006). Bioelisa Sifilis (Biokit) adalah uji kompetitif dengan menggunakan seluruh antigen T.pallidum untuk melapisi Baik dari piring Antibodi treponemal pada serum uji bersaing dengan HRP berlabel Antibodi anti-treponemal manusia. Dalam pengujian ini, pengikatan konjugat ke spesifik Antigen, ditentukan dengan mengukur intensitas warna substrat (TMB), berbanding terbalik Sebanding dengan jumlah antibodi spesifik dalam sampel uji. Dibandingkan dengan FTAABS Dan TPHA, uji ini memiliki sensitivitas 99,5% dan spesifisitas 99,4% (Ebel et al., 1998). Versi lain dari uji ini, Bioelisa Syphilis 3.0 (Biokit) adalah rekombinan dua langkah EIA menggunakan antigen rekombinan (TpN15 dan TpN17) untuk melapisi fasa padat dan HRP Antigen rekombinan terkonjugasi untuk mendeteksi IgG dan IgM anti-treponemal. Pengujian ini Menunjukkan sensitivitas 97,4%, dan spesifisitas 100%. Namun, tingkat deteksi yang lebih rendah pun Diamati pada sampel dari pasien dengan sifilis primer yang tidak diobati (Cole et al., 2007). ICE Syphilis (Murex) adalah sandwich r ekombinan dua langkah AMDAL menggunakan tiga T. pallidum Antigen rekombinan (TpN15, TpN17 dan TpN47) dilapisi ke sumur pelat microtiter Strip; Sumur juga dilapisi dengan anti-human immunoglobulin G (IgG) dan M (IgM). Jika Antibodi terhadap T.pallidum hadir dalam spesimen (serum atau plasma) yang ditangkap Antigen di piring Sebagai tambahan, proporsi IgG dan IgM total spesimen yang diuji Ditangkap oleh antibodi anti-manusia. Komponen anti-treponemal yang tert angkap Antibodi terdeteksi oleh antigen rekombinan (TpN15, TpN17 dan TpN47) yang diberi label HRP. Intensitas substrat enzim TMB berbanding lurus dengan konsentrasi Antibodi yang bereaksi dengan antigen T.pallidum rekombinan. Kisaran sensitivitas dan Spesifisitas untuk uji Sifilis ICE masing-masing adalah 98,2% sampai 100% dan 99,2% sampai 100% (Cole et al., 2007; Lam et al., 2010; Viriyataveekul et al., 2006; Young et al., 1998). Penelitian lain untuk Evaluasi Sifilis ICE (Murex) sebagai tes skrining sifilis, sensitivitas pada primer Sifilis adalah 84% (48/50) (Manavi & McMillan, 2007) dan 77,2% (61/79) (Young et al., 2 009).
Trep-Chek (Phoenix) adalah tes tidak langsung untuk mendeteksi antibodi anti-treponemal. Itu Sumur microplate dilapisi dengan antigen treponemal rekombinan tertentu. Anti-treponemal Antibodi yang ada dalam sampel serum berikatan dengan antigen immobilisasi. Anti manusia Antibodi IgG berlabel HRP dan substrat TMB digunakan untuk mendeteksi antitreponemal spesifik Antibodi hadir dalam sampel pasien. B ila dibandingkan dengan hasil Uji serologis konvenional, sensitivitas dan spesifisitas untuk Trep-chek adalah 85,3% dan 95,6%, masing-masing (Tsang et al., 2007); Studi lain menemukan sensitivitas 98,9% dan spesifisitas Dari 95,6% dibandingkan dengan hasil FTA-ABS (Binnicker et al., 2011). Trep-Sure (Phoenix) adalah sandwich rekombinan dua langkah AMDAL untuk deteksi antitreponemal Antibodi IgG dan IgM. Pengujian ini menggunakan treponema rekombinan tertentu Antigen diimobilisasi pada sumur lempeng mikro. Antibodi anti-treponemal dari pasien Sampel berikatan dengan antigen immobilisasi, yang dideteksi dengan HRP terkonjugasi Antigen treponema dan substrat TMB. Trep-Sure memiliki sensitivitas dan spesifisitas 98,9% Dan 94,3%, masing-masing (Binnicker et al., 2011). Captia Syphilis M (Trinity, mantan Centocor) adalah ELISA yang menangkap menggunakan piring mikrotitrasi Dilapisi dengan anti-manusia μ rantai antibodi spesifik, yang mengikat IgM hadir dalam serum. Pelacak Kompleks digunakan untuk mendeteksi antibodi IgM anti-treponemal yang ditangkap di piring. Itu Kompleks pelacak terdiri dari antigen T. pallidum, monoklonal antiaxial biotinilasi Antibodi IgM, dan streptavidin terkonjugasi dengan peroksidase lobak. Enzimnya Substrat TMB menghasilkan produk berwarna dan intensitas warnanya proporsional dengan Konsentrasi antibodi (Lefevre et al., 1990); Versi y ang lebih baru dari tes ini menggunakan HRP Antigen rekombinan terkonjugasi dan bukan kompleks pelacak (Rotty et al., 2010). AMDAL ini Dirancang khusus untuk diagnosis sifilis kongenital, namun dapat digunakan untuk deteksi Infeksi primer Sensitivitasnya adalah 94% untuk sifilis primer, 85% untuk sekunder, dan 82% Untuk sifilis laten awal (Lefevre et al., 1990 ). Ini IgM menangkap AMDAL juga berguna untuk
Pemantauan respon pengobatan pada sifilis dini (McMillan & Young, 2008; Rotty et al., 2010). Schmidt dkk melakukan evaluasi komparatif AMDAL yang berbeda untuk penentuan Antibodi terhadap T.pallidum pada pasien dengan sifilis primer dengan menguji 52 sera Negatif di TPHA Kepekaan untuk Captia Syphilis M adalah 86,5% (45/52) dan tes lainnya Untuk deteksi IgG dan IgM, seperti ICE Syphilis (Murex), Enzygnost Syphilis (Berhing) Dan Bioelisa Sifilis (Biokit) menunjukkan sensitivitas 75,0% (39/52), 69,2% (36/52) dan 67,3 (24/41), masing-masing (Schmidt et al., 2000).
