LABORATORIUM FITOKIMIA FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS HASANUDDIN
LAPORAN LENGKAP PRAKTIKUM ISOLASI SENYAWA BIOAKTIF ISOLASI FLAVONOID DAUN BELIMBING WULUH ( Averrhoa
OLEH
KELOMPOK V (LIMA) GOLONGAN JUMAT SORE 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
MARDIA SASKIAH VYNZZIE GUNANANDA MULIYATI NUR ALFONS YAHYA I AGUSTINA WAN NOR FADZLINA
N11107016 N11107020 N11107035 N11107057 N11107062 N11107077 N11107083
ASISTEN ICHSAN SAID, S.Si. MAKASSAR 2009
1
bilimbi )
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ............................. .............................................. ................................. ................................. .................... ... i DAFTAR ISI ........................... ............................................ ................................. ................................. ................................ ............... ii BAB I LATAR BELAKANG BELAKANG ................................ ................................................ ................................. ...................... ..... 1 I.1 I.2 I.3
Penda Pendahul huluan uan ...... ......... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ..... .. 1 Maksu Maksud d dan Tuju Tujuan an Perc Percoba obaan an .... ....... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ..... ..... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ... 3 Prins Prinsip ip Percob Percobaan aan ....... .......... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ..... 3
BAB II TINJAUA TINJAUAN N PUSTAKA PUSTAKA .......... ............... ......... ........ ......... ......... ......... ......... ......... .......... ......... ........ ......... .......
6
II.1 Uraian Uraian Tumbuha Tumbuhan n ......... .............. ......... ......... ......... ......... .......... ......... ........ ......... ......... ......... .......... ......... ........ .... 6 II.2 Ekstraks Ekstraksii ......... .............. ......... ......... .......... ......... ........ ......... ......... ......... ......... ......... .......... ......... ........ ......... ......... ......... ..... 9 II.3 Metode Metode Pemisaha Pemisahan n ........ ............. .......... ......... ........ ......... ......... ......... ......... ......... .......... ......... ........ ......... ........ ... 30 BAB III METODE KERJA ........................... ............................................ ................................. ............................ ............ 45 III.1 III.1 III.2 III.2 III.3 III.3 III.4 III.4 III.5 III.5 III.6 III.6
Alat dan Bahan Bahan ...... .......... ......... ......... ......... ......... ......... .......... ......... ........ ......... ......... ......... .......... ......... ........ ....... ... Penyiapa Penyiapan n Sampel Sampel ......... .............. ......... ........ ......... ......... ......... .......... ......... ........ ......... ......... ......... ......... ....... ... Ekstraks Ekstraksii dan dan Partisi Partisi Sampel Sampel ......... ............. ........ ......... ......... ......... .......... ......... ........ ......... ......... ...... .. Isolasi Isolasi dengan dengan Krom Kromatog atografi rafi Kolom Kolom Konve Konvensio nsional nal ......... .............. ......... ......... ..... Isolasi Isolasi dengan dengan Krom Kromatog atografi rafi Lapis Lapis Tipis Tipis Preparat Preparatif if ...... ........... .......... .......... ....... KLT Dua Dimensi Dimensi dan Multi Multi Eluen Eluen ........ ............ ......... ......... ......... ......... ......... .......... ......... ....... ...
45 45 46 47 50 50
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN PEMBAHASAN ................. .................................. ................................. ..................... ..... 52 BAB V KESIMPULAN KESIMPULAN ............................ ............................................ ................................. ................................. ................ 61 V.1 Kesimpu Kesimpulan lan ........ ............. ......... ......... .......... ......... ........ ......... ......... ......... ......... ......... .......... ......... ........ ......... ......... ...... .. V.2 Saran Saran dan Kritik Kritik ......... .............. ......... ......... ......... ......... .......... ......... ........ ......... ......... ......... .......... ......... ........ ....... ...
61 61
DAFTAR DAFTAR PUSTAK PUSTAKA A ........ ............. .......... ......... ........ ......... ......... ......... ......... ......... .......... ......... ........ ......... ......... ......... ........ ...
61
LAMPIRAN LAMPIRAN ......... ............. ......... ......... ......... .......... ......... ........ ......... ......... ......... ......... ......... .......... ......... ........ ......... ......... ......... ........ ...
iii
GAMBAR GAMBAR ........ ............. ......... ......... .......... ......... ........ ......... ......... ......... .......... ......... ........ ......... ......... ......... ......... ......... .......... ....... ..
iv
SKEMA SKEMA KERJA KERJA ........ ............. ......... ........ ......... ......... ......... .......... ......... ......... ......... ........ ......... ......... ......... .......... ......... ....... ...
vii
HASIL HASIL DISKUSI DISKUSI ………………………… ……………………………………… ………………………… ……………………. ………. xiii
2
BAB I LATAR BELAKANG
1.1 Pend endahulua luan Indo Indone nesi sia a memi memili liki ki keka kekaya yaan an alam alam yang yang sang sangat at meli melimp mpah ah,, baik baik kekaya kekayaan an fauna fauna maupun maupun kekaya kekayaan an flora floranya nya.. Tidak Tidak salah salah lagi lagi bahwa bahwa di Indonesia terdapat banyak tumbuhan yang beraneka ragam lengkap dengan ciri khasnya masing-masing. Hal ini disebabkan Indonesia terletak di garis khatulistiwa dengan iklim tropis sehingga tanahnya subur dan cocok untuk berbagai macam jenis tanaman. Berbicara mengenai obat, sumber penggunaannya dapat ditelusuri dari budaya dan konsep kesehetan dari beberapa prinsip pandang. Di Indonesia send sendir iri, i,
lan landasa dasan n
ilmi ilmiah ah
kons konsep ep
peng pengob obat atan an
tra tradisi dision onal al
belu belum m
di
dokumen dokumentasi tasikan kan secara secara sistemat sistematis, is, namun namun manfaat manfaatnya nya telah telah dirasaka dirasakan n terutama oleh masyarakat yang hidupnya jauh dari fasilitas modern. Di Indonesia penggunaan obat tradisional yang lebih dikenal sebagai jamu jamu,, telah telah melua meluas s sejak sejak zaman zaman nenek nenek moyan moyang g hingga hingga kini kini dan terus terus dilestar dilestarikan ikan sebagai sebagai warisan warisan budaya. budaya. Bangsa Bangsa Indonesi Indonesia a yang yang terdiri terdiri dari berbagai berbagai suku bangsa, bangsa, memiliki memiliki keanekar keanekaragam agaman an obat tradisio tradisional nal yang dibuat dari bahan-bahan alami bumi Indonesia, termasuk tanaman obat. Tidak Tidak sedikit sedikit masyara masyarakat kat mengalih mengalihkan kan keperca kepercayaan yaan kepada kepada produkprodukproduk kecantikan dan kesehatan dari bahan-bahan bahan-bahan tradisional yang banyak diproduksi. Apalagi fenomena ini didukung oleh banyaknya warisan resep
3
dari dari nenek nenek moya moyang ng kita kita yang yang teruj terujii khasi khasiatn atnya ya dan dan kenyat kenyataan aan bahwa bahwa Indonesia memiliki keanekaragaman hayati jenis tumbuhan obat. Manf Manfaa aatt kean keanek ekar arag agam aman an haya hayati ti ters terseb ebut ut bagi bagi manu manusi sia a sang sangat at beragam seperti sebagai obat, kosmetik, pengharum, penyegar, pewarna, dan penghasil senyawa organik yang jenisnya dan jumlahnya tak terhingga. Salah Salah satuny satunya a adala adalah h tanama tanaman n belimb belimbing ing wuluh wuluh ( Averrhoa bilimbi ). Belim Belimbin bing g wuluh wuluh ( Averrho Averrhoa a bilimbi bilimbi ) merup merupak akan an tanam tanaman an yang yang memi memilik likii banya banyak k kegun kegunaan aan hampir hampir disem disemua ua bagian bagianny nya a karen karena a memi memilik likii banya banyak k kandu kandunga ngan n kompon komponen en kimia kimia sepert sepertii sapon saponin, in, tanin tanin,, glukos glukosida ida,, kalsi kalsium um oksalat, oksalat, sulfur, sulfur, asam format, peroksid peroksidase ase pada batangny batangnya, a, serta serta tannin, tannin, sulfur, asam format, peroksidase, kalsium oksalat, kalium sitrat, flavonoid pada daunnya, dimana diketahui bahwa komponen-komponen kimia tersebut memiliki khasiat masing-masing. Oleh karena itu, dilakukanlah percobaan isolasi senyawa bioaktif. Pada praktiku praktikum m ini, akan dilakuka dilakukan n pengisol pengisolasia asian n senyawa senyawa flavonoi flavonoid d dari daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi ). bilimbi ). Percobaan ini dilakukan atas dasar telah diketahuinya kandungan senyawa flavonoid pada tanaman ini dan tujuan untuk untuk menentu menentukan kan metode metode ekstras ekstrasi, i, isolasi isolasi dan pengiden pengidentifik tifikasia asian n pada simplisia ini.
4
1.2 Maksud Maksud dan dan Tuju Tujuan an Perco Percobaa baan n 1.2.1. 1.2.1. Maksu Maksud d Percoba Percobaan an Mengetah Mengetahui ui dan memaham memahamii cara-car cara-cara a mengekstr mengekstraksi aksi,, mengiso mengisolasi lasi,, dan mengidentifikasi komponen kimia dari suatu tanaman atau bahan alam. 1.2.2. 1.2.2. Tujua Tujuan n Perco Percobaa baan n 1.
Mene Menent ntuk ukan an
meto metode de
ekst ekstra raks ksii
simp simpli lisi sia a
daun daun
beli belimb mbin ing g
wulu wuluh h
( Averrhoa Averrhoa bilimbi ). ). 2.
Menen Menentuk tukan an metod metode e pemis pemisah ahan an atau atau isolas isolasii kompo komponen nen kimia kimia dari dari simplisia daun belimbing wuluh ( Averrhoa ( Averrhoa bilimbi ). ).
3.
Menentukan metode identifikasi komponen kimia dari simplisia daun belimbing wuluh belimbing wuluh ( Averrhoa ( Averrhoa bilimbi ). ).
1.3 1.3 Prin Prinsi sip p Perc Percob obaa aan n 1.3. .3.1 Mas Maseras erasii pelar pelarut ut organ organik ik akan akan mene menembu mbus s dindi dinding ng sel sel dan dan masuk masuk ke dalam dalam rongga sel yang mengandung zat aktif, zat aktif akan larut dalam pelarut organik tersebut sehingga terjadi perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dan pelarut organik di luar sel, maka larutan terpekat akan berd erdifus ifusii
kelua eluarr
sel
dan dan
pro proses ses
ini ini
berul erula ang
teru terus s
sampai pai
terj erjadi
keseimbangan antara konsentrasi cairan zat aktif di dalam sel dan diluar sel.
1.3.2 1.3.2 Ekstra Ekstraksi ksi CairCair-Pa Padat dat Memisahk Memisahkan an satu atau lebih lebih senyawa senyawa dengan dengan mengguna menggunakan kan satu pela pelaru rutt dima dimana na seny senyaw awa a ters terseb ebut ut akan akan terd terdis istr trib ibus usii menu menuru rutt ting tingka katt
5
kepolarannya menggunakan magnetik stirrer atau sentrifus, dan yang tidak larut akan membentuk endapan.
1.3.3 1.3.3 Kroma Kromatog tograf rafii Lapis Lapis Tipis Tipis Adsorp Adsorpsi si yaitu yaitu pemis pemisah ahan an daya daya serap serap kompo komponen nen kimia kimia terhad terhadap ap adsor adsorben ben (fase (fase diam). diam). Dan Dan parti partisi si yaitu yaitu kompon komponen en kimia kimia berger bergerak ak naik naik meng mengiku ikuti ti fase fase gerak gerak (elue (eluen) n) denga dengan n kecep kecepata atan n yang yang berbed berbeda a tingka tingkatt kepolarannya, hal inilah yang menyebabkan terjadinya pemisahan.
1.3.4 1.3.4 Kromatog Kromatografi rafi Kolom Kolom Konvens Konvensiona ionall Pemisahan suatu senyawa dari senyawa lain dalam suatu ekstrak, dimana senyawa-senyawa itu akan terpartisi sesuai tingkat kepolarannya, dim dimana ana fase fase diam diam yang yang dig digunak unakan an adal adalah ah bubu buburr sili silika ka kas kasar yang yang dimampa dimampatkan tkan pada kolom yang terlebih terlebih dahulu dahulu dimasuk dimasukkan kan kapas kapas untuk untuk mencegah silikanya turun, dan digunakan kertas saring agar proses partisi dapat dapat berjalan berjalan baik dan lebih lebih selektif selektif karena karena lewat lewat pori-por pori-porii pengguna penggunaan an perb perban andi ding ngan an elue eluen n tert terten entu tu berg bergun una a untu untuk k memp mempar arti tisi si ekst ekstra rak k dan dan digunakan dari yang paling nonpolar lalu paling polar agar proses pemisahan lebih baik dan dibantu dengan bantuan gaya gravitasi.
1.3.5 1.3.5 Kromatog Kromatografi rafi Lapis Lapis TIpis TIpis Preparat Preparatif if Adsorpsi dan partisi berdasarkan pada jumlah dan cara penotolan cuplikan yang berkesinambungan yang memberikan hasil elusi berupa pita.
6
1.3.6 1.3.6 Multi Multi Eluen Eluen dan KLT Dua Dimensi Dimensi Prins insip
dari ari
mult ulti
elue luen
yait yaitu u
adsorp sorps si
dan
parti artis si
den dengan gan
meng menggu guna naka kan n lemp lempen eng g GF 254 254 seba sebaga gaii fase fase diam diam dan dan bebe bebera rapa pa perbandingan eluen dengan tingkat kepolaran tertentu untuk mempertegas dan memastikan adanya senyawa tunggal. Sedangkan Sedangkan prinsip dari KLT dua dimensi adalah adsorpsi dan partisi denga engan n
mengg enggun unak aka an
lem lempeng peng
GF
254
sebag ebaga ai
fase ase
diam iam
dan
perbandingan eluen pada profil KLT dimana akan memperpanjang lintasan noda (Rf) oleh menunjukkan senyawa tunggal.
