17536-TECNICAS-citologicas

Laboratorio de Técnicas Citológicas

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANÁLISIS REGIÓN VERACRUZ

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

CATEDRÁTICA:

Dra. Martha Elva Díaz Viveros ALUMNO: FECHA:

Facultad de Bioanálisis, Región Veracruz. Veracruz.


Práctica No. 1

DESCRIPCION, MANEJO Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO COMPUESTO E ILUMINACIÓN DE KÖHLER * FUNDAMENTO:

El micr micros osco copi pio o co como mo su nomb nombre re lo indi indica ca,, es un inst instrum rumen ento to óptico que amplifica la imagen de un objeto pequeño, las imágenes micr micros oscó cópi pica cass pued pueden en aume aument ntar ar de 100 100 a 2000 2000 vece vecess el tama tamaño ño original. No obstante, la función más importante del instrumento no es solo ver los objetos pequeños sino interpretar lo que se ve, debido a esto, el empleo del microscopio exige más que en ningún otro caso, un gran conocimiento del instrumento y su adecuado manejo para lograr imágen imágenes es amplif amplifica icadas das con la menor menor cantid cantidad ad posibl posible e de defect defectos os ópticos y el logro logro de de contraste adecuado. El microscopio es el instru trumento que más se usa en los laboratori laboratorios os que estudian estudian imágenes imágenes pequeñas. pequeñas. Actualme Actualmente nte existen existen dos tipos de microscopios: el óptico y el electrónico. En el microscopio óptico el aumento del objeto se consigue usando un sistema de lentes que manipula el paso de los rayos de luz entre el objeto y los ojos. El microscopio electrónico utiliza un rayo de electrones controlado por un campo magnético. magnético. A nivel del laboratorio, laboratorio, en donde el Químico Químico Clínico Clínico desemp desempeña eña su princi principal pal funció función, n, el micro microsco scopio pio es un instru instrumen mento to fundamental de trabajo, por lo anterior, se considera necesario que en la formac formación ión del Químic Químico o Clínico Clínico se ponga princi principal pal inter interés és en su enseñanza. El microscopio compuesto es un instrumento óptico que se emplea para aumentar o ampliar las imágenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio óptico común está conformado por tres sistemas: a. El sistema mecánico está constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes que permiten el movimiento para el enfoque. b. El sistema sistema óptico compren comprende de un conjunto conjunto de lentes lentes dispuestas dispuestas de tal manera que produce el aumento de las imágenes que se observan a través de ellas c. El sis sistem tema a de ilumin iluminaci ación ón co compr mprend ende e las partes partes del microsc microscopi opio o que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observación a través del microscopio. La parte mecánica del Microscopio Facultad de Bioanálisis, Región Veracruz. Veracruz.


La parte mecánica del microscopio comprende: el pie, el tubo, el revólver, el asa, la platina, el carro, el tornillo macrométrico y el tornillo micr microm omét étri ricco. Esto Estoss elem elemen ento toss so sost stiienen enen la par arte te ópti ptica y de iluminación, además permite los desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto. El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general forma de Y o bien es rectangular El tubo. Tiene forma cilíndrica y está ennegrecido internamente para evit evitar ar las las mole molest stia iass que que oc ocas asio iona nan n los los refle eflejo joss de la luz. luz. En su extremidad superior se colocan los oculares. El revólver. revólver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan los objetivos. Al girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posición de trabajo, la cual se nota por el ruido de un piñón que lo fija. La columna columna, llamada también asa o brazo, es una pieza colocada en la parte posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porción superior y por el extremo inferior se adapta al pie. La platin platina a. Es una una pieza ieza me mettálic lica plan lana en la que que se co colloca la preparación u objeto que se va a observar. Presenta Presenta un orificio en el eje ópti óptico co del del tubo tubo que que perm permit ite e el paso paso de los los ra rayo yoss lumi lumino noso soss a la prep prepar arac ació ión. n. La plat platin ina a pued puede e se serr fija fija,, en cuyo cuyo ca caso so perm perman anec ece e inmóvil; en otros casos puede ser giratoria, es decir, mediante tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos circulares. circulares. Carro. Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la preparación con movimiento ortogonal de adelante hacia atrás y de derecha a izquierda. El tornillo macrométrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del microscopio, deslizándose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos movimientos largos permiten el enfoque rápido de la preparación. El tornillo micrométrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nitido de la preparación. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm que se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos. Sistema Óptico El sistema óptico es el encargado de reproducir y aumentar las imágenes mediante el conjunto de lentes que lo componen. Los oculares. Los oculares están constituidos generalmente por dos lentes, dispuestas sobre un tubo corto. Los oculares generalmente más utilizados son los de: 8X, 1OX, 12.5X, 15X. La X se utiliza para expresar en forma abreviada los aumentos.