(Sato and Paulo, 2011)
PRINSIP PENGUJIAN Layar Treponema pallidum ELISA Kit adalah alat uji imunosorbent enzyme-linked fase padat (ELISA). Sumur mikrotiter sebagai fasa padat dilapisi dengan antigen treponemal rekombinan tertentu. Spesimen dan kontrol siap pakai dikuburkan ke dalam sumur ini. Selama inkubasi Treponema pallidumspesifik Antibodi spesimen dan kontrol positif te rikat pada antigen immobilisasi. Setelah dilakukan langkah pencucian untuk menghilangkan sampel dan zat pengikat yang tidak terikat lobak peroksidase terkonjugasi treponema Antigen disalurkan ke dalam sumur. Selama inkubasi kedua konjugat ini mengikat secara khusus antibodi yang dihasilkan Dalam pembentukan kompleks imun terkait enzim. Setelah langkah pencucian kedua untuk menghilangkan konjugasi tak mengikat, kompleks imun terbentuk (jika terjadi hasil positif) Dideteksi dengan inkubasi dengan media TMB dan pengembangan warna biru. Warna biru berubah menjadi kuning dengan berhenti Reaksi indikator enzimatik dengan asam sulfat. Intensitas warna ini berbanding lurus dengan jumlah antibodi spesifik Treponema pallidum di
contoh. Absorbansi pada 450 nm dibaca menggunakan pembaca piring microtiter ELISA. (Alpco, 2011)
Sifilis adalah penyakit multistage kronis yang disebabkan oleh spirochaete Treponema Pallidum subsp. Pallidum, dan biasanya ditularkan melalui kontak seksual atau kongenital (1). Sifilis telah menjadi masalah kesehatan masyarakat dalam dua dekade terakhir, dengan Diperkirakan 12 juta kasus baru terjadi per tahun di seluruh dunia (2). Selanjutnya, Sifilis telah dianggap sebagai salah satu faktor untuk memfasilitasi infeksi HIV dan Transmisi, dan sifilis kongenital menyebabkan lebih dari setengah juta kelahiran mati atau Kematian neonatal setiap tahun (3). Di Cina, Sifilis telah menjadi salah satu dari lima besar paling banyak Melaporkan penyakit menular dan yang paling sering dilaporkan menular secara seksual Penyakit (STD), kejadian yang meningkat dari 7,12 kasus per 100.000 orang Pada tahun 2004 menjadi 22 kasus per 100.000 orang di tahun 2008 (4, 5). Tes imunosorben terkait enzim (ELISA) yang menggunakan lipoprotein nonspesifik, Ekstrak utuh dari T. pallidum, atau protein rekombinan sebagai antigen Penyaringan sifilis telah banyak digunakan di laboratorium klinis, karena mudah dilakukan Dan cepat untuk melakukan dan juga berpotensi untuk otomatis (11, 1 2). Beberapa T. Protein pallidum telah diuji termasuk TpN15 (Tp0171), TpN17 (Tp0435), TpN44.5 (TmpA, Tp0768), TpN47 (Tp0574), Tp0453, Tp92 (Tp03266), dan Tp0965 (13-17). Meskipun antigen rekombinan ini k adang digunakan dalam kombinasi di Tes komersial dan menunjukkan sensitivitas tinggi, tidak semua antigen ini dapat digunakan untuk mendeteksi sifilis tahap awal. Sangat penting untuk mengevaluasi lebih spesifik Fic dan rekombinan rekombinan sensitif untuk serodiagnosis sifilis. (Jiang et al., 2013)
Sifilis, yang disebabkan oleh spirochete Treponema Pallidum subsp. Pallidum, adalah infeksi bakteri kronis Yang tetap menjadi perhatian kesehatan masyarakat di seluruh dunia. Itu WHO memperkirakan bahwa 12 juta kasus baru dari venere al Sifilis terjadi pada tahun 1999, lebih dari 90% di antaranya Negara berkembang, dengan jumlah yang meningkat pesat Kasus di Eropa Timur (1,2). Sifilis kongenital adalah Perhatian khusus di negara-negara berkembang sebagaimana mestinya Menyebabkan aborsi spontan, lahir mati, kematian Neonatus, atau penyakit pada bayi; Laporan terbaru dari Tanzania memperkirakan bahwa sampai 50% kelahiran mati Disebabkan oleh sifilis (3). Sangat penting untuk Kesehatan di seluruh dunia adalah pengakuan bahwa sifilis Infeksi sangat me ningkatkan transmisi dan akuisisi Dari human immunodeficiency virus (HIV) (4,5). Faktor-faktor ini, seiring dengan sifatnya yang sangat merusak Penyakit ter lambat, membuat sifilis menjadi kesehatan masyarakat yang penting perhatian. Terlebih lagi, wabah baru - baru ini telah dilaporkan terjadi di Indonesia Beberapa kota di Eropa dan Amer ika Utara di antara manusia Yang berhubungan seks dengan pria (LSL) (6-8). Wabah di antara MSM dikaitkan dengan peningkatan seksual yang tidak aman Perilaku, mungkin konsekuensi dari peningkatan ARV Pengobatan untuk HIV dalam survei terbaru; 37-52% dari MSM melaporkan beberapa pe rilaku berisiko (6-9). Deteksi serologis antibodi spesifik terhadap T. pallidum sangat penting dalam diagnosis Sifilis, sebagai jalur alami infeksi Ditandai dengan periode tanpa manifestasi klinis (10,11). Tes serologis dibagi menjadi nontreponemal Dan tes treponemal dan tidak sendirian saja sudah cukup Diagnosis, karena t es nontreponemal bisa digunakan Terapi monitor, namun karena spesifisitasnya yang rendah Hasil positif yang diperoleh dengan metode ini perlu dilakukan Dikonfirmasi dengan tes treponemal. Sebaliknya, sebagai Positif pada tes treponemal berlangsung sepanjang hidup, Tes treponemal tidak dapat digunakan dalam tindak lanjut Pasien. Akibatnya, pencarian metode diagnostik yang sederhana, andal, dan hemat uang terus berlanjut. Nontreponema Tes meliputi Penelitian Penyakit Venereal Laboratorium dan kartu Rapid Plasma Reagin (RPR) Tes. Tes treponema meliputi neon serum Uji absorpsi antibodi treponemal, T. pallidum Tes hemaglutinasi (TPHA) (Radim, Pomezia, Italia), Immunoassay terkait enzim (ELISA), dan Western Blot (WB) assay; Baik ELISA maupun WB Tes dapat didasarkan pada lisat sel utuh (12-15) Atau antigen treponema rekombinan (16-20). Lebih Baru-baru ini, immunoassay chemiluminescent dipasang Dengan antigen rekombinan telah dievaluasi (21,22). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi Kinerja diagnostik Enzygnost Syphilis (Dade Behring, Marburg, Jerman) dibandingkan dengan ARSITEK Sifilis TP (Abbott Japan Co., Tokyo, Jepang). Kedua tes sepenuhnya otomatis, namun berbeda Komposisi antigen dan prinsip metode. Sebagai tes konfirmasi, TPHA dan WB digunakan. Sebuah penelitian retrospektif dilakukan dengan tiga panel Sera: yang pertama termasuk 244 klinis dan serologis Ditandai serapan sifilis, sedangkan yang kedua termasuk 74 sampel diperoleh dari pasien yang menderita Dari penyakit yang berpotensi mengganggu. Akhirnya, kami mengevaluasi Pertunjukan Sifilis Enzygnost menggunakan yang ketiga Panel dari 129 sera dipilih dari antara 9.210 Sampel dikirim antara t anggal 1 Februari 2007 dan 30 April 2007 ke Laboratorium Mikrobiologi PT Rumah Sakit St. Orsola di Bologna untuk pemutaran rutin Untuk sifilis: semua 129 sera telah dinilai reaktif oleh ARSITEK Sifilis TP, tapi negatif oleh TPHA Dan WB.
Enzygnost Sifilis adalah enzim satu langkah yang kompetitif Immunoassay untuk penentuan antibodi in vitro Untuk T. pallidum T. pallidum-spesifik antibodi (IgG dan / atau IgM) yang terkandung dalam sampel dan Antibodi yang mengandung kontras peroksidase bersaing Mengikat antigen treponema dilapisi ke Sumur piring Antibodi serum tak terikat Dan antibodi konjugasi dicuci dan Akt ivitas enzim dari konjugat terikat adalah bertekad. Intensitas warna yang dihasilkan adalah Berbanding terbalik dengan konsentrasi T. pallidum antibodi dalam sampel. Pengujian itu Diproses dengan instrumentasi otomatis (Genesis RSP 200 / BEP III) dan hasilnya ditafsirkan sebagai berikut Instruksi pabrikan.
(Marangoni et al., 2009)
Sifilis, yang dulu dikenal dengan Great Pox, terus berlanjut Tantang dokter dengan nuansa diagnosis dan Manajemen [1]. Atas dasar tes Wasserman Diperkenalkan 1100 tahun yang lalu [2], diagnosis sifilis berlanjut Untuk mengandalkan tes serologis karena Treponema Pallidum tidak bisa dibiakkan secara in vitro. Selanjutnya langsung Visualisasi spirochete membutuhkan lesi dan Baik antibodi neon atau mikroskop medan gelap, Yang tidak mungkin tersedia. T. pallidum Uji amplifikasi asam nukleat tidak banyak tersedia Untuk digunakan oleh laboratorium klinis. Dengan demikian, tes serologis adalah Dasar pengelolaan sifilis, dan pengetahuan Keterbatasan diagnosis mereka sangat penting bagi dokter. Beberapa tes serologis sifilis telah dibersihkan Gunakan di Amerika Serikat oleh Food and Drug Ad Gristration (FDA) sebagai diagnostik, konfirmatori, dan Tes skrining donor darah Namun, lebih banyak sifilis Tes tersedia secara komersial, terutama karena Prosedur yang kur ang ketat untuk perkembangan mereka secara internasional [3]. Berbeda dengan metode yang lebih tua, seperti Tes reagen plasma cepat (RPR), yang menggunakan fosfolipid (Nontreponemal) antigen, tes serologis yang lebih baru Gunakan antigen spesifik T. pallidum. Teknologi baru ini Telah membanjiri pasar internasional karena Otomasi mereka Meskipun sebagian besar tidak dibersihkan oleh FDA, tes ini bisa digunakan setelah memvalidasi Kinerja dibandingkan dengan standar referensi. Tes khusus treponemal baru telah menggantikan nontreponemal Tes untuk pemeriksaan di beberapa laboratorium dan Memiliki potensi untuk membingungkan manajemen klinis. Ini Review berfokus pada tes serologis baru yang telah ada Paling banyak dievaluasi untuk skrining noncongenital sipilis
(Seña, White and Sparling, 2010)
Enzim immunoassay (EIA) dan enzyme-linked immunosorbent Assay (ELI SA) keduanya banyak digunakan sebagai alat diagnostik di Indonesia Obat-obatan dan sebagai tindakan pengendalian mutu di berbagai industri; Mereka juga digunakan sebagai alat analisis dalam penelitian biomedis Untuk deteksi dan kuantifikasi antigen atau antibodi spesifik Dalam sampel tertentu. Kedua prosedur ini serupa
Prinsip dasar dan berasal dari radioimmunoassay (RIA). RI A pertama kali dideskripsikan oleh Be rson dan Yalow (Yalow dan Berson, 1960), dimana Yalow dianugerahi Hadiah Nobel Pada tahun 1977, untuk mengukur insulin plasma endogen. RIA saat itu Dikembangkan menjadi teknik baru untuk mendeteksi dan mengukur biologis Molekul hadir dalam jumlah sangat kecil, paving Cara untuk analisis dan deteksi biologi lainnya yang tak terhitung jumlahnya Molekul, termasuk hormon, peptida, dan protein. Karena kekhawatiran keamanan mengenai penggunaan radioaktivitasnya, Uji RIA dimodifikasi dengan mengganti radioisotop dengan a Enzim, sehingga menciptakan EIA modern dan ELISA.