7
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
II.1 II.1 Urai Uraian an Tum Tumbu buha han n II.1. II.1.1 1 Klasif Klasifika ikasi si Tum Tumbuh buhan an (1) (1) Belimbing Wuluh ( Averrhoa bilimbi ) Kingdom
:
Plantae
Divisio
:
Mlyophyta
Subdivisio
:
Angiospermae
Class
:
Magnoliopsida
Ordo
:
Oxalidales
Family
:
Oxalidaceae
Genus
:
Averrhoa
Spesies
:
Averrhoa bilimbi
II.1.2 .1.2 Nama ama Lai Lain n Lime Limeng ng,, seli selime meng ng,, thli thlime meng ng (Ace (Aceh) h),, sele seleme meng ng (Gay (Gayo) o),; ,; Asom Asom,, belimbing, balimbingan (Batak), malimbi (Nias),; balimbieng (Minangkabau), belim belimbin bing g asam asam (Mela (Melayu) yu),; ,; Balim Balimbin bing g (Lamp (Lampung ung). ). calinc calincing ing,, balin balingbi gbing ng (Sunda),; Balimbing wuluh (Jawa), bhalingbhing bulu (Madura).; Blingbing buloh (Bali), limbi (Bima), balimbeng (Flores),; Libi (Sawu), belerang (Sangi). (1)
8
II.1 II.1.3 .3 Morf Morfol olog ogii Tumb Tumbuh uhan an Pohon kecil, tinggi mencapai 10 m dengan batang yang tidak begitu besar dan mempunyai garis tengah hanya sekitar 30 cm. Ditanam sebagai pohon buah, kadang tumbuh liar dan ditemukan dari dataran rendah sampai 500 m dpi. (2) Pohon Pohon yang yang berasa berasall dari dari Ameri Amerika ka tropi tropis s ini mengh menghend endaki aki tempat tempat tumbuh tumbuh tidak tidak ternaung ternaungii dan cukup cukup lembab. lembab. Belimbin Belimbing g wuluh wuluh mempuny mempunyai ai batang batang kasar kasar berbenjo berbenjol-be l-benjol, njol, percaba percabangan ngan sedikit, sedikit, arahnya arahnya condong condong ke atas. Cabang muda berambut halus seperti beludru, warnanya coklat muda. Daun Daun berupa berupa daun majemuk majemuk menyirip menyirip ganjil dengan dengan 21-45 21-45 pasang pasang anak daun. Anak daun bertangkai pendek, bentuknya bulat telur sampai jorong, ujung runcing, pangkal membundar, tepi rata, panjang 2-10 cm, lebar 1-3 cm, warnanya hijau, permukaan bawah hijau muda. Perbungaan berupa malai, berkelompok, berkelompok, keluar dari batang atau percabangan yang besar, bunga kecilkecil berbentuk bintang warnanya ungu kemerahan. (2) Bentuk buahnya bulat lonjong bersegi, panjang 4-6,5 ern, warnanya hijau kekuningan, bila masak berair banyak, rasanya asam. Biji bentuknya bulat telur, gepeng. Rasa buahnya asam, digunakan sebagai sirop penyegar, bahan penyedap masakan, membersihkan noda pada kain, mengkilapkan barang-barang yang terbuat dari kuningan, membersihkan tangan yang kotor atau sebagai bahan obat tradisional. Perbanyakan dengan biji dan cangkok. (2)
9
II.1 II.1.4 .4 Kand Kandun unga gan n Kim Kimia ia Batang Batang belim belimbi bing ng wuluh wuluh ( Averrho Averrhoa a bilimbi) bilimbi) mengandung mengandung saponin, tanin, glukosida, kalsium oksalat, sulfur, asam format, peroksidase. (2) Daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi) mengandung tannin, sulfur, asam format, peroksidase, kalsium oksalat, kalium sitrat, flavonoid. (2) Buah belimbing wuluh ( Averrhoa ( Averrhoa bilimbi ) mengandung flavonoid dan saponin. (3) Bunga belimbing wuluh ( Averhoa bilimbi ) mengandung alkaloida dan polifenol. (3)
II.1.5 .1.5 Kegu egunaan aan Bunga belimbing wuluh ( Averrhoa ( Averrhoa bilimbi ) berguna untuk pengobatan batu batuk k dan dan sari sariaw awan an (sot (sotam amat atit itis is). ). Seda Sedang ngka kan n daun daun beli belimb mbin ing g wulu wuluh h ( Averrhoa bilimbi ) memi memilik likii kegun kegunaan aan untuk untuk menyem menyembuh buhka kan n sakit sakit perut perut,, gondongan (parotitis), dan rematik. Untuk buah belimbing wuluh ( Averrhoa ( Averrhoa bilimbi ) dapat berguna sebagai obat untuk menyembuhkan batuk rejan, gusi berdarah, sariawan, sakit gigi berlubang, jerawat, panu, tekanan darah tinggi, kelu kelump mpuh uhan an,,
memp memper erba baik ikii
fung fungsi si
penc pencer erna naan an,,
dan dan
rada radang ng
rekt rektum um..
Sedan Sedangka gkan n untuk untuk batan batangny gnya, a, belum belum ditemu ditemuka kan n penggu penggunaa naanny nnya a dalam dalam masyarakat dikarenakan sifatnya yang keras. (2&3)
10
II.1 II.1.6 .6 Data Data Eko Ekolo logi gi Frekuensi
: Frekuensi pe pertumbuhan be belimbing wu wuluh dari ta tahun ke tahu tahun n cuku cukup p cepa cepat. t. Hal Hal ini ini dika dikare rena naka kan n tana tanama man n belim belimbi bing ng wuluh wuluh tumbuh tumbuh diberb diberbag agai ai iklim iklim terten tertentu tu khususnya di daerah iklim tropis. (1)
Habitat
: tumbuhan be b elimbing wuluh biasanya dapat tumbuh dimana saja tanpa perlu adanya populasi sendiri. (1)
Kead Keadaa aan n tan tanah ah
: tum tumbuh buh di di tan tanah ah yang yang subu suburr dan dan kaya kaya unsu unsurr har hara. a. (1) (1)
Tempat pat tumbuh
: Iklim lim yang ang cocok ada adalah ikl iklim trop tropiis, den dengan gan cura urah hujan hujan yang cukup tinggi. tinggi. Ketingg Ketinggian ian tempat tempat adalah adalah 200-450 m di atas permukaan laut. (1)
Lokasi
: India, India, Myanmar , Laos, Laos, Kamboja, Kamboja , Thailand, Thailand, Indonesia, china. china.
Menye enyeb bar
juga juga
ke
Seme emenanju anjun ng
Ind India, ia,
Muangthai, dan Filipina. (1)
II.2 Ekstraksi II.2 II.2.1 .1 Defi Defini nisi si Ekst Ekstra rak k Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif dari simplisisa nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan. (4)
11
II.2 II.2.2 .2 Ekst Ekstra raks ksii Ekstraksi adalah suatu proses pemisahan dari bahan padat maupun cair cair deng dengan an bant bantua uan n pelar elarut ut.. Pela Pelaru rutt yang yang digu diguna naka kan n haru harus s dapat apat mengekstrak substansi yang diinginkan tanpa melarutkan material lainnya. (4) Pelarut organik yang paling sering digunakan dalam mengekstraksi zat aktif dari sel tanaman adalah metanol, etanol, kloroform, hexan, aseton, benzen dan etil asetat. (4) Proses terekstraksinya zat aktif dalam sel tanaman adalah : pelarut organik akan menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif, zat aktif akan larut dalam pelarut organik tersebut sehingga terjadi perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dan pelarut organik di luar sel, maka larutan terpekat akan berdifusi keluar sel dan dan proses proses ini berula berulang ng terus terus sampa sampaii terjad terjadii keseim keseimba banga ngan n antar antara a konsentrasi cairan zat aktif di dalam sel dan diluar sel. (4) Ekstraksi padat cair atau leaching adalah transfer difusi komponen terlarut dari padatan inert ke dalam pelarutnya. Proses ini merupakan proses yang bersifat fisik karena komponen terlarut kemudian dikembalikan lagi ke keadaan semula tanpa mengalami perubahan kimiawi. Ekstraksi dari bahan padat dapat dilakukan jika bahan yang diinginkan dapat larut dalam solven pengeks pengekstrak traksi. si. Ekstraks Ekstraksii berkelan berkelanjuta jutan n diperluk diperlukan an apabila apabila padatan padatan hanya hanya sedikit larut dalam pelarut. Namun sering juga digunakan pada padatan yang
12
larut karena efektivitasnya. [ Lucas, Howard J, David Pressman. Principles and Practice In Organic Chemistry] Faktor-faktor yang mempengaruhi laju ekstraksi adalah: (4) -
Tipe ipe pe persia rsiap pan sam samp pel
-
Waktu ek ekstraksi
-
Kuantitas pe pelarut
-
Suhu pelarut
-
Tipe pelarut Minyak Minyak dapat dapat diekstra diekstraksi ksi dengan dengan perkolas perkolasi, i, imersi, imersi, dan gabunga gabungan n
perkolasi-imersi. Dengan metode perkolasi, pelarut jatuh membasahi bahan tanpa tanpa merendam merendam dan berkonta berkontak k dengan dengan seluruh seluruh spasi spasi diantara diantara partikel partikel.. Sementara imersi terjadi saat bahan benar-benar terendam oleh pelarut yang bersirkulasi di dalam ekstraktor. Sehingga dapat disimpulkan: (4) -
Dalam lam proses ses perk perkol ola asi, laj laju di saat saat pela pelaru rutt berkon rkonttak denga engan n
permuk permukaan aan bahan bahan selalu selalu tinggi tinggi dan pelaru pelarutt meng mengali alirr denga dengan n cepat cepat membasahi bahan karena pengaruh gravitasi. -
Dalam lam pros proses es imer imersi si,, bahan ahan berk erkonta ontak k denga engan n pelar larut secar ecara a
periodeik sampai bahan benar-banar terendam oleh pelarut. Oleh karena itu pelaru pelarutt menga mengalir lir perla perlaha han n pada pada permu permukaa kaan n bahan, bahan, bahka bahkan n saat saat sirkulasinya cepat. -
Untu Untuk k perk perkol olas asii yang yang baik, baik, parti partike kell baha bahan n haru harus s sama sama besar besar untuk untuk
mempermudah pelarut bergerak melalui bahan.
13
-
Dalam Dalam kedu kedua a prosed prosedur, ur, pela pelarut rut disi disirk rkula ulasik sikan an secar secara a counter-current
terhad terhadap ap bahan. bahan. Sehin Sehingg gga a bahan bahan dengan dengan kandu kandunga ngan n minya minyak k paling paling sedikit harus berkontak dengan pelarut yang kosentrasinya paling rendah. Metode perkolasi biasa digunakan untuk mengekstraksi bahan yang kandungan minyaknya lebih mudah terekstraksi. Sementara metode imersi lebih cocok digunakan untuk mengekstraksi minyak yang berdifusi lambat. (4) Ekstraksi adalah teknik yang sering digunakan bila senyawa organik (sebagian besar hidrofob) dilarutkan atau didispersikan dalam air. Pelarut yang tepat tepat (cukup (cukup untuk untuk melarutk melarutkan an senyawa senyawa organik; organik; seharus seharusnya nya tidak tidak hidrofob) ditambahkan pada fase larutan dalam airnya, campuran kemudian diaduk diaduk dengan dengan baik sehingg sehingga a senyawa senyawa organik organik diekstra diekstraksi ksi dengan dengan baik. baik. Lapisan organik dan air akan dapat dipisahkan dengan corong pisah, dan seny senyaw awa a orga organi nik k dapa dapatt diam diambi bill ula ulang dari dari lapi lapisa san n org organik anik deng dengan an menyingkirkan menyingkirkan pelarutnya. Pelarut yang paling sering digunakan adalah dietil eter eter (C2H5OC2H5), yang yang memi memili liki ki titi titik k didi didih h rend rendah ah (seh (sehin ingg gga a muda mudah h disingkirkan) dan dapat melarutkan berbagai senyawa organik. (4) Ekstraksi bermanfaat untuk memisahkan campuran senyawa dengan berbagai sifat kimia yang berbeda. Contoh yang baik adalah campuran fenol (C6H5OH), OH), anili anilin n (C6H5NH2) dan dan tolu toluen en (C6H5CH3), yang yang semuan semuanya ya larut larut dalam dietil eter. Pertama anilin diekstraksi dengan asam encer. Kemudian fenol fenol dieks diekstra traks ksii denga dengan n basa basa encer encer.. Tolue Toluen n dapat dapat dipis dipisahk ahkan an deng dengan an menguapk menguapkan an pelarutn pelarutnya. ya. Asam yang digunaka digunakan n untuk untuk mengeks mengekstrak trak anilin anilin
14
ditam ditamba bahi hi basa basa untuk untuk mendap mendapatk atkan an kemba kembalili anili anilinny nnya, a, dan dan alkal alkalii yang yang digun digunak akan an mengek mengekstr strak ak fenol fenol diasa diasamk mkan an untuk untuk menda mendapat patkan kan kembal kembalii fenolnya. (4) Bila senyawa organik tidak larut sama sekali dalam air, pemisahannya pemisahannya akan lengkap. Namun, nyatanya, banyak senyawa organik, khususnya asam dan dan basa basa orga organi nik k dala dalam m dera deraja jatt tert terten entu tu laru larutt juga juga dala dalam m air. air. Hal Hal ini ini merupakan masalah dalam ekstraksi. Untuk memperkecil kehilangan yang diseba disebabk bkan an gejal gejala a pelar pelaruta utan n ini, ini, disar disaran ankan kan untuk untuk dilak dilakuka ukan n ekstr ekstraks aksii berulang. Daripada anda menggunakan keseluruhan pelarut itu untuk satu kali ekstraks ekstraksi, i, lebih lebih baik mengguna menggunakan kan sebagiansebagian-seba sebagian gian pelarut pelarut untuk untuk beberapa kali ekstraksi. Kemudian akhirnya menggabungkan bagian-bagian pelarut tadi. Dengan cara ini senyawa akan terekstraksi dengan lebih baik. Alasannya dapat diberikan di bawah ini dengan menggunakan menggunakan hukum partisi. (4) Perhatikan senyawa senyawa organik yang larut baik dalam air dan dalam dietil eter ditambahkan pada campuran dua pelarut yang tak saling campur ini. Rasio Rasio senyawa senyawa organik organik yang larut larut dalam dalam masing-m masing-masin asing g pelarut pelarut adalah adalah konstan. Jadi, (4) Ceter / Cair = k (konstan) Ceter dan Ceter dan Cair adalah Cair adalah konsentrasi zat terlarut dalam dietil eter dan di air. k adalah sejenis konstanta kesetimbangan dan disebut koefisien partisi. Nilai k bergantung pada suhu. (4)
15
II.2. II.2.3 3 Penge Pengerti rtian an Ekstr Ekstraks aksii Ekstraksi adalah suatu proses pemisahan dari bahan padat maupun cair cair deng dengan an bant bantua uan n pelar elarut ut.. Pela Pelaru rutt yang yang digu diguna naka kan n haru harus s dapat apat mengekstrak substansi yang diinginkan tanpa melarutkan material lainnya. (4)
II.2 II.2.4 .4 Tuju Tujuan an Eks Ekstr trak aksi si Untuk menarik komponen kimia yang terdapat dalam simplisia. Proses ekstraksi ini didasarkan atas perpindahan massa komponen zat padat yang ada dalam simplisia ke dalam pelarut organik. Setelah pelarut menembus lapisan lapisan permukaa permukaan, n, dinding dinding sel zat padat padat yang terlarut, terlarut, berdifus berdifusii karena karena faktor faktor perbe perbedaa daan n konsen konsentra trasi si dalam dalam sel dan dan pelar pelarut ut organ organik ik di luar luar sel, sel, proses proses ini berselan berselang g terus-m terus-mener enerus us sampai sampai terjadi terjadi keseimba keseimbangan ngan antara antara konsentrasi konsentrasi cairan zat aktif di dalam dan di luar sel. (5) Pembuatan sediaan ekstrak dimaksudkan agar zat berkhasiat yang terdapa terdapatt disimpli disimplisia sia terdapa terdapatt dalam dalam bentuk bentuk yang mempunyai mempunyai kadar kadar yang tinggi dan hal ini memudahkan zat berkhasiat dapat diatur dosisnya. Dalam sediaa sediaan n ekstra ekstrak k yang yang dapat dapat distan distandar darisa isasi sikan kan kadar kadar zat zat berkh berkhasi asiat at di dalamnya sukar untuk diperoleh hasil yang sama. (5)
16
II.2. II.2.5 5 JenisJenis-Jen Jenis is Ekstra Ekstraksi ksi Metode Ekstraksi secara Dingin A.