Los objetivos. Los objetivos producen aumento de las imágenes de los objetos y organismos y, por tanto, se hallan cerca de la preparación que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos: objetivos secos y objetivos de inmersión. Loss obje Lo objeti tivo voss se seco coss se util utiliz izan an sin sin nece necesi sida dad d de co colo loca carr sust sustan anci cia a alguna entre ellos y la preparación. En la cara externa llevan una serie de índices que indican el aumento que producen, la abertura numérica y otros datos. Así por ejemplo, si un objetivo tiene estos datos: plan 40/0,65 y 160/0,17, significa que el objetivo es planacromático, su aumento aumento 40 y su abertura numérica 0,65, calculada calculada para una longitud longitud de tubo de 160 mm. El número de objetivos varía con el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los objetivos secos más frecuentemente utilizados son: 6X, 1OX, 20X, 45X y 60X. El objetivo de inmersión está compuesto por un complicado sistema de lentes. Para observar a través de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y la preparación, de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos objetivos son de 1 OOX y se distingue por uno o dos círculos o anillos de color negro que rodea su extremo inferior. Los objetivos se disponen en una pieza giratoria denominada revólver. revólver. Sistema de Iluminación Dirige la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la pre prepara paracción ión u objet bjeto o que que se va a obse observ rvar ar en el micr icrosc sco opio pio. Comprende los siguientes elementos: El espejo espejo.. Tiene iene dos dos ca cara ras: s: una una có cónc ncav ava a y otra otra plan plana. a. Goza Goza de movimientos en todas las direcciones. La cara cóncava se emplea de prefe prefere renci ncia a con ilumin iluminaci ación ón artifi artificia cial, l, y la plana, plana, para para ilumin iluminaci ación ón natu natura rall (luz (luz so sola lar) r).. Mode Modern rnam amen ente te se pres presci cind nde e del del es espe pejo jo en la fabr fabric icac ació ión n de micr micros osco copi pios os,, ya que que és ésto toss trae traen n inco incorp rpor orad ada a una una lámpara colocada en el eje del microscopio. Condensador. El condensador está formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la prep prepar arac ació ión. n. El co cond nden ensa sado dorr se hall halla a deba debajo jo de la plat platin ina. a. Pued Puede e deslizarse sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo que determina su movimiento ascendente o descendente. Diafragma. Gene Genera ralm lmen ente te,, el co cond nden ensa sado dorr es está tá prov provis isto to de un diafragma-iris, que regula su abertura y controla la calidad de luz que debe pasar a través del condensador. condensador. Trayectoria del Rayo de Luz a través del Microscopio

El haz luminoso luminoso procedente procedente de la lámpara pasa directame directamente nte a través través del diafragma al condensador. Gracias al sistema de lentes que posee



el condensador, la luz es concentrada sobre la preparación a observar. El haz de luz penetra en el objetivo y sigue por el tubo hasta llegar el ocular, donde es captado por el ojo del observador * MATERIAL: Microscopio Compuesto de campo claro. * METODOLOGÍA: El microscopio es un instrumento óptico de precisión que proporciona la amplificación de las imágenes de los objetos, lo que hace posible, ver con detalles y claridad sus estructuras pequeñas o invisibles a la vista humana, facilitando de esta manera su estudio. Esta integrado por tres sistemas; óptico, mecánico y de iluminación, a su vez cada sistema esta constituido por varios componentes y cada uno tiene funciones especificas, las que son necesarias conocer para su buen funcionamiento.

1. 2. 3. 4.

Identifique las partes del sistema mecánico del microscopio. Identifique las partes del sistema óptico del microscopio. Identifique las partes del sistema de iluminación del microscopio. Describa las principales características de cada uno de los componentes que integran el sistema mecánico, óptico y de iluminación del microscopio. 5. Describa la función que tienen cada una de las partes que integran los sistemas antes mencionados. 1. Colocar el microscopio en una mesa que permita una cómoda observación a través del ocular. 2. Limpiar el sistema óptico y el de iluminación. 3. Subir el condensador hasta el tope y cerrar el diafragma iris aproximadamente a la mitad.

