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EXTRACCIÓN DE LÍPIDOS DE CEREBRO
Cruz Vera Yeyzon Javier Faul!ad Cienias ?ásias Esuela @u$mia Pro'rama @u$mia E9mails) duran5avierBD'mail( duran5avierBD'mail(om om Suarez Suarez Hernán Hernández dez Jhon Jhon Wilma Wilmar r Faul!ad Cienias ?ásias Esuela @u$mia Pro'rama @u$mia E9mails 5,Dlive(om(ar E9mails 5,Dlive(om(ar
=***> Pan Andrés Felipe Faul!ad Cienias ?ásias Esuela @u$mia Pro'rama @u$mia E9mails) elipanB @gmail.com
BRAIN LIPID EXTRACTION Cruz Vera Yeyzon Javier* Suarez Hernández Jhon Wilmar ** ** Pan Andrés Felipe*** Fecha de entrega: 15/10/2014
Resumen: En la prá!ia prá!ia se pre!endi" pre!endi" e#!raer y separar separar los l$pidos l$pidos presen!es en el ere%ro de res& para pos!eriormen!e median!e una serie de prue%as previamen!e asi'nadas haer reonoimien!o de los posi%les l$pidos e#!ra$dos de la mues!ra(
Paa!ras Ca"e) l$pidos& oles!erol& esin'ol$pidos& osol$pidos&
'luol$pidos(
A!stract: +n pra!ie& an a!!emp! ,as made !o e#!ra! and separa!e !he lipids presen! in !he %rain o %ee& and la!er %y a preassi'ned num%er o !es!s& ma-e possi%le !he reo'ni!ion o lipids e#!ra!ed rom !he sample
#e$%&rds: .ipids& holes!erol& sphin'olipids& phospholipids& 'lyolipids(
Intr&ducc'(n El ere%ro !iene un al!o on!enido de l$pidos& !an!o omo /01 de su peso seo( .os áidos 'rasos 2FAS3 de los osol$pidos del del ere ere%r %ro& o& espe espei ial alme men! n!e e de ade adena na lar' lar'a a mono mono insa!urados AF& son responsa%les de man!ener la es!ru!ura de las mem%ra mem%ranas nas&& mien!r mien!ras as 4ue los poliin poliinsa! sa!ura urados dos AF on!rolar on!rolar su luidez luidez Es!os on5un!o on5un!os s om%us!i%les om%us!i%les es!án es!án su5e!os a una on!inua renovai"n( 6e heho& los am%ios en los l$pidos de la die!a ma!erna duran!e el em%arazo o la la!ania provoan am%ios en el peril de A7 del ere%ro de las r$as al naer naer y en el desarr desarroll ollo o pos!na pos!na!al !al !emprano !emprano(( Además& el ere%ro adul!o puede ser inlueniado por las on!ri%uion on!ri%uiones es espe$ias espe$ias FA e#"'enos( e#"'enos( Es!os Es!os am%ios am%ios implian implian no s"lo la an!idad an!idad !o!al de los A7 poliinsa!urados poliinsa!urados adminis!rados& sino !am%ién la relai"n 89/:89;(
disu disu!i !irr las las ons onse eue uen nia ias s de es!o es!os s am% am%io ios s para para la plas!iidad neuronal y la supervivenia( Con suer!e& un me5or onoimien!o de es!os aspe!os duran!e el enve5eimien!o normal del ere%ro nos aerará a la omprensi"n de las ausas y los meanismos de su pa!olo'$a relaionada on la edad(
Por lo !an!o& la in'es!a de 'rasas en la die!a de!ermina la omposii"n FA del ere%ro y& por lo !an!o& puede inluir en la uni"n neurol"'ia y la apaidad de aprendiza5e& omo se ha demo demos! s!ra rado do en al'u al'uno nos s anim animal ales es y& on on meno menos s reuenia&
en los seres seres humano humanos( s(
Resultados y discusión
Resutad&s $ d'scus'(n )* E+trac E+tracc'( c'(n n $ se,ara se,arac'( c'(n n de de -,'d -,'d&s* &s* El proes proeso o de separa separai" i"n n y e#!ra e#!rai" i"n n de los dis!in!o dis!in!os s e#!ra!os para la mues!ra de ere%ro se realiz" median!e las
