informe 1 - microscopía

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS (Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA) FACULTAD DE CIENCIA BIOLÓGICAS E.A.P. GENÉTICA Y BIOTECNOLOG BI OTECNOLOGÍA ÍA

Informe N°1: MICROSCOPÍA

Curso

:

LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR

Profesores :

ROSA GONZALES GONZALES JORGE ZEVALLOS ALVA

Alumna

:

LLACSAHUANGA ALLCCA, Lidia Elena

Código

:

14100113

Ciclo

:

2°

Ciudad Universitaria, setiembre del 2014

Laboratorio de Biología Celular

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ÍNDICE

Contenido MARCO TEÓRICO ................................................................................................................................. 3 MATERIALES ........................................................................................................................................ 4 PROCEDIMIENTO ................................................................................................................................. 5 ESQUEMAS .......................................................................................................................................... 6 OBSERVACIONES ................................................................................................................................. 9 CUESTIONARIO .................................................................................................................................. 10 CONCLUSIONES ................................................................................................................................. 12 BIBLIOGRAFÍA .................................................................................................................................... 13

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MARCO TEÓRICO Desde un principio, el avance en los estudios celulares ha estado determinado en gran medida por nuestra capacidad de observar sus estructuras, es decir, de ampliarlas para poder observarlas a pesar de su minúsculo tamaño. Es debido a esto que la microscopía juega un papel fundamental en la biología celular, al ser el principal método de estudio de la célula. Existen diversos tipos de microscopios: óptico, electrónico de barrido y de transmisión, etc. Nos concentraremos en las partes del microscopio óptico. 

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Ocular: Es el lente que se encuentra cercano al ojo del observador. Capta y amplía la imagen formada en el objetivo. Objetivo: Son los lentes que se encuentran en el revólver. Es el lente que permite la mayor y regulable ampliación de imagen. Son considerados los más importantes en la formación de la imagen microscópica pues determinan el poder de resolución Condensador: Concentra y regula los rayos luminosos. Diafragma: Es el regulador de la cantidad de luz que llega al condensador. Foco: Origen de la luz, dirige esta al condensador. Tubo óptico: Cilindro mecánico que porta al ocular en un extremo y a los objetivos en el revólver en el otro. Revólver: Sistema rotador que porta a los objetivos de diferentes aumentos. Macro y micrométrico: Tornillos de enfoque. Varían la distancia entre la platina donde se ubica la muestra y los objetivos en el revólver. El macrométrico es utilizado para variaciones más amplias, mientras que el micrométrico para más pequeñas. Platina: Plataforma con orificio central donde se coloca la preparación (muestra en un portaobjetos). El orificio permite el paso de luz y posee pinzas para sujetar la preparación en su lugar.

Otros conceptos importantes en microscopía óptica: Índice de refracción:

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Apertura Numérica (NA): capacidad del objetivo de poder captar los rayos refractados por las estructuras finas de las cuales está constituido el objeto que se observa Poder de resolución (PR): capacidad de un objetivo de poder distinguir la distancia mínima que debe existir entre dos puntos del objeto para que se puedan visualizar como dos puntos separados.

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MATERIALES Del Alumno: 

Papel lente

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Cubreobjetos

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Portaobjetos

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Navaja de afeitar

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Frasco y gotero

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Pinza de punta fina

Especímenes: 

Bulbo de cebolla

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Hojas de elodea

Del Laboratorio Microscopio de campo claro con condensador móvil y diafragma de campo.

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PROCEDIMIENTO Primero, verificamos que el microscopio se encuentre en óptimas condiciones. Nos aseguramos que su luz funcione y luego la apagamos y preparamos las muestras a observar. Observación de Elodea  

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Con el gotero, colocamos una gota de agua de caño en un portaobjetos. Con la pinza, cogemos un pequeño pedazo de una hoja de Elodea y lo colocamos sobre la gota en el portaobjetos. Formando un ángulo de 45° entre el portaobjetos y un cubreobjetos, soltamos este último para así cubrir la muestra. Colocamos el portaobjetos con la muestra de Elodea en la platina del microscopio. Colocamos la muestra en el medio del campo iluminado. Abrimos y cerramos el diafragma hasta encontrar una buena iluminación para esta muestra. Enfocamos observando con el lente objetivo de 4, moviendo el macrométrico primero y luego el micrométrico. Observamos también con el objetivo de 10 y 40, en ambos casos usamos el micrométrico para terminar de enfocar, sin mover ya el macrométrico. Realizamos diagramas de lo observado, estos se encuentran en la siguiente sección del informe.

Observación de Catáfila de cebolla   

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Extrajimos la envoltura externa de la cebolla. Con el Gillette o la navaja cortamos un pequeño rectángulo de cebolla. De este pedazo de cebolla, cogemos una fina capa, la más externa, la epidermis, con la pinza. Esta capa fina la colocamos en la laminilla con una gota de agua. Nuevamente, formando un ángulo de 45° entre la laminilla y lámina, cubrimos la muestra. Llevamos a la platina a observar y graficamos lo observado en el microscopio con el objetivo de 4, 10 y 40.

Observación extra 

También realizamos la observación de una letra pequeña cortada de un periódico para confirma la orientación de la imagen: volteada.

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ESQUEMAS Elodea

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Catáfila de bulbo de cebolla

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OBSERVACIONES Elodea Como observamos este espécimen con 3 diferentes lentes objetivos, vimos con cada uno de ellos diferentes niveles de detallismo. A continuación una descripción de los observado a distintos aumentos totales. 

