INFORME DE LA PRÁCTICA NO. 5 DETERMINACIÓN DE HIERRO SÉRICO Y CAPACIDAD TOTAL DE FIJACIÓN DE HIERRO OBJETIVO: Conocer las técnicas colorimétricas útiles para la determinación de hierro efectuando una de éstas, así mismo realizar una determinación de la capacidad total de fijación de hierro para determinar la capacidad libre de fijación y el porcentaje de saturación, completando así el estudio de la cinética del hierro.
GENERALIDADES El hierro es un oligoelemento utilizado en la síntesis de la hemoglobina y otras heminas celulares. Su absorción intestinal se realiza en el duodeno y en las primeras porciones del yeyuno, y es transportado por la transferrina y almacenado intracelularmente en forma de ferritina. La concentración normal del hierro contenido en el plasma -unido a la transferrina- es de 80-150 microg/dl en el varón y de 60-140 microg/dl en la mujer. Sus concentraciones en plasma son variables según el sexo -ya reflejado en los distintos valores de la normalidad-, la edad -más alto en la pubertad-, el momento del día -mayor por la mañana-, el tono vegetativo y el tipo de alimentación. Obtenemos hierro de la dieta, y, normalmente, el cuerpo absorbe aproximadamente el 10% del hierro que se encuentra en los alimentos. Los lugares de depósito de hierro son los hepatocitos (depósitos parenquimatosos de hierro) y el sistema mononuclear fagocítico (depósitos reticulares de hierro). A partir del descubrimiento descubrimiento de Schade y Caroline por el que caracterizaron a la globulina plasmática transportadora de Fe+3 (Transferrina (T), Siderofilina, se han desarrollado muchos muchos métodos para evaluar su concentración concentración y la capacidad del suero de combinarse con con dicho metal, toda vez que uno de los factores factores limitantes de la eritropoyesis eritropo yesis es la cantidad de hierro que llega a la médula ósea vía transferrina (T), en especial de su grado de saturación. Esta proteína de transporte de Fe+3, de carácter glicoproteico y ß1 globulínico, presenta un marcado polimorfismo genético, conociéndose más de 21 variantes. Las concentraciones de ferritina sérica reflejan los depósitos totales de hierro del organismo, pero ha de tenerse en cuenta que los procesos inflamatorios o las enfermedades causantes de necrosis hepatocelular producen una elevación de la ferritinemia por encima de los valores que corresponderían a los depósitos del metal. La ferritina sérica mide la cantidad de hierro en las células corporales y el hierro sérico la cantidad de hierro en la sangre, por lo tanto tienen diferentes rangos "normales". El resultado del análisis de ferritina sérica estará expresado en nanogramos por mililitro y el valor normal es: 12 a 300 ng/ml en hombres y 12 a 150 ng/ml en mujeres. El análisis de hierro sérico debería ser realizado por la mañana, cuando los niveles de hierro están más altos. Para el análisis de ferritina no hay preferencia por un momento específico, pero las enfermedades inflamatorias como el asma o la artritis pueden elevar tu nivel de ferritina. f erritina.
MATERIALES
Equipo para la determinación de Hierro (colorimétrico) (colorimétr ico) = kit Ferrocine Ferrocin e
Kit para CTFH Espectrofotómetro
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Tubos Pipetas Gradilla
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Suero (1.0 mL mínimo)
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PROCEDIMIENTO a) Hierro sérico
Prepara la serie de tubos indicada en la tabla 1
Leer las absorbancias A del patrón y la muestra frente al blanco a una 560nm(el color es estable por 30 min)
Realizar los cálculos necesarios
Blanco
Mezclar y dejar reposar por 10 min a temperatura ambiente
Standar
BlancoProblema
Problema
100 µL H2O bidestilada 100 µL suero problema 100 µL estándar 1 gota R2 500 µL Rt ad Total de Fijación de Hierro (CTFH)
apacid
b)
C
Pipetear en los tubos 5mL de muestra y 1mL de sol. saturante (R5)
Mezclar bien e incubar por 10 min a temperatura ambiente.
Añadir a cada tubo 3 dosis de agente precipitante (70mg c/u)
Recoger sobrenadante cuidadosamente y tratar como muestra para determinaciòn de hierro
Centrifugar 15 min a 3000 r.p.m
Mezclar bien e incubar por 10 min a temperatura ambiente.
