EVALUACIÓN DE LIMPIEZA Y SANITIZACIÓN DE EQUIPO: MEZCLADOR DE LISTÓN 1
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA EVALUACION DE LIMPIEZA Y SANITIZACION DE EQUIPO: MEZCLADOR DE LISTÓN
LABORATORIO DE TECNOLOGÍA FARMACÉUTICA I
GRUPO: 1601
EQUIPO 1173
JUÁREZ LÓPEZ EDGAR PÉREZ TABOADA TANIA ANAID VARGAS BAUTISTA ABDIEL ZÚÑIGA CASTELLANOS ROSALÍA
2010-1
EVALUACIÓN DE LIMPIEZA Y SANITIZACIÓN DE EQUIPO: MEZCLADOR DE LISTÓN 2 OBJETIVO Evaluar la eficiencia del proceso de limpieza y sanitización del mezclador de listón mediante la cuantificación de trazas de paracetamol, estableciendo como límites 10ppm y para control microbiológico 100 UFC de mesófilos y hongos. HIPÓTESIS El uso de un equipo como el mezclador de listón implica su forzosa exposición a diferentes tipos de contaminantes, tanto químicos como microbiológicos. Esta situación hace forzosa la implementación de procedimientos adecuados de limpieza y sanitización, que procurarán reducir por debajo del límite aceptable establecido un producto (peor de los casos), en este caso paracetamol por debajo de 10ppm en un área de 25cm2. Y para la sanitización se espera que el uso de etanol como sanitizante disminuya la contaminación por hongos y por mesófilos a menos de 100 UFC en la misma área de muestreo. FUNDAMENTOS CONCEPTOS GENERALES Limpieza. Se define como el grado de aceptación de sustancias, partículas y microorganismos no deseables cuyo efecto sea adverso para el producto o proceso. Sanitización. Acción de eliminar o reducir los niveles de partículas viables por medio de agentes físicos o químicos posteriores a la operación de limpieza. Procedimiento normalizado de limpieza. Documento escrito que debe describir en forma clara y secuencial cada uno de los pasos a seguir para llevar a cabo de manera reproducible las operaciones del proceso de limpieza, así como las responsabilidades del personal involucrado. Validación de proceso de limpieza. La validación del proceso de limpieza asegura que los procedimientos de limpieza de equipo eliminan residuos a niveles previamente determinados como aceptables. El protocolo de validación de limpieza debe describir el equipo a ser limpiado, los procedimientos, materiales, niveles de limpieza aceptables, parámetros a ser observados y controlados y los métodos analíticos. GENERALIDADES Proceso de limpieza El proceso de limpieza aplica a todo equipo de fabricación, accesorios y áreas que tienen contacto directo con el producto o sus componentes. Cada empresa basada en sus políticas internas debe analizar y definir la forma de efectuarlo de manera eficiente, para lo cual se debe considerar: a. Diseño del equipo: desarmado, forma de limpieza, proceso específico y rearmado. b. Procesos asépticos y no asépticos.