Maserasi
Metode Metode maseras maserasii merupaka merupakan n cara penyaria penyarian n yang sederha sederhana, na, yang dilakuka dilakukan n dengan dengan cara cara merenda merendam m serbuk serbuk simplisia simplisia dalam dalam cairan cairan penyari penyari selam selama a bebera beberapa pa hari hari pada pada temper temperatu aturr kamar kamar terlin terlindun dung g dari dari cahay cahaya. a. Metode Metode maseras maserasii digunak digunakan an untuk untuk menyari menyari simplisia simplisia yang yang mengand mengandung ung komponen kimia yang mudah larut dalam cairan penyari, tidak mengandung benzoin, tiraks dan lilin. (6)
Keterangan: A = Bejana untuk maserasi berisi bahan yang sedang dimaserasi B = Tutup C = Pengaduk yang digerakkan secara mekanik Maserasi Maserasi umumnya umumnya dilakuka dilakukan n dengan dengan cara : memasuk memasukkan kan simplisia simplisia yang sudah diserbukkan dengan derajat halus tertentu sebanyak 10 bagian
17
ke dalam bejana maserasi yang dilengkapi pengaduk mekanik, kemudian ditambahkan 75 bagian cairan penyari ditutup dan dibiarkan selama 5 hari pada temperatur kamar terlindung dari cahaya sambil berulang-ulang diaduk. Setel Setelah ah 5 hari, hari, disari disaring ng kedala kedalam m dalam dalam bejana bejana penam penampun pung, g, kemudi kemudian an ampasnya diperas dan ditambah cairan penyari lagi secukupnya dan diaduk kemudian disaring lagi hingga diperoleh sari 100 bagian. Sari yang diperoleh diperoleh ditutup dan disimpan pada tempat yang terlindung dari cahaya selama 2 hari, endapan yang terbentuk dipisahkan dan filtratnya dipekatkan. (6) Keuntungan cara penyarian dengan maserasi adalah cara pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana dan mudah diusahakan. Kerugian cara cara maser maserasi asi adalah adalah penge pengerj rjaan aanny nya a lama lama dan penyar penyarian ianny nya a kuran kurang g sempurna. (6) Maserasi dapat dilakukan modifikasi misalnya : (6) Digesti, Digesti , adalah cara maserasi dengan menggunakan
1.
pemanasan lemah, yaitu pada suhu 40 – 50 oC. Cara maserasi ini hanya dapat dapat dilaku dilakukan kan untuk untuk simpl simplis isia ia yang yang zat aktifn aktifnya ya tahan tahan terhad terhadap ap pemanasa pemanasan. n. Dengan Dengan pemanasa pemanasan n akan akan diperole diperoleh h keuntung keuntungan an antara antara lain : (6) a.
Kekentalan
pelarut
berkurang,
yang
dapat
mengakibatkan berkurangnya lapisan-lapisan batas. b.
Daya melarutkan cairan penyari akan meningkat, sehin sehingga gga peman pemanas asan an terse tersebut but memp mempuny unyai ai peng pengaru aruh h yang yang sama sama dengan pengadukan.
18
c.
Koefisien di difusi be berbanding lu lurus de dengan su suhu absolut dan berbanding terbalik dengan kekentalan, hingga kenaikan suhu akan berpengaruh pada kecepatan difusi. Umumnya kelarutan zat aktif akan meningkat bila suhu dinaikkan. Maserasi Maserasi dengan dengan mesin mesin pengadu pengaduk k , Pengguna Penggunaan an
2.
mesin pengaduk yang berputar terus-menerus, waktu proses maserasi dapat dipersingkat menjadi 6 sampai 24 jam. (6) Remaserasi, Remaserasi , Cair Cairan an peny penyar arii diba dibagi gi dua, dua, Selu Seluru ruh h
3.
serbuk simplisia simplisia dimaserasi dimaserasi dengan cairan cairan penyari penyari pertama, pertama, sesudah die dienapt naptua uan ngkan gkan
dan
diper iperas as,,
ampas pas
dim dimaserasi rasi
lagi agi
deng dengan an
cairanpenyari yang kedua. (6) Maserasi Maserasi
4.
melingk melingkar ar ,
Mase Masera rasi si
dapa dapatt
dipe diperb rbai aiki ki
deng dengan an meng mengus usah ahak akan an agar agar cair cairan an peny penyar arii sela selalu lu berg berger erak ak dan dan menye menyebar bar.. Denga Dengan n cara cara ini penya penyari ri selalu selalu menga mengalir lir kembal kembalii secar secara a berkesinambungan berkesinambungan melalui serbuk simplisia dan melarutkan zat aktifnya. Keuntungan cara ini : (6) a.
Aliran cairan penyari mengurangi lapisan batas.
b.
Cairan
penyari
akan
didistribusikan
secara
seragam, sehingga akan memperkecil kepekatan setempat. c. 5.
Waktu yang diperlukan lebih pendek. Maser Maserasi asi melin melingk gkar ar berti berting ngkat kat,, Pada Pada maser aseras asii
melingkar penyarian tidak dapat dilaksanakan secara sempurna, karena
19
pemind pemindaha ahan n massa massa akan akan berhen berhenti ti bila bila keseim keseimban bangan gan telah telah terjad terjadi. i. Masalah ini dapat diatas dengan maserasi melingkar bertingkat. (6) B.
Perkolasi Perkolasi adalah cara penyarian yang dilakukan dengan mengalirkan
cairan penyari melalui serbuk simplisia yang telah dibasahi. Kekuatan yang berperan pada perkolasi antara lain : gaya berat, kekentalan, daya larut, tegangan permukaan, difusi, osmosa, adesi, daya kapiler dan daya gesekan (friksi). (6) Alat yang digunaka digunakan n untuk untuk perkolasi perkolasi disebut disebut perkolator perkolator,, cairan yang digunakan untuk menyari disebut cairan penyari atau menstrum, larutan zat aktif yang keluar dari perkolator disebut sari /perkolat, sedang sisa setelah dilakukannnya penyarian disebut ampas atau sisa perkolasi. (6) Keterangan: A = Perkolator B= Botol Cairanpenyari C = Keran D = Tutup karet E = Gabus F = Sarangan G = Botol
20
Kecuali dinyatakan lain, perkolasi dilakukan sebagai berikut : 10 bagian simplisia atau campuran simplisia dengan derajat halus yang cocok dibasahi dengan dengan 2,5 bagian sampai 5 bagian bagian cairan cairan penyari, penyari, lalu dimasuk dimasukkan kan ke dala dalam m
beja bejana na
tert tertut utup up
seku sekura rang ng-k -kur uran angn gnya ya
sela selama ma
3
jam. jam.
Mass Massa a
dipindahkan sedikit demi sedikit ke dalam percolator sambil tiapkali ditekan hati-hati, dituangi dengan cairan penyari secukupnya sambil cairan mulai menetes dan di atas simplisia masih terdapat selapis cairan penyari. Lalu perkolator ditutup dan dibiarkan selama 24 jam. (6) Cara perkolator lebih baik dibandingkan dengan cara maserasi karena: (6) a.
Aliran cairan penyari menyebabkan adanya pergantian larutan yang
terjad terjadii deng dengan an laruta larutan n yang yang konse konsenta ntasin sinya ya lebih lebih rendah rendah,, sehin sehingg gga a meningkatkan derajat perbedaan konsentrasi. (6) b.
Ruangan Ruangan diantara diantara butir-bu butir-butir tir serbuk serbuk simplisia simplisia membent membentuk uk saluran saluran
tempat mengalir cairan penyari. Karena kecilnya saluran kapiler tersebut, maka kecepatan pelarut cukup untuk mengurangi lapisan batas, sehingga dapat meningkatkan perbedaan konsentrasi. (6) Untuk Untuk mengh menghind indar arii kehil kehilan angan gan minyak minyak atsiri atsiri pada pada pembu pembuata atan n sari, sari, maka cara perkolasi diganti dengan cara reperkolasi. Dalam proses perkolasi biasa, perkolat yang dihasilkan tidak dalam kadar yang maksimal. (6)
Metode Ekstraksi secara Panas A.
Refluks
21
Metode refluks merupakan metode berkesinambungan dimana cairan penyari penyari secara kontinu kontinu akan menyari menyari zat aktif aktif di dalam dalam simplisia simplisia.. Cairan Cairan penyari dipanaskan sehingga menguap dan uap tersebut dikondensasikan oleh pending pendingin in balik, balik, sehingg sehingga a mengalam mengalamii kondensa kondensasi si menjadi menjadi molekulmolekulmolekul cairan dan jatuh kembali ke dalam labu alas bulat sambil menyari simplisia, proses ini berlangsung berlangsung secara berkesinambungan berkesinambungan dan dilakukan 3 kali dalam waktu 4 jam. (7)
d
Keterangan :
c
a. Labu alas bulat b. Slang air masuk b
c. Kondensor bola d. Slang air keluar
a
Alat Refluks Keuntungan metode refluks : (7)
-
Cairan penyari yang diperlukan lebih sedikit dan secara
langsung diperoleh hasil yang lebih pekat.
-
Serbuk simplisia disari oleh cairan penyari yang murni,
sehingga dapat menyari zat aktif lebih banyak.
22
Simplisia yang biasa diekstraksi dengan cara ini adalah simplisia yang memp mempun unya yaii komp kompon onen en kimi kimia a yang yang taha tahan n terh terhad adap ap pema pemana nasa san n dan dan mempunyai tekstur yang keras seperti akar, batang, buah/biji dan herba. (7) Serbuk Serbuk simplisia simplisia atau bahan bahan yang akan diekstra diekstraksi ksi secara secara refluks refluks ditimbang kemudian dimasukkan ke dalam labu alas bulat dan ditambahkan pelarut organik misalnya methanol sampai serbuk simplisia terendam kurang lebih 2 cm diatas permukaan simplisia, atau 2/3 dari volume labu kemudian labu alas bulat dipasang kuat pada statif pada heating mantel lalu mantel lalu kondensor dipasang pada labu alas bulat yang dikuatkan dengan klem pada statif. (8) Aliran air dan pemanasan dijalankan sesuai dengan suhu pelarut yang digunakan. Setelah 4 jam dilakukan penyaringan filtratnya ditampung dalam wadah wadah penampu penampung ng dan ampasny ampasnya a ditamba ditambah h lagi pelarut pelarut dan dikerjakan dikerjakan sepe sepert rtii semu semula la,, ekst ekstra raks ksii dila dilaku kuka kan n seba sebany nyak ak 3 – 4 jam. jam. Filt Filtra ratt yang yang diperole diperoleh h dikumpul dikumpulkan kan dan dipekatk dipekatkan an dengan dengan alat rotavapo rotavapor, r, kemudia kemudian n dilakukan pengujian selanjutnya. (8)
B.
Soxhletasi Soxhletasi merupakan penyarian simplisia secara berkesinambungan,
cair airan
penya enyarri
dipa ipanas naskan kan
hing ingga
mengu nguap,
uap
cair cairan an
peny enyari ari
terkondensasi menjadi molekul cairan oleh pendingin balik dan turun menyari simplisia di dalam klonsong dan selanjutnya masuk kebali ke dalam labu alas bulat setelah melewati pipa siphon, proses ini berlangsung hingga proses penyarian zat aktif sempurna yang ditandai dengan beningnya cairan penyari
23
yang melalui pipa siphon tersebut atau jika diidentifikasi dengan KLT tidak memberikan noda lagi. (5)
Keterangan a = Pendingin b = mantel c = Pipa samping d = sifon e = labu alas bulat
Keuntungannya Keuntungannya : cairan penyari penyari yang diperlukan lebih lebih sedikit dan lebih peka pekat. t. Peny Penyar aria ian n dapa dapatt dite diteru rusk skan an sesu sesuai ai deng dengan an kepe keperl rlua uan, n, tanp tanpa a menambah volume cairan penyari. Kerugiannya : larutan dipanaskan terusmenerus, menerus, sehingga sehingga zat aktif aktif yang tidak tahan tahan pemanasa pemanasan n kurang kurang cocok. cocok. Metode soxhlet bila dilihat secara keseluruhan termasuk cara panas namun
24
proses proses ekstraks ekstraksinya inya secara secara dingin, dingin, sehingg sehingga a metode metode soxhlet soxhlet digolong digolongkan kan dalam cara dingin. (5) Sampel atau bahan yang akan diekstraksi terlebih dahulu diserbukkan dan ditimbang kemudian dimasukkan ke dalam klonsong yang telah dilapisi kertas saring sedemikian rupa (tinggi sampel dalam klonsong tidak boleh lebih dari pipa sifon). Selanjutnya labu alas bulat diisi dengan cairan penyari yang sesuai kemudian ditempatkan di atas water bath atau heating mantel dan diklem dengan kuat kemudian klonsong yang telah diisi sampel dipasang pada pada labu labu alas alas bulat bulat yang yang dikuat dikuatka kan n dengan dengan klem klem dan dan caira cairan n penyar penyarii dita ditamb mbah ahka kan n untu untuk k memb membas asah ahka kan n samp sample le yang yang ada ada dala dalam m klon klonso song ng (diusahakan tidak tejadi sirkulasi). (6) Setela Setelah h itu konde kondenso nsorr dipasa dipasang ng tegak tegak lurus lurus dan dikle diklem m pada pada stati statif f dengan dengan kuat. kuat. Alira Aliran n air dan dan peman pemanas as dilan dilanjut jutkan kan hingg hingga a terjad terjadii prose proses s ekstraksi zat aktif sampai sempurna (biasanya (biasanya 20 – 25 kali sirkulasi). Ekstrak yang diperoleh dikumpulkan dan dipekatkan pada alat rotavapor. (8)
C.
Metode In Infus Merupakan metode ekstraksi panas yang dilakukan dengan merendam
sampel tanaman dalam pelarut dengan suhu 90ºC selama 15 menit. Hal ini sesuai dengan teori bahwa peningkatan suhu berlangsung paling sedikit 15 menit menit hingg hingga a 30 menit. menit. Jika Jika dilaku dilakukan kan selam selama a 30 menit menit maka maka metod metode e ekstraks ekstraksinya inya disebut disebut dekok. dekok. Biasanya Biasanya alat yang yang digunaka digunakan n disebut disebut panci panci infus. infus. Jika Jika tidak tidak dinyatak dinyatakan an lain prosedur prosedur kerja kerja infus infus dengan dengan merenda merendam m
25
sampel sampel dalam dalam pelar pelarut ut yang yang bersu bersuhu hu 90ºC 90ºC selam selama a 15 menit menit setela setelah h itu didinginkan dan disaring. (8)
Keterang Keterangan: an: A = Panci Panci berisi berisi bahan bahan dan air B = Tangas air D.
Metode Destilasi Destilas Destilasii atau penyulin penyulingan gan adalah adalah suatu suatu metode metode pemisah pemisahan an bahan bahan
kimi kimia a berd berdas asar arka kan n perb perbed edaa aan n kece kecepa pata tan n atau atau kemu kemuda daha han n meng mengua uap p (volatilitas) bahan. Dalam penyulingan, campuran zat dididihkan sehingga menguap, dan uap ini kemudian didinginkan kembali ke dalam bentuk cairan. Zat Zat yang yang memi memili liki ki titi titik k didi didih h lebi lebih h rend rendah ah akan akan meng mengua uap p lebi lebih h dulu dulu.. Jadi ada perbedaan komposisi antara fase cair dan fase uap, dan hal ini meru merupa paka kan n syar syarat at utam utama a supa supaya ya pemi pemisa saha han n deng dengan an dist distil ilas asii dapa dapatt dilakukan. dilakukan. (6) Kalau Kalau komposi komposisi si fase uap sama sama dengan dengan komposi komposisi si fase cair, maka pemisahan
dengan
jalan
destilasi
tidak
dapat
dilakukan.