PRINSIP-PRINSIP UMUM EIA / ELISA menggunakan konsep imunologi dasar antigen Mengikat antibodi spesifiknya, yang memungkinkan pendeteksian sangat Sejumlah kecil antigen seperti protein, peptida, hormon, Atau antibodi dalam sampel cairan. EIA dan ELISA memanfaatkan Antigen enzim enzim dan antibodi untuk mendeteksi biologis Molekul, enzim yang paling umum digunakan Alkaline phosphatase (EC 3.1.3.1) dan oksidase glukosa (E.C.1.1.3.4). Antigen dalam fase fluida tidak bergerak, biasanya di Piring microtiter 96well. Antigen diijinkan untuk mengikat a Antibodi spesifik, yang kemudian dideteksi oleh a Sekunder, enzim-coupled antibody. Substrat kromogenik Untuk enzim menghasilkan perubahan warna yang terlihat atau fluoresensi, Menunjukkan adanya antigen. Kuantitatif atau Pengukuran kualitatif dapat dinilai berdasarkan kolorimetri tersebut bacaan. Substrat fluorogen memiliki sensitivitas yang lebih tinggi dan Dapat secara akurat mengukur t ingkat konsentrasi antigen dalam mencicipi. Prosedur umum untuk ELISA diuraikan pada Gambar 1. Berbagai j enis ELISA telah digunakan dengan modifikasi Langkahlangkah dasar yang dijelaskan pada Gambar 1. Langkah kunci dalam uji ELISA adalah deteksi langsung atau tidak langsung antigen oleh Menaati atau melumpuhkan antigen atau penangkapan spesifik antigen Antibodi, masing-masing, langsung ke permukaan sumur. Untuk Pengukuran sensitif dan kuat, antigen bisa secara khusus Dipilih dari sampel antigen campuran melalui antibodi "capture". Antigen dengan demikian "terjepit" antara Antibodi penangkapan dan antibodi deteksi. Jika antigen Yang diukur berukuran kecil atau hanya memiliki satu epitope Untuk mengikat antibodi, metode kompetitif digunakan di mana Baik antigen diberi label dan bersaing untuk yang tidak diberi label Pem bentukan kompleks antigen-antibodi atau antibodi diberi label Dan bersaing untuk antigen terikat dan antigen dalam sampel. Masing-masing teknik ELISA yang dimodifikasi ini dapat digunakan untuk a Tujuan kualitatif dan kuantitatif.
Gambar 1. Teknik uji imunosorbent enzyme-linked enzyme (ELISA) yang digunakan Untuk mendeteksi antigen pada sampel tertentu. Antigen (dalam fase cair) adalah Ditambahkan ke sumur, di mana ia melekat pada dinding. Antibodi primer berikatan Khusus untuk antigen. Antibodi sekunder terkait enzim ditambahkan Yang bereaksi dengan kromogen, menghasilkan perubahan warna secara kuantitatif atau Secara kualitatif mendeteksi antigen
Sandwich ELISA Teknik sandwich digunakan untuk mengidentifikasi antigen sampel tertentu. Permukaan sumur disiapkan dengan kuantitas terikat yang diketahui Antibodi untuk menangkap antigen yang diinginkan. Setelah mengikat nonspesifik Situs diblokir menggunakan albumin serum sapi, antigen yang mengandung Sampel diaplikasikan ke piring. Antibodi primer yang spesifik Kemudian ditambahkan bahwa "sandwich" antigen. Enzim-linked sekunder Antibodi diterapkan yang me ngikat antibodi primer. Gabungan enzim antibodi tak terikat dicuci. Substrat Ditambahkan dan secara enzimatik diubah menjadi warna yang bisa jadi Kemudian dihitung. Canady dkk. (2013) menganalisa sera pasien Metode sandwich untuk mendeteksi peningkatan pertumbuhan keratinosit Faktor (KGF) dalam sera pasien keloid dan scleroderma Dibandingkan dengan kontrol sehat untuk mengukur KGF manusia (Gambar 3). Salah satu keuntungan menggunakan antibodi spesifik yang dimurnikan untuk ditangkap Antigen adalah bahwa ia menghilangkan kebutuhan untuk memurnikan antigen dari a Campuran antigen lain, sehingga mempermudah pengujian dan peningkatannya Spesifisitas dan se nsitivitasnya.