4. Seleccionar con el revolver el objetivo de menor aumento (10 X).

Facultad de Bioanálisis, Región Veracruz.


Bajar la platina y colocar la preparación (fijarse que quede firmemente sujeta al carro, y que el cubre objetos y el objeto estén situados hacia arriba) acomodando la porción de la preparación que se va examinar en la apertura central de la platina

5.

Mirando por los extremos subir la platina hasta el tope, si no hay tope acercar la platina lo más cerca posible a la lente objetiva, hasta apoyarlo levemente sobre la preparación. Normalmente los microscopios convencionales poseen un tope que impide su ascenso por arriba de cierta marca. Sin embargo, puede darse el caso que tal tope no exista. (este tope solo existe en la lente objetiva de 10X)

6.

Mirando por los oculares bajar la platina con el tornillo macrométrico hasta que empiecen a distinguirse los detalles de la preparación.

7. Afinar los detalles de la imagen moviendo el tornillo micrométrico. 8. Ajustar la distancia interpupilar ( distancia entre los ojos).

9.

Ajustar dioptrías (agudeza visual) en el porta ocular izquierdo, o bien con el ocular enfocable izquierdo



Una vez conseguido el enfoque correcto, recorra todo la preparación, a fin de ir reconociendo imágenes que le sean familiares. recordar que el objetivo de 10X permite ver la visión panorámica del preparado. Es decir, los tejidos, su ubicación, y sus relaciones (función importante al inicio del estudio que ahorrará tiempo dedicado al análisis de la muestra). 11 Cambiar a un objetivo de más aumento (sin bajar la platina con el tornillo macrométrico) y enfocar únicamente con el tornillo micrométrico. 12 Para usar el objetivo de 100X, aleje la lente de la muestra, deposite una gota de aceite de inmersión en el portaobjetos (sin quitar la laminilla de la platina) en el punto de mayor concentración luminosa, acerque la lente de 100 lentamente hasta que esta se encuentre en contacto con el aceite (observar lateralmente éste movimiento). Observe por el ocular y mueva ligeramente el tornillo micrométrico hasta encontrar la imagen. 13 Recordar que los objetivos de 40X y 100X, permiten ver detalles de una célula, o la conformación celular de una estructura. Se puede observar la forma y tamaño de células o grupo de ellas, aspecto que permite analizar la muestra de manera eficiente. 10

14

Al finalizar su observación, apague la fuente de luz, colocar la lente de menor aumento. Aleje la platina del objetivo. Retire la laminilla y limpie las lentes objetivas y la platina.

MICROSCOPIO COMPUESTO



* OBSERVACIONES Y RESULTADOS: El microscopio, es uno de los instrumentos de uso más frecuente en los laboratorios clínicos, muchos de los errores diagnósticos no tienen su base en el preparado, sino en la errónea manipulación del instrumento. El uso adecuado de los recursos ópticos del microscopio permitirá reconocer detalles y variaciones tintoriales, que ayudarán al correcto diagnóstico, es por eso importante, que para su manejo, se cuente con técnicas adecuadas que permitan obtener imágenes claras en el menor tiempo posible y que además, mantengan al instrumento en buenas condiciones. El microscopio es un instrumento óptico de precisión, mediante un sistema de lentes y fuentes de iluminación puede hacer visible un objeto microscópico y proporciona la amplificación de las imágenes de los objetos, lo que hace posible, ver con detalles y claridad sus estructuras pequeñas o invisibles a la vista humana, facilitando de esta manera su estudio. Las lentes de un microscopio óptico se encuentran en el condensador, el objetivo y el ocular. El condensador se utiliza para enfocar la luz sobre la preparación. Elevando o bajando el condensador puede alterarse el plano del foco de luz y elegirse una posición que consiga el foco preciso. El objetivo es la lente situada cerca del objeto que se observa. El aumento primario del objeto es producido por la lente objetivo y la imagen se transmite al ocular, donde se realiza el aumento final. En los microscopios modernos el tubo óptico tiene una medida estándar y produce aumentos de 1x, no obstante este aumento varia de acuerdo a su medida. Por lo tanto, el aumento total de un microscopio compuesto se debe calcular tomando en cuenta el producto del aumento de su objetivo, tubo óptico y de su ocular.