Metode ini merupakan termasuk unit operasi kimia jenis perpindahan massa. Pener Penerapa apan n proses proses ini didasa didasarka rkan n pada pada teori teori bahwa bahwa pada pada suatu suatu laruta larutan, n, masing-masing komponen akan menguap pada titik didihnya. Model ideal distilasi didasarkan pada Hukum Raoult dan Hukum Dalton. (6)
26
1: Heat source 2: Still pot 3: Still head 4: Thermometer 5: Condenser 6: Cooling water in 7: Cooling water out Alat Destilasi 8: Distillate/receiving Distillate/receiving flask 9: Vacuum/gas inlet 10: Still receiver 11: Heat control 12: Stirrer speed control 13: Stirrer/heat plate 14: Heating (Oil/sand) bath
27
15: Stirrer bar/anti-bumping granules 16: Cooling bath. Ini adalah adalah gambar gambaran an desti destilas lasii yang yang sanga sangatt sederh sederhana ana ditem ditemuka ukan. n. Namu Namun n konse konsep p dasar dasar destil destilasi asi terseb tersebut ut sepert sepertii gamba gambarr di atas. atas. Tujua Tujuan n destilasi umumnya antara lain : (6) a. Untuk Untuk memis memisahk ahkan an dan dan sekali sekaligus gus menuru menurunka nkan n suatu suatu zat (zat (zat padat padat maup maupun un zat zat cair cair)) dari dari suat suatu u camp campur uran an yang yang memp mempun unya yaii titi titik k didi didih h berbeda. b. Untuk mengetahui titik didih suatu zat Destilas Destilasii uap dapat dapat dipertim dipertimbang bangkan kan untuk untuk menyari menyari serbuk serbuk simplisia simplisia yang yang mengan mengandu dung ng kompon komponen en yang yang mempu mempunya nyaii tititk tititk didih didih tingg tinggii pada pada teka tekana nan n udar udara a norm normal al.. Pada Pada pema pemana nasa san n bias biasa a terj terjad adii kemu kemung ngki kina nan n kerusa kerusakan kan zat aktifn aktifnya ya.. Untuk Untuk mence mencega gah h hal terseb tersebut ut maka maka dilak dilakuk ukan an dengan destilasi uap. Dengan adanya uap air yang masuk, maka tekanan kesetimbangan uap zat kandunga kandungan n akan akan diturunk diturunkan an menjadi menjadi sama sama dengant dengantekan ekanan an bagian bagian di adlam suatu system, sehingga produk akan terdestilasi dan terbawa oleh uap air air yang ang menga engali lir. r. Dest Destil ilas asii uap uap buka bukan n sema semata ta-m -mat ata a suat suatu u pros proses es pengua penguapa pan n pada pada titik titik didihn didihnya ya,, tetap tetapii suatu suatu prose proses s perpi perpinda ndaha han n massa massa kesuatu media yang bergerak. (6)
28
Uap jenuh akan membasahi permukaan bahan, melunakkan jaringan dan menembus ke dalam melalui dinding sel, dan zat aktif akan pindah ke rongga uap air yang aktif dan selanjutnya akan pindah ke rongga uap yang bergerak melalui antar fase. Proses ini disebut hidrofusi. Di bawah ini contoh alat dan fungsi bagian-bagiannya : (6) Alat Destilasi (6) 1. Labu destilasi, destilasi, berfungsi sebagai sebagai wadah atau tempat tempat suatu campuran campuran zat cair yang akan di destilasi. Terdiri dari : a. Labu dasar bulat. b. Labu erlenmeyer erlenmeyer khusus khusus untuk destilasi destilasi atau refluks. 2. Steel Head, berfungsi berfungsi sebagai penyalur penyalur uap atau gas yang akan masuk ke alat pendingin pendingin (kondensor) (kondensor),, dan biasanya biasanya labu destilas destilasinya inya sudah sudah dilengkapi dengan leher yang berfungsi sebagai steel head.
29
3. Thermometer, Thermometer, biasanya biasanya digunkan digunkan untuk mengukur mengukur suhu uap uap zat cair yang yang dide didest stil ilas asii
sela selama ma
pros proses es
dest destil ilas asii
berl berlan angs gsun ung, g,
dan dan
seri sering ngny nya a
thermometer yang digunakan harus, a. Bers Berska kala la suhu suhu ting tinggi gi yang yang diat diatas as titi titik k didi didih h zat zat cair cair yang yang akan akan didestilasi. b. Ditempatkan pada labu destilasi atau steel head dengan ujung atas reservoir HE sejajar dengan pipa penyalur uap ke kondensor. 4. Kondensor, memiliki 2 celah, yaitu celah masuk dan celah keluar, untuk alir aliran an uap uap hasi hasill reak reaksi si dan dan untu untuk k alir aliran an air air kera keran. n. Pend Pendin ingi gin n yang yang digunakan biasanya adalah air yang dialirkan dari dasar pipa,tujuannya adalah agar bagian dari dalam pipa lebih lama mengalami mengalami kontak dengan air sehingga pendinginan lebih sempurna dan hasil yang dihasilkan lebih sempurna. 5. Labu Labu didih didih,, biasan biasanya ya selal selalu u berasa berasa atau atau keset keset,, yang yang berfu berfungs ngsii untuk untuk sebagai wadah sampel. Contohnya untuk memisahkan alkohol dan air. 6. Pipa dalam = pipa destilasi, berfungsi sebagai tempat mengalirnya mengalirnya uap air yang telah didinginkan oleh pendingin pada bagian luarnya. 7. Adaptor (Recervoir ( Recervoir Adaptor ), ), berfungsi untuk menyalurkan hasil destilasi yang yang sudah sudah terkon terkondis disii untuk untuk disalu disalurk rkan an ke penam penampun pung g yang yang telah telah tersedia. Miny Minyak ak
Meng Mengu uap
merup erupak aka an
subta ubtans nsii
yan yang
meny enyebabk babka an/
menimbulkan bau dari bemacam-macam tanaman. Sifat-sifat Umumnya tidak berwa berwarna rna dan dan tidak tidak berca bercamp mpur ur denga dengan n air. air. Sumbe Sumber-s r-sum umber ber simpli simplisia sia
30
teruta terutama ma dari dari tumbu tumbuh-t h-tum umbu buhan han,, miner mineral, al, dan dan
mikro mikroorg organi anisme sme.. Cara Cara
memperoleh Minyak Menguap antara lain : (6)
-
Penyulingan Penyulingan dengan uap air, dengan memanaskan memanaskan atau menguapkan menguapkan
zat cair lalu uap tersebut didinginkan kembali supaya jadi cair dengan bantuan kondensor.
-
Hidr Hidrol olis isa a
enzi enzima mati tik, k,
peme pemeca caha han n
ikat ikatan an
glik glikos osid idis iste terh rhad adap ap
glikosidayang dilakukan dengan enzim tertentu yang disebut glikosidase.
-
Dekstru Dekstruksi ksi (Penyuli (Penyulingan ngan biasa), biasa), merupak merupakan an metode metode yang sangat sangat
pentin penting g dari dari dalam dalam mengan menganali alisis sis suatu suatu bahan bahan yang yang bertuj bertujua uan n untuk untuk merubah sampel menjadi bahan yang dapat diukur.
-
Penguran Pengurangan gan tekanan, tekanan, beberap beberapa a minyak minyak menguap menguap dapat dapat disuling disuling
dengan pengurangan tekanan atmosfer.
-
Pemer Pemerasa asan, n, atau atau pengem pengempaa paan n dilak dilakuk ukan an untuk untuk menda mendapat patkan kan
berbagai minyak jeruk dengan menggunakan alat pemeras.
-
Enfleura Enfleurage, ge, merupak merupakan an ekstrak ekstraksi si mengguna menggunakanp kanpelau elautt cara cara kuno
yang sampe sekarang digunakan. Bahan pelarut yang digunakan adalah minyak murni. Lemak murni biasanya dengan bahan-bahan lain dioleskan pada pada permu permuka kaan an kaca kaca tipis. tipis. Lemba Lembaran ran kaca kaca yang yang telah telah diole dioles s lemak lemak disusun dalam rak secara teratur. Kemudian ditempeli dengan bungabunga, setelah dua atau tiga hari, bunga-bunga yang layu dibuang diganti dengan segar, dilakukan berulang, sampai lemak benar-benar telah jenuh dengan minyak bunga.
31
Keguna Kegunaan an minyak minyak mengu menguap ap antara antara lain lain sebag sebagai ai korige korigensi nsia a odori odoris, s, karminatifum, makanan, dan antiseptik. Untuk klasifikasi minyak menguap antara lain : (6)
- Hidrokarbon : Terpen-terpen/Siskuiterpen - Alkohol : Ester dan alkohol - Aldehid - Keton - Fenol - Ester Fenolik : Ester dan Fenol - Oksida-oksida : Peroksida - Ester-ester : Ester-ester dan Alkohol II.3 II.3 Meto Metode de Pem Pemis isah ahan an II.3. II.3.1 1 Kroma Kromatog togra rafi fi Lapis Lapis Tipis Tipis (KLT) (KLT) Pada Kromatografi Lapis Tipis (KLT), zat penjerap merupakan merupakan lapisan tipis serbuk halus yang dilapiskan pada lempeng kaca, plastik ataulogam secara secara merata. merata. Dengan memaka memakaii KLT, pemisahan pemisahan
senyawa senyawa yang amat
berbed berbeda a seper seperti ti senyaw senyawa a organ organik ik alam alam dan senya senyawa wa organi organik k sinte sintetik tik,, komplek kompleks s anorgani anorganik-a k-anorg norganik anik dan bahan bahan ion anorganik anorganik dapat dapat dilakuka dilakukan n beberapa menit dengan alat yang harganya tidak terlalu mahal. (9) Pada Pada kroma kromatog tograf rafii kolom kolom merupa merupakan kan prose proses s yang yang lamba lambat, t, yang yang memb membutu utuhka hkan n penyer penyerap ap relat relatif if dalam dalam jumlah jumlah yang yang besar besar demiki demikian an pula pula cuplikan yang digunakan, sedangkan dalam kromatografi lapis tipis hanya membutuhkan membutuhkan penyerap penyerap dan cuplikan dalam dalam jumlah yang sedikit sedikit dan noda-
32
noda yang terpisahkan dilokalisir pada plat seperti pada lembaran kertas. Setelah Setelah pemisah pemisahan an mudah mudah diperole diperoleh h senyawa senyawa – senyawa senyawa yang terpisah terpisah secara individu yaitu dengan jalan menggeruknya dan mengumpulkan tiaptiap lapisan dalam mana lap[isan tersebut dirap. (9) Adsorben yang paling anyak digunakan dalam KLT adalah silikagel dan alumi aluminiu nium m oksid oksida. a. Silika Silika gel gel umumn umumnya ya menga mengandu ndung ng zat tamba tambahan han kalsium sulfat untuk mempertinggi daya lekatnya. Zat ini digunakan untuk adsorben universal untuk kromatografi senyawa netral, asam dan basa. (10) Pemisa Pemisahan han komp kompon onen en suatu suatu senya senyawa wa yang yang dipis dipisahk ahkan an denga dengan n kromatografi lapis tipis tergantung pada jenis pelarut, zat penyerap dengan sifat daya serap masing-masing komponen. Komponen yang terlarut akan terbawa terbawa oleh fase diam (penyera (penyerap) p) dengan dengan kecepata kecepatan n perpinda perpindahany hanyang ang berbedaberbeda-beda beda.. Perbandi Perbandingan ngan kecepata kecepatan n bergerak bergeraknya nya kompone komponen n terlarut terlarut dalam fase gerak (pelarut) adakah dasar untuk mengidentifikasi komponen yang dipisahkan, perbandingan kecepatan ini dinyatakan dalam Rf (Rate of Flow), dengan persamaan : (11) Jarak yang ditempuh senyawa terlarut Rf = Jarak yang ditempuh pelarut Pelaksanaan Kromatografi Lapis Tipis Kroma Kromatog togra rafi fi diguna digunaka kan n untuk untuk memisa memisahk hkan an subst substans ansii campur campuran an menjadi menjadi kompone komponen-ko n-kompo mponenn nennya. ya. Seluruh Seluruh bentuk bentuk kromatog kromatografi rafi berkerja berkerja berdas berdasark arkan an prins prinsip ip ini. ini. Semu Semua a kroma kromatog tograf rafii memil memiliki iki fase fase diam diam (dapa (dapatt berupa berupa padatan, padatan, atau atau kombina kombinasi si cairan-pa cairan-padata datan) n) dan fase gerak gerak (berupa (berupa
33
cairan atau gas). Fase gerak mengalir melalui fase diam dan membawa komponen-komponen yang terdapat dalam campuran. Komponen-komponen yang berbeda bergerak pada laju yang berbeda. Kita akan membahasnya lebih lanjut. (12) Pelaksaanan kromatografi lapis tipis menggunakan sebuah lapis tipis silika atau alumina yang seragam pada sebuah lempeng gelas atau logam atau plastik yang keras. Jel silika (atau alumina) merupakan fase diam. Fase diam untuk kromatografi lapis tipis seringkali juga mengandung substansi yang mana dapat berpendarflour dalam sinar ultra violet, alasannya akan dibahas selanjutnya. Fase gerak merupakan pelarut atau campuran pelarut yang sesuai. (12)
Sebua Sebuah h garis garis mengg mengguna unakan kan pinsi pinsill digam digambar bar dekat dekat bagian bagian bawah bawah lempengan dan setetes pelarut dari campuran pewarna ditempatkan pada garis itu. Diberikan penandaan pada garis di lempengan untuk menunjukkan posisi awal dari tetesan. Jika ini dilakukan menggunakan tinta, pewarna dari tinta akan bergerak selayaknya kromatogram dibentuk. (12)
34
Ketika bercak dari campuran itu mengering, lempengan ditempatkan dalam sebuah gelas kimia bertutup berisi pelarut dalam jumlah yang tidak terlalu banyak. Perlu diperhatikan bahwa batas pelarut berada di bawah garis dimana dimana posisi posisi bercak bercak berada. berada. Alasan Alasan untuk untuk menutup menutup gelas kimia kimia adalah adalah untuk meyakinkan bawah kondisi dalam gelas kimia terjenuhkan oleh uap dari pelarut. Untuk mendapatkan kondisi ini, dalam gelas kimia biasanya ditempa ditempatkan tkan beberapa beberapa kertas kertas saring saring yang terbasa terbasahi hi oleh pelarut. pelarut. Kondisi Kondisi jenuh dalam gelas kimia dengan uap mencegah penguapan pelarut. Karena pelar pelarut ut berger bergerak ak lamba lambatt pada pada lempe lempenga ngan, n, komp kompone onen-k n-kom ompo ponen nen yang yang berbed berbeda a dari dari campu campuran ran pewar pewarna na akan akan berger bergerak ak pada pada kecep kecepata atan n yang yang berbeda dan akan tampak sebagai perbedaan bercak warna. (12)
Gambar : menunjukkan lempengan setelah pelarut b ergerak setengah dari lempengan.
Pelarut dapat mencapai sampai pada bagian atas dari lempengan. Ini akan memberik memberikan an pemisah pemisahan an maksima maksimall dari kompone komponen-ko n-kompon mponen en yang berwarna untuk kombinasi tertentu dari pelarut dan fase diam. (12) Jika anda ingin mengetahui bagaimana jumlah perbedaan warna yang tela telah h terb terben entu tuk k dari dari camp campur uran an,, anda anda dapa dapatt berh berhen enti ti pada pada baha bahasa san n
35
sebelumnya. Namun, sering kali pengukuran diperoleh dari lempengan untuk memudah memudahkan kan identifi identifikasi kasi senyawasenyawa-seny senyawa awa yang yang muncul. muncul. Pengukur Pengukuran an ini berdasarkan pada jarak yang ditempuh oleh pelarut dan jarak yang tempuh oleh bercak warna masing-masing. (12) Keti Ketika ka pela pelaru rutt mend mendek ekat atii
bagi bagian an atas atas lemp lempen enga gan, n, lemp lempen enga gan n
dipindah dipindahkan kan dari gelas kimia kimia dan posisi posisi pelarut pelarut ditandai ditandai dengan sebuah sebuah garis, garis, sebelum sebelum mengala mengalami mi proses proses penguap penguapan. an. Penguku Pengukuran ran berlangs berlangsung ung sebagai berikut: (13)
Sebagai contoh, jika komponen berwarna merah bergerak dari 1.7 cm dari garis awal, sementara pelarut berjarak 5.0 cm, sehingga nilai R f untuk komponen berwarna merah menjadi: (13)
Jika mengulang percobaan ini pada kondisi yang tepat sama, nilai R f yang akan diperoleh untuk setiap warna akan selalu sama. Sebagai contoh, nila nilaii Rf untuk untuk warna warna merah merah selal selalu u adalah adalah 0.34. 0.34. Namu Namun, n, jika jika terdap terdapat at
36
perubaha perubahan n (suhu, (suhu, kompos komposisi isi pelarut pelarut dan sebagainy sebagainya), a), nilai nilai tersebu tersebutt akan beru erubah. bah. Anda Anda haru arus meng mengid iden enti tifi fika kasi si
teta etap
pewa pewarn rna a
mengin nging gat
yang yang
tert terten entu tu..
teknik knik ini jik jika Mari Mari
kita kita
liha lihatt
and anda
ingin gin
baga bagaim iman ana a
meng menggun gunak akan an kroma kromatog tograf rafii lapis lapis tipis tipis untuk untuk meng mengana analis lisis is pada pada bagian bagian selanjutnya. (13) Beberapa faktor yang mempengaruhi nilai Rf adalah : (13)
-
Pelarut
-
Bahan penmgambang (jenis dan ketebalan lapisan)
-
Kejenuhan ruangan akan pelarut
-
Kelembaban udara
-
Konsentrasi
-
Komposisi larutan diperiksa
-
Panjang trayek migrasi
-
Senyawa asing
-
Ketidak homogenan kertas
-
Arah serabut kertas
-
Mutu dan sifat dari lapisan adsorbsi dan kertas
-
Derajat kejenuhan bejana pemisah.