(Gan and Patel, 2013)
Enzyme linked Immunosorbent Assay (ELISA) adalah alat diagnostik klinis yang banyak digunakan Mendeteksi berbagai macam penyakit dari penyakit menular hingga biomarker kanker. Hal ini digambarkan sebagai a Metode diagnostik yang tepat, sensitif, serbaguna dan kuantitatif [1]. Meski ada bermacam-macam Kit uji skrining untuk deteksi antigen / antibodi, mereka memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang lebih rendah dibandingkan dengan Sandwich ELISA assay [2,3]. Sebagai contoh, te s ELISA dengue konvensional dari Standard Diagnostics Inc. memiliki sensitivitas 98,8% dan spesifisitas 99,2%, sedangkan rapid test kit Dari perusahaan yang sama memiliki sensitivitas 94,2% dan spesifisitas 96,4% sesuai data dari Spesifikasi produk Standard Diagnostics. Namun, tes ELISA konvensional memakan waktu lama, Membutuhkan peralatan laboratorium khusus dan keahlian penting untuk dilakukan. Oleh karena itu, saat ini, mereka Tidak layak untuk diterapkan dalam pengujian cepat dan diagnosis perawatan titik. Untuk alasan ini, peneliti adalah Mencoba miniatur seluruh prosedur ELISA di Lab-on-a-Chip (LOC) atau Lab-on-Compact Disc (LOCD) platform. (Thiha and Ibrahim, 2015)
Agen etiologi sifilis adalah Treponema pallidum. Sifilis memiliki manifestasi k linis yang beragam dan memiliki banyak gambaran klinis dengan penyakit tr eponemal dan nontreponemal lainnya. Oleh karena itu, adalah wajib bahwa diagnosis klinis selalu didukung oleh tes laboratorium yang sesuai dan bahwa hasil tes ditafsirkan dengan mengacu pada riwayat pasien dan temuan pemeriksaan fisik. Sifilis berkembang melalui stadium primer, sekunder, laten dan tersier yang berbeda. Ulkus yang muncul pada sifilis primer dan sekunder kaya akan treponema; Transmisi kelamin terjadi melalui kontak langsung dengan lesi ini. Tahap penyakit di mana pasien hadir memiliki implikasi untuk diagnosis dan pengobatan. Pada beberapa tahap, penyakit ini mungkin tidak bergejala, dan ada masalah dalam mendiagnosis sifilis dini, neurosifilis, sifilis kongenital asimtomatik dan sifilis pada pengguna narkoba suntikan dan orang koinfeksi dengan agen reaksi dan antibodi serologis.
Meskipun T pallidum tidak dapat tumbuh dalam budaya, ada banyak te s untuk diagnosis sifilis langsung dan tidak langsung. Meski begitu, tidak ada satu tes optimal. Metode diagnostik langsung meliputi deteksi T pallidum dengan pemeriksaan mikroskopis cairan atau smear dari lesi, pemeriksaan histologis jaringan atau metode amplifikasi asam nukleat seperti polymerase chain reaction (PCR). Diagnosis tidak langsung didasarkan pada tes serologis untuk mendeteksi antibodi. Tes serologis terbagi dalam dua kategori: tes nontreponemal untuk skrining, dan tes treponemal untuk konfirmasi (Gambar (Gambar1) .1). Semua tes nontreponemal mengukur antibodi antiphospholipid baik imunoglobulin (Ig) G dan IgM yang dibentuk oleh inang dalam menanggapi materi lipoidal yang dilepaskan oleh sel inang yang rusak di awal infeksi dan lipid dari permukaan sel treponema itu sendiri. Semua tes treponemal menggunakan T pallidum atau komponennya sebagai antigen. Jika eksudat lesi atau jaringan tersedia, pemeriksaan langsung dilakukan, diikuti dengan tes serologi nontreponemal. Tes nontreponemal reaktif kemudian dikonfirmasi dengan tes treponemal. Hasil uji serologis yang dikonfirmasi menunjukkan adanya antibodi treponemal namun tidak menunjukkan stadium penyakit dan, tergantung pada tesnya, mungkin tidak membedakan antara infeksi masa lalu dan saat ini. Terlepas dari kekurangan dan kompleksitas penafsirannya, tes serologis menjadi andalan dalam diagnosis dan tindak lanjut sifilis. Sifilis laten hanya bisa didiagnosis dengan tes serologis. Sebenarnya, di Amerika Utara, sebagian besar kasus sifilis diidentifikasi pada tahap laten dengan tes serologis. Sensitivitas dan spesifisitas tes serologis bervariasi tergantung pada jenis tes dan stadium penyakit (Tabel (Tabel 1) .1). Penerapan berbagai uji diagnostik pada berbagai tahap sifilis dan interpretasi mereka dirangkum dalam (Tabel (Tabel 2) 2) dan (Tabel (Tabel 3), 3), masing-masing. Tidak ada metode laboratorium rutin yang andal untuk membedakan treponema patogen lain satu sama lain atau dari sifilis. Uraian rinci tentang prosedur diagnostik yang umum digunakan untuk sifilis dapat ditemukan dalam e disi terbaru manual laboratorium. Untuk pemeriksaan langsung, eksudat dari lesi sifilis kongenital primer, sekunder dan awal adalah yang paling berguna. Penting untuk mengumpulkan cairan seret yang jelas bebas dari erit rosit, reruntuhan jaringan dan organisme lainnya. Abrasi lesi yang lembut mungkin diperlukan untuk mengekspresikan cairan serentak yang jelas. Lesi harus dibersihkan dengan air gar am atau air sebelum mengumpulkan spesimen. Hal ini sangat penting saat mengumpulkan spesimen dari daerah seperti di bawah preputium, dimana treponema nonpathogenic ada. Untuk mikroskop lapangan gelap, cairan harus dikumpulkan pada slide, ditutup dengan coverlip dan diperiksa dalam 20 menit. Untuk pengujian antibodi fluorescent langsung, apusan harus dilakukan pada slide dan kemudian dikeringkan dengan udara.
Sementara plasma dapat digunakan dalam beberapa tes serologi nontreponemal, serum adalah spesimen pilihan untuk tes serologis nontreponemal dan treponemal. Spesimen yang hemolyzed, terkontaminasi bakteri, chylous, keruh atau mengandung partikulat tidak memuaskan. Perhatian harus diberikan dalam pengiriman seluruh spesimen darah untuk mencegah hemolisis. Tes ser ebrospinal fluid (CSF) diindikasikan pada sifilis kongenital dan tersier dan saat ada gejala neurologis. Kontaminasi darah CSF harus dihindari karena dapat menyebabkan hasil CSF positif palsu. Pada sifilis kongenital, sampel vena dari ibu dan anak harus diuji.