Práctica No. 2

TOMA DE ESTUDIO CITÓLOGICO CÉRVICO-VAGINAL PARA DOC * FUNDAMENTO: El cáncer cérvico-uterino es la neoplasia maligna más frecuente en México. El estudio citológico cérvico-vaginal anual es la forma más adecuada, sencilla y de bajo costo para detectar este tipo de cáncer. Para un diagnóstico correcto es fundamental abarcar la zona escamocolumnar. El estudio al microscopio de las células exfoliadas del aparato genital femenino es un complemento diagnóstico de primordial importancia en ginecología y obstetricia. La principal utilidad de la citología exfoliativa ginecológica es la detección precoz de lesiones precursoras del carcinoma de cuello uterino. Mediante la organización de programas de detección masiva en mujeres asintomáticas, con el procedimiento de Papanicolaou y el tratamiento y control adecuado de los casos diagnosticados, se ha logrado, en algunos países del mundo, reducir la incidencia y, la mortalidad por cáncer invasor del cuello uterino. La citología exfoliativa también puede tener utilidad en el diagnóstico de tumores de la vagina, endometrio y ovario. La citología hormonal puede ser empleada para evaluar ciertos aspectos de la condición hormonal en la mujer. El estudio de la citología exfoliativa del aparato genital de la mujer fue especialmente desarrollado por George Papanicolaou, quien, además de describir las características morfológicas de las células exfoliadas, desarrolló una técnica de fijación y tinción de los extendidos que se mantiene hasta hoy y que permite un adecuado estudio citológico. En su honor se denomina, prácticamente en todo el mundo, examen de Papanicolaou (PAP) al estudio de la citología exfoliativa diagnóstica del aparato genital femenino, especialmente a la proveniente del cuello uterino. En la actualidad ya está



demostrado que el uso del PAP no sólo es útil en la detección del cáncer en la citología ginecológica sino en otros tipos de patologías. El Dr. George Papanicolaou en 1941 propuso por primera vez la evaluación citológica de células obtenidas del cervix y vagina como método para detectar cáncer cervical y sus precursores. Posteriormente la citología cervical ha sido aprobada como el método más eficaz y efectivo para la detección del cáncer y sus precursores. A pesar de la probada efectividad de los frotis de PAP en la reducción de la incidencia del cáncer cervical, muchos se han preocupado de la precisión de esta prueba diagnóstica, la cual depende de su especificidad y sensibilidad para detectar. La citología es extremadamente específica para detectar cáncer cervical y NIC de alto grado, pero es mucho menos específica para diagnosticar NIC de bajo grado. En contraste a su alta especificidad para detectar alto grado de NIC y cáncer invasor el PAP no es muy sensitivo, pues los resultados falsos negativos ocurren entre el 8 y 50%. Cuando los frotis de PAP fueron introducidos por Papanicolaou las muestras eran tomadas solo del fondo de saco vaginal y prontamente pareció que este método era inadecuado resultando una proporción alta de falsos negativos, Ayre en 1947 reportó el uso de espátula de madera para raspar la superficie del cervix para obtener las células del área en que se inician y desarrollan las NIC y cánceres muy conocida como la Zona de Transformación, la muestra puede ser tornada con un aspirador endocervical, un hisopo de algodón humedecido con solución salina o con escobilla endocervical (citobrush). Con esta última se obtiene 10 veces más células endocervicales que con el hisopo de algodón, mejorando la eficacia del PAP. Estudios que usan una combinación de espátula de madera y escobilla endocervical reportan alrededor de 20% de falsos negativos. Otros factores importantes para reducir la proporción de falsos negativos son la fijación rápida de células para prevenir cambios secundarios artificiales debidos a la sequedad por aire y también el uso de un laboratorio citológico con normas rigurosas de control de calidad. Es necesario cumplir simples lineamientos. La paciente debe ser instruida a no usar ducha o lavado vaginal y no tener coito por 24 horas antes de la obtención de la muestra. El PAP no debe ser obtenido durante la regla o menos de una semana después de cesar antibióticos intravaginales o agentes antimicóticos. Debe ser tomado antes del examen bimanual usando una pequeña cantidad o no de lubricante. Ácido acético no debe ser aplicado al cervix antes de tomar el frotis. Una espátula de madera tipo Ayre deberá ser usada y rotada alrededor del cervix dos veces con presión firme, Una escobilla endocervical, inmediatamente colocada en el orificio externo, rotada 180º solamente y retirada. Las células obtenidas con ambos métodos son colocadas en la misma lámina. La muestra es inmediatamente fijada y etiquetada con el nombre de la paciente.