II.3.2 II.3.2 Kromatog Kromatografi rafi Kolom Kolom Konvensio Konvensional nal dan Kromatog Kromatografi rafi Vakum Vakum Cair Kromatografi Kolom Konvensional Kroma Kromatog togra rafi fi kolom kolom merupa merupakan kan metod metode e kroma kromatog tograf rafii klasi klasik k yang yang masih banyak digunakan. Kromatografi Kromatografi kolom digunakan untuk memisahkan senyawasenyawa-sen senyawa yawa dalam dalam jumlah jumlah yang banyak banyak berdasa berdasarkan rkan adsorps adsorpsii dan
37
partisi. Kemasan adsorben yang sering digunakan adalah silika gel G-60, kieselgur, Al 2O3, dan Diaion. Cara pembuatannya ada dua macam : (14) a. Cara kering yaitu silika gel dimasukkan ke dalam kolom yang telah diberi kapas kemudian ditambahkan cairan pengelusi. b.
cara cara basa basah h yaitu yaitu sili silika ka gel gel terle terlebi bih h dahul dahulu u disus disuspe pens nsik ikan an deng dengan an
cairan pengelusi yang akan digunakan kemudian dimasukkan ke dalam kolom melalui dinding kolom secara kontinyu sedikit demi sedikit hingga masuk semua, sambil kran kolom dibuka. Eluen dialirkan hingga silika gel mapat, setelah silika gel mapat eluen dibiarkan mengalir sampai batas adsorben kemudian kran ditutup dan sampel dimasukkan yang terebih dahulu dilarutkan dalam eluen sampai diperoleh kelarutan yang spesifik. Kemud Kemudian ian sampe sampell dipipe dipipett dan dimasu dimasukka kkan n ke dalam dalam kolom kolom melal melalui ui dinding kolom sedikit demi sedikit hingga masuk semua, dan kran dibuka dan diatur tetesannya, serta cairan pengelusi ditambahkan. Tetesan yang keluar ditampung sebagai fraksi-fraksi. Pelaksanaan kromatografi kolom Dalam kromatografi lapis tipis, fase diam adalah lapisan tipis jel silika atau alumina pada sebuah sebuah lempeng lempengan an gelas, gelas, logam logam atau plastik. plastik. Kolom Kolom kromatog kromatografi rafi berkerja berkerja berdasar berdasarkan kan skala skala yang yang lebih lebih besar besar menggun menggunakan akan material terpadatkan pada sebuah kolom gelas vertikal. (14) Dalam laboratorium, seringkali dengan mudah digunakan buret biasa sebagai kromatografi kolom. (14)
38
Penggunaan kolom Anggapla Anggaplah h akan dilakukan dilakukan pemisah pemisahan an campuran campuran dari dua senyawa senyawa yang berwarna, yaitu kuning dan biru. Warna campuran yang tampak adalah hijau. hijau. Larutan Larutan jenuh jenuh dibuat dibuat dari campura campuran n dengan dengan menggun menggunakan akan pelarut pelarut yang lebih disukai dalam kolom. (14) Pertama kran penutup dibuka untuk membiarkan pelarut yang sudah berada dalam kolom mengering sehingga material terpadatkan rata pada bagian atas, dan kemudian tambahkan larutan secara hati-hati dari bagian atas kolom. Lalu buka kran kembali kembali sehingga sehingga campura campuran n berwarna berwarna akan disera diserap p pada pada bagian bagian atas atas mater materia iall terpa terpadat datkan kan,, sehin sehingga gga akan akan tampa tampak k seperti gambar dibawah ini: (14)
39
Selanjutnya tambahkan pelarut baru melalui bagian atas kolom, cegah sedapat mungkin jangan sampai merusak material terpadatkan dalam kolom. Lalu buka kran, supaya pelarut dapat mengalir melalui kolom, kumpulkan dalam satu gelas kimia atau labu dibawah kolom. Karena pelarut mengalir kontinyu, tetap tambahkan pelarut baru dari bagian atas kolom sehingga kolom tidak pernah kering. (14) Gambar berikut menunjukkan perubahan yang mungkin terjadi sejalan dengan perubahan waktu. (14)
40
Penjelasan tentang apa yang terjadi Senyawa biru lebih polar daripada senyawa kuning dan memungkinkan mempuny mempunyai ai kemampu kemampuan an berikata berikatan n dengan dengan hidrogen hidrogen.. Hal ini dikarena dikarenakan kan senyawa biru tidak bergerak secara sangat cepat melalui kolom. Itu berarti bahwa senyawa biru harus dijerap secara kuat pada jel silika atau alumina dibanding dengan senyawa kuning. Karena kurang polar, senyawa kuning menghabiskan waktu dalam pelarut, sehingga keluar dari kolom lebih cepat. (14) Proses pencucian senyawa melalui kolom menggunakan pelarut dikenal sebagai
elusi .
Pelarut disebut sebagai
eluen .
Bila yang diinginkan adalah senyawa biru saja
41
(14)
Setelah seluruh senyawa kuning selesai terkumpulkan, Pelarut yang telah digunakan diganti dengan pelarut yang lebih polar. Ini akan mempunyai dua pengaruh, keduanya akan mempercepat senyawa biru melalui kolom. (14) •
Pelarut polar akan bersaing untuk mendapatkan ruang pada jel silika atau alum alumin ina a deng dengan an seny senyaw awa a
biru biru..
Bebe Bebera rapa pa ruan ruang g untu untuk k
seme sement ntar ara a
dipergun dipergunakan akan oleh molekul-m molekul-molek olekul ul pelarut pelarut pada permukaa permukaan n fase diam, diam, tidak tidak meny menyedi ediak akan an molek molekulul-mo molek lekul ul biru biru untuk untuk meleka melekatt dan dan ini akan akan cenderung menjaga pergerakannya dalam pelarut. •
Akan ada atraksi yang lebih besar antara molekul-molekul pelarut polar dan molekul biru yang polar. Kecenderungan ini akan menarik molekul-molekul biru menempel pada fase diam kembali pada larutan. Pengaruh total yaitu dengan bertambahnya bertambahnya kepolaran pelarut, senyawa
biru akan menghabiskan waktu dalam larutan dan karenanya akan bergerak lebih cepat. (14) Jika Campuran yang Dimiliki Tidak Berwarna Jika Jika mengg mengguna unakan kan kromat kromatogr ografi afi kolom kolom untuk untuk memur memurnik nikan an produk produk organik, mungkin produk yang diharapkan akan menjadi produk yang tidak berwarna berwarna,, meskipu meskipun n satu atau lebih dari dari pengotor pengotor berwarn berwarna. a. Anggapl Anggaplah ah segala sesuatunya tidak berwarna. (14) Ini bukan merupakan pekerjaan yang cepat dan mudah. Apa yang akan diku dikump mpul ulka kan n dan dan apa apa yang yang kelu keluar ar dari dari bawa bawah h kolo kolom m dala dalam m selu seluru ruh h rangkaian pipa yang berlabel. Bagaimana besar setiap sampel akan jelas
42
tergantu tergantung ng pada pada bagaima bagaimana na besar besar kolom kolom yaitu yaitu mungkin mungkin akan terkumpu terkumpull 1cm3 atau 5cm3 sampel atau apapun itu besarnya yang sesuai. (14) Maka kemudian akan dilakukan pengambilan setetes dari setiap larutan dan membuatnya ke dalam kromatografi lapis tipis. Tetesan pada garis dasar ditempatkan bersama dengan setetes senyawa murni dari senyawa yang seme sement ntar ara a dibu dibuat at.. Deng Dengan an meng mengul ulan angi gi peke pekerj rjaa aan n ini, ini, samp sampel el dapa dapatt diid diiden enti tifi fika kasi si yang yang mana mana yang yang diku dikump mpul ulka kan n pada pada bawa bawah h kolo kolom m yang yang mengandung produk yang diinginkan dan hanya dibutuhkan. (14)
II.3 II.3.3 .3 Frak Fraksi sina nas si Prinsip Prinsip dari fraksina fraksinasi si adalah adalah penggab penggabunga ungan n senyawa senyawa berdasar berdasarkan kan bercak noda pada lempeng dengan pengamatan pada UV 254 nm dan 366. Tujuan dilakukan penggabungan adalah untuk memisahkan dan memperoleh seny senyaw awa a dala dalam m juml jumlah ah yang yang maks maksim imal al,, di mana mana peng pengga gabu bung ngan anny nya a dida didasa sark rkan an pada ada nila nilaii Rf yang yang sam sama dan pena penamp mpak akan an warn warna a yang yang ditunjukkna itu sama.
II.3.4 II.3.4 Kromatog Kromatografi rafi Lapis Lapis Tipis Tipis Prep Preparat aratif if Absorbsi Absorbsi dan partisi partisi berdasar berdasarkan kan pada jumlah dan cara penotol penotolan an cuplik cuplikan an yang yang berkes berkesina inamb mbung ungan an denga dengan n hasil hasil akhir akhir membe membentu ntuk k pita. pita. Kromatog Kromatograf rafii lapis lapis tipis tipis preparat preparative ive merupak merupakan an metode metode isolasi isolasi dari suatu suatu simplisia untuk mendapatkan senyawa tunggal. (15: 54) Lapusan preparatif normalnya adalah lapisan KLT yang lebih tebal tebal dari 0,5. Seperti aturan umumnya dimana ketebalan ketebalan maksimumnya adalah 2
43
mm meskipun beberapa pengerjaan melibatkan penggunaan lempeng yang tebalnya tebalnya mencapai mencapai 10 mm. Pembuat Pembuatan an lempeng lempeng KLTP haruslah haruslah resisten resisten terhadap abrasi. KLTP dibahas dalam beberapa literatur dimana metode ini masih menjadi metode yang populer. Ada perbedaan utama antara KLTP dan KLT konvensional : (15: 54) 1. Sampel ditotolkan ditotolkan berupa berupa pita, biasanya bila memungkinkan memungkinkan ditotolkan selebar lempeng. 2. Deteksi dari dari pemisahan pemisahan senyawa senyawa biasanya biasanya dilakukan dilakukan dengan dengan absorbansi absorbansi UV atau flouresensi. 3. Biasanya multi elusi diperlukan untuk memperoleh resolusi pemisahan yang baik dari komponen sampel. Kare Karena na besa besarn rnya ya volu volume me yang yang diap diapli lika kasi sika kan n pada pada KLTP KLTP bila bila diba diband ndin ingk gkan an deng dengan an KLT, KLT, peng penggu guna naan an alat alat peno penoto tola lan n sepe sepert rtii yang yang dibic dibicara araka kan n nanti nanti diperl diperluka ukan n untuk untuk keaku keakurat ratan. an. Laruta Larutan n sampe sampell dapat dapat ditotolkan sepanjang sepanjang lempeng lempeng KLTP. Ini memungkinka memungkinkan n jumlah maksimum maksimum volume yang ditotolkan (volume hingga 500 ml larutan dapat dicapai dengan penggunaan alat). Bagaimanapun juga sangat penting untuk membiarkan sekitar 2 cm dari ujung pita dengan tepi lempeng. Ini dapat menghindarkan efek efek tepi tepi yang yang dapat dapat terjad terjadii selam selama a penge pengemb mbang angan an karen karena a perbe perbeda daan an kete keteba bala lan n
sorb sorben en pada pada tep tepi
lemp lempe eng. ng.
Keteb etebal alan an dari dari lapi lapisa san n
dan
kemamp kemampuan uan sampe sampell untuk untuk melin melintas tasii jarak jarak dari dari lempen lempeng g menye menyebab babka kan n miligram samapi satu berat yang sangat rendah dapat diaplikasikan tetapi
44
sayangnya waktu pengembangan pengembangan yang panjang tidak dapat dihindarkan dihindarkan dari penggunaan gaya kapilaritas normal. Biasanya pemisahan yang memakan waktu 30-60 menit pada KLT akan memakan waktu beberapa jam pada KLTP dengan lapisan setebal 2 mm. Ini tidak serta merta menjadi kerugian dari KLTP karena pemisahan dapat dilakukan semalaman dan kromatografer tida tidak k perl perlu u mela melaku kuka kan n bany banyak ak hal hal sela selama ma peng pengem emba bang ngan an.. Bias Biasan anya ya pemilihan eluen ditentukan berdasarkan percobaan KLT sebelumnya. (15: 55) Pengembangan Pengembangan dari lempeng lempeng KLTP dapat dilakukan dilakukan beberapa beberapa kali ( biasanya 3 sampai sampai 5 kali) jika diperlukan diperlukan dengan pengeringan pengeringan bersalang. bersalang. Resolusi biasanya ditingkatkan dengan cara ini. Sering digunakan campuran pelarut sebagai fas gerak yang memiliki kepolaran di bawah profil KLTnya. Pada pengembangan pertama senyawa dipisahkan sampai bergerak kurang lebih 2 cm. Pengembangan kedua dan selanjutnya, polaritas dari fase gerak dapa dapatt
diti diting ngka katk tkan an sedi sediki kitt
untu untuk k
mena menaik ikka kan n
reso resolu lusi si..
