BAB I PENDAHULUAN A. Latar Latar Bela Belakan kang g Dalam ilmu kimia ada beberapa campuran yang dapat dipisahkan antara lain adalah memisahkan zat padat dari suatu suspensi, memisahkan zat padat dari larutan, memisahkan zat cair, memisahkan campuran dua jenis larutan, dan kromatografi. Kromat Kromatogr ografi afi merupa merupakan kan teknik teknik pemis pemisahan ahan senyaw senyawaa campur campuran an berdas berdasark arkan an perbedaan kecepatan migrasi, karena adanya perbedaan koefisien distribusi masingmasing masing senyawa senyawa di antara dua fase yang saling bersinggungan bersinggungan dan tidak saling campur, campur, yang disebut sebagai fase gerak (mobile (mobile phase) phase) yang berupa zat cair atau zat gas, dan fase diam ( stationary stationary phase) phase) yang berupa zat cair atau zat padat. pabila pemilihan kedua fase dilakukan secara tepat, maka lambat laun komponen sampel akan memisah. plika plikasi si kromat kromatogr ografi afi berkem berkemban bang g dengan dengan cepat cepat sehing sehingga ga memungk memungkink inkan an diperoleh suatu pemisahan, isolasi, dan identifikasi komponen-komponen dengan struktur yang hampir sama satu dengan yang lain yang terdapat dalam suatu sampel. !al tersebut tida tidak k mung mungki kin n dipe dipero role leh h denga dengan n cara cara pemis pemisah ahan an yang yang lain lain.. "eknik eknik krom kromat atog ogra rafi fi diguna digunakan kan pada hampir hampir setiap setiap metode metode analis analisis is sampel sampel komple kompleks ks karena karena kemamp kemampuan uan pemisahannya, kecepatannya, dan penggunaan pengg unaan jumlah sampel yang sedikit. #emisahan #emisahan dan pemurnian pemurnian kandungan tumbuhan tumbuhan terutama terutama dilakukan dilakukan dengan menggunakan menggunakan salah satu dari empat teknik teknik kromatograf kromatografii atau gabungan teknik teknik tersebut. tersebut. Keempat Keempat teknik teknik kromatograf kromatografii itu adalah$ kromatografi kertas (KKt), kertas (KKt), kromatografi lapis tipis (K%"), tipis (K%"), kromatografi gas caw (K&'), caw (K&'), dan kromatografi cair kinerja tinggi (K'K"). Di sampin samping g teknik teknik yang telah telah dikemu dikemukaka kakan, n, bebera beberapa pa teknik teknik lain lain kadangkadang-kada kadang ng digunakan digunakan pada penelitian penelitian fitokimia fitokimia.. #emisahan #emisahan dengan ekstraksi cair-cair cair-cair sederhana sederhana masih tetap bermanfaat bermanfaat di bidang karotenoid. karotenoid. lat untuk ekstraksi cair-cair cair-cair otomatis berupa alat sebar lawan-arus 'raig telah ada sejak lama, tetapi ada kecenderungan alat tersebut baru digunakan scbagai usaha akhir bila teknik lain gagal. lat yang lebih menyenangkan untuk ekstraksi cair-cair telah dikembangkan baru-baru ini, dinamai kromato matogr graf afii
lawa lawann-ar arus us
#eng #enggu guna naan anny nyaa
tete tetess
(K% K%")
yang yang
digu diguna naka kan n
pada pada
skal skalaa
peny penyia iapa pan. n.
tcru tcruta tama ma untu untuk k memi memisa sahk hkan an kand kandun unga gan n yang yang laru larutt dala dalam m air air
(!ostetmann, *).
B. Perumusan Masalah
#erumusan masalah dari makalah ini mengetahui bagaimana "eknik pemisahan secara Kromatografi %awan rus "etes+
C. Tujuan
ntuk mengetahui tentang istilah kromatografi beserta klasifikasinya dan memahami bagaimana teknik pemisahan secara K%" (Kromatografi %awan rus "etes)
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
A. PENE!TIAN K!"MAT"!A#I
Kromatografi adalah suatu teknik pemisahan campuran berdasarkan perbedaan kecapatan migrasi antara dua komponen. #ada kromatografi, komponen-komponen yang dipisahkan diantara dua buah fase yaitu fase diam dan fase gerak. ase diam akan menahan komponen campuran, sedangkan fase gerak akan melarutkan zat komponen campuran. Komponen yang mudah larut tertahan, fase diam akan tertinggal. edangkan komponen yang larut dalam fase gerak akan bergerak lebih cepat. (dnan,/) Kromatografi dibedakan menjadi beberapa macam berdasarkan jenis fasa yang terlibat, antara lain $ . 0. 1. 2.
