Manual para el manejo del software Empower
Temas:
1. Crea Crearr Pro Proy yecto ecto 2. Desa Desarro rrollo llo de Métod Métodos os 3. Creaci Creacin n de de un un Conjun Conjunto to de de Métod Métodos os !. Confi"ur Confi"uraci acin n del E#uipo E#uipo y el el $oftwar $oftware e Empower Empower %. Crea Creaci cin n de Méto Métodos dos de de Proc Proces eso o %.1 %.1
Comp Compro ro&a &aci cin n Manu Manual al del del Mét Métod odo o de de Pro Proce ceso so
'. Ela&o Ela&orac racin in del del inform informe e
1( Crea Crearr Proy Proyec ecto to o Abrir el Software Empower, ingresar usuario ( System) y la contraseña ( manager ), ), luego se debe presionar OK.
A continuación continuación aparecer aparecer la siguiente siguiente !entana" !entana"
)ota: desde )ota: desde a#u$ a#u$ en el icono “Configure System” se se crea el proyecto y se reali%an las configuraciones pertinentes. o
*n"resar a: &onfigure a: &onfigure System + 'ile + ew ro*ect + +acer clic en e-t +se debe seleccionar el tamaño del proyecto (/01 23) y el enunciado 'ull Audit 4rail Support Support no debe estar estar seleccio seleccionad nado o + +acer clic en e-t 5 +oto 6iode Array (seleccionar) (seleccionar) + Owner Owner Only (debe (debe estar estar seleccio seleccionad nada) a) + +acer clic en e-t 5 +acer clic en e-t + ro*ect ame (escribir el nombre del proyecto) + 'inis+ (finali%ar).
)ota: de )ota: de esta forma el proyecto ya esta creado. 7na !e% creado el proyecto, se debe crear el m8todo. 2( Desarrollo Desarrollo de Métodos o
o
9niciar nue!amente sesión en el software Empower (escribiendo el usuario y la cla!e correspondiente)
:uego se debe +acer clic donde dice Ad!anced y selecciono la interface ;uic< Start y presiono OK.
o
Se abrir un cuadro de dialogo (Select ro*ect System), a partir del cual se debe seleccionar el nombre del proyecto #ue fue creado anteriormente y el sistema cromatogrfico #ue es 6efaul y seleccionar OK.
o
o
A continuación se abrir la !entana de anlisis de la interfa% ;uic< Start.
Se debe presionar la pestaña =iew 2et+od y la opción #ue dice 9nstrument y se abrir la !entana =iew 2et+od 9nstrument.
)ota: en esta !entana programo todas las condiciones del proyecto, tanto del m8todo instrumental (dibu*o uno encerrado en el c$rculo) como del detector (dibu*o dos encerrado en el c$rculo). :as condiciones se modifican por separado (se debe +acer clic en cada uno). &ondiciones modificadas en" 28todo 9nstrumental"
,eneral: en esta pestaña se debe establecer el rango de la longitud de onda con la cual deseo traba*ar de comien%o a fin (start wa!elengt+ > end wa!elengt+)
De"as
E-entos
lujo: estable%co el flu*o con el cual !a ir pasando la fas mó!il a tra!8s de la columna (ml?min)
Temperatura: modifico la temperatura a la cual #uiero #ue se mantenga la columna.
$ol-ente: +ay cuatro recuadros (sol!ente A, sol!ente 3, sol!ente &, sol!ente 6) en los cuales debo escribir la composición de la fase mó!il y la proporción en la #ue se encuentra, dependiendo de por cual canal este pasando mi fase mó!il.
Canal
6etector"
@eneral
E!entos
&anal
&anal /
)ota: las condiciones indicadas, aparecen en la parte superior del software (pestañas) al momento de +acer clic sobre cada uno de estos (m8todo instrumental o detector). o
'inalmente se debe presionar donde dice ile + $a-e as/ + se abrir un cuadro para guardar el m8todo instrumental (colocar el nombre), el cual estar dentro del proyecto #ue se creo anteriormente.
o
7na !e% reali%ado esto, en la barra de estado (parte inferior de la pantalla) debern aparecer los nombres asignados con el cual se guardo el m8todo (2et+od Set) y el proyecto (9nstrumental 2et+od).
)ota: en el caso #ue el m8todo instrumental ya +aya sido creado (se +ayan establecido todas las condiciones), se debe presionar el icono abrir el m8todo instrumental #ue ya fue creado.
(carpeta de color amarillo), para
3( Creacin de un conjunto de métodos
o
ara crear un con*unto de m8todos se debe +acer clic en la pestaña =iew 2et+od 5 2et+od Set (para poder abrir el con*unto de m8todos).