Dala Dalam m
KLPT KLPT,,
selanjutn selanjutnya ya akan dipindah dipindahkan kan senyawa senyawa yang yang akan akan dipakai dipakai untuk untuk analisis analisis lebih lanjut atau penggunaan lain. Suatu lempeng kecil yang tajam dapat digunakan untuk menandai posis lapisan. Selalu diingat bahwa penandaan dilakukan agak di bawah zona pemisahan. Zona ini dapat dikerok dengan spatula besi atau alat lain yang cocok. Sejumlah pelarut diperlukan untuk melarutkan melarutkan analit. Sorben dapat dipisahkan dengan penyaringan dan pelarut dapat diuapkan untuk memperoleh senyawa yang diinginkan. (15: 55)
II.3. II.3.5 5 KLT Dua Dua Dime Dimens nsii dan Mult Multii Eluen Eluen
45
KLT dua dimensi dan multieluen memiliki prinsip yang sama yaitu adsor adsorbsi bsi dan dan parti partisi si tetap tetapii yang yang membe membedak dakan annya nya pada pada KLT KLT 2 dimens dimensii didasarkan pada proses elusi yang bertujuan untuk memperpanjang jarak lint lintas asan an noda noda untu untuk k memp memper erol oleh eh seny senyaw awa a tung tungga gall seda sedang ngka kan n pada pada multi multielu eluen en jumlah jumlah totola totolanny nnya a yang yang berbed berbeda a yaitu yaitu berupa berupa cuplik cuplikan an yang yang berkesinambungan dan menghasilkan hasil elusi berupa pita. Kromatografi planar adalah satu-satunya teknik kromatografo dimana kromatografi dua dimensi dapat dilakukan. Ini merupakan alat pemisahan yang baik dan cukup sering dilirik sebagai suatu prosedur untuk dilakukan. Sayangnya Sayangnya kebanyakan kebanyakan pemisahan pemisahan dua dimensi dahulunya telah melibatkan pemisahan kurang lebih 20 jenis asam amino pada selulosa atau silika gel, dimana prosedurnya memakan waktu seharian untuk dilakukan dan hanya satu sampel per lempeng yang bisa di analisa dalam satu waktu. Hasilnya adalah adalah suatu suatu kroma kromatog togram ram sepert sepertii cetaka cetakan n jari, jari, mengid mengident entifi ifika kasi si noda noda dengan membandingkannya dengan standar sangat memakan waktu dan harus dilakukan terpisah pada kondisi eluen yang sama . Bagaimanapun jug juga, a, suat suatu u meto metode de tela telah h dike dikemb mban angk gkan an.. Dulu Duluny nya a asam asam amin amino o tela telah h dipisahkan dengan cara ini selama berabad-abad. (15:115) Dalam Dalam hal untuk untuk mendapa mendapatkan tkan resolusi resolusi yang baik, penting penting untuk memilih dua campuran pelarut yang berbeda, meskipun dengan kekuatan pelarut yang sama ini cukup sulit tetapi penting. (15:115)
46
Gambar mekanisme KLT 2 dimensi
BAB III METODE KERJA
47
III. III.1 1 Alat Alat dan dan Bah Bahan an Adapu Adapun n alatalat-ala alatt yang yang diguna digunakan kan antar antara a lain: lain: Batan Batang g pengad pengaduk, uk, bejana maserasi, botol penampung, botol semprot, buret, cawan porselin, chamber, corong pisah, kaca ukuran 20x20 cm, gegep kayu, gelas piala, gelas ukur, gunting, kipas angin, lampu UV 254 nm, lampu UV 366 nm, labu Erlenmey Erlenmeyer, er, lempeng lempeng kromatog kromatograf rafi, i, lumpang lumpang dan mortir, mortir, oven, oven, penggar penggaris, is, pensil, pipa kapiler, pipet tetes, seperangkat alat sentrifuge, seperangkat alat kromatografi kolom, statif dan klem, tabung reaksi, timbangan ohaus, dan vial. Adap Adapun un baha bahann-ba baha han n
yang yang digu diguna naka kan n
anta antara ra lain lain::
Aqua Aquade dest st,,
aluminium foil, etanol, etil asetat, H 2SO4 10%, hexan, kapas, kertas label, kertas timbang, kertas saring, kloroform, lem, lempeng KLT, metanol, sampel tanaman belimbing wuluh ( Averrhoa ( Averrhoa bilimbi ), ), silika halus, silika kasar.
III.2 III.2 Penyia Penyiapan pan Sampe Sampell III.2.1 III.2.1 Pengambi Pengambilan lan Sampel Sampel Simp Simpli lisi sia a daun daun beli belimb mbin ing g wulu wuluh h ( Averrho Averrhoa a bilimbi bilimbi ) diam diambi bill dari dari peka pekara rang ngan an ruma rumah h di Jl.P Jl.Per erin inti tis s Keme Kemerd rdek ekaa aan n IV No.5 No.58, 8, Maka Makass ssar ar.. Menggunakan pisau atau gunting atau dipetik secara langsung dengan jari pada bagian tangkai daunnya, dimasukkan dalam plastik. Kemudian dicuci bersih dengan air, diangin-anginkan hingga agak kering. III.2.2 III.2.2 Pengolah Pengolahan an Sampel Sampel
48
Daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi ) yang telah diambil, dicuci hingga hingga bersih bersih dengan dengan air mengali mengalirr lalu ditiriskan ditiriskan lalu sampel sampel dikering dikeringkan kan dengan dengan cara diangindiangin-ang angink inkan an
di atas atas kertas kertas koran koran pada pada tempat tempat yang
terlindu terlindung ng dari sinar sinar matahari matahari langsung langsung.. Setelah Setelah kering kering diguntin digunting-gu g-guntin nting g hingga kecil-kecil lalu dikeringkan sampai kering betul.
III.3 III.3 Ekstraksi Ekstraksi dan Partisi Partisi Sampel Sampel III.3 III.3.1 .1 Ekstr Ekstraks aksii Sampe Sampell Ekstraksi dengan Pelarut Metanol (Metode Maserasi) Disiapkan alat dan bahan ; Simplisia daun belimbing wuluh ( Averrhoa ( Averrhoa bilimbi ) yang telah kering dan halus ditimbang sebanyak 100 g ; Dimasukkan ke dalam toples kemudian ditambahkan dengan cairan penyari (metanol) hingga sampel terendam dengan cairan penyari volumenya lebih tinggi 2 cm. Toples ditutup erat dan diberi plester untuk menghindari menguapnya menguapnya cairan penyari ; Dibiarkan selama 3 hari terlindung dari cahaya, kemudian disaring hasil ekstraksi dan diperas ampasnya ; Hasil ekstraksi dimasukkan ke dalam wadah (yang telah ditarer) dan dibiarkan menguap dengan bantuan kipas angin ; Ditimbang bobot ekstrak, diberi label dan disimpan dalam eksikator.
II.3 II.3.2 .2 Part Partis isii Eks Ekstr trak ak Ekstraksi Cair – Padat Karena ketidaktersediaan alat-alat yang dibutuhkan untuk percobaan ECP ini seperti magnetik stirer ataupun sentrifuge, maka yang digunakan adalah lumpang dan mortirnya dimana ekstrak nanti akan dimasukkan ke
49
dalam dalam lumpang lumpang dan digerus digerus dengan dengan mortir mortir sebagai sebagai penggant penggantii magneti magnetik k stirer. Sejumlah ekstrak metanol daun belimbing wuluh ( ( Averrhoa bilimbi ) dilarutkan dalam etil asetat sedikit demi sedikit dalam wadah ; Kemudian ekstra ekstrak k terseb tersebut ut dimas dimasukk ukkan an dan dan diger digerus us sampai sampai homoge homogen n ; Setel Setelah ah homogen, didiamkan sebentar sehingga terlihat ada yang larut dan tidak larut berupa endapan ; Ambil bagian yang larut dan pindahkan ke dalam wadah lain dengan menggunakan pipet tetes ; Sisa ekstrak berupa endapan yang tidak larut dipindahkan ke wadah lain ; Ulangi prosedur ini hingga dua kali (hingga jernih)
III.4 III.4 Isolasi Isolasi dengan dengan Kromatogra Kromatografi fi Kolom Konvensio Konvensional nal II.4.1 II.4.1 Penyiapa Penyiapan n Kolom Kroma Kromatogr tografi afi Kolom Kolom Konven Konvension sional al Penyiapan Alat-alat Perangkat Kromatografi Kolom Konvensional Alat-ala Alat-alatt perangka perangkatt kromatog kromatografi rafi kolom kolom dicuci dicuci dengan dengan metanol metanol dan dike dikeri ring ngka kan n ; Dira Dirang ngka kaii alat alat kolo kolom m berd berdas asar arka kan n petu petunj njuk uk yang yang ada ada ; Rangkaian tersebut ditegakkan dengan bantuan statif dan klem
II.4 II.4.2 .2 Peny Penyia iapa pan n Samp Sampel el Penyiapan Bubur Silika Ditimbang silika kasar dan ekstrak ; Diperoleh bobot silika yaitu 100x dari dari ekst ekstra rak k ; Sili Silika ka diba dibagi gi dala dalam m dua dua bagi bagian an ; Bagi Bagian an pert pertam ama a yang yang bobotny bobotnya a lebih besar dimasuk dimasukkan kan ke dalam dalam cawan cawan porselen porselen,, sedangka sedangkan n sisany sisanya a untuk untuk penyia penyiapa pan n ekstra ekstrak k ; Silika Silika yang yang ada ada di cawan cawan porse porsele len n
50
dibasahkan dengan pelarut hexan ; Diaduk-aduk hingga terbasahi semuanya ; Didiamkan beberapa saat (sesekali diaduk) ; Silika siap digunakan Penyiapan Ekstrak (Metode Kering) Disiapka Disiapkan n alat dan bahan bahan ; Ekstrak Ekstrak ditimbang ditimbang ; Kemudia Kemudian n ekstrak ekstrak dilarutkan dengan kloroform ; Ekstrak dikeringkan dengan penambahan sisa silika yang tadi sedikit demi sedikit ; Kemudian digerus di dalam lumpang kecil ; Sisa silika disimpan ; Ekstrak siap digunakan Pengerjaan Partisi Disi Disiap apka kan n alat alat dan dan baha bahan n ; Alat Alat kolo kolom m yang yang tela telah h dipa dipasa sang ng dimasukkan kapas pada ujung kolom (dasar kolom) ; Dimasukkan bubur silika yang telah disiapkan secara perlahan-lahan ; Ditunggu beberapa saat sehing sehingga ga mamp mampat at atau atau dipuku dipukull dengan dengan karet karet pipet pipet tetes tetes ; Dimas Dimasukk ukkan an sampel perlahan-lahan ; Ditunggu beberapa saat ; Dimasukkan sisa silika dari pengerin pengeringan gan ekstrak ekstrak sebagai sebagai penggant penggantii kertas kertas saring saring ; Dimasuk Dimasukkan kan perb perban andi ding ngan an
elue eluen n
satu satu-s -sat atu u
mula mulaii
dari dari
nonnon-po pola larr
hing hingg ga
pola polar, r,
perbandingannya yaitu: Hexan : Etil = 1 : 0 (100ml : 0ml), Hexan : Etil = 10 : 0 (45ml : 5ml), Hexan : Etil = 5 : 1 (42ml : 8 ml), Hexan : Etil = 1 : 1 (25 ml : 25ml), Metanol = 100% (25 ml) ; Ditampung dalam vial hingga mencapai volume 5 ml dan dibiarkan menguap.
III.4.3 III.4.3 Fraksinas Fraksinasii Kompone Komponen n Kimia Kimia
51
Disiapkan alat dan bahan ; 49 vial yang tersedia dari hasil pemisahan dengan metode kromatografi kolom dipilih dengan range tertentu. Vial yang dipilih adalah vial ke 1, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, dan 49 ; Terdapat 13 vial yang telah dipilih kemudian dilarutkan dengan kloroform ; Dita Ditamb mbah ahka kan n deng dengan an 1 vial vial yang yang beri berisi si ekst ekstra rak k hexa hexan n dan dan kemu kemudi dian an dilarutkan ; Totolkan ke-14 vial di atas lempeng silika ukuran 10 x 7 cm, dimana vialnya telah diberi batas atas 0,5 cm, batas bawah 1 cm, jarak antara tepi silika dengan noda pertama dan terakhir 0,4 cm, jarak antara nodanya yaitu 0,7 cm ; Dielusi dengan eluen yang paling baik pemisahannya dengan KLT yaitu eluen hexan : etil asetat (3 : 1) di dalam chamber yang telah dijenuhkan ; Setelah terelusi sampai batas atas kemudian didiamkan atau dikeringkan ; Dilihat penampakannya pada lampu UV 366 nm dan UV 254 nm serta penyemprotan H 2SO4 ; Digabungkan noda-noda yang sama pena penamp mpak akan anny nya a dala dalam m bebe bebera rapa pa frak fraksi si,, terd terdap apat at 4 frak fraksi si yang yang tela telah h digabungkan. Antara lain: 1 – 14 fraksi III, 43 – 49
fraksi I, 15 – 30
fraksi II, 31 – 42
fraksi IV ; Ke-4 fraksi ini dimasukkan ke dalam vial
dengan cara dilarutkan dengan kloroform ; Fraksi di dalam vial ini dibiarkan menguap.
III.5 Isolasi dengan Kromatografi Kromatografi Lapis Lapis Tipis Tipis Preparatif Preparatif (KLTP) (KLTP)
52
III.5.1 III.5.1 Penyiapa Penyiapan n Lempeng Lempeng KLTP KLTP Lempeng kaca 20x20 cm dibilas dengan alkohol ; Ditimbang silika halus 7 gram untuk satu lempeng ; Disiapkan sejumlah air yaitu 2 kali dari bobot silika ; Dilarutkan silikanya dalam air hingga terbasahi ; Alat pembuat lempeng kaca silika dirangkai ; Ditaburkan silika di atas lempeng kaca ; Diratakan dengan gabus hingga rata ; Dikeluarkan dari alat dan diratakan deng dengan an bant bantua uan n tang tangan an deng dengan an cara cara dite ditepu pukk-te tepu puk k dari dari bela belaka kang ng ; Dikeringkan.
III.5.2 III.5.2 Isolasi Isolasi Kompone Komponen n Kimia Kimia Disiapkan lempeng dan ekstrak (fraksi III) ; Dilarutkan ekstrak dengan kloroform ; Dibuat batas tanda pada lempeng ; Ditotolkan ekstrak secara berkesinambungan ; Dibuat eluen hexan : etil (4 : 1) sebanyak 25 ml ; Chamber dijenuhkan ; Dimasukkan lempeng pada chamber dan dibiarkan terelusi ; Setelah terelusi, lempeng dikeluarkan dari chamber ; Dilihat pitanya pada lampu UV 254 nm dan UV 366 nm ; Dikerok semua pita yang tampak ; Diperoleh 6 hasil pita KLTP
III.6 III.6 KLT Dua Dua Dimen Dimensi si dan dan Multi Multi Eluen Eluen Multi Eluen Disiapkan alat dan bahan ; Hasil kerukan KLTP disentrifuge dalam tabung sentrifus sebanyak 3 kali dengan metanol ; Diuapkan dan setelah itu dilarutkan dengan kloroform (ada 6 vial) ; Disediakan lempeng yang sudah diaktifk diaktifkan an ; Masing-m Masing-masin asing g vial ditotolk ditotolkan an pada pada lempeng lempeng yang berbeda berbeda ;
53
Disi Disiap apka kan n
perb perba andin ndinga gan n
elue eluen n
dari dari
yang ang
nonnon-po pola larr
hing hingga ga
pola polar r
(hexan: (hexan:kloro kloroform form=3:1 =3:1 ; hexan:et hexan:etil=4 il=4:1 :1 ; hexan:et hexan:etil=1: il=1:1) 1) ; Setelah Setelah di elusi elusi dengan tiga eluen, dilihat penampakannya di lampu UV.254 nm dan UV 366 nm. KLT Dua Dimensi Disiapka Disiapkan n alat dan bahan bahan ; Dilarutk Dilarutkan an ekstrak ekstrak dengan dengan klorofor kloroform m ; Ditotolkan pada lempeng yang telah diaktifkan ; Dibuat perbandingan eluen hexan : etil = 4 : 1 ; Dimasukkan ke dalam chamber dan dielusi ; Setelah mencapai batas atas, diputar 90 o, lalu dielusi lagi ; Setelah di elusi ke-2 mencapai mencapai batas atas, atas, dikeluar dikeluarkan kan dari chamber chamber dan dikering dikeringkan kan ; Dilihat Dilihat penampakan nodanya pada UV.254 nm dan UV.366 nm.
