!"#$%#&' )%*+,+-%#&' ./ !%$#%0$ Estas técnicas nos permiten diferenciar los componentes del objeto de nues tro estudio, las células, mediante el uso de colorantes. Estos pueden ser naturales o artificiales, según su origen y, según sus propiedades químicas, ácidos, básicos, neutros o indiferentes. La ventaja del uso de los colorantes está, por una parte, en que facilita la identificación de células o, en general, objetos microscópicos; y por otra, que estos colorantes tiñen de forma parcial, total o gradual las diferentes estructuras que integran los objetos de nuestro estudio. Los tipos de tinciones que encontramos son:
- directas: por inmersión en el baño colorante. - Indirectas: en este tipo el colorante no actua directamente y el objeto tiene que ser tratado con anterioridad con una sustancia que permita la fijación del tinte (mordiente) Las más comunes son las siguientes: Coloración de Papanicolaou Se trata de una técnica citológica compuesta por 3 soluciones: Hematoxilina, OG y EA Hematoxilina: Colorante nuclear. OG: Se trata de una solución alcohólica de ácido fosfotúngstico y Orange G. El ácido fosfotúngstico acidifica la solución y aumenta la unión del Orange G a zonas citoplasmáticas densas. EA: Se trata de una solución alcohólica que tiñe selectivamente el citoplasma de células que tuvieron actividad metabólica poco antes de la recolección de la muestra. Tiñe de rosa a rojo las células escamosas superficiales, cilios, nucleolo y eritrocitos. Coloración Hematoxilina & Eosina El método supone la aplicación de la tinción de hematoxilina, que por ser catiónica o básica tiñe estructuras ácidas (basófilos) en azul y púrpura, como por ejemplo los núcleos celulares, y el uso de la eosina, que tiñe los componentes básicos (acidófilos) en tonos de rosa gracias a su naturaleza aniónica o ácida, como el citoplasma. Panóptico Rápido Este método de tinción diferencial se emplea por su rápida ejecución, manteniendo calidad como otros métodos aunque consiguiendo menos resolución de las estructuras celulares. Se compone de 3 soluciones:
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Alcohólica de Triarilmetano.
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Tamponada de Xanteno y
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Tamponada de Tiazina
Azul de Metileno Se usa para observar agrupamientos y morfologías de bacterias y levaduras, la cuales difieren desde el punto de vista químico en su medio exterior y por eso se tiñen contrastando con su alrededor. Otras tinciones usadas en citología son: Giemsa: solución de eosina, azul de metileno y azur, que teñirán las estructuras según su carácter ácido o básico. May Grunwald – Giemsa: es una tinción por decantación con dos colorantes:
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colorante de Giemsa
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colorante de May Grundwald: solución metílica de azul de metileno.
Wright: solución metílica de eosina o azul de metileno para una tinción por decantación.
Actividades:
Realizar una extensión de un exudado bucal con panoptico rápido Primero introducimos una torunda que hemos cogido del laboratorio y la introducimos en la boca y la resfregamos por las paredes de nuestra boca, intentando coger células muertas que se encuentren ahí. Seguidamente cogemos un portaobjetos y frotamos la torunda contra el portaobjetos intentando que se quede cualquier tipo de respos celulares en el portaobjetos. Teñimos el portaobjetos, dejamos secar y observamos al microscopio.
Realizar un frotis de piel con panóptico rápido: Cogemos un depresor lingual y mojamos la mano por la parte del dorso. Raspamos intentando coger restos de células muertas y frotamos por el porta para dejar ahí depositada la muestra. Teñimos con panóptico rápido, dejamos secar y observamos al microscopio.
Frotis sanguíneo:
Para realizar un frotis sanguíneo necesitaremos punzarnos el dedo corazón y presionar el dedo para que salga una gota de sangre. Depositamos una gota de sangre en un lado del portaobjetos y con otro portaobjetos realizamos la extensión, para dejar una fina capa de sangre y con ello de células sanguíneas para poder observar al microscopio. Dejamos secar la sangre y luego teñimos, volvemos a dejar secar y observamos al microscopio.
Muestra de orina: Con una pipeta llenamos un tubo de ensayo, el cual meteremos en la centrifugadora. Tras esto vertemos el líquido sobrante por el fregadero sin brusquedad. El fondo sólodi que nos queda son las células a estudiar, las cuales las extraeremos del tubo con una pipeta Pasteur y colocamos un cubreobjetos o dejamos secar la muestra. Teñimos o no.