Kromatografi gas-cair Kromatografi gas-padat Kromatografi cair-cair Kromatografi cair-padat Kromatografi ditemui oleh 3icheal "swett, seorang ahli botani di ni4ersity
5arsawa (#oland) pada tahun 67. #erkataan kromatografi berasal dari perkataan 8unani, yaitu chromos yang berarti warna dan graphos yang berarti menulis. "swett telah menerangkan re4olusi klorofil dan pigmen-pigmen lain yang diekstrak dari tumbuhan dan diterangkan dalam bentuk. (udjadi,*) 9:ika larutan klorofil dalam petroleum eter dituras melalui satu jalur penyerap (saya menggunakan kalsium karbonat, secara amannya yang didapatkan dalam satu tub kaca yang sempit), maka pigmen-pigmen akan terpisah dari atas sehingga kebawah dalam beberapa zon yang berwarna mengikuti jujukan jerapan, yang mana pigmen yang lebih terjerap akan tersesar dengan perlahan berbanding dengan pigmen yang kurang terjerap lalu memaksa pigmen-pigmen lain ke bawah. #engasingan ini adalah lengkap secara praktikal sekiranya satu zon pelarut yang tulen mengekori suatu pigmen. eperti spectrum cahaya, komponen yang berbeda dalam campuran pigmen itu akan terpisah secara sismatik pada lajur kalsium karbonat dan setiap pigmen boleh diidentifikasikan dan
ditentukan
kuantitinya.
aya
menamakan
penyediaan
sedemikian
sebagai
kromatogram dan kaedah itu dinamakan kromatografi;. (udjadi,*) Kromatografi terbentuk apabila terdapat satu fasa pegum dan fasa gerak. asa pegum biasanya ialah cair atau gas. etiap molekul yang berbeda akan terjerap pada fasa
pegun dengan kekuatan yang berbeda. #ada masa yang sama, dua molekul yang berlainan juga mempunyai kelarutan yang berbeda dalam fasa bergerak. (<=toby,0662) Katakanlah kita mempunyai campuran dua bahan dan >. akan terjerap pada fasa pegun dengan kuat manakala > tidak juga mempunyai kelarutan dalam fasa bergerak yang lebih rendah berbanding dengan >. :ustru apabila campuran dan > dibiarkan melalui satu jalur kromatografi, > dapat bergerak dengan lebih cepat berbanding dengan karena mengalami rintangan yang kuat dalam perjalanannya. (dnan,/)
B. K!"MAT"!A#I LA$AN A!US TETES
Kromatografi lawan arus tetes adalah cara pemisahan cair-cair yang didasarkan pada partisi linarut antara dua pelarut yang tidak bercampur, #erbedaan nisbi linarut. 3etode ini melibatkan amatan bahwa fase cair yang ringan dengan afinitas permukaan dinding yang rendah membentuk fase tetesan yang tarik menarik ke atas melalui fase berat dan terlihat adanya gerakan antar muka yang sangat aktif. Dengan mempartisi linarut antara fase diam dan tetesan, pemisahan dapat dicapai linarut yang diisolasi dalam jangka waktu tertentu, tergantung pada parameter seperti ukuran kolom, dan laju aliran pengelusi, dan sering diperbesar dengan mengorbankan kemurnian. (dnan,/) #emakaian tekanan mempunyai fungsi a atau b atau gabungan keduanya $ a. 3emperbesar tekanan pada kolom yang diisi dengan bahan kemas yang berukuran partikel tertentu memperbesar laju aliran pengelusi. b. Kolom yang dielusi dengan pelarut memakai tekanan dapat diisi dengan bahan kertas yang lebih halus dan dengan demikian menghasilkan daya pisah lebih besar. Keuntungan besar jika suatu waktu elusi pendek ialah memperkecil penguraian senyawa peka yang mungkin terjadi selama pemisahan dalam jangka waktu lama. ?stilah @preparatifA mencangkup sejumlah senyawa yang diisolasi mulai dari 3g sampai Kg dan mencakup semua pemisahan, yang tidak dipakai hanya untuk tujuan analitik. (dnan,/) Kromatografi lawan arus mempunyai cirri khas yaitu tanpa penyangga padat, factor yang memberi kelebihan terpenting kepada cara ini. %inarut adalah ditahan oleh penyangga padat dan pengaruh penyerapan ini sering terlihat pada kur4a elusi yang
menunjukan pembentukan ekor senyawa yang dipisahkan. elain itu, penyangga padat dapat menimbulkan pencemaran dan denaturasi cuplikan. kan tetapi, penghilangan penyangga padat dan penggunaan system lawan arus menimbulkan sejumlah komponen.