EVALUACIÓN DE LIMPIEZA Y SANITIZACIÓN DE EQUIPO: MEZCLADOR DE LISTÓN 3 c. Las diferentes áreas de fabricación: líquidos, sólidos, semisólidos, inyectables, etc. Grado de limpieza El término grado de limpieza se aplica en base a la siguiente clasificación: a. Mínima o menor. Se entiende como mínima o menor cuando se procesan de manera secuencial lotes del mismo producto, a la misma o diferente concentración, siempre y cuando los lotes se realicen de menor a mayor concentración. b. Normal o mayor. Es cuando se procesan productos diferentes; cuando se concluya la fabricación de un lote y se requiera trabajar otro lote de diferente producto. c. Exhaustiva. Cuando proceda una limpieza especial, como después de una remodelación o mantenimiento programado o correctivo. Forma de realización En la industria farmacéutica se utilizan prácticas diversas para el proceso de limpieza de área de producción, sistemas, etc. Los métodos comúnmente empleados pueden dividirse en: a. Proceso de limpieza manual. b. Proceso de limpieza semiautomático. c. Proceso de limpieza automático. EVALUACIÓN DE LA LIMPIEZA Tipos de muestreo Los diferentes tipos de muestreo permiten determinar el nivel de contaminación del equipo de producción. Es importante considerar las ventajas de todos los métodos y utilizarlos cuando sea más apropiado, ya sea para estudios de validación o para el proceso actual de limpieza. El método de muestreo debe acoplarse al equipo que se limpia y al objetivo de la validación de la limpieza. Muestreo con hisopo. Aplica a superficies duras y planas o casi planas como son las paredes internas de equipos: tanques, secadores, mezcladores, mirillas, válvulas y otras. Las muestras son tomadas al azar en un área definida que esté en contacto con el producto. El hisopo como elemento de remoción del residuo puede ser sustituido por otro material que sea absorbente y/o adsorbente. Se deben evitar materiales que sean aditivos o reactivos a la superficie de los equipos. Es necesario establecer: La extensión del área a muestrear, ya que es una información crítica utilizada para determinar el límite analítico aceptable del residuo (LAAR). El material, la forma, las dimensiones y el área de la plantilla de muestreo. Requisitos del material como forma y dimensiones del elemento de remoción.
EVALUACIÓN DE LIMPIEZA Y SANITIZACIÓN DE EQUIPO: MEZCLADOR DE LISTÓN 4 El solvente para empapar al elemento de remoción para facilitar la absorción y/o adsorción del residuo a partir de la superficie. La cantidad de elementos de remoción. Los movimientos del o de los elementos de remoción sobre la superficie. El contenedor del elemento de remoción antes y después del muestreo. Volumen del solvente en el contenedor. El manejo y almacenaje del contenedor y del elemento de remoción entre el muestreo y la determinación. Ventajas: Disuelve y físicamente remueve el residuo. Adaptable a una gran variedad de superficies. Fácil y económico. Permite el muestreo de un área definida. Aplicable a una gran variedad de residuos. Limitaciones: Los materiales del hisopo pueden interferir en la determinación analítica. El recobro del residuo en la superficie no es total. No permite muestrear tuberías, válvulas o sitios de difícil acceso. Métodos analíticos de mayor sensibilidad. Muestreo por enjuague. Involucra el uso de un volumen conocido de agua para enjuagar el área de la superficie del equipo. Aplica a superficies blandas como sellos, lonas, mangas o superficies duras circulares, sinuosas o irregulares como la superficie de válvulas, bombas, cuchillas, agujas entre otras. En este método es necesario establecer: La magnitud total del área compartida de los equipos por el residuo y el o los productos ya que es una información crítica utilizada para determinar el límite analítico aceptable del residuo (LAAR). El solvente, en el cual sea soluble el residuo El volumen del solvente de tal forma que entre en contacto con toda la superficie a muestrear. La temperatura del solvente. Dispositivo de enjuague. El contenedor de la muestra, su manejo y almacenaje entre el muestreo y la determinación. Ventajas: Adaptable a tuberías y ductos en sistemas cerrados. Fácil manejo. Fácil aplicación.
