INFORME DE LABORATORIO PRACTICA Nº 2 HIDROLISIS DE POLISACARIDOS
TUTOR: MIGUEL DELGADO
Bogotá noviembre noviembre 20 de 2008 –
HIDRÓLISIS DE POLISACARIDOS
OBJETIVOS:
Determinar la cantidad de azúcar reductor que puede encontrarse en una solución de almidón utilizando 3,5 dinitrosalicilato de de sodio. Reconocer la hidrólisis hidrólisis de polisacáridos polisacáridos en la la solución de almidón cuando esta cambia de cambia de color. realizar la medición de espectrofotométricamente.
MARCO TEORICO:
POLISACARIDOS: En este grupo se incluyen sustancias amorfas de peso molecular elevado, generalmente no definido, que por hidrólisis dan monosas. Su formula general es ( )n Los polisacáridos más importantes son: el almidón, las celulosas, las dextrinas, el glucógeno etc. Sus principales características son:
insolubilidad en el agua, como las celulosas, otros como las dextrinas, forman suspensiones coloidales, los almidones se hinchan formando engrudos. son insípidos. no son reductores. por hidrólisis se transforman en glúcidos glúcidos de peso molecular cada vez menor, la última etapa es la obtención de monosacáridos.
ALMIDÓN: Formula general: ( )n Se produce en las plantas con clorofila como uno de los principales productos de la asimilación, y se encuentra en forma de granos microscópicos en diversas partes del vegetal, principalmente en los depósitos de reserva como las semillas o tubérculos. En el comercio se conocen como almidón cuando procede de las semillas de cereales o leguminosas, y fécula cuando se extrae de los tubérculos, químicamente estas sustancias son idénticas.
GLUCOGENO: Llamado también almidón animal, existe como material de reserva en el hígado de los mamíferos. Es un polvo blanco, amorfo, que se tiñe de negro violáceo por el yodo. Los ácidos minerales diluidos lo transforman en maltosa y g lucosa.
DEXTRINA: Son sustancias de constitución no bien conocida que se consideran como productos intermedios en la sacarificación del almidón, de donde se las obtiene. Las dextrinas son solubles en agua e insolubles en alcohol. Su olor a pan tierno es característico, se utiliza frecuentemente en la fabricación de adhesivos (colas dextrinadas)
CELULOSA: Está constituido por la condensación de 100-200 moléculas de glucosa formando largas cadenas, las que se reúnen, a su vez, en grupos de 50 macromoléculas macromoléculas y forman de celobiosa.
REACTIVOS:
Solución de almidón soluble (6 mg/ml) en buffer fosfato de sodio 0.02 M y pH 6.9 NaOH2, 4 N HCI 4 N Reactivo 3,5-dinitro salicilato de sodio: (disolver 5 g de ácido 3,5-dinitro salicílico en 100 ml de NaOH 2N, calentar. Por separado, adicionar 150 g de nitrato de sodio y potasio a 250 ml de H2O, calentar. Mezclar las dos soluciones y completar a 500 ml) Buffer fosfato de sodio 0.02 M pH 6.9 en NaCI 0.005 M. NaOH 20% Reactivo de Lucas. (134 g de ZnCI2 en 89 ml de HCI concentrado) • • • •
• • •
PROCEDIMIENTO: El profesor en el momento de la práctica distribuirá el trabajo de tal manera que cada grupo realice una Hidrólisis diferente sobre el mismo polisacárido; por ejemplo el grupo 1 efectuará hidrólisis ácida sobre almidón proveniente de maicena y el grupo 2 efectuará la hidrólisis enzimática sobre la misma muestra a fin de que puedan comparar los resultados. La solución del polisacárido tendrá una concentración de 6 mg/ml y se preparará en Buffer fosfato de sodio 0.02 M pH = 6,9. Todos los grupos realizarán la hidrólisis ácida de la celulosa en presencia de ZnCl2 (o reactivo de Lucas) Hidrólisis ácida:
Rotular ocho tubos de ensayo y agregar en orden los siguientes reactivos:
condiciones
tubos B -
0 0.4
1 0.4
2 0.4
3 0.4
4 0.4
5 0.4
6 0.4
0.4
-
-
-
-
-
-
-
NaOH, 2.4 N
1
1
-
-
-
-
-
-
HCl 4N, ml
0.6
0.6
0.6
0.6
0.6
0.6
0.6
0.6
15
25
Solución almidón, ml Agua destilada, ml
Colocar los tubos 1 a 6 en un baño maría a ebullición y dejarlos en los siguientes tiempos: Tiempo de incubación, minutos
0
0
3
6
9
12
Finalizado el tiempo de incubación, sacar cada tubo y detener la hidrólisis agregando: NaOH, 2.4N, ml
-
-
1
1
1
1
1
1
Reactivo 3,5dinitrosalicilato, ml
1
1
1
1
1
1
1
1
Introducir todos los tubos en el baño a ebullición durante cinco minutos, enfriar y agregar 7 ml de agua destilada. Agitar y medir transmitancia a 540 nm. Utilice el B para ajustar el 100% de transmitancia. transmitancia.
ANALISIS DE RESULTADOS:
La hidrólisis de los polisacáridos puede seguirse midiendo el incremento en azúcares reductores mediante el Reactivo 3,5-dinitrosalicilato en solución alcalina. El ácido 3,5dinitrosalicílico (de color amarillo) se reduce a ácido 3-amino-5 nitro salicílico, (rojizo oscuro) produciendo una coloración que se mide espectrofotométricamente a 540 nm. La extensión o porcentaje de hidrólisis se determina comparando la cantidad de azúcar reductor presente en cualquier tiempo, con la cantidad de azúcar presente después de la hidrólisis ácida total. La hidrólisis de los polisacáridos también puede efectuarse por medios químicos. Los ácidos fuertes diluido catalizan el rompimiento indiscriminado de los enlaces glicosídicos, dando como producto final glucosa. La estructura polisacárida se demuestra en este experimento, ya que el número de grupos reductores en el medio de reacción aumenta a medida que transcurre la hidrólisis. El progreso de la hidrólisis se mide de la misma forma que en la hidrólisis enzimática.
TABLA DE RESULTADOS:
ABSORBANCIA A 540 nm TUBOS GRUPOS ALBUMINA S GLOBULINA S PROLAMIN AS GLUTAMIN AS
B 0.004
1 0.077
2 0.093
3 0.179
4 0.186
5 0.253
6 0.274
7 0.041
8 0.034
9
0.069
CONCLUSIONES:
10
11
12
13
0.029
0.095
0.098
14
0.107 0.207
BIBLIOGRAFIA
Bioquímica de Harper Robert K. Murray Peter A. Mayes Daryl K. Granner Victor W. Rodwell Ed. El manual moderno, S.A. de C.V. México, D.F.
1988
Química elemental moderna Orgánica Celsi- Iacobucci Ed. Kapelusz Buenos Aires
Modulo Bioquímica UNAD 2008