En donde dice 9nstrument 2et+od (encerrado en el circulo ro*o) debo seleccionar el nombre del m8todo (el cual fue creado o
anteriormente). :uego se debe guardar el m8todo con el nombre seleccionado (presionando el dis#uete #ue aparece en la parte superior i%#uierda).
o
En la pestaña donde dice Bun Sample 5 Sample ;ueue (se deben escribir, todos los parmetros de las muestras #ue sern inyectadas).
armetros #ue se deben tener en consideración"
:ista de modos" 0un nly
ial: se completa de acuerdo a la posición #ue ocupa la muestra.
$ample )ame: se completa con el nombre de las muestras #ue se !an a ainyectar.
*nj ol: se completa con el !olumen de inyección correspondiente a la muestra.
unction: Se debe seleccionar dependiendo si es un estndar (Standards), se asume #ue la concentración es conocida, o si es muestra (se debe seleccionar la opción desconocido ya #ue no se en #ue concentración se encuentra).
Metod $et: selecciono el nombre con el cual se creo el m8todo.
0un Time: tiempo de corrida total #ue dura la muestra.
o
ara reali%ar la ad#uisición de datos se debe comprobar de #ue la pestaña =iew Ac#uisition este seleccionada (de color naran*o)
!( Confi"uracin del E#uipo y el $oftware Empower
o
Se debe encender, el detector y la pantalla del m8todo instrumental y presionar en la pantalla, donde dice 2enu?Status (todos los parmetros aparecen en cero).
Esta es la !entana de anlisis de muestra.
o
o
7na !e% encendido el e#uipo, y el software ubicado en la pestaña Bun Sample se debe presionar el icono de E#uilibrado del sistema?monitori%ación de la l$nea base, para abrir el cuadro de dialogo de configuración del e#uilibrado del sistema?monitori%ación de la l$nea de base (Setup E#uilibrate?System 2onitor).
6onde dice 9nstrument 2et+od debo seleccionar de la lista el m8todo #ue se +a creado al comien%o y a continuación +acer clic en Setup E#uilibrate?2onitor. &uando comien%a el e#uilibrado, aparecer la l$nea base en el panel de !isuali%ación en tiempo real. →
o
Al e#uilibrar el monitor, los datos #ue fueron guardados en el 28todo 9nstrumental (flu*o, temperatura de la columna, sol!ente) debern aparecer en la pantalla del e#uipo.
)ota: :a temperatura de la columna ira aumentando poco a poco, +asta alcan%ar la programada y cuando esta aun no es alcan%ada, en la pantalla del e#uipo aparecer un mensa*e de alerta, se debe presionar clear cada !e% #ue apare%ca para eliminar el mensa*e. )ota: ara poder obser!ar la l$nea base, se debe +acer clic en la pestaña Bun Sample 5 &ontrol anel (se podr obser!ar la corrida de la l$nea base). o
o
2ientras se esta estabili%ando la linea base, ubico el mouse sobre el cromatograma y presiono con el botón derec+o, en donde aparecern !arias opciones entre ellas" 'ull!iew (!ol!er al tamaño original una !e% #ue +ago %oom al cromatograma), &ustomi%e &+annels (en la cual debo escribir las tres longitudes de onda especificas a la cual #uiero medir y estas deben estar ticadas), tambi8n se puede configurar si deseo !er los cromatogramas *untos (o!erlay in single plot) o por separado (separate plots).
&uando la l$nea base ya se +aya estabili%ado, se debe +acer clic en la +erramienta (detener monitori%ación).
)ota: 6ebido a #ue el software a*usta automticamente la escala del grafico en tiempo real, la l$nea de base puede aparecer con ruido. o
o
7na !e% #ue se detiene el proceso de monitori%ación, se debe +acer clic en el icono #ue dice &orrida de la muestra, es decir, se le dar partida a las inyecciones. 7na !e% #ue doy la partida aparece un cuadro en el cual debo especificar el nom&re de la muestra (la #ue comen%ara a correr) y luego se presiona Bun.
Al +acer clic en el icono 9nyección de muestra se abrir el cuadro de dialogo de configuración de los parmetros de inyección Cnica (Specify Single 9n*ect arameters).
)T4: 7A =ED ;7E :AS 9E&&9OES FA S96O @BA3A6AS &O29EDA :A &OBB96A E: 49E2O 6E &OBB96A 6E :A 27ES4BA O SE 7E6E &A239AB.
)ota: se debe completar con el nombre de la muestra, la función (en el caso #ue sea estndar o muestra lo #ue se este inyectando), nombre del m8todo, ubicación de la muestra en el !ial, !olumen de inyección, tiempo de corrida de la muestra y finalmente presionar 9n*ect.