EVALUACIÓN DE LIMPIEZA Y SANITIZACIÓN DE EQUIPO: MEZCLADOR DE LISTÓN 5 Aplica a sustancias activas, excipientes y agentes de limpieza. Permite muestrear una mayor área. Permite el muestreo de superficies porosas. Limitaciones: En ciertos casos mayor sensibilidad del método analítico No representativo si el residuo no se encuentra homogéneamente distribuido. Aplica a componentes o equipos mayores. Muestreo por recirculación de solvente. Aplica a equipos mayores donde sea posible recircular solvente con el propósito de muestrear toda la superficie del equipo La magnitud total del área compartida de los equipos por el residuo y el o los productos ya que es una información crítica utilizada para determinar el límite analítico aceptable del residuo (LAAR). El solvente, en el cual sea soluble el residuo El volumen del solvente de tal forma que entre en contacto con toda la superficie a muestrear. La temperatura y tiempo de recirculación del solvente. Volumen de la muestra. Ventajas: Aplica a sustancias activas, excipientes y agentes de limpieza. El recobro del residuo en la superficie es mejor. Mejor manejo analítico de la muestra. Permite el muestreo de superficies porosas. Adaptable a tuberías y ductos en sistemas cerrados. Métodos analíticos de mayor sensibilidad. Limitaciones: Puede ser necesario el uso de uniforme especializado. Aplica a componentes de equipos mayores. Mayor volumen de solvente. Mayor tiempo y costo del muestreo. Muestreo por placebo. Involucra la determinación de residuos en el equipo. Puede realizarse procesando un lote placebo a través del equipo y habiendo probado el placebo par el contaminante. Éste método no es muy aceptado ya que no se puede asegurar que el contaminante es distribuido uniformemente a través del sistema. Además el placebo tiende a diluir al contaminante a un punto que tal vez sea difícil de detectar. Debe considerarse también el costo de proceso para este método, ya que es más caro que otros muestreos y no es aplicable a superficies en las cuales no entra en contacto el producto.
EVALUACIÓN DE LIMPIEZA Y SANITIZACIÓN DE EQUIPO: MEZCLADOR DE LISTÓN 6 Métodos analíticos Es de suma importancia determinar la especificidad y sensibilidad de los métodos analíticos empleados para detectar los residuos o contaminantes. Con las ventajas de la tecnología analítica es posible detectar residuos del proceso de fabricación y de limpieza, aún si se encuentran a bajas concentraciones. Si los residuos o contaminantes no son detectados no significa que no haya ningún residuo después del proceso de limpieza. Residuo y sistemas de medición Residuo Fármaco
Materia prima
Agente de limpieza
Sanitizantes
Solventes y lubricantes Biocarga Endotoxinas
Sistema de medición CLAR, CG, CCD, COT, ELISA, espectroscopia, electroforesis, absorción atómica y fluorescencia Volumetría, conductimetría, organoléptico, gravimetría, electroforesis, espectroscopía, COT, CLAR, CCD Absorción atómica, COT, potenciometría, organoléptico, osmolaridad, electroforesis, espectroscopía, enzimáticos, cromatografía de iones, conductividad Absorción atómica, COT, potenciometría, organoléptico, osmolaridad, electroforesis, espectroscopía CG, organoléptico, espectroscopía, gravimetría Cuenta microbiana y luminiscencia Bioensayo y LAL
VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS. RECOMENDACIONES PARA SU PRESENTACION ANTE LA FEUM Introducción Los métodos analíticos usados para evaluar la calidad de los productos farmacéuticos están sujetos a varios requisitos de acuerdo con la normatividad vigente, así como con otros documentos normativos nacionales e internacionales. La FEUM es el documento legal instituido por la Ley General de Salud donde se establecen los métodos de análisis y los requisitos sobre la identidad, pureza, potencia y otras características de calidad que garanticen que los fármacos, aditivos, medicamentos, radiofármacos y productos biológicos sean eficaces y seguros. Propuesta de métodos analíticos Para proponer un método analítico se pueden considerar dos casos:
EVALUACIÓN DE LIMPIEZA Y SANITIZACIÓN DE EQUIPO: MEZCLADOR DE LISTÓN 7 Método revisado que pretenda sustituir a un método publicado por la FEUM con cambios mayores o menores ya sea, en las características o condiciones de operación, aspectos instrumentales o reactivos, entre otros. Método nuevo cuando se trate de un método analítico no publicado en la FEUM. Los métodos analíticos que se propongan por una organización para ser incluidos en la FEUM, deben presentarse por medio de una solicitud dirigida a la dirección ejecutiva de la CPFEUM, indicando el área de aplicación farmacopeica y su base racional, donde se identifique la necesidad del método, su factibilidad, y en su caso el porqué es preferido sobre el método farmacopeico. Validación del método analítico La validación de un método es el proceso que establece, mediante estudios de laboratorio, que las características de desempeño del método satisfacen los requisitos para su aplicación analítica. El proceso de validación de los métodos analíticos puede comprender, pero no está limitado al estudio de las siguientes características de desempeño: Verificación del sistema. Precisión del sistema. Linealidad del sistema. Especificidad y selectividad del método. Exactitud del método. Linealidad e intervalo del método. Precisión del método. Límite de detección del método. Límite de cuantificación del método. Robustez del método. Tolerancia del método. Los métodos analíticos para fines de validación se clasifican en cuatro categorías, ya que requieren de diferentes esquemas de estudio: Categoría I. Métodos analíticos para cuantificar a un componente específico en muestras de producto terminado en pruebas de estabilidad, ya sea en fármacos, aditivos o preparados farmacéuticos u otros analitos de interés. Categoría II. Métodos analíticos para la determinación de impurezas en muestras de fármacos, preparados farmacéuticos, y aditivos. Estos métodos pueden incluir determinaciones cuantitativas o pruebas límite. En éstas últimas, el interés es establecer si el analito excede o no un valor límite. Los métodos de pureza quedan incluidos en esta categoría. Categoría III. Métodos analíticos utilizados en la determinación de un analito en una muestra con el objeto de evaluar una característica de desempeño del preparado farmacéutico.
EVALUACIÓN DE LIMPIEZA Y SANITIZACIÓN DE EQUIPO: MEZCLADOR DE LISTÓN 8 Categoría IV. Pruebas de identificación de un analito en muestras de fármacos, aditivos o preparados farmacéuticos, cuyo propósito es establecer la presencia del analito de interés. Verificación del sistema La verificación del sistema son pruebas utilizadas para verificar que el sistema funciona correctamente con base en criterios establecidos previamente. Esta verificación permite establecer la confiabilidad del sistema, antes del procesamiento de las muestras durante el uso rutinario del método; también se le conoce como buen o correcto funcionamiento del sistema. Precisión del sistema La precisión del sistema es el grado de concordancia relativa de la respuesta analítica de soluciones de referencia de concentración o magnitud conocida. Linealidad del sistema Es la verificación de que la respuesta analítica y la concentración del analito (puede ser sustancia de referencia) se ajustan al modelo matemático, en un intervalo de concentraciones pertinentes a la aplicación analítica. Especificidad / Selectividad del método La especificidad/selectividad del método es la capacidad de un método analítico para obtener una respuesta debida únicamente al analito de interés y no a otros componentes de la muestra, que pueden estar presentes (especificidad) o que se pudieran presentar por efectos ambientales y/o de interacción con los mismos componentes (selectividad) Tales como: impurezas, productos de degradación o componentes de la misma muestra. Exactitud del método La exactitud de un método debe ser determinada a todos los métodos de carácter cuantitativo. La exactitud de un método analítico es la concordancia absoluta entre el resultado obtenido con el método y la cantidad verdadera del analito presente en la muestra, a una cantidad fija. Determinación de la exactitud de los métodos analíticos de la categoría I La exactitud puede determinarse por la aplicación del método analítico a placebos o muestras adicionadas preparados de manera independiente al menos por sextuplicado obtenidas de acuerdo a un procedimiento especifico, dichas muestras deben contener a todos los componentes del producto y además se le debe adicionar la concentración del analito que representa el 100%. Determinación de la exactitud en los métodos analíticos de la categoría II