* MATERIAL: • • • • • • •

Mesa de exploraciones. Espejo vaginal estéril y sin lubricantes. Guantes estériles. Citobrush, espátula de Ayre o hisopo sin algodón. Citospray o alcohol de 96º. Laminillas portaobjetos. Lápiz diamante.

* METODOLOGÍA: Con la paciente en posición ginecológica, se introduce el espejo vaginal cerrado verticalmente cabía adentro y ligeramente hacia abajo, rotándolo hasta quedar dentro y horizontal. Se abre el espejo, se observa el cerviz y se procede a la toma del estudio mediante el citobrush o espátula de Ayre, introduciendo la parte convexa dentro del orificio cervical y rotándola 360º. Se coloca la muestra sobre el portaobjetos previamente identificado con los datos de la paciente poniéndola a continuación de la muestra o la toma exocervical. Se fija con el citospray rociándola a 30 cm de distancia.

* OBSERVACIONES: Se debe tratar de localizar el cerviz siempre, con el mínimo de molestias para la paciente. En caso de no contar con material adecuado, puede usarse el abatelenguas junto con el hisopo sin algodón. En caso de carecer del citospray puede sustituirse por alcohol de 96º. Se debe procurar que no pasen más de 10 segundos entre la toma y la fijación. * RESULTADOS: Se obtendrán así las laminillas con material celular adecuado y fijado, listas para ser teñidas y observadas al microscopio. * ESQUEMAS



Frotis de Papanicolaou

El examen de Papanicolaou es un procedimiento simple y relativamente económico que puede detectar con facilidad condiciones cancerosas o precancerosas.

Práctica No. 4

OBSERVACIÓN DE CÉLULAS CERVICOVAGINALES NORMALES * FUNDAMENTO: La muestra citológica habitual se obtiene del cuello uterino de la unión escamocolumnar y del fondo de saco posterior de la vagina para diagnóstico oncológico y de pared lateral de la vagina para diagnóstico hormonal. Con este procedimiento se obtienen fundamentalmente células exfoliadas del epitelio pavimentoso cervicovaginal y del epitelio cilíndrico endocervical, en ocasiones también se encuentran células endometriales y, excepcionalmente, células del epitelio de la trompa y del ovario, Además



pueden encontrarse eritrocitos, células inflamatorias, microorganismos y elementos de contaminación. El Frotis Citológico se tiñe generalmente con el método de Papanicolaou. Este método emplea hematoxilina para teñir el núcleo de color azul oscuro o violeta oscuro y un conjunto de substancias que colorea el citoplasma en forma diferente según la maduración celular. El citoplasma de las células inmaduras y en general de las metabólicamente activas, se tiñe de color azul pálido o azul verdoso porque capta el light green, que es un colorante básico, estas células se denominan basófilas o cianófilas. Las células con citoplasma acidófilo toman el color rosado de la eosina y se denominan eosinófilas. También es eosinófilo el nucleolo. Las células que contienen gránulos de queratina tienen avidez por el colorante Orange G, que tiñe el citoplasma de color anaranjado o amarillo. Aquí se describen los rasgos morfológicos esenciales de los componentes del extendido cervicovaginal, como se observan con la tinción de Papanicolaou. Células exfoliadas del epitelio pavimentoso estratificado.- El epitelio que reviste la vagina y porción vaginal del cuello uterino de la mujer sexualmente madura es un epitelio pavimentoso estratificado, llamado también epitelio escamoso. Mide aproximadamente 0,2 mm de espesor y está formado por estratos histológicamente bien diferenciables: El estrato basal está formado por una sola capa de células de tipo cilíndrico dispuestas en empalizada sobre la membrana basal. Las células germinativas (aquellas cuya función es producir células de la especie) son redondas u ovaladas, con núcleo grande, ovalado y central, que ocupa gran parte de la célula. El proceso de regeneración del epitelio se efectúa a partir de esta capa celular, el resto de los estratos representan etapas del proceso de maduración y diferenciación celular para, finalmente, descamarse en la superficie. El estrato parabasal está compuesto de varias capas de células redondeadas o poliédricas, de núcleo central, citoplasma grueso, con puentes intercelulares (estrato espinoso profundo). El estrato intermedio también presenta puentes intercelulares (estrato espinoso superficial) y está formado, por numerosas capas de células aplanadas, con citoplasma rico en glucógeno, núcleos relativamente pequeños, centrales y vesiculosos. El estrato superficial consta de varias capas de células aplanadas grandes, de forma poligonal, de citoplasma delgado y claro, sin puentes intercelulares y con núcleo picnótico central. El epitelio escamoso tiene la capacidad de exfoliar diversos tipos celulares según el grado de maduración alcanzado. Habitualmente las células que se exfolian provienen de los estratos superiores, a menos que existan úlceras o que la muestra se tome con excesiva energía. Los tipos celulares del epitelio escamoso que se reconocen en el extendido citológico son los siguientes: Facultad de Bioanálisis, Región Veracruz.