dis!in!as en!riu'aiones en ada e#!ra!o y la u!ilizai"n de solven!es más aines al omponen!e lip$dio 4ue se 4uisiera e#!raer(
.*
Se,arac'(n de -,'d&s de e+tract& II
Es!e proedimien!o no se realiz" de%ido a 4ue se pens" 4ue no era neesario ya 4ue se su'iere 4ue las e#!raiones y separaiones hehas en la primera par!e de la sei"n de la%ora!orio ueron adeuadas(
Eiienia de las e#!raiones 1EF+C+ We#!ra!o :Were%ro E5emplo 1EF+C+ 0(;I':(0B *00 1EF+C+ ;(BI1 para oles!erol Para hallar las eiienias de ada e#!ra!o se proedi" omo se mues!ra en el e5emplo(
/* Prue!as es,ec'0'cas Ta!a . Kesul!ado de las
+ma'en de E#!ra!o +( Con!iene prinipalmen!e oles!erol& .os es!eroles son solu%les en ae!ona& al on!rario de lo 4ue suede on o!ros l$pidos omple5os(
Prue%a para Coles!er ol
Prue%a para Ail'lierol es y Fosol$pido s .ei!inas
Posi!ivo
Posi!ivo
Prue% a para Fosor o
Posi!iv o
prue%as
espeiias
Prue%a para 7luol$pidos y Esin'ol$pid os K( Golish Posi!ivo
Prue!a ,ara c&ester&: El !es! realizado para la
+ma'en de E#!ra!o ++ on!iene osolip$dos( Al'unos 'lieroosol$pidos& omo las lei!inas& la osa!idile!anolamina y la osa!idilserina& son solu%les el é!er e insolu%les en ae!ona(
+ma'en ; de E#!ra!o +++ ual onsis!e prinipalmen!e de 'luol$pidos( .os 'lu"sidos de esin'osina se disuelven en alohol alien!e y son insolu%les en ae!ona y é!er(
de!erminai"n de oles!erol es el !es! .ie%erman9?urhard es un rea!ivo olorimé!rio u!ilizado para la de!erminai"n de oles!erol& lo 4ue da un olor verde in!enso( Es!e olor omienza on un olor rosa violáeo y pro'resa a !ravés de un verde laro y lue'o un olor verde muy osuro( El olor es de%ido al 'rupo hidro#ilo 29LH3 del oles!erol reaiona on los rea!ivos lo 4ue 'enera una aumen!o en la on5u'ai"n de la ins!aurai"n del anillo usiona adyaen!e( .a reai"n osis!e en 4ue el oles!erol sure una o#idai"n 'radual& ormándose una moléula de oles!apolieno 4ue posee un do%le enlae adiional al oles!erol& la e!apa iniial onsis!e en la pro!onai"n del oh del oles!erol& desprendiéndose a'ua& o%!eniéndose el ion ar%onio ;&9 oles!adieno 4ue ons!i!uye el primer paso de la reai"n de olor( .a o#idai"n del ion ar%onio por el so produe un áido oles!a9he#ano9sul"nio romooro& produiendo la !onalidad verdosa( Se u!ilizan rea!ivos espe$ios para la olorai"n de los derivados del oles!erol( se usa un áido uer!e para 4ue el oles!erol a!Me omo un alohol y as$ pueda ourrir la deshidra!ai"n on la ormai"n de un on5u'ado pi( El medio de%e ser anh$drido al in de evi!ar 4ue las moléulas de a'ua no in!erieran en la reai"n de oles!erol a oles!erileno(
F'gura ) .ie%erman9?urhard
Prue!a ,ara Ac'g'cer&es $ F&s0&-,'d&s ) Prue%a de lei!ina el proeso de la e#!raion de la lei!ina ha sido muy dsu!ido desde su desu%rimen!o en 6o%ley era de NB ya 4ue la lei!ina es un ompus!o de áil au!oo#idaion( .a lei!ina es!a os!i!uida prinipalmen!e poraido osorio& 'lierol&olina en!re o!ros( Ga.ean =I0I& i> mos!r" 4ue uando un solui"n aloh"lia de lei!ina se !ra!a on loruro de admio& la poren!a5e de ni!r"'eno presen!e en orma de olina en la lei!ina preipi!" omo el ompues!o de loruro de admio& es mayor 4ue la del ori'inal lei!inaO Por o!ro lado& la sus!ania res!an!e en el il!rado !iene orrespondien!emen!e menos de su ni!r"'eno represen!ado por la olina( Ademas la mues!ra presen!a dos apas ya 4ue on la adiion del loruro de admio la soluion pasa a ser insolu%le en alohol ya 4ue es!a se une al loruro de admio y se preipi!a(