EVALUACIÓN DE LIMPIEZA Y SANITIZACIÓN DE EQUIPO: MEZCLADOR DE LISTÓN 9 En el análisis cuantitativo de impurezas, la exactitud debe ser evaluada en muestras, al menos por sextuplicado, de principio activo o del producto farmacéutico a las que se han adicionado cantidades conocidas y fijas de impurezas de acuerdo a la especificación. La exactitud se evalúa mediante el porcentaje de recobro (cociente porcentual de la concentración recuperada entre la concentración adicionada) considerando los resultados del análisis de las muestras. Límite de cuantificación del método. El límite de cuantificación (LC) es la cantidad mínima de analito en una muestra que puede ser determinada con exactitud y precisión aceptable, bajo las condiciones de aplicación del método. Las unidades de límite se expresan como se indica en el método analítico (por ejemplo %, ppm, partes por billón, mg/g, etc.) Análisis de datos para métodos no instrumentales. El límite de cuantificación se calcula con la siguiente ecuación: 𝐿𝐶 =
10𝑆𝑒 𝑏
b= pendiente Se= medida del error de la respuesta analítica. Puede ser la desviación estándar de la regresión o la desviación de la ordenada al origen Análisis de datos para métodos instrumentales Por el procedimiento de la señal-ruido, el LC es la concentración cuya respuesta analitica es la inmediatamente superiora 10 veces la señal-ruido. En caso de la linealidad el límite de cuantificación se calcula. 𝐿𝐶 =
10𝑆𝑒 𝑏
Tolerancia del método Es el grado de reproducibilidad de los resultados de prueba obtenidos por el análisis de la misma muestra bajo una variedad de condiciones. Robustez del método Capacidad del método analítico de mantener su desempeño al presentarse variaciones pequeñas pero deliberadas, en las características normales de operación del método VALIDACION DE MÉTODOS ANALÍTICOS SEGÚN LA NOM-059
EVALUACIÓN DE LIMPIEZA Y SANITIZACIÓN DE EQUIPO: MEZCLADOR DE LISTÓN 10 Los métodos analíticos que no sean farmacopeicos deben ser validados de acuerdo a un protocolo aprobado y que sean utilizados para: o Evaluación de fármacos y aditivos o Evaluación de producto a granel en proceso y terminado o Validaciones o Estudios de estabilidad En el caso de métodos farmacopeicos para producto procesado o producto terminado deberán realizarse pruebas que demuestren la aplicabilidad del método a su producto e instalaciones. Cualquier cambio en un método analítico validado debe ser sometido al proceso de control de cambios. METODOLOGÍA Material Equipo
Bata blanca Cofia Cubrebocas Guantes Bolsas para esterilización Marcos metálicos 5×5 Hisopos estériles Hisopos plásticos Agua destilada Cubetas Paños Cajas petri Matraz erlenmeyer 500mL Mechero Fisher Pipetas Tubos de ensaye con tapón de baquelita Gradilla Matraz aforado 100mL
Mezclador listón Autoclave Balanza analítica Lámpara UV Estufa
Instrumentos
Espectrofotómetro UV
Reactivos
Paracetamol USP 90% Etanol Metanol Sílica gel Tolueno Cloroformo Agar Soya tripticaseina Agar papa-dextrosa Fosfato di básico de potasio Hidróxido de sodio 1N Detergente
EVALUACIÓN DE LIMPIEZA Y SANITIZACIÓN DE EQUIPO: MEZCLADOR DE LISTÓN 11 Técnica Se esterilizó todo el material de cristal en la estufa a 180°C durante dos horas. Se preparó un estándar de 10 ppm de paracetamol y se corrió en cromatografía de capa fina (CCF) de dos carriles contra la muestra preparada de acuerdo a las indicaciones de la FEUM (4mg en 1mL). Se preparó una solución buffer de fosfatos para el manejo de las muestras tomadas para control microbiológico y se esterilizó. Los guantes, batas, cofias, cubrebocas y marcos se colocaron en bolsas para esterilizar y se esterilizaron en autoclave durante 30 minutos, posteriormente se colocaron en la estufa para retirar la humedad. Se preparó una