Células superficiales: Las células exfoliadas del estrato superficial miden 40 a 60 micrones de diámetro. Son aplanadas, delgadas, de contorno generalmente poligonal. La mayoría de ellas tienen citoplasma eosinófilo, pero puede ser cianófilo. El núcleo es central, circular y pequeño, mide menos de 6 micrones de diámetro. Es picnótico, denso, homogéneo y no se reconoce en él estructura cromatínica. Células intermedias: Las células exfoliadas del estrato intermedio son del mismo tamaño o ligeramente menores que las superficiales. Tienen forma redondeada o poligonal, algunas con el borde plegado, el citoplasma es algo más grueso que el de las células superficiales, generalmente basófilo, pudiendo ser eosinófilo. El núcleo es central, redondo y mide alrededor de 8 micrones; la cromatina nuclear tiene disposición reticular. Existen algunas variedades de células intermedias. Las células intermedias superficiales son más grandes y poligonales que las células intermedias profundas, que tienen un contorno más ovalado. Las células naviculares presentan dos extremos aguzados que le confieren la forma de un bote; por su contenido de glucógeno, su citoplasma puede aparecer vacío y el núcleo desplazado hacia un borde. Células parabasales: En el frotis normal de una mujer en edad fértil no constituyen más del 5% de las células exfoliadas del epitelio pavimentoso. Miden 15 a 25 micrones, son generalmente redondeadas, con citoplasma grueso cianófilo. El núcleo es central, redondo o elíptico, con un diámetro mayor que el de las células intermedias; la cromatina se dispone en forma de finos gránulos. Las células básales prácticamente no aparecen en los frotis. Células exfoliadas del epitelio endocervical: La mucosa endocervical está revestida por epitelio cilíndrico simple muco secretor. Estas células cilíndricas pueden descamarse aisladamente o en grupos. Las células aisladas observadas de perfil, presentan el núcleo cerca de uno de los extremos que corresponde al polo basal. En este extremo se reduce el diámetro de la célula a manera de un tallo. El núcleo es redondo u ovalado, con la cromatina granular fina y dispersa. Cuando las células endocervicales descamadas en grupos se observan desde el polo superior, presentan un aspecto semejante a un panal de abejas, porque muestran su borde citoplasmático nítido, de forma hexagonal; cuando se observan lateralmente presentan un característico aspecto en "empalizada". Células exfoliadas del endometrio:



Aproximadamente el 2% de los frotis obtenidos por aspirado endocervical contienen células endometriales. Las células endometriales recogidas habitualmente en el frotis cervicovaginal suelen presentar signos de degeneración.