Sejumlah tes EIA treponemal tersedia secara komersial (10), termasuk Captia syphilis G, Captia Syphilis M dan Captia pilih Syph-G (Trinity Biotech, Irlandia), tes sifilis SpiroTek (Organon Teknika, AS), Enzygnost Syphilis (Dade Behring, Jerman), dan Bio-Rad Sifilis G (Laboratorium Bio-Rad, AS). Tes Captia Syphilis G mendeteksi antibodi IgG, dapat digunakan baik sebagai tes skrining dan tes konfirmasi, dan merupakan pengganti yang tepat untuk uji MHA-TP (8). Tes Captia Syphilis M dirancang untuk mendeteksi antibodi IgM pada sifilis kongenital, dan mungkin lebih sensitif daripada tes IgM FTA-ABS 19S (11); Hal ini juga dianggap cocok untuk deteksi sifilis dini. Tes sifilis SpiroTek memiliki sensitivitas tertinggi dari semua tes treponemal (terutama pada sifilis primer yang tidak diobati) dan direkomendasikan sebagai tes konfirmasi oleh CDC (1). Tes AMDAL terbukti sama dengan atau lebih baik daripada tes FTA-ABS dan TPPA secara keseluruhan sensitivitas dan spesifisitas dan lebih bermanfaat pada orang dengan koinfeksi HIV (12-14). Selain itu, AMDAL dapat diyakinkan untuk otomasi, menghilangkan variasi dan subjektivitas pembaca manusia. Sementara sejumlah laboratorium telah beralih ke AMDAL treponemal untuk skrining, kekurangannya adalah bahwa tes treponema umumnya tetap reaktif seumur hidup pada sebagian besar pasien seperti yang dibahas di bagian 'uji serologis Treponemal pada kertas saat ini, dan ini bisa menyesatkan Individu yang tidak lagi memiliki penyakit aktif. Ada juga isu lain yang muncul. Sensitivitas AMDAL mungkin tidak lebih besar dari MHA-TP pada sifilis primer, dan proporsi yang meningkat mungkin hanya memiliki hasil reaktif EIA (V Paus, CDC, komunikasi pribadi). Untuk alasan ini, CDC saat ini merekomendasikan bahwa, jika AMDAL digunakan untuk skrining, uji RPR harus dilakukan pada semua reaktan AMDAL, dan uji tre ponema kedua seperti TP-PA atau FTA-ABS harus digunakan untuk konfirmasi jika Tes RPR bersifat reaktif. (Ratnam, 2007)
Sifilis adalah infeksi yang membingungkan yang disebabkan oleh spirochete Treponema pallidum, yang ditularkan terutama melalui Kontak seksual Ini berkembang melalui beberapa tahap klinis, dengan Ciri khas klinis termasuk chancre keras selama primer Sifilis, diikuti oleh ruam dan limfadenopati umum Selama sifilis sekunder. Setelah resolusi tahap sifilis ini, Infeksi memasuki fase laten asimtomatik yang berlangsung lama Bulan sampai puluhan tahun. Gejala yang beragam dan kronis muncul selama Sifilis tersier, termasuk neurosifilis, keterlibatan kardiovaskular, Dan gummas.1 Diagnosis laboratorium sifilis bergantung pada penggunaan a
Banyak tes serologis karena fakta bahwa T. pallidum tidak bisa Dibiakkan secara in vitro; 2,3 ini berbeda dengan kebanyakan penyakit bakteri, Dimana diagnosis pasti bisa dilakukan dengan deteksi langsung Patogen Tes serologis umum untuk diagnosis Sifilis dibagi menjadi dua kategori: tes non-treponemal dan Tes treponemal Tes non-treponemal, seperti yang cepat Tes reagen plasma (RPR) dan penelitian penyakit kelamin Laboratorium (VDRL), digunakan terutama untuk me nentukan aktivitas serologis dan untuk memantau efek terapeutik. Meskipun Keuntungan dari tes ini, yang banyak tersedia, murah, Dan mudah dilakukan, hasilnya membutuhkan konfirmasi lebih lanjut Skrining untuk mendeteksi antibodi spesifik Treponema. Itu Tes treponemal, seperti aglutinasi partikel T. pallidum (TPPA), uji T. pallidum hemaglutination (TPHA), dan Uji absorpsi antibodi treponemal fluoresen (FTA-ABS) Digunakan untuk mendeteksi antibodi treponema spesifik. Namun, Tes ini sangat padat karya dan bergantung pada operator. Selanjutnya, mereka menunjukkan sensitivitas yang buruk dalam deteksi Dari sifilis awal. Dalam beberapa tahun terakhir, immunoassays enzim otomatis (EIAs) dan Chemiluminescence immunoassays (CIA) juga telah dikembangkan Untuk serodiagnosis sifilis. Tes ini, menggunakan satu atau Lebih banyak protein T. pallidum rekombinan TpN15 (Tp0171), TpN17 (Tp0435), TpN44.5 (TmpA, Tp0768), dan TpN47 (Tp0574), 5,6 telah mendapatkan minat peneliti di lapangan Diagnosis sifilis karena bersifat obyektif, dapat direproduksi,
Otomatis, dan terkomputerisasi.7 Lebih penting lagi, tes ini Telah membawa beberapa laboratorium besar di Amerika Serikat untuk menyaring pasien Dengan algoritma sebaliknya, yang dimulai dengan uji treponemal; Tes reaktif diikuti dengan tes kuantitatif non-treponemal Dan sampel sumbang harus direkreen ulang dengan yang kedua dan Tes treponema yang berbeda.8,9 Meskipun protein ini telah ada Digunakan dalam serodiagnosis sifilis, tidak umum Kesepakatan tentang mana protein antigen yang terbaik dalam hal Serodiagnostik, dan protein yang terpapar permukaan mungkin terjadi Memiliki sensitivitas yang superior terhadap protein yang saat ini digunakan karena Paparan langsung mereka terhadap sistem kekebalan tubuh. Oleh karena itu, itu Sangat penting untuk mengevaluasi