dilución del detergente de acuerdo al marbete del envase, indicando para limpieza de equipos 24mL por litro de agua. El equipo se limpió con el detergente utilizando una esponja suave, tratando de no maltratar la superficie y se sanitizó con etanol al 70%, posteriormente se aisló al equipo hasta la fecha programada para el muestreo. Se recolectaron dos muestras para control microbiológico y dos para análisis de trazas de paracetamol utilizando material equipo y uniformes previamente esterilizados. Las muestras de control microbiológico se sembraron por vaciado en placa en condiciones de asepsia para realizar el conteo microbiano del equipo. El método de análisis seleccionado fue la espectroscopía UV. Se compararon las muestras con el estándar de 10ppm encontrándose que la muestra no era cuantificable RESULTADOS Se encontró que la concentración de paracetamol presente en las muestras recolectadas fue tan pequeña que quedó muy por debajo del límite cuantificable. En la sanitización se encontró que no se presentó crecimiento de ninguna colonia en los medios de cultivo control, tampoco se reportó crecimiento alguno en los medios inoculados con la muestra del mezclador de listón y sí se reportó el crecimiento de cuatro colonias en el medio de control ambiental. ANÁLISIS DE RESULTADOS Se demostró en la CCF que la concentración dada de paracetamol (10ppm) es sumamente pequeña, al no aparecer siquiera en la placa de silica, por lo que se deduce que a pesar de que hubiera trazas de paracetamol en el equipo, sería sumamente difícil identificarlo, mucho menos cuantificarlo.
EVALUACIÓN DE LIMPIEZA Y SANITIZACIÓN DE EQUIPO: MEZCLADOR DE LISTÓN 12 La determinación se realizó por medio de comparación con un estándar de concentración conocida (10ppm), pero se presentó en ambos casos un valor de 0 en A para las muestras, lo que nos lleva a creer que el método analítico utilizado no posee la sensibilidad necesaria para el procedimiento. Los resultados obtenidos nos indican que el procedimiento de limpieza se realizó de manera eficiente, ya que los residuos de paracetamol encontrados están muy por debajo del límite de aceptación previamente establecido. Cabe destacar que se realizó una revisión a la bitácora asignada al equipo en que se revisó, encontrándose que en dicho equipo hace ya más de un año que no se mezcla paracetamol en ninguna presentación. De cualquier manera, se encontró el material en condiciones de poco cuidado, ya que se limpiaron residuos de polvos desconocidos, lo que demuestra que en general el equipo mezclador de listón carece de las condiciones y del procedimiento de limpieza adecuado. En el caso de la sanitización, se demostró con los medios para control de calidad que fueron preparados de manera correcta, por lo que los resultados obtenidos son fiables para evaluar la eficiencia del proceso de sanitización del equipo con etanol. Al colocar cuatro cajas de petri en contacto con el medio ambiente del área se encontró la presencia de 4 UFC, que son representativas para la posible contaminación a partir del medio ambiente. Las dos cajas inoculadas con las muestra del mezclador sanitizado se incubaron a 37 grados durante tres días, y no se presentó la formación de ninguna colonia, por lo que se deduce que el proceso de sanitización fue correcto. CONCLUSIONES Se concluye que el procedimiento realizado para la limpieza y sanitización resultó adecuado, obteniéndose condiciones óptimas en el mezclador de listón, muy por debajo de los límites de aceptación establecidos. REFERENCIAS
SSA. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos 8ª ed. SSA México Galella et col. Verificación de limpieza: desarrollo y validación de métodos utilizando espectrometría de movilidad iónica. Pharmaceutical technology en español. SeptiembreOctubre 2009 Yoshi Izumi, James Akers. Impacto de la automatización en el proceso aséptico Pharmaceutical Technology en español Septiembre-Octubre 2009 Gavlick et col. Estrategias analíticas para la determinación de residuos de agentes de limpieza. Pharmaceutical technology. Enero-Marzo 1997 CIPAM Procesos de limpieza y su validación en áreas de fabricación.