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x40: Con este aumento aún podíamos observar los bordes de la hoja de Elodea, pero ya se puede ver ciertas separaciones en los filamentos que componen a la hoja, parecidos a ladrillos de construcción. Además, se observa las diferentes tonalidades de verde. X100: Este aumento nos permite ya ver a las células de la hoja, e inclu so observar a los cloroplastos esparcidos en estas. Vemos que cada célula está separada de otra por una estructura un poco más oscura. X400: Se observa una mayor cantidad de detalles, se podría incluso contar los cloroplastos en cada célula; además, al mirar detenidamente, logramos discernir que estos cloroplastos se encuentran en movimiento (ciclosis). Hay zonas más “verdes” que otras debido a estos cloroplastos, pues, siendo la muestra

tridimensional, hay lugares donde se encuentran uno sobre otros los cloroplastos. Se ve, también, de una manera más definida, la envoltura que separa a las células unas de otra, la pared celular. Catáfila de cebolla 

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x40: Vimos un complejo organizado de células, estas tenían gorma hexaédrica, como en celdas alargadas, y estaban ordenadas con las demás, encajando como ladrillos no rectangulares. No se podía observar más detalles. X100: Con este aumento ya se puede ver la pared celular entre las células e incluso unas estructuras dentro de la célula (el núcleo) aunque no muy claramente. X400: Se ve claramente el núcleo dentro de las células y la pared celular que las rodea.

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CUESTIONARIO 1. Explique por qué al hacer la iluminación Kohler se requiere enfocar una preparación antes de desplazar el condensador. Es necesario para la iluminación Kohler debido a que se tendrá que hacer un enfoque de los márgenes del campo iris, y si no hay un espécimen que observar, no se puede saber propiamente si está o no enfocado. Sabremos que el campo iris está correctamente enfocado cuando veamos los márgenes de la muestra claramente. Además, es recomendable realizar esta iluminación con la muestra que se desea observar, pues la forma en que esta muestra refracte la luz es única o diferente a la de otras; entonces, al realizar la iluminación con la muestra deseada se obtiene una mejor observación. 2. Mencione qué cuidados del microscopio hay que tener al usar el aceite de inmersión. Al trabajar con el aceite de inmersión se debe tener en cuenta las siguientes precauciones:  Apenas se termine la observación, limpiar cuidadosamente el lente objetivo con el papel lente para evitar que el aceite se seque, pues de pasar esto, se tendrá que usar una mezcla de alcohol-acetona o xilol para limpiarlo, que a largas o en demasiada cantidad dañan el lente o su sujeción. Además, tener cuidado de realizar bien esta limpieza, pues de dejar rastros de aceite en el objetivo, este puede fluir dentro de la carcasa del microscopio y causar daño a sus engranajes o a la lente del condensador.  Descartar rápidamente el papel lente usado para la limpieza del objetivo con aceite para evitar su reutilización.  No inclinar el microscopio para que el aceite de inmersión no caiga en otras partes del microscopio como el condensador, por ejemplo, pues lo dañaría. También tener otras precauciones para evitar que esto suceda, como echar el aceite en el portaobjetos cuando este NO está en la platina, y evitar derramarlo.  Tener cuidado de no acercar el lente objetivo demasiado a la muestra cubierta del aceite, pues se puede romper el portaobjetos, causando raspaduras u otros daños graves al objetivo, o en un caso peor, se puede romper el objetivo en sí.  Al cambiar de muestra y colocar el portaobjetos, nunca girar una lente seca en la posición de visión, puesto que si el aceite de inmersión fluye dentro de una lente cóncava, es muy difícil de limpiar completamente. Microscopía

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3. Explique qué es una preparación en fresco y qué es una fija. En esta práctica hemos realizado preparaciones en fresco.  Preparación en fresco: Es una preparación inmediata, en ella se pone la muestra directamente entre el portaobjetos y el cubreobjetos con una gota de agua. No se fija al fuego ni se le trata demasiado, aunque sí se le puede hacer tinciones vitales. Es la que se usa cuando se desea observar la movilidad de los microorganismos y tiene la desventaja de no permitir demasiado contraste y que muchas muestras no llegan a ser visibles con esta preparación.  Preparación fija: Esta es la preparación que es tratada o fijada ante de ser observada, puede ser teñida y fijada a fuego y es utilizada para observar estructuras no dinámicas de los microorganismos, gracias a las tinciones permite una mejor observación de la muestra, pero sin movimiento. Demora más en realizar.

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CONCLUSIONES 

El microscopio óptico, incluso con su “bajo aumento”, es una herramienta vital para el estudio celular, pues permite la rápida y eficaz observación de cuerpos minúsculos, definitivamente no visibles a simple vista (“Bajo aumento” para

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estudios moleculares o sus semejantes). La preparación correcta y el adecuado mantenimiento del microscopio son necesarios para una buena observación, de ser maltratado el microscopio su vida útil se reducirá en gran manera y la imagen que nos proporcionará no será la mejor. Los componentes del microscopio óptico brindan la mayor comodidad para el trabajo, pues consta de diversas partes que podemos ajustar para una buena observación.

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BIBLIOGRAFÍA Karp, Gerald. “Biología Celular y Molecular”. Editorial Mc Graw Hill, 5ta edición , México, 2009: 728 Ma. Genoveva González- Morán. “Técnicas en Biología Celular, teoría y práctica”, AGT Editor, S.A., 1era edición, 1996 Madigan, M. T., Martinko, J. M. Y Parker, J. “Biología de los microorganismos” Prentice

Hall, 8va edición, Iberia, España, 1997. Alberts, Bruce. “Biología Molecular de la Célula” Ediciones Omega, 2da edición, Barcelona, 1994 http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/articles/basics/care.html http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/articles/basics/kohler.html

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