Determinar CTFH, CLFH y % de saturaciòn
PRECAUCIONES EN LA DETERMINACIÓN Tener el material limpio, libre de detergente e iones
RESULTADOS Cinética de He (Ferrozine Colorimétrico) Nombre del paciente: Laura González Jiménez Resultados Concentración de He
116.9 μg/dL
Concentración Total de Fijación de Hierro (CTFH)
305.4 μg/dL
Concentración Libre de Fijación de Hierro (CLFH)
188.5 μg/dL
% Saturación
38.27 %
Valores de Referencia Hombres: 65.0 – 175.0 µg/dL Mujeres: 40.0 – 130.0 µg/dL Hombres: 259.0 – 400.0 µg/dL Mujeres: 220.0 – 360.0 µg/dL Hombres: 200.0 – 300.0 µg/dL Mujeres: 150.0 – 250.0 µg/dL 18.0 – 48.0 %
Cálculos Blanco = 0
Estándar = 0.165
[]
B/P = 0.023
P = 0.216
[]
Blanco = 0
Estándar = 0.165
B/P = 0.023
P = 0.191
[]
[]
CONCLUSIÓN ALTERACIONES PATOLOGICAS Hipersideremia Puede observarse en:
Hemocromatosis idiopática: enfermedad genética de herencia autosómica recesiva que se caracteriza por un incremento de la absorción de hierro. Las personas con hemocromatosis absorben el doble de esa cantidad. Una vez absorbido, el exceso de hierro no sale del cuerpo. En su lugar, se almacena en la sinovial (articulaciones) y los órganos importantes como el hígado, el corazón, el cerebro, el páncreas y los pulmones. Durante muchos años, el hierro se acumula a niveles tóxicos que pueden dañar o incluso destruir un órgano. La sobrecarga de hierro puede causar muchos problemas de salud, con mayor frecuencia una forma de diabetes que es a menudo resistente a tratamiento con insulina. Debido a esto, la hemocromatosis hereditaria es a veces llamada "diabetes bronceada". Aporte exógeno excesivo de hierro, fundamentalmente administración intramuscular o intravenosa (preparados farmacológicos, transfusiones repetidas de hematíes, etc.). La sobrecarga de hierro por aporte oral de suplementos no se suele producir, ya que cuando los valores de hierro en el organismo son adecuados disminuye su absorción. Anemias hemolíticas y anemias que cursan con hemolisis (megaloblásticas, sideroblásticas,talasemia) y aplasia medular
intramedular
Hepatopatias parenquimatosas agudas y crónicas; no se observa en los procesos colestásicos (en las hepatopatías no colestásicas la relación hierro/cobre es alta, mientras que la relación se invierte en lascolestásicas). Porfiria hepatocutánea, tarda en algunos casos.
Hiposideremia
Se observa hiposideremia en: 1. Anemia ferropénica. Es la causa más frecuente y puede originarse por: -Disminución de la absorción de hierro (gastrectomía, enfermedad celíaca, etc.) -Aumento de la pérdidas: hipermenorrea, (ulcus, hernia de hiato, tumores de colon, etc.)
sangrado
crónico
digestivo
-Disminución marcada de ingesta de hierro (dieta vegetariana estricta) -Aumento de las necesidades (por embarazo y lactancia) 2. Anemia inflamatoria crónica:infecciones, colagenopatías, procesos inflamatorios en general y neoplasias. Se distingue de la anterior por cursar con transferrina baja y ferritina normal o alta. No existe ferropenia real sino una mala utilización del hierro por secuestro en el sistema mononuclear fagocítico (antiguamente llamado sistema reticuloendotelial o SRE) 3. Síndrome nefrótico, por pérdida renal de transferrina
CONCLUSIONES Se logró determinar la concentración de hierro sérico mediante ayuda de kits, así mismo se determinó la capacidad total de fijación de hierro, la capacidad libre de fijación de hierro y el porcentaje de saturación en la paciente Laura González Jiménez notando que no presenta patologías relacionadas a deficiencia de hierro. Debido a que cada análisis determina los niveles de hierro desde diferentes fuentes, y por diferentes razones, los resultados anormales también tendrán diferentes causas. Por ejemplo, un resultado de ferritina sérica superior a lo normal puede deberse a un linfoma de Hodgkin o a una enfermedad hepática. Un resultado de ferritina sérica inferior a lo normal puede deberse a un sangrado prolongado del tracto digestivo, mientras que un resultado de hierro sérico inferior a lo normal podría ser causado por un embarazo o un sangrado menstrual abundante.
UTILIDAD DE LA PRUEBA La prueba sirve para determinar Los análisis de ferritina y hierro séricos determinan los niveles de hierro de diferentes maneras. El valor de ferritina sérica muestra la cantidad de hierro que hay en tu cuerpo, mientras que el valor de hierro sérico muestra la cantidad de hierro que hay en tu sangre. El análisis puede ser vital, ya que el hierro puede acumularse hasta llegar a niveles dañinos antes de que aparezcan síntomas.
BIBLIOGRAFIA
De la Peña Adolfo. Hierro sérico. 2009. (En línea). Consultado el 9 de septiembre de 2013. Disponible en: http://adolfoneda.com/hierro-serico/ Kids Health. Hereditary Hemochromatosis. (En línea). Consultado el 10 de septiembre de 2013. Disponible en: http://kidshealth.org/parent/general/aches/hh.html#