antigen rekombinan baru dengan Diagnosis yang sangat akurat untuk digunakan dalam pengujian serologis untuk sipilis. ELISA Protein rekombinan Tp0663 diencerkan dalam buffer karbonat (0,1 M, pH 9,6), kemudian 96-piring sumur (Corning Costar, New York, USA) dilapisi dengan 100 ml per sumur semalam pada suhu 4 8C. Dengan Campur mencuci, piring diblokir selama 2 jam di kamar Suhu dengan 200 ml PBSTM. Sampel serum diencerkan 1: 100 dengan PBSTM, dan 100 m l ditambahkan ke masing-masing sumur. Setelah Inkubasi selama 2 jam pada suhu 37 ° C , lempeng dicuci secara ekstensif Dengan PBST. IgG anti-human kambing terkonjugasi HRP digunakan pada a Pengenceran 1:10 000, dan kemudian 100 ml ditambahkan ke masing-masing sumur. Itu Campuran diinkubasi selama 1 jam pada suhu 37 8C. Pelat dikembangkan oleh
Menambahkan 100 ml tetramethylbenzidine substrat ke masing - masing sumur dan Diinkubasi pada suhu kamar selama 30 menit. Reaksi itu Dihentikan dengan penambahan 100 ml asam sulfat 1 M. Itu Absorbansi dibaca pada 450 nm. Setiap sampel diuji di duplikat. Nilai kerapatan optik rata-rata untuk yang tidak terinfeksi Sera kontrol ditentukan dengan diagnosis klinis ditambah dua kali lipat Standar deviasi dianggap sebagai nilai cutoff untuk ditentukan Positif pada setiap sampel. Nilai cutoff dari ELISA adalah 0,4121. Nilai serapan kurang dari atau sama dengan nilai cutoff Ditentukan menjadi negatif, sedangkan yang lebih besar dari pada Nilai cutoff didefinisikan sebagai positif. (Xu et al., 2016)
PRINSIP PENGUJIAN: Metode ELISA didasarkan pada reaksi antibodi di Sampel diuji dengan antigen yang teradsorpsi pada Permukaan polistiren Imunoglobulin yang tidak terikat dicuci mati. Enzim globulin anti-manusia bertipe enzim mengikat antigenKompleks antibodi pada tahap kedua. Setelah langkah pencucian baru, Konjugat terikat dikembangkan dengan bantuan substrat Larutan (TMB) untuk membuat produk yang larut dalam warna biru Yang berubah menjadi kuning setelah menambahkan larutan asam berhenti. (Vircell, 2014)
Sifilis merupakan penyakit ulseratif genital, merupakan hal yang penting
Penyebab penyakit menular seksual yang juga Merupakan masalah kesehatan masyarakat yang besar di keduanya Negara berkembang dan negara maju. Infeksi dengan Human Immunodeficiency Virus (HIV) pada orang dewasa di Indonesia India didominasi oleh heteroseksual Transmisi1 . Ulserasi dan peradangan terjadi Oleh sifilis bertindak sebagai faktor risiko yang penting untuk Transmisi serta akuisisi HIV dan keduanya Infeksi tampak berkembang dengan cepat saat terjadi Bersama. Uji serologis masih menjadi alat penting dalam Diagnosis laboratorium sifilis Tidak treponemal Uji antibodi seperti VDRL (Venereal Disease Research Laboratorium) dan Rapid Plasma Reagin (RPR) adalah Berguna untuk penyaringan massal sifilis3 . Berpendar Penyerapan Antibodi Treponemal (FTA-ABS) atau Treponemal pallidum Haemagglutination (TPHA) atau Uji immunosorbenr enzim terkait enzim (ELISA), Khusus untuk sifilis lebih bermanfaat untuk menghindari kesalahan Hasil positif3,4. Mengingat hal ini, penelitian ini Dilakukan untuk mengetahui prevalensi sifilis di Indonesia Pasien sero reaktif HIV dan untuk mem bandingkan efikasi Tes untuk skrining.
(A et al., 2014)
RINSIP PROSEDUR Sifilis Total Ab menggunakan tiga antigen rekombinan dalam uji sandwich. Antigen akan mendeteksi T. pallidum spesifik IgG, IgM, dan IgA; Memungkinkan tes untuk mendeteksi antibodi selama semua tahap infeksi. Sumur dilapisi dengan campuran antigen rekombinan TBC 15Kd, 17Kd, dan 47Kd T. pallidum. Antibodi spesifik dalam spesimen serum atau plasma digabungkan dengan antigen ini dan dengan Antigen yang sama dikonjugasikan ke lobak peroksidase bila konjugasi ditambahkan ke sumur di mana Spesimen telah diinkubasi. Setelah bahan yang tidak bereaksi dibuang dengan cara mencuci, Adanya enzim terikat, menunjukkan adanya spesimen antibodi spesifik Terungkap dengan perubahan warna pada campuran substrat / kromogen. Intensitas warnanya Dibandingkan dengan di sumur kontrol untuk mengetahui ada tidaknya antibodi spesifik. (BIO-RAD, 2014)
EIA (Enzim Immunoassay) adalah enzim Immunoassay dan seorang wakil dari generasi baru Tes yang andal dan cepat untuk deteksi spesifik Antibodi IgG dan IgM. Hal ini efisien dalam pengujian sejumlah besar od Spesimen. Sekarang, ini tersedia secara luas dan semakin banyak Digunakan untuk skrining Tesnya otomatis, tapi mahal. Tes AMDAL sangat sensitif dalam deteksi Sifilis primer dan sekunder dengan IgM EIA Menjadi tes pertama yang positif dalam beberapa kasus (11). Di