Prue!a ,ara 1uc&-,'d&s $ Es0'ng&-,'d&s: .a reai"n de Golish es una prue%a de ará!er uali!a!ivo para ual4uier ar%ohidra!o& donde se deshidra!a 2las pen!osa urural o he#osas a hidro#ime!ilurural3 e hidroliza 2el enlae 'luosidio3 por medio de áido sulMrio los 'rupos unionales& apareiendo un anillo morado de%ido a 4ue en la preparai"n el áido es un a!alizador para la hidr"lisis de los enlaes 'luos$dios presen!es en losar%ohidra!os& donde los polisaáridos y disaáridos los redue a monosaáridos( El rea!ivo de Golish on!iene na!ol 4ue es el 4ue ondensa a los urulares 2de lashe#osas o pen!osas3 y es lo 4ue produe el anillo morado en la preparai"n( .a reaion es posi!iva para !odos los lipidos de !ipos 'luolidios es deir !odos los lipidos 4ue on!iene una seion ar%ohidra!ada ya 4ue es!a sera la hidrolizada( .a prue%a 4ue u!ilizaria seria la prue%a de osoro ya 4ue los esin'ol$pidos on!ienen osoro*
F'gura / reaion de molish Prue!a ,ara F(s0&r&: .a reai"n se %asa en 4ue el osa!o inor'ánio& en medio áido& on el moli%da!o 2rea!ivo 3 da osomoli%da!o& olor amarillo( .a posi!ividad de es!a reai"n india la presenia de "soro inor'ánio( .as sus!anias or'ánias dan la reai"n posi!iva& siempre 4ue se ha'a una hidr"lisis previa( .a reai"n posi!iva se maniies!a por la reai"n de un preipi!ado amarillo de osomoli%da!o de amonio(
F'gura . reaion de la prue%a de osoro
Prue!a de Feh'ng: En un !u%o de ensayo& adiione m.
apliando ada una de las prue%as espe$ias realizadas& de%ido a 4ue es!os resul!ados dieron posi!ivo(
de ehlin' A y m. de ehlin' ?( Adiione m. de la mues!ra o%!enida en ;(0( Calien!e en %ao mar$a a e%ullii"n duran!e minu!os o has!a la ormai"n de un preipi!ado ro5o y la deolorai"n de la solui"n(
BIBLIO1RAFIA Analie los resul!ados o%!enidos( (
(
Gaiá9?o!e5ara& E(& e! al(& Brain lipid composition in rabbits after total parenteral nutrition with two different lipid emulsions. Qu!ri!ion& 0;( .223) p( ;;9;B( .edesma& G(6(& G(7( Gar!in& and C(7( 6o!!i& Lipid changes in the aged brain: Effect on snaptic function and neuronal sur!i!al. Pro'ress in .ipid Kesearh& 0( 3)23) p( ;9;( h!!p)::,,,(slideshare(ne!:Gilisanm:reonoimien!o9 del9oles!erol94uimia
Es!a prue%a dio posi!ivo 2preipi!ado ro5o3 a pesar de la olorai"n azul& de%ido 4ue se evideni" la preseni" la presenia de un preipi!ado olor ro5o en el ondo del !u%oO la olorai"n azul& posi%lemen!e& se de%i" al orden de los rea!ivos en la adii"n de es!os(
C&ncus'&nes •
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El proeso de e#!rai"n de los e#!ra!os para el análisis de ada una de las mues!ras& !uvo poa eiienia para los !res e#!ra!os& o%!eniéndose mayor eiienia de e#!rai"n del e#!ra!o +( Kealizando ada una de las mues!ras de l$pidos en la e#!rai"n& se evideni" la presenia de es!os
h!!p)::4uimiosarmao%iolo'os(%li'oo(om(m#:rea iones9del9oles!erolR(n5;JPn@ h!!p)::,e%delproesor(ula(ve:armaia:'mendez:man uales10P6F:ETPEK+GEQ