EL ICONO LO PRESIONO SOLO CUANDO QUIERO IR INYECTANDO LAS UESTRAS UNA A UNA Y ASI E!ITO COPLETAR LA TA"LA QUE APARECE AL PRESIONAR LA PESTA#A “RUN SAPLE” $!ENTANA DE ANALISIS DE UESTRA% YA QUE LA COPLETO SOLO CUANDO QUIERO INYECTAR !ARIAS UESTRAS Y LAS ESCRI"O TODAS DE UNA SOLA !E&' )ota: Es a#u$ donde se reali%a la ad#uisición de los datos, para luego poder procesarlos. 0) Creacin de Métodos de Proceso ( 9ntegrar los datos > &alibrar los patrones > &uantificar las muestras)
o
Facer clic en la pestaña 3rowse ro*ect (en donde estarn todas las inyecciones reali%adas). En la parte superior de esta pestaña, e-isten subpestañas (Sample Sets G 9n*ections > &+annels > 2et+ods > Besult Sets > Besults > Sign Offs > &ur!es).
o
o
o
En la subpestaña simple set aparece el nombre con #ue guarde las muestras inyectadas y en la pestaña 9n*ections aparecern cada una de las inyecciones #ue fueron guardadas con el nom&re de la muestra. 7na !e% ubicada en la pestaña Sample Set ubico el mouse sobre el nombre de las muestras inyectadas (#uedara de color negro), luego se debe presionar el icono #ue dice Be!iew 6ata + rocess + E-traer cromatograma (a#u$ se debe cambiar la longitud de onda (presionar enter) a la cual #uiero medir el compuesto de inter8s (cromatograma en la parte superior), para !er con mayor claridad el compuesto en la muestra inyectada (cromatograma en la parte inferior) Facer clic en el icono #ue dice rocessing arameters Hi%ard + OK (cuadro de procesamiento de m8todo wi%ard) + OK (cuadro de dialogo" nue!o m8todo de proceso).
o
:uego se deba +acer clic en e-t (cuadro de dialogo" 9ntegration pea< detección ) + e-t + Seleccionar donde dice m$nima rea y +acer clic en el pic de inter8s (una !e% #ue el rea m$nima +aya sido seleccionada, se le debe borrar el ultimo decimal y +acer clic en 4est + e-t + e-t (aparecer un cuadro con el nombre del pic #ue +a sido seleccionado *unto con el tiempo de retención de este).
)ota: Facer clic con el botón derec+o del ratón en el grfico para tener acceso a las opciones de %oom ('ull =iew?7n%oom) del menC conte-tual '
o
:uego presiono donde dice" (cuadro de dialogo" 9ntegration ea< detection /) + e-t
o
Aparecer un cuadro de dialogo" región de integración" se debe definir el rea del pic del compuesto de inter8s desde donde comien%a (start) +asta donde termina (end) + e-t
)ota: en este cuadro de dialogo, las reas de los pic ya estn seleccionadas (l$neas de color ro*o, obser!adas en la l$nea base). o
En esta pantalla de rec+a%o de picos (9ntegration G ea< Be*ection) contiene los resultados de la integración de la pantalla precedente. Si se +an integrado adecuadamente los picos de inter8s, continuar con el paso siguiente. 6e lo contrario, utili%ar las opciones Minimum 4rea (rea m$nima) y Minimum 5ei"t (altura m$nima) para continuar definiendo la integración.
)ota:
Facer clic sobre un pico para el #ue se desee definir el rea m$nima o la altura m$nima. El pico aparecer marcado de color ro*o. Facer clic en Minimum 4rea o Minimum 5ei"t. El campo o campos se rellenan automticamente con un nCmero #ue representa el I0J de la altura o rea real del pico. :as opciones 2inimum Area y 2inimum Feig+t in+iben la integración de los picos con reas y alturas iguales o inferiores a los !alores introducidos. &omo alternati!a, introducir los !alores en estos campos de forma manual.
Cuan(o se intro(u)en *os +a*ores en estos )am,os (e forma manua*- se a)ti+a e* .ot/n Test y se ,ue(e 0a)er )*i) en 1* ,ara +isua*i2ar *os resu*ta(os o.teni(os )on *os +a*ores intro(u)i(os' Si e* soft3are (etermina *os +a*ores- e* .ot/n Test se (esa)ti+a y *a ,rue.a se rea*i2a autom4ti)amente' Nota:
Cuando se o&ten"a una inte"racin satisfactoria6 acer clic en )e7t. o
Se abrir la pantalla general de calibrado (&alibration > @eneral)
)ota: se debe aceptar lo #ue ya esta predeterminado y +acer clic en e-t. o
Aparecer un cuadro de dialogo de ;uic< Start y se debe presionar es.
o o o o o o o o o o o o
Se abrir la pantalla de nombres y tiempos de retención (&alibration > ames and Betention 4imes).