Otros tipos de células: Rara vez aparecen en el frotis células epiteliales cilíndricas exfoliadas del epitelio tubárico; cuando ello ocurre, pueden ser confundidas con células endocervicales. También es excepcional observar células de la decidua o del trofoblasto (postaborto, placenta previa). Los histiocitos o macrófagos generalmente se encuentran aislados. Miden entre 10 y 25 micrones de diámetro, según el estado funcional. Son redondeados u ovalados, el citoplasma es semitransparente, finamente vacuolado o con grandes vacuolas restos de células fagocitadas. El núcleo es oval o reniforme con la cromatina fina y granular, el nucléolo es pequeño. Los histiocitos se presentan comúnmente alrededor del período menstrual, en el embarazo, en el post parto y en los procesos inflamatorios del endometrio. En algunos procesos inflamatorios y en la menopausia se pueden observar histiocitos gigantes multinucleados. Los leucocitos polimorfonucleares pueden encontrarse en el frotis normal. Miden alrededor de 10 micrones, tienen citoplasma poco definido y a menudo transparente. En los procesos inflama torios pueden llegar a ser tan abundantes que impiden ver las células epiteliales. Los linfocitos y plasmocitos se observan en las inflamaciones crónicas cervicovaginales. Es frecuente observar eritrocitos, son considerados como componentes anormales. * MATERIAL: * Microscopio * Aceite de inmersión * Laminillas fijadas y teñidas por la técnica de Papanicolaou. * METODOLOGÍA: Una vez fijada y teñidas (tinción modificada de Papanicolaou) nuestras muestras de estudio citológico cérvico-vaginal, se procede a la observación de las mismas, para lo cual se requiere de un microscopio óptico., el cual deberá estar limpio y con la iluminación regulada, posteriormente se coloca la laminilla en la platina y se enfoca la muestra con el objetivo de 10 X , después, se procede a la observación con el objetivo seco fuerte (40 X), la cual debe realizares de manera sistemática y precisa para dar un resultado preciso.

* OBSERVACIONES:



Células parabasales superficiales

Células superficiales

Células

RESULTADOS: Se observó la morfología cervicovaginal normal, lo cual es muy importante para poder diferenciar entre las células normales y las células malignas. El conocimiento detallado de la morfología celular normal nos ayuda para que un momento dado podamos establecer la diferencia entre una célula normal y una célula maligna, de acuerdo a las características morfológicas de las células. Práctica No. 6 OBSERVACIÓN DE DISPLASIAS: LEVE, MODERADA Y GRAVE * FUNDAMENTO: La displasia se puede definir como la presencia de alteraciones nucleares, cambios en la relación núcleo/citoplasma y de las características citoplasmáticas de una célula cualquiera. La intensidad de la displasia puede ser leve, moderada o avanzada. En la displasia del epitelio escamoso las células se exfolian generalmente aisladas; las que se descaman en grupos, presentan límites netos. A mayor diferenciación de la lesión, los límites celulares de los grupos exfoliados son menos distinguibles. La forma y tamaño de las células depende del grado de maduración que alcanza el epitelio. En 1973 fue propuesto el término de Neoplasia Intraepitelial Cervical (NIC) para incluir todas las formas de lesiones precursoras de cáncer cervical, incluyendo displasia y carcinoma in situ; el NIC se divide en tres grupos: NIC 1 corresponde a displasia leve; NIC 2 corresponde a displasia moderada. Dado que los patólogos no pueden distinguir la reproducibilidad entre displasia severa y carcinoma in situ, NIC 3 abarca ambas lesiones. En diciembre de 1988, el Instituto Nacional de Cáncer (NCI) propuso un nuevo sistema de nomenclatura, el Sistema Bethesda (TBS), en donde las displasias leves (NIC 1) están dentro del grupo de Lesiones Escamosas Intraepiteliales de Bajo Grado, y las displasias moderada, severa (NIC 1, NIC 2) y cáncer in situ se encuentran en las Lesiones Escamosas Intraepiteliales de Alto Grado.



Displasia Leve, Neoplasia Intraepitelial Cervical 1 (NIC I), Lesión Escamosa Intraepitelial de Bajo Grado (LIE BG). Las células exfoliadas de una displasia leve corresponden a células poligonales de tipo intermedio o superficial, con núcleo levemente aumentado de tamaño y discreto aumento de la relación núcleo/citoplasma. Generalmente el núcleo ocupa menos de 1/3 del área celular. Existe leve variación del tamaño y forma de los núcleos, algunos de los cuales pierden su contorno perfectamente redondo u ovalado al ser observados al microscopio de luz. El núcleo es hipercromático, con la cromatina dispuesta en forma reticular o finamente granular. Displasia Moderada, Neoplasia Intraepitelial Cervical 2 (NIC II), Lesión Escamosa Intraepitelial de Alto Grado (LIE AG). En el extendido obtenido de una displasia moderada las células corresponden