BAB III MET"D"L"I PE!C"BAAN
%.& Alat 'an Bahan
1..
lat-alat -
1..0
Kertas saring jarum suntik !amilton B4en #ensil #enggaris &elas kimia 66m% &elas beaker
>ahan-bahan -
%.( Pr)se'ur Per*)+aan
#emisahan dilakukan pada model "okyo Eikakikai ("okyo, :epang) 166 kromatografi D''' dengan 166 kapiler (266 0 mm i.d) yang dihubungkan secara seri. ekitar g fraksi alkaloid mentah dilarutkan dalam 06 m% campuran $ fase bergerak dan stasioner, dan disuntikkan dengan jarum suntik !amilton ke dalam loop peralatan D'''. istem yang digunakan adalah he=ane$ ethyl acetate$ methanol$ water (6$ F$ F$ ) dalam mode ascending. Debit fase gerak ditetapkan 16 m% G jam dan eluat dikumpulkan dalam pecahan ca. m%. raksi dianalisis lebih lanjut dengan K%" dan kromatografi gas (&'H setiap pecahan kesepuluh) dan kemudian digabungkan seperti yang ditunjukkan pada "abel .
?DB%< %K%B?D EB3 TABERNAEMONTANA #.
Ta+le &. Alkal),'s ,'ent,-e' r)m
Tabernaemontana
hilariana
D''' fraction a (composition ) (J2)
lkaloids present 1-!ydro=ycoronaridine 'oronaridine
3ethod identiIcation b "%', &', 3
of
> (20J7F)
'oronaridinec
"%', &', 3, !-3E, 3E
1
' (77J)
oacanginec
"%', &', 3, !-3E, 3E
1
D (66J6)
oacangine
"%', &', 3
1-(0-B=opropyl) coronaridine < (J02)
oacangine
"%', &', 3
1-(0-B=opropyl)coronaridine oacangine hydro=yindolenine (0FJ1/)
?bogaminec
"%', &', 3, !-3E
& (1*J211)
oacangine pseudoindo=yl
"%', &', 3
'oronaridine pseudoindo=yl ! (212J2F)
"abernanthine c
"%', &', 3
? (276J27F)
"h
"%', &', 3
ambar ! "#kema $ase erak %an $ase &iam
''-
D''' tumbuh dari pengamatan bahwa fase ringan dengan afinitas permukaan dinding rendah membentuk tetesan diskrit yang naik melalui fase berat dengan terlihat bukti gerak interfacial yang sangat aktif. Dalam kondisi ideal setiap tetesan bisa menjadi LpiringL jika disimpan lebih sedikit diskrit di seluruh sistem. ?tu metode yang dikembangkan oleh "?3! et al. mengeksploitasi ide-ide ini dan pada dasarnya terdiri dari 066Mto 766 kolom 4ertikal panjang (06 sampai 76 cm) dari tabung bore kaca silanized sempit (,F sampai 0 mni, i.d.) yang dihubungkan secara seri oleh tubefel "eflon kapiler. %angkah pertama untuk mengisi seluruh sistem dengan fase diam diikuti oleh injeksi sampel (dilarutkan baik dalam fase cahaya atau dalam fase berat atau dalam campuran fase .baik) dalam ruang sampel. 3obile N hase ini dipompa melalui ruang sampel dan dimasukkan dengan tabung kapiler ke bagian bawah kolom gelas pertama dari lubang yang lebih lebar. liran stabil dari tetesan naik terbentuk. Ketika droplet mencapai bagian atas kolom, itu dikirim ke bagian bawah kolom berikutnya melalui tubing "eflon, sehingga meregenerasi tetesan baru. Dalam kondisi yang sesuai, tuba kapiler hanya memungkinkan fase gerak mengalir. ejumlah kecil fase diam juga dapat memasuki tubing "eflon awalnya, tetapi efeknya tidak signifikan. Ketika fase bergerak bergerak melalui kolom, turbulensi dalam droplet mempromosikan pembagian efisien dari zat terlarut antara dua fase. "ergantung pada masalah pemisahan, ponsel N mungkin lebih berat atau lebih ringan daripada fase diam. Ketika lebih ringan, fase gerak dikirimkan di bagian bawah kolom (mode menaik) dan, ketika lebih berat, melalui bagian atas (mode menurun)