)ota: donde dice ame se puede escribir el nombre espec$fico correspondiente a cada pic (compuesto de inter8s). o
Facer clic en )e7t. Se abrir la pantalla de cantidades predeterminadas (&alibration 6efault Amounts) con los nombres de los nue!os componentes
introducidos en la tabla. Fabr una fila para cada uno de los picos integrados !isuali%ados en el cromatograma
)ota: las cantidades (Amount) y las unidades (7nits) se deben escribir de forma manual. o
Facer clic en e-t y se abrir la pantalla de patrones internos de calibrado (&alibration > 9nternal Standards).
)ota: Aceptar la selección predeterminada de E7ternal $tandard Cali&ration (calibrado con patrones e-ternos). o
A continuación, +acer clic en )e7t. Se abrir la pantalla del nombre del m8todo de proceso (rocessing 2et+od ame).
)ota" Se debe escribir el nombre del m8todo correspondiente y luego +acer clic en 'inis+. o
El software Empower integrar el cromatograma aplicando los parmetros configurados, calibrar el patrón y arc+i!ar el nue!o m8todo de proceso. =ol!er a aparecer la !entana de !isuali%ación de datos (=iew 6ata) con la pantalla principal de re!isión acti!a (Be!iew 2ain) y con el nombre del m8todo de proceso en la barra de estado.
)ota: Facer clic en la pestaña Pea8s para !isuali%ar los resultados de la integración, como nombres de los picos, tiempos de retención, cantidades, etc. '.1 Compro&acin Manual del Método de Proceso o
o
7na !e% #ue se reali%aron todas las inyecciones, se deben de integran y cuantificar los cromatogramas, en donde se especifican las reas, tiempo de retención y concentración de cada pic<. Se debe pinc+ar el icono #ue dice =iew 6ata, en esta !entana aparecern todas las inyecciones reali%adas.
o
Facer clic en
(integrar) para integrar el cromatograma.
o
Facer clic en
(calibrar) para calibrar el cromatograma.
o
Facer clic en
(cuantificar) para cuantificar el cromatograma.
)ota: ara !isuali%ar los resultados del proceso de datos manual, +acer clic en el icono (icono de proceso) de la barra de +erramientas. Se abrir la !entana de re!isión de datos (Be!iew). o
o
o
En la !entana =iew 6ata, al +acer clic, me aparecern todas las inyecciones reali%adas al lado i%#uierdo y al lado derec+o me aparecern los cromatogramas. En la parte inferior en la !entana /6 &+annels, y selecciono la l$nea, !oy a ile + $a-e + Cali&ration (!oy guardando cada uno de mis puntos para luego poder +acer la cur!a de calibración). 7na !e% #ue tengo los puntos guardados, presiono donde dice &aliration &ur!e , #ue es donde !oy !iendo mi cur!a de calibración (concentración conocida) con los puntos #ue fueron guardados anteriormente. A#u$ se !a creando la cur!a de cada uno de los componentes de inter8s.
)ota: A cada una de las concentraciones #ue !oy guardando le !oy colocando un nombre. o
o
:uego presiono el icono donde dice Be!iew 2ain Hindow, para regresar al cuadro inicial en donde tengo el cromatograma (cada uno de los compuestos identificados con sus nombres). En el caso #ue se este inyectando muestra (no se conoce la concentración), en la parte inferior en la !entana /6 &+annels, y selecciono la l$nea, !oy a ile + $a-e + 0esult (!oy guardando cada uno de los compuestos #ue ya estn integrados).
'( Ela&oracin del *nforme ara generar un informe una !e% #ue se +an ad#uirido y procesado los datos (integración)"
o
o o
Facer clic en 9rowse Project, en la barra de na!egación. Aparecer la !entana del e-aminador de proyectos (3rowse ro*ect). En la pare superior aparecen !arias pestañas (9nyections, Besults, Samples Sets, &+annels, etc.) En la pestaña *njections6 aparece el listado de todas las inyecciones reali%adas. Facer clic en la pestaña 0esults y, a continuación, en el botón pdate para actuali%ar la !isuali%ación en pantalla. Seleccionar el resultado #ue se #uiere !isuali%ar (#uedara seleccionado de color negro) y +acer clic en el icono para !isuali%ar el cromatograma (se abrir una pestaña, se debe presionar OK), luego se debe ir guardando cada uno de los cromatogramas, presionando el icono
