Experimento # 15 Análisis Orina patológica II: orina patológica Objetivos:
Analizar una muestra de orina patológica Mediante ensayos sencillos. Aplicar ensayos conocidos a la determinación determinación de compuestos compuestos anormales anormales en la orina. Marco teórico:
El análisis de la orina comienza con su inspección visual, para comprobar si a simple vista se observan cálculos, hematuria, coloración oscura o coluria por eliminación excesiva de Urobilinógeno, aspecto claro o turbio de la orina, lo que facilita, el diagnóstico de infección urinaria. Mediante el análisis elemental de la orina puede saberse si existe o no glucosa en ella, su densidad y pH, el exceso de cuerpos cetónicos, iones en orina, la existencia e xistencia de células, pus o bacterias, bilirrubina y urobilinógeno excesivos, la presencia o ausencia de proteínas, así como la detección de sustancias diversas (cannabis, heroína, cocaína, benzodiacepinas y otros fármacos). En condiciones normales no debe haber glucosa en la orina. Aunque una pequeña parte de la población elimina glucosa con la orina sin padecer ningún trastorno, si aparece suele indicar que es muy elevado el nivel de glucosa en la sangre, por lo que interesa especialmente en el diagnóstico de la diabetes, intolerancia hidrocarbonada y algunas alteraciones renales. La densidad de la orina debe estar entre 1003 y 1030. Su pH debe ser de entre 4,6 y 8 según la dieta: si aumenta, la orina se hace más básica y facilita la infección por algunos microorganismos y la formación de cálculos. Si hay un exceso de cuerpos cetónicos, posiblemente se deba a una cetoacidosis, diabética en la mayoría de los casos. Cuantificar los iones sodio y potasio sirve para conocer si la persona toma diuréticos. Si aparecen glóbulos rojos en la orina, visibles al microscopio o a simple vista, más que tratar los síntomas a nivel local debe buscarse las causas, Podemos encontrarnos ante una hematuria en estos casos: Nefropatía, cálculos, procesos infecciosos, quistes renales, hidronefrosis, traumatismos, etc. La existencia de pus en orina, es patológica, se conoce como piuria, y obliga a pensar en infección del tracto urinario. Existe leucocituria si la cifra de leucocitos en orina es mayor de 2000 células. Puede ser debida a un proceso inflamatorio, causado a su vez por un proceso infeccioso o por una enfermedad inflamatoria, ante una cifra alta de leucocitos, solicita un cultivo de orina,
para comprobar si hay o no infección, y si éstos son positivos, pondremos el tratamiento oportuno. Sin embargo si los cultivos son negativos, hay que investigar la posibilidad de una enfermedad inflamatoria o de una infección no bacteriana.
Materiales y reactivos
Orina patológica, reactivo benedict, ácido al 2%, solución de nitroprusiato de sodio, ácido nítrico concentrado, H 2O2 al 3%, azufre en polvo, (NH 4) SO4 , NH4OH concentrado y bencidina. Reacción de Benedict En química, la reacción o prueba de Benedict identifica azúcares reductores, como la
lactosa, la glucosa, la maltosa, y celobiosa. En soluciones alcalinas, pueden reducir el Cu2+ que tiene color azul a Cu +, que precipita de la solución alcalina como Cu2O de color rojo-naranja. El reactivo de Benedict consta de: Sulfato cúprico
Citrato de sodio
Carbonato anhidro de sodio.
Además se emplea NaOH para alcalinizar el medio.
NITROPRUSIATO DE SODIO Indicaciones: Hipertensión severa y crisis hipertensivas. Insuficiencia cardíaca congestiva. Cardiopatías congénitas con hipertensión pulmonar. Estabilidad: Frasco ampolla: conservar entre 15-30 °C en recipiente resistente a l a luz. No utilizar si el color pasa del marrón al azul, proteger de la luz ultravioleta. Factor de riesgo cuando se administra en el embarazo: Categoría C.
Ácido nítrico (HNO3) estado de agregación Líquido Apariencia Límpido transparente (si es puro) o amarillento (si posee residuos de la síntesis industrial) Densidad 1500 kg/m3; 1,5
Toxicología Ingestión: Corrosivo. Dolor abdominal, sensación de quemazón, shock. Inhalación: Corrosión del tracto respiratorio, tos, dificultad respiratoria, pérdida del
g/cm3 Masa molar 63.012 g/mol Punto de fusión 231 K (-42 °C) Punto de ebullición 356 K (83 °C
conocimiento. Piel Puede causar graves quemaduras. Ojos: Quemaduras graves e irritación ocular.