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
54
Pada praktikum isolasi senyawa bioaktif ini dilakukan proses ekstraksi, identifikasi, identifikasi, dan isolasi komponen kimia yang terdapat dalam daun belimbing wuluh ( Averrhoa Averrhoa bilimbi ). ). Pengerjaan awal pada praktikum ini yaitu pengambilan sampel daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi ) bilimbi ) di lokasi. Simplisia daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi ) diambi diambill meng menggun gunaka akan n pisau pisau atau atau gunti gunting ng atau atau dipet dipetik ik secara secara langsung langsung dengan jari pada bagian tangkai tangkai daunnya, daunnya, dimasukk dimasukkan an dalam plastik. Kemudian dicuci bersih dengan air, diangin-anginkan hingga agak kering. Setelah itu, daun belimbing wuluh ( Averrhoa ( Averrhoa bilimbi ) bilimbi ) yang telah diambil, dicuci hingga bersih dengan air mengalir lalu ditiriskan lalu sampel dikeringkan dikeringkan dengan cara diangin-anginka diangin-anginkan n di atas kertas koran koran pada tempat yang terlindu terlindung ng dari sinar sinar matahari matahari langsun langsung. g. Setelah Setelah kering kering diguntin diguntingggunting hingga kecil-kecil lalu dikeringkan sampai kering betul. Kemudia Kemudian, n, sampel sampel yang telah kering kering tersebut tersebut di ekstraks ekstraksii dengan dengan metode maserasi dengan menggunakan pelarut metanol. Metode maserasi ini dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari selam selama a bebera beberapa pa hari hari pada pada temper temperatu aturr kamar kamar terlin terlindun dung g dari dari cahay cahaya. a. Metode Metode maseras maserasii digunak digunakan an untuk untuk menyari menyari simplisia simplisia yang yang mengand mengandung ung kompon komponen en kimia kimia yang yang muda mudah h larut larut dalam dalam caira cairan n penyar penyari. i. Prins Prinsip ip dari dari maseras maserasii itu sendiri sendiri yaitu yaitu pelarut pelarut organik organik akan menembus menembus dinding dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif, zat aktif akan larut dalam dalam pelar pelarut ut organ organik ik terseb tersebut ut sehin sehingga gga terjad terjadii perbe perbedaa daan n konse konsentr ntrasi asi
55
antara larutan zat aktif di dalam sel dan pelarut organik di luar sel, maka laruta larutan n terpek terpekat at akan akan berdi berdifus fusii kelua keluarr sel sel dan dan proses proses ini berula berulang ng terus terus sampai terjadi keseimbangan keseimbangan antara konsentrasi cairan zat aktif di dalam sel dan diluar sel. Setelah Setelah diekstra diekstraksi, ksi, selanjutn selanjutnya ya dilakuka dilakukan n partisi partisi ekstrak ekstrak dengan dengan metode ekstraksi cair-padat. Namun, Karena ketidaktersediaan alat-alat yang dibut dibutuhk uhkan an untuk untuk perco percoba baan an ECP ECP ini sepert sepertii magne magnetik tik stire stirerr ataupu ataupun n sentrifug sentrifuge, e, maka maka yang yang digunaka digunakan n adalah adalah lumpang lumpang dan mortirny mortirnya a dimana dimana ekstrak nanti akan dimasukkan ke dalam lumpang dan digerus dengan mortir sebagai sebagai penggant penggantii magneti magnetik k stirer. stirer. Pengerjaa Pengerjaannya nnya yaitu yaitu sejumla sejumlah h ekstrak ekstrak metanol daun belimbing wuluh ( Averrhoa ( Averrhoa bilimbi ) bilimbi ) dilarutkan dalam etil asetat sedikit demi sedikit dalam wadah. Kemudian ekstrak tersebut dimasukkan dan diger digerus us sampai sampai homoge homogen. n. Setela Setelah h homoge homogen, n, didia didiamka mkan n sebent sebentar ar sehing sehingga ga terlih terlihat at ada yang yang larut larut dan dan tidak tidak larut larut berup berupa a endapa endapan. n. Ambil Ambil bagian yang larut dan pindahkan ke dalam wadah lain dengan menggunakan pipet tetes. Sisa ekstrak berupa endapan yang tidak larut dipindahkan ke wadah lain. Ulangi prosedur ini hingga dua kali (hingga jernih) Selanjutn Selanjutnya ya yaitu isolasi isolasi dengan dengan kromatog kromatografi rafi kolom kolom konvensio konvensional. nal. Metode Metode kolom kolom konve konvensi nsion onal al ini diban dibantu tu dengan dengan gaya gaya gravi gravitas tasii dan dan oleh oleh karena hanya bantuan ini sehingga prosesnya memakan waktu yang lama. Langkah Langkah awal dari metode ini adalah adalah semua semua alat dibersihkan dibersihkan dan dicuci dicuci dengan dengan metan metanol, ol, termas termasuk uk vial vial dan kolom kolom.. Setel Setelah ah itu disiap disiapkan kan bubur bubur silikanya. Dimana proses penyiapan bubur silika itu, silika kasar saja yang
56
digun digunak akan, an, meskip meskipun un seben sebenar arnya nya silik silika a halus haluspun pun juga juga bisa bisa diguna digunaka kan. n. Namun, penggunaan penggunaan silika halus harus dibarengi dibarengi dengan penambahan silika kasar dengan konsistensi atau bobot yang lebih besar dibandingkan silika halus halus.. Hal ini dikare dikarenak nakan an bila bila hanya hanya meng menggun gunak akan an silika silika halus halus akan akan menyebabkan silika tersebut terlalu mampat ketika berada di dalam kolom karena rongga-rongga rongga-rongga antar partikel terlalu kecil sehingga menyulitkan eluen untuk untuk mempa memparti rtisi si ekstr ekstrak ak sebab sebab kroma kromatog tograf rafii kolom kolom ini hanya hanya diban dibantu tu dengan gaya gravitasi. Silika kasar direndam dengan hexan dalam suatu wadah wadah sambil sambil diaduk diaduk-ad -aduk uk dengan dengan maksu maksud d memb membasa asahin hinya ya sehin sehingga gga membuatnya bisa memadat. Jumlah Jumlah silika silika kasar kasar yang digunakan digunakan untuk untuk pembuata pembuatan n bubur bubur silika silika kasar adalah 100 kali dari jumlah bobot ekstrak yang digunakan. Sisa bobot silika dari yang telah dipersiapkan digunakan untuk mengeringkan ekstrak pada saat penyiapan sampel dengan metode kering. Prosesnya yaitu ekstrak dilarutkan dengan kloroform hingga larut, dan ditambahkan sisa silika tadi, digerus hingga kering dan sisa silika yang tidak dipakai disimpan sebagai peng pengga gant ntii kert kertas as sari saring ng di atas atas samp sampel el dan dan diba dibawa wah h elue eluen. n. Sete Setela lah h penyiapan ekstrak selesai, rangkai alat kolom. Setelah Setelah terangka terangkai, i, dimasuk dimasukkan kan sedikit sedikit kapas kapas untuk untuk menahan menahan atau menyumbat sedikit ujung kolom, dan biarkan memadat terlebih dahulu dan dimampatkan dengan cara memukul-mukul buret kolom dengan karet pipet tetes. tetes. Setela Setelah h itu ditamb ditambah ahkan kan sampel sampel tadi tadi yang yang sudah sudah disiap disiapka kan n lalu lalu dimasukkan sisa silika kasar tadi sebagai pengganti kertas saring (sehingga
57
proses partisi lebih maksimal), setelah itu dimasukkan perbandingan eluen satu per satu, dimulai dari eluen yang paling non-polar hingga ke yang polar. Maksud dari kenapa eluen yang digunakan haruslah dari non-polar terlebih dahulu dahulu ke yang yang polar polar adala adalah h agar agar senya senyawawa-se senya nyawa wa yang yang ada ada didal didalam am simplisi simplisia a tersebut tersebut terparti terpartisi si menurut menurut tingkat tingkat kepolara kepolarannya nnya masingmasing-mas masing ing karen karena a apabil apabila a yang yang diguna digunaka kan n eluen eluen polar polar terle terlebih bih dahu dahulu lu maka maka akan akan menyebabkan senyawa polar dan non-polar akan ikut tertarik oleh eluen polar polar terseb tersebut ut sehin sehingga gga hasil hasil partis partisiny inya a pun pun menja menjadi di kacau. kacau. Jadi Jadi harus harus digunakan eluen non-polar terlebih dahulu agar senyawa yang mula-mula tertarik lebih dulu adalah senyawa-senyawa non-polar dan saat digunakan eluen polar, senyawa yang tertarikpun hanya senyawa-senyawa polar saja, sebab sebab tidak tidak ada lagi lagi senya senyawa wa non-po non-polar lar yang yang tersis tersisa, a, sehin sehingga gga hasil hasil partisinya pun menjadi bagus. Perbandingan eluen yang digunakan adalah hexan : etil asetat = 1 : 0 (100ml) ; 10 : 1 (50ml) ; 5 : 1 (50ml) ; 1 : 1 (50ml) ; metanol : hexan = 1 : 0 (25ml). Hasil Hasil partisi partisi ditampun ditampung g di dalam dalam vial dan diuapkan diuapkan hingga kering. kering. Jumlah vial yang digunakan adalah 49 buah vial. Setelah Setelah itu, dilakuk dilakukan an fraksina fraksinasi si atau atau penggab penggabunga ungan n vial-vial vial-vial yang sama sama penampa penampakan kan nodanya nodanya setelah setelah ditotolk ditotolkan an kembali kembali di atas lempeng lempeng silika. Langkah awal dari fraksinasi adalah pemilihan dari hasil partisi metode kolom kolom konve konvens nsion ional al berdas berdasark arkan an pemili pemiliha han n secara secara acak acak diman dimana a pada pada umumnya dipilih range 10. Hal ini disesuaikan dengan kondisi hasil partisi
58
(jumlah vial yang digunakan). Semakin kecil range vial semakin tampak hasil partisinya jika ada senyawa yang sama dari tiap perwakilan vial. Setela Setelah h terpil terpilih ih sejum sejumlah lah vial vial perwa perwakil kilan an (13 (13 vial vial ditam ditambah bah 1 vial vial ekstra ekstrak k hexan) hexan),, ekstra ekstrakny knya a dilar dilarutk utkan an denga dengan n klorof kloroform orm hingg hingga a larut. larut. Dibuatlah perbandingan perbandingan eluen dimana yang digunakan adalah perbandingan hexan : etil asetat (3 : 1) sebanyak 20 ml. Setelah itu dimasukkan ke dalam chamb chamber er dan ditun ditunggu ggu hingga hingga jenuh jenuh dengan dengan cara cara mema memasuk sukkan kan kerta kertas s saring saring.. Sambil Sambil menung menunggu gu cham chamber ber jenuh jenuh,, ke-14 ke-14 vial vial itu ditot ditotolk olkan an pada pada lempeng yang seolah-olah sudah diaktifkan dan setelah ditotol dan chamber dijenuh, dijenuh, lempeng lempeng dimasukk dimasukkan an ke dalam dalam chamber chamber dan dibiarka dibiarkan n terelusi terelusi hingga batas atas setelah itu dikeluarkan dari chamber dan dikeringkan dan dilihat penampakan nodanya pada lampu UV.254 nm dan UV.366 nm serta penyemprotan dengan H 2SO4. Dari penampakan noda, bisa dilakukan fraksinasi atau penggabungan noda noda-n -nod oda a
menj menjad adii
bebe bebera rapa pa
frak fraksi si..
Peng Pengga gabu bung ngan an
frak fraksi si-f -fra raks ksii
ini ini
didasarkan pada penampakan nodanya yang hampir sama. Didapat 4 fraksi dimana fraksi I merupakan penggabungan vial 1-14, frak fraksi si II yang yang meru merupa paka kan n peng pengga gabu bung ngan an vial vial 15-3 15-30, 0, frak fraksi si III III yang yang merupakan penggabungan dari vial 31-42, dan fraksi IV yang merupakan penggabungan dari vial 43-49. Selanjutnya dilakukan KLTP. Pada Pada Krom Kromat atog ogra rafi fi Lapi Lapis s Tipi Tipis s Prep Prepar arat atif if (KLT (KLTP) P) untu untuk k skal skala a praktikum, penyiapan lempeng sangat sederhana sekali. Dimana ditimbang 7 gram silika halus untuk 1 lempeng dan sejumlah air yang digunakan adalah
59
dua kali bobot silika. Dilarutkan silika tadi dalam air di stock erlenmeyer hingga larut. Dipasang kaca 20x20 cm pada alat dan diratakan posisinya. Ditaburkan silika tadi di atas kaca yang sudah dibersihkan dengan etanol untuk membebaslemakkannya. membebaslemakkannya. Diratakan dengan gabus. Dikeluarkan dari alat alat dan dan dirata diratakan kan lagi lagi bagia bagian n yang yang belum belum rata rata denga dengan n tanga tangan n sambil sambil ditepuk-tepuk. Dikeringkan di oven. Disiapkan ekstrak dan lempeng yang telah dibuat tadi. Ekstrak yang dipilih adalah ekstrak pada fraksi III. Hal ini berdasarkan penampakan noda pada percobaan fraksinasi yang telah dilakukan sebelumnya, karena noda yang warnanya paling menonjol yaitu ungu kehijauan (vial ke-31) berada pada fraksi III. Dilarutkan ekstrak dengan kloroform hingga larut. Diberi tanda pada lempeng. Ditotolkan ekstrak pada lempeng secara berkesinambungan. berkesinambungan. Dibuat perbandingan eluen hexan : etil (4 : 1) sebanyak 25 ml. Dijenuhkan chamber chamber dengan dengan memasukkan memasukkan eluen eluen tadi dan ditutup ditutup (bila (bila perlu perlu dengan dengan pengocokan). pengocokan). Setelah jenuh dimasukkan lempeng lempeng tadi dan dibiarkan terelusi hingg hingga a batas batas atas. atas. Dikelu Dikeluark arkan an dari dari chamb chamber er dan dikeri dikeringk ngkan. an. Diliha Dilihatt penampakan pitanya pada UV 254 nm dan 366 nm. Dikerok sejumlah pita sesuai pita yang tampak. Diperoleh 6 pita. Yang terakhir, dilakukan multi eluen dan KLT dua dimensi. Mula-mula, 6 hasil KLTP disentrifus terpisah, dengan menggunakan metanol sebanyak 3 kali lalu ditampung di vial lalu diuapkan. Metanol digunakan berdasarkan pemilihan fraksi untuk penotolan KLTP yang telah dilakukan sebelumnya. Karena fraksi yang dipilih adalah fraksi III, maka pelarut yang digunakan
60
untuk melarutkan ekstrak didalam vial adalah metanol. Karena seperti yang telah diketahui metanol bersifat semi-polar berarti kepolarannya berada di teng tengah ah-t -ten enga gah h dan dan frak fraksi si yang yang dipi dipili lih h adal adalah ah frak fraksi si III III yang yang dike diketa tahu huii meng mengand andun ung g ekstra ekstrak k yang yang kepola kepolara ranny nnya a berada berada diten ditengah gah-te -tenga ngah h pula pula dimana fraksi III ada penggabungan penggabungan noda-noda pada vial 31 – 42 dari 49 vial hasil kromatografi kolom. Jadi pelarut yang digunakan pun bersifat hampir sama dengan ekstrak pada vial-vial tersebut, dipilihlah metanol. Setela Setelah h disent disentrif rifus us denga dengan n mengg menggun unaka akan n pelaru pelarutt metano metanol, l, hasil hasil sentrifus kemudian dipisahkan dan ditampung di dalam vial. Setelah itu vial tersebut didiamkan hingga metanolnya menguap. Untuk pengerjaan multieluen, ekstrak yang telah disentrifus tersebut dilarutkan dengan kloroform. Digunakan kloroform karena pelarut tersebut baik untuk penotolan pada lempeng sebab memenuhi syarat pelarut yang bisa bisa diguna digunaka kan n untuk untuk penoto penotolan lan pada pada lempen lempeng g yaitu yaitu dapat dapat melar melarutk utkan an ekstrak dan mudah menguap. Meskipun sebenarnya pelarut lain bisa juga digunakan asalkan memenuhi syarat tersebut. Kloroform tidak spesifik atau harus harus digunaka digunakan n untuk untuk melarutk melarutkan an ekstrak ekstrak pada percobaa percobaan n ini. Setelah Setelah ekstrak dilarutkan dengan kloroform, ditotolkan pada lempeng yang sudah diaktifkan. Ditotolkan pada lempeng secara terpisah. Eluen yang digunakan adal adalah ah mula mulaii dari dari perb perban andi ding ngan an elue eluen n yang yang nonp nonpol olar ar ke pola polar, r, teta tetapi pi perbedaa perbedaan n tingkat tingkat kepolar kepolaranny annya a hanya hanya sedikit sedikit antara antara satu dengan dengan yang lainnya yaitu hexan : CHCl 3 = 3 : 1 ; hexan : etil = 4 : 1 ; dan hexan : etil = 1 : 1. Digunakan ketiga eluen yang perbedaan tingkat kepolarannya berbeda
61
sedikit ini agar bisa dilihat pergerakan noda atau hasil dari elusinya, apakah noda yang ingin dibuktikan tunggal atau tidak bisa dilihat kenaikannya kenaikannya sedikit demi sedikit sehingga jelas hasilnya, karena itu dipilih dari non-polar ke polar. Eluen yang dipilih tidak boleh memiliki perbedaan tingkat kepolaran yang jauh apa lagi kalau eluen kedua atau ketiga melebihi kepolaran dari eluen yang yang diguna digunaka kan n pada pada KLTP. KLTP. EluenEluen-elu eluen en terse tersebut but tidak tidak boleh boleh memili memiliki ki kepolaran yang lebih tinggi dari KLTP, harus berdekatan sehingga kenaikan noda pun terlihat jelas. Setelah Setelah terelusi terelusi dengan dengan mengguna menggunakan kan ketiga ketiga eluen eluen dari non-pol non-polar ar hingga polar, dilihat penampakan atau kenaikan nodanya pada UV 254 nm dan UV 366 nm. Namun, pada percobaan ini tidak didapatkan hasil yang diinginkan. Setelah dilihat penampakan nodanya pada UV 254 nm dan UV 366 nm, noda yang telah ditotolkan justru melayang atau menumpuk di atas hingga batas elusi. Untu Untuk k KLT KLT dua dua dime dimens nsi, i, disi disiap apka kan n semu semua a alat alat dan dan baha bahann nnya ya.. Dilarutk Dilarutkan an ekstrak ekstrak dengan dengan klorofor kloroform, m, lalu ditotoka ditotokan n pada lempeng lempeng yang yang sudah diaktifkan dibuat perbandingan eluen hexan : etil = 4 : 1. Dielusi hing hingga ga bata batas s atas atas.. Sete Setela lah h menc mencap apai ai bata batas s atas atas,, dipu diputa tarr 90 o untuk memperpanjang jarak lintasannya, lalu dielusi lagi. Setelah dielusi ke dua mencapai mencapai batas batas atas dikeluark dikeluarkan an dari chamber chamber dan dikering dikeringkan. kan. Dilihat penampakan atau kenaikan nodanya pada UV 254 nm dan UV 366 nm. Namun pada percobaan KLT dua dimensi ini pun tidak didapatkan senyawa tunggal seperti halnya pada multi eluen.