BAB I/ HASIL DAN PEMBAHASAN "ahap ini telah melewati skrining fraksi dengan "%', sampel juga dianalisis oleh &' J ?D (Dagnino et al., ) dengan penambahan standar otentik dari koleksi kami sendiri. &radien suhu yang digunakan diberikan pemisahan dasar dan memungkinkan identifikasi semua alkaloid yang standarnya tersedia. raksi yang terkumpul kemudian dikelompokkan dan dianalisis lebih lanjut oleh !E&' J 3. lkaloid diidentifikasi berdasarkan pencocokan 3 dengan bank data >-E< (mengandung 20.666 senyawa) dan juga dengan perbandingan fragmentasi 3 mereka dengan data literatur (an der !eidjen dan erpoorte, *). raksi >, ' dan , masing-masing, menghasilkan hampir koroner murni (6 mg), 4oacangine (06 mg) dan ibogamine (06 mg). ?ni adalah senyawa utama dari kulit akar ". hilariana dan karena itu, diperoleh dalam jumlah dan kemurnian yang cukup tinggi untuk
melakukan analisis spektrometri tanpa pemurnian lebih lanjut. fraksi memberi campuran coronaridine dan turunan 1-hidroksilnya. raksi D dan < memberikan campuran dari turunan 4oacangine dan 1- (0-o=opropyl) coronaridine, sebuah artefak yang dicurigai (4an >eek et al., *2a). amun, karena metode ini tidak menggunakan aseton dan hanya kondisi lembut yang digunakan, 1- (0-o=opropyl) coronaridine mungkin merupakan senyawa yang benar dari tanaman. >ahkan, Bkuyama dkk. (0) juga melaporkan isolasi dan akti4itas biologis 1 - (0oksopropil) koronaridin dari ". panda-caCui. raksi & memberikan campuran alkaloid tipe pseudoindo=yl. raksi ! memberi sejumlah kecil tabernanthine murni. raksi aya memberikan sejumlah kecil alkaloid "h murni, yang tidak dapat diidentifikasi oleh data 3-nya. &' J ?D dan !E&' J 3 analisis tidak mampu mendeteksi alkaloid lain dalam jumlah yang cukup untuk memungkinkan identifikasinya. emua alkaloid terisolasi dikenal senyawa dan termasuk kelas ibogan. 3eskipun beberapa fraksi mengandung dua atau tiga senyawa, campuran kompleks alkaloid dapat dipisahkan pada skala preparatif. >erbeda dengan kromatografi kolom adsorpsi, D''' menggunakan sistem polaritas rendah terbukti menjadi alat yang sederhana dan berguna untuk pemisahan alkaloid indol dari kulit akar ". hilariana. elanjutnya, tidak ada dekomposisi ekstrak yang diamati baik selama atau setelah proses pemisahan. Keterbatasan teknik ini adalah bahwa waktu yang diperlukan untuk pemisahan dan 4olume pelarut yang dikonsumsi tinggi. Di sisi lain, pelarut yang digunakan murah (kelas reagen umum), tidak ada gradien kompleks fase gerak dan tidak ada penyangga yang diperlukan, dan prosesnya dapat dilakukan secara otomatis. Bleh karena itu kerugiannya relatif kecil mengingat teknik ini memungkinkan fraksinasi dari ekstrak tumbuhan yang sangat sensitif.
BAB / PENUTUP Kes,m0ulan . D''' menggunakan sistem polaritas rendah terbukti menjadi alat yang sederhana
dan berguna untuk pemisahan alkaloid indol dari kulit akar ". hilariana 0. #elarut yang digunakan murah (kelas reagen umum), tidak ada gradien kompleks fase gerak dan tidak ada penyangga yang diperlukan, dan prosesnya dapat dilakukan secara otomatis. 1. "eknik ini memungkinkan fraksinasi dari ekstrak tumbuhan yang sangat sensitif.
DA#TA! PUSTAKA
Reinhard, E. (1980). Planta Medica Journal of Medical Plant Research. Droplet Counter-Current Chromatography and its Applicaon to the Preparave Scale Separaon of Natural Products , Vol
39, 1-18. Vileas, !. ". (1999). Ph#toche$ical "nal#sis. Droplets Counter-current Chromatography of Indole Alkaloids From a!ernaemontana hilariana , %ol 10, &0-&3 .