El azufre
Es un elemento esencial para la fisiología de los vegetales. La forma de comercialización más conocida es en forma de un polvo muy fino, de un color amarillo característico. Es accesible, de bajo precio y su aplicación es muy sencilla. En el cultivo de plantas se usa como acaricida, funguicida y para acidificar los suelos y sustratos
Hidróxido de amonio Hidróxido de amonio , también conocido como agua de amoníaco o amoníaco acuoso es
una solución de amoníaco en agua. Técnicamente, el término "hidróxido de amonio" es incorrecto debido a que dicho compuesto no es aislable (solo lo encontramos como ion amonio e ion oxidrilo, es decir ya disociado). Sin embargo, dicho término da una fiel descripción de cómo se comporta una solución de amoníaco, siendo incluso este término usado por científicos e ingenieros. El agua de amoníaco se encuentra comúnmente en soluciones de limpieza doméstica; también existen equipos de química que contienen restos de esta sustancia. El sulfato de amonio es una sal cuya fórmula química es (NH 4)2SO4. Color: gris claro. Aspecto: granos Se utiliza como floculante y, además, como un reactivo en química molecular para precipitar proteínas solubles. En bioquímica, se usa para precipitar fraccionadamente las globulinas que no son solubles en agua y para diferenciarlas de las albúminas. Las globulinas se pueden re disolver para hacer subsecuentes análisis, como puede ser la extracción de una proteína en particular por cromatografía de afinidad con NaCl. El sulfato de amonio es excelente componente para la llamada precipitación fraccionada, porque, entre otras cosas, hace que el agua compita entre la disolución de esta sal o de la proteína (formada por muchos grupos carboxilo y amonio), causando que precipite la proteína.
Procedimiento:
presencia de carbohidratos en una muestra de orina patológica
Detección de cuerpos cetónicos con la rueba de Rothera
presencia de proteínas en una muestra de orina patológica
A 5mL de ractivo de benedict para análisis cualitativo en un tubo de ensayo
A 5mL de orina añadir sulfato de amonio en cristales hasta que la orina se encuentra saturada de
agregar luego 2 ó 3 gotas de una solución fresca de nitroprusiato de sodio al 5%
calentar 5mL de la orina clara hasta la ebllición. La formación de un precipitado se debe a la coagulación de las proteínas presentes.
hervir por medio minuto o colocar en un baño de agua
agregar 8 gotas de orina libre de proteína.
y 1 ó 2 mL d3e solución concentrada de de hidroxido de amonio.
añadirmos 5 gotas ácido acético al 2% si desaparece el precipitado se debe a la presencia de fosfatos y no a las proteínas.
un color púrpura indica la presencia de acetona.
debe evitarse la adición de un exceso de ácido.
espolvornoar un poco de flor de azufre sobre la superficie de 10mL de orina patológica colocada en un vaso químico de 50mL. la orina no debe contener ni tolueno, ni timol
presencia de sales biliares (prueba de Hay)
5 ml de orina patológica añadir sulfato de amonio en cristales hasta saturar
un color púrpura indica la precencia de cetonas
Detección de cuerpos cetónicos con la prueba de rothera
1 o 2 mL de la solución de NH4OH
agregar 2 o 3 gotas de solución fresca de nitroprusiato de sodio
Resultados:
1. Presencia de carbohidratos en una muestra de orina patológica: Positiva, color verde oscuro
2. Presencia de proteínas en una muestra de orina patológica: Positiva, formación de un precipitado.
3. Detección de pigmentos biliares en la orina patológica: Positiva, presencia de pigmentos biliares
4. Presencia de sales biliares (prueba de hay): Negativa, indicativo de tensión superficial
5. Detección de cuerpos cetónicos con la prueba de rothera Positiva, color morado
Discusiones:
El análisis rutinario de orina es una medición por métodos físicos y químicos para medir diferentes parámetros químicos y microscópicos para diagnosticar la presencia de infecciones urinarias, enfermedades renales, y otras enfermedades generales que producen metabolitos en la orina. Se utiliza para evaluar la función de los riñones, de las diferentes hormonas que lo regulan, y situaciones de la regulación de líquidos en el cuerpo humano. El análisis de orina se realiza como estudio rutinario para discriminación del estado de salud, para el diagnóstico precoz de diferentes enfermedades, para el control de la diabetes o enfermedades renales. También para diagnosticar infecciones urinarias o la presencia de enfermedades renales. En esta parte del estudio se describe la presencia de:
Interpretación de la apariencia y color de la orina, pueden aparecer diversas variaciones, orina clara, turbia, amarilla clara, marilla oscura, roja, verde, azul,etc.) Presencia de bilirrubina en orina Presencia de glucosa en orina Hemoglobina en orina Cetonas en orina Nitritos en orina Medición del pH Proteínas en orina Densidad de la orina Urobilinógeno en orina
Presencia de carbohidratos: Los niveles de glucosa superiores a lo normal pueden ser un signo de:
Diabetes mellitus Secreción anormal de glucosa de los riñones en la orina (glucosuria renal)
Embarazo
Presencia de proteínas en muestra de orina patológica: Principalmente es un indicador de problemas renales, como la glomerulonefritis, como la pérdida de proteínas disminuye la presión oncótica se suele acompañar de edemas intersticiales, lo que se llama síndrome nefrótico. Detección de pigmentos biliares en la orina patológica: se denomina coluria e indica una obstrucción de la vía biliar, intra o extra hepática (hepatitis, cálculos, cáncer de páncreas o de la vía biliar) Prueba de Hay: Pigmentos y sales biliares: cuando se encuentran en la orina, son expresión de enfermedades que comprometen las funciones del hígado y de los conductos biliares. Los pigmentos bilirrubina y biliverdina son productos de degradación de la hemoglobina y se encuentran presentes en la ictericia, anemia y enfermedades hemáticas y biliares. Detección de cuerpos cetónicos con la prueba de rothera: La cetonuria es un trastorno médico caracterizado por una alta concentración en la orina de cuerpos cetónicos, como la acetona. Varias enfermedades pueden producir una acetonuria, en especial aquellas que producen cuerpos cetónicos como resultado del uso de vías alternas de energía metabólica. Se ve cetonuria en la inanición o, con mayor frecuencia, en la diabetes mellitus descompensada. La producción de cuerpos cetónicos es una respuesta normal a un déficit de glucosa. Una cetonuria puede verse en estados de acidosis metabólica llamada cetoacidosis. Conclusiones: La orina patológica: Aspecto:
La orina patológica suele ser turbia La turbidez se presenta como resultado de infecciones urinarias La orina también se enturbia por la presencia de eritrocitos, leucocitos y bacterias. Olor:
La orina de los pacientes con diabetes sacarina suelen tener un olor dulce por la cetosis. Las infecciones de vías urinarias producen fetidez urinaria por la presencia de bacterias. La orina de los lactantes con una enfermedad hereditaria del metabolismo de los aminoácidos huele a arce o azúcar quemada 2 enfermedad de jarabe de arce”.
La cistinuria y homo cistinuria producen orina con olor a azufre. En al fenilcetonuria la orina tiene olor a moho o a ratón. La tirosimenia se caracteriza por orina con olor a col o pescado. Color:
La orina color vino tinto oscuro puede observarse en individuos afectados de enfermedades hepáticas, mientras que en el melanosarcoma, la orina tiene un color marrón Cuestionario
1. Por que se requiere que la muestra de orina patológica que se analiza con el reactivo de Benedict no contenga proteínas? Ya que el benedict es un reactivo para determinar azucares simples, es específicos para glucosa. La glucosa en la orina suele acompañarse de presencia de cuerpos cetónicos, que aparecen en exceso en la diabetes no controlada, pero las proteínas no deben estar presentes cuando se realiza la prueba de Benedict, porque altera la reacción y puede alterar los resultados. 2. Porque el azufre en presencia de sales biliares en la orina patológica precipita al fondo del vaso químico? El azufre precipita al fondo del vaso en presencia de sales biliares, porque los ácidos biliares son agentes que reducen la tensión superficial, esto provoca que el azufre precipite y no quede en suspensión, la precipitación indica que hay presencia de sales y ácidos biliares.
3. Métodos que se emplean hoy en día en los laboratorios clínicos y que ahorran tiempo. Tira reactiva de orina: análisis de una péquela muestra de orina mediante el empleo de una tira reactiva introducida en la muestra. Se realiza en la misma consulta. Los resultados se obtienen en 5-10 minuto. Se utiliza como prueba de screening ya que aporta información básica. Utilizadas para descartar o confirmar embarazo, detectar infección de la orina, descomprensión diabética, entre otras. Coloración de un frotis de orina no centrifugada mediante el método de Gram, constituye un índice practico para diferencias entre infección y contaminación urinaria. El Urocultivo: se utiliza para diagnosticar bacteriuria, la orina constituye un método excelente para cultivar la mayor parte de microorganismos que infectan el aparato urinario.
Estudio del Sedimento Urinario: una de las determinaciones de laboratorio que nos dan más información de la patología renal. Teste de Drogas: prueba muy sencilla, utilizada para la determinación de los metabolitos de las distintas drogas presentes en la orina, en caso de consumo de estas sustancias. Test de Embarazo. Test de Glucosa.
Bibliografías:
Stryer L, Berg JM, Tymoczko JL (2003) Estructura y función de las proteínas. En: “Bioquímica”, 5ª ed. Editorial Reverté (Barcelona, España), pp. 41-76.
Luisot P (1982). “Bioquímica Estructural”, 2ª Ed. Editorial AC.
Smith I, Feinberg JG (1965) “Paper & Thin Layer Chromatography and Electrophoresis”. Shandon Scientific Company Ltd. Desarrollo histórico de la
técnica y aplicaciones.