62
BAB V KESIMPULAN
63
V.1 Kesi Kesimp mpu ulan lan Dari semua hasil percobaan yang dilakukan, dapat ditarik kesimpulan: 1.
Metode ekstraksi yang digunakan untuk simplisia daun belimbing wuluh ( Averrhoa Averrhoa bilimbi ) adalah metode dengan berat simplisia 100 gram dan volume menstrum metanol 3 liter.
2.
Metode partisi yaitu ekstraksi cair padat dengan menggunakan pelarut etil asetat 25 ml dan hasil partisi larut etil asetat 1,6 gram dan yang tidak larut etil 0,75 gram.
3.
Meto Metode de krom kromat atog ogra rafi fi lapi lapis s tipi tipis s tipi tipis s deng dengan an meng menggu guna naka kan n elue eluen n heksan : etil 3 ; 1 sebanyak 5 ml dan diperoleh profil KLT.
4.
Kromatografi kolom dengan menggunakan berat simplisia sebanyak 0,42 gram, berat silica 42 gram dan perbandingan eluen heksan : etil ( 1:0 = 100 ml ; 10:0 = 50 ml ; 5:1 = 50 ml ; 1:1 = 50 ml ; dan methanol 25 ml ) dan diperoleh 49 vial.
5.
Fraksinasi dengan perbandingan eluen heksan : etil = 3 : 1 sebanyak 20 ml dan diperoleh hasil fraksi 4 fraksi.
6.
Fraksi Fraksi ketiga ketiga dilanjut dilanjutkan kan ke kromatog kromatograf rafii lapis lapis tipis tipis prepara preparatif tif dengan dengan perbandingan eluen heksan : etil = 4 : 1 sebanyak 25 ml dan diperoleh hasil sebanyak 6 pita.
7.
Semua pita dikeruk dan dilanjutkan ke KLT 2 dimensi dan multieluen dengan perbandingan eluen untuk multieluen heksan : kloroform = 3 ; 1 (5 ml), heksan : etil = 4:1 (5ml) dan heksan : etil asetat = 1 : 1 (5ml) serta untuk KLT 2 dimensi menggunakan eluen heksan : etil = 4 ; 1 ( 25 ml).
64
8. Hasil Hasil pengisola pengisolasian sian menun menunjukk jukkan an bahwa bahwa belimbin belimbing g wuluh tidak tidak dipero diperoleh leh senyawa tunggal.
V.2 V.2 Sara Saran n dan dan Krit Kritik ik Cara Cara kaka kakak k memb membim imbi bing ng prak prakti tika kan n suda sudah h cuku cukup p baik baik,, dan dan perl perlu u ditingkatkan sedikit lagi, serta metode diskusinya tetap dipertahankan.
DAFTAR PUSTAKA
1.
Http://www.rizkytrondol.wordpress.com/belimbing-wuluh//
65
2.
Http://www.tubuhsehat.com/tanaman-obat-dilingkungan-sendiri/averrhoabilimbi//
3.
Http://www.tanamanObat.org/BelimbingWuluh//
4.
Dirjen POM. 1995. Farmakope Indonesia. Indonesia . Jakarta : Depkes RI. 7.
5.
Anief, Moh. 1995. Ilmu Meracik Obat : Teori Dan Praktik . Praktik . Gadjah Mada University Press : Yogyakarta. 165-166.
6.
DEPKES RI. 1989. Sediaan Galenik . Jakarta : Dirjen POM. 10-28.
7.
Sudjadi. 1994. Metode Pemisahan. Pemisahan . Yogyakarta : Kanisius. 63-66.
8.
Darise Darise,, dkk. dkk. 1997. 1997. Kompone Komponen n Kimia Kimia dalam dalam Praktek Praktek Phytoche Phytochemis mistry try .. Makassar : Fakultas Farmasi. 1-10, 24
9.
Gritter J.R, dkk. 1991. Pengantar Kromatografi . Penerbit ITB: Bandung. 6, 83, 107, 109.
10. Sastrohamidjojo. 11. Roth,
1985. Kromatografi. Penerbit Liberty : Yogyakarta, 27.
H.J., Blaaschke, G. 1988. Analisis Farmasi . Penerjemah Sarjono Kisman. Universitas Gadjah Mada Press : Yogyakarta. 374
12. Http://www.chemistry.org/materi_kimia/instrumen_analisis/kromatografi1/
kromatografi_kolom/ 13. Http://www.chemistry.org/materi_kimia/instrumen_analisis/
kromat kro matogr ografi afi1 1/
kromatografi_lapis_tipis/ 14. Http://www.chemistry.org/SitusKimiaIndonesia/Kromatograf-Kolom//
15.Thin-Laye 15. Thin-Layerr Chromatography. Chromatography. E-book. 16. Tjit Tjitro roso soep epom omo, o,
G. 1994 1994.. Taks Takson onom omii Yogyakarta : UGM Press.
Harborne, ne, 17. Harbor
Tumb Tumbuh uhan an
Obat Obat-O -Oba bata tan n.
J.B. J.B. 1987. 1987. Meto Metode de Fito Fitoki kimi mia a : Penu Penunt ntun un Cara Cara Mode Modern rn Menganalisis Tumbuhan. Tumbuhan . Penerbit ITB : Bandung. 4-7, 19-30. LAMPIRAN
66
GAMBAR A.
Ekst kstrak raksi Cair Cair Padat
Ekstrak tidak larut etil asetat
B.
Ekstrak larut etil as asetat
Krom Kromat atog ogra rafi fi Lapi Lapis s Tipi Tipis s
UV 254 nm
UV 366 nm
Eluen = Hexan : Etil ( 3 : 1 )
C.
Krom Kromat atog ogra rafi fi Kolo Kolom m Kon Konve vens nsio iona nall
67
Eluen = Heksan : etil etil asetat asetat = 1 : 0 Heksan : etil asetat = 10 : 1 Heksan : etil asetat asetat = 5 : 1 Heksan : etil asetat = 1 : 1 Metanol : etil asetat = 1 : 0
D.
Fraksinasi
UV 254 nm
UV 366 nm
Eluen = Hexan : Etil ( 3 : 1 )
E.
Krom Kromat atog ogra rafi fi Lap Lapis is Tip Tipis is Pre Prepa para rati tif f
68
H 2SO4
UV 366 nm
UV 254 nm
Eluen = Hexan : Etil ( 4 : 1 )
F.
KLT KLT 2 Dime Dimens nsii dan dan Mult Multie ielu luen en
UV 254 nm
UV 366 nm
69
UV 254 nm Eluen =
UV 366 nm
Hexan : CHCl 3 ( 3 : 1 ) Hexan : Etil ( 4 : 1 ) Hexan : Etil ( 1 : 1 )
70
SKEMA KERJA A.
Ekst kstrak raksi Cair Cair Padat Ekstrak MeOH
Dilarutkan dengan etil asetat
Digerus dalam lumpang Diamkan beberapa saat
Larut etil asetat (diambil)
tidak larut etil asetat(disimpan) asetat(disimp an)
Dilakukan sebanyak 3 kali
Diuapkan
.
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Ekstrak awal
ekstrak larut etil asetat
ekstrak tidak larut etil
Dilarutkan dengan kloroform
Ditotolkan pada lempeng
Dielusi dengan eluen hexan : etil = 3 :1
Dilihat penampakannya di UV 254 dan 366 nm
71
.
Kromatografi Kolom Konvensional Penyiapan Bubur Silika Ditimbang silika kasar dan ekstrak
Diperoleh bobot silika kasar 100x dari ekstrak
Dibagi menjadi 2 bagian
Bagian pertama dimasukkan di cawan porselen Bagian kedua untuk penyiapan sampel
Dibasahkan dengan pelarut hexan
Diaduk-aduk hingga terbasahi semuanya
Diamkan beberapa saat (sekali-sekali diaduk)
Silika siap digunakan Penyiapan Ekstrak Ekstrak ditimbang
Dilarutkan dengan CHCl 3
Penyiapan dengan metode kering
Ekstrak dikeringkan dengan penambahan sisa silika tadi Sedikit demi sedikit
Digerus hingga kering
72
Sisa silika disimpan
Ekstrak siap digunakan Proses Partisi Dirangkai alat kolom
Dimasukkan kapas pada buret kolom
Dimasukkan bubur silika mampatkan Dimasukkan sampel
Dimasukkan sisa silika
Dimasukkan perbandingan eluen
Ditampung di vial
Diuapkan
D.
Fraksinasi Diambil 13 perwakilan vial + pembanding
Ditotolkan pada lempeng
Dielusi dengan eluen heksan : etil (4:1)
Dilihat pada UV 254 , 366 , & H2SO4
Digabung noda yang sama
73
Diperoleh 4 fraksi
.
Kromatografi Lapis Tipis Preparatif Penyiapan Lempeng KLTP Lempeng kaca 20x20 yang telah dibilas dengan alkohol
Ditimbang silika halus 7 gram tiap lempeng
Disiapkan sejumlah sejumlah air yaitu 2x dari bobot silika
Dilarutkan silikanya dalam air hingga larut
Dipasang alatnya
Ditaburkan silika di atas lempeng
Diratakan dengan gabus hingga rata
Dikeluarkan dari alat dan diratakan dengan bantuan tangan
dikeringkan Proses KLTP Dilarutkan ekstrak fraksi ke 3 dengan kloroform
Ditotolkan pada lempeng secara berkesinambungan
Dielusi dengan eluen heksan : etil (4:1)
74
Dilihat pita yang terbentuk pada UV 254 dan 366
Dikerok pita yang terbentuk
Diperoleh 6 hasil pita KLTP
.
Multi Eluen dan KLT Dua Dimensi Multi Eluen 6 vial (ekstrak)
Dilarutkan dengan CHCl 3
Disiapkan perbandingan eluen Hexan : CHCl 3 = 3 : 1 Hexan : Etil = 4 : 1 Hexan : Etil = 1 : 1
Ditotolkan pada lempeng
Dielusi dengan ketiga eluen yang telah disiapkan
Dilihat pada UV 254 nm dan UV 366 nm KLT Dua Dimensi Ekstrak
Dilarutkan dalam CHCl 3
Disiapkan eluen hexan : etil = 4 : 1
Ditotolkan pada lempeng
75
Dielusi hingga batas atas
Diputar 90 o
Dielusi lagi hingga batas atas
Dikeluarkan dari chamber
Dikeringkan
Dilihat pada UV 254 nm dan UV 366 nm
76
HASIL DISKUSI
Digunakan penyari etil asetat karena menurut jurnal yang diperoleh dikata dikatakan kan bahwa bahwa senya senyawa wa flavon flavonoid oid larut larut dalam dalam etil etil aseta asetat. t. Dan alasa alasan n meng mengapa apa eluaen eluaen yang yang diguna digunaka kan n pada pada proses proses KLT KLT adalah adalah heksan heksan : etil etil asetat 3 : 1 karena belum tentu senyawa yang ditarik dengan etil asetat hanya bisa menarik senyawa-senyawa yang memiliki tingkat kepolaran sama atau atau diba dibawa wah h etil etil aset asetat at,, teta tetapi pi adap adapun un seny senyaw awa a wala walaup upun un deng dengan an konsentrasi yang sedikit bisa ikut tertarik dalam etil asetat. Sehingga hasil yang diperoleh ada senyawa yang tertinggal di bawah dan adapula yang terelusi. Alas an mengapa eluen yang digunakan kelompok lima berbeda dengan kelompok lain yang sama-sama memiliki tujuan untuk mengisolasi flavonoid karena senyawa flavonoid yang ditarik oleh kelompok lima berbeda dengan dengan flavono flavonoid id yang yang ditarik ditarik oleh kelompok kelompok lain. lain. Setiap Setiap jenis jenis flavonoi flavonoid d memi memilik likii cirri cirri-ci -ciri ri yang yang berbed berbeda a termas termasuk uk pelaru pelarutt yang yang bias bias menai menaikk kkan an nodanya. Alasa Alasan n menga mengapa pa pada pada hasil hasil KLT mulel muleluen uen dan 2 dimen dimensi si tidak tidak menampakkan noda karena mungkin senyawa flavonoidnya sangat mudah terhidrolisis oleh pemaparan cahaya yang terlalu lama, yang mengakibatkan senyawa tersebut pada waktu dielusi tidak naik atau dengan kata lain oleh kare karena na
terh terhid idro roli lisi sisn snya ya
meny menyeb ebab abka kan n
kepolarannya.
77
seny senyaw awa a
ters terseb ebut ut
bert bertam amba bah h
Alas Alasan an meng mengap apa a meng menggu guna naka kan n meto metode de part partis isii pada padatt kare karena na sebenarnya tidak terlalu bermasalah pada metode apa yang digunakan. Hal ini didasarkan pada jurnal yang diperoleh, dikatakan bahwa dengan metode partisi cair maupun padat, senyawa flavonoid bisa ditarik dari suatu simplisia. Hal Hal ini terbuk terbukti ti juga juga dengan dengan kelom kelompok pok lain lain yang yang juga juga menari menarik k flavon flavonoid oid dengan metode partisi cair, tetap juga mendapatkan senyawa tunggal dari flavonoid. Alasan mengapa semua pita diambil karena merupakan kesalahan dari kelompok yang tidak melakukan uji pendahuluan dengan menggunakan pereaksi pereaksi spesifik spesifik untuk untuk menentu menentukan kan ada tidaknya tidaknya senyawa senyawa flavonoi flavonoid d di dalam suatu simplisia.
78