Diduga sifilis primer suatu IgM harus diminta, Karena antibodi ini dapat dideteksi pada akhir Minggu kedua setelah infeksi, sedangkan antibodi IgG adalah Terdeteksi 4 - 5 minggu setelah infeksi. Tes AMDAL telah ditunjukkan sama dengan atau Lebih baik dari FTA-ABS dan tes TPPA secara keseluruhan Sensitivitas dan spesifisitas dan lebih bermanfaat untuk HIV Orang koinfeksi (12). Ada beberapa versi Dari immunoassays, tergantung pada metode Deteksi, seperti immunoassay chemiluminescent (CIA), dan immunoassay microbead (MIA). Ini Immunoassay dapat mendeteksi IgG, IgM atau kedua IgG Dan antibodi IgM, diproduksi melawan Treponema Pallidum. Kriteria diagnostik serologis untuk sipilis Dalam skrining, jika hanya tes serologis treponemal Digunakan, mereka mengidentifikasi orang-orang dengan sukses sebelumnya Pengobatan sifilis, serta orang-orang yang tidak diobati sipilis. Tes Treponemal tidak bisa dibedakan Infeksi sebelumnya dari infeksi saat ini. Karena itu, Kombinasi tes spesifik dan non spesifik Direkomendasikan Jika screening dimulai dengan spesifik Uji serologis (misalnya AMDAL), maka perlu dilakukan a Tes spesifik baru untuk mengkonfirmasi (misalnya TPHA) diagnosisnya
Dari sifilis Jika kedua tes itu positif, maka kuantitatif Uji tidak spesifik diperlukan (VDRL atau RPR). Jika tes treponema konfirmasi positif Dan tes non-treponemal negatif, pada pasien dengan dugaan sifilis dini, tes EIA-IgM mungkin Digunakan (8). Namun, perkembangan IgM dan nya Kegigihan setelah tahap awal laten sifilis tidak dimengerti. Diperlukan penelitian lebih lanjut Uji IgM dapat direkomendasikan untuk penggunaan rutin Pengujian orang dewasa (17). Jika pemutaran dimulai dengan yang tidak spesifik Uji serologis, maka temuan kuantitatif positifnya Perlu dikonfirmasi dengan tes tertentu. Jika yang utama Skrining terdiri dari nonspesifik dan spesifik Tes, perlu untuk mengukur titer dari nonspesifik Tes, terutama jika tes spesifiknya positif (14). Temuan uji non-spesifik (VDRL atau RPR) Dengan titer lebih besar dari 1:16, dan / atau IgM positif Tes, umumnya menunjukkan sifilis aktif dan harus Diobati, meski serologi harus ditafsirkan masuk Terang sejarah pengobatan dan temuan klinisnya. VDRL / RPR dan EIA-IgM sering kali negatif Sifilis terlambat, tapi ini tidak mengecualikan kebutuhan Pengobatan (15). (Golušin et al., 2016)
DAPUS A, C. K., S, P. S., Ameeta, J. and Abhay, C. (2014) ‘Brief Communication : Serodiagnosis of syphilis in HIV Sero-reactive Patients .’, (June), pp. 108–110. Alpco (2011) ‘Corticosterone ( Mouse / Rat ) ELISA For the quantitative determination of corticosterone in rat and mouse serum or plasma’, pp. 1–8. Available at: www.alpoco.com. BIO-RAD (2014) ‘Syphilis Total Ab’. Available at: http://www.biorad.com/webroot/web/pdf/inserts/CDG/en/883679_EN.pdf. Gan, S. D. and Patel, K. R. (2013) ‘Enzyme Immunoassay and Enzyme-Linked Immunosorbent Assay’, Journal of Investigative Dermatology . Elsevier Masson SAS, 133(9), pp. 1 –3. doi: 10.1038/jid.2013.287. Golušin, Z., Jovanović, M., Matić, M., Vujanović, L., Roš, T. and Je remić, B. (2016) ‘Serological Tests for Acquired Syphilis in Immuno-competent Patients’, Serbian Journal of Dermatology and Venereology , 8(2), pp. 79 –87. doi: 10.1515/sjdv-2016-0007. Jiang, C., Zhao, F., Xiao, J., Zeng, T., Yu, J., Ma, X., Wu, H. and Wu, Y. (2013) ‘Evaluation of the recombinant protein TpF1 of Treponema pallidum for serodiagnosis of syphilis’, Clinical and Vaccine Immunology , 20(10), pp. 1563 –1568. doi: 10.1128/CVI.00122-13. Marangoni, A., Moroni, A., Accardo, S. and Cevenini, R. (2009) ‘Laboratory diagnosis of syphilis with automated immunoassays’, Journal of Clinical Laboratory Analysis, 23(1), pp. 1 –6. doi: 10.1002/jcla.20268. Ozoli, D., Katkovska, S. and Bobojeda, L. (2009) ‘Internet Journal of Medical Update Screening Assays to find out Late Latent Syphilis Cases – Which is’, 4(2), pp. 29–35. Ratnam, S. (2007) ‘The laboratory diagnosis of syphilis.’, The Canadian journal of infectious diseases & medical microbiology = Journal canadien des maladies infectieuses et de la microbiologie m edicale / ́ AMMI Canada, 16(1), pp. 45 –51. doi: 10.1016/0197-1859(94)90004-3. Sato, N. S. and Paulo, S. (2011) ‘Laboratorial Diagnosis of Syphilis’, p. 130. Available at: www.intechopen.com. Seña, A. C., White, B. L. and Sparling, P. F. (2010) ‘Novel Treponema pallidum Serologic Tests: A Paradigm Shift in Syphilis Screening for the 21st Century’, Clinical Infectious Diseases, 51(6), pp. 700 – 708. doi: 10.1086/655832. Thiha, A. and Ibrahim, F. (2015) ‘A C olorimetric Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Detection Platform for a Point-of-Care Dengue Detec tion System on a Lab-on-Compact-Disc’, Sensors (Basel, Switzerland), 15(5), pp. 11431 –11441. doi: 10.3390/s150511431. Vircell (2014) ‘SYPHILIS ELISA IgG + IgM’, pp. 1–4. Available at:
http://www.peramed.com/peramed/docs/T1060_EN.pdf. Xu, M., Xie, Y., Jiang, C., Xiao, Y., Kuang, X., Zhao, F., Zeng, T., Liu, S., Liang, M., Li, L., Wang, C. and Wu, Y. (2016) ‘A novel ELISA using a re combinant outer membrane protein, rTp0663, as the antigen for serological diagnosis of syphilis’, International Journal of Infectious Diseases, 43, pp. 51 –57. doi: 10.1016/j.ijid.2015.12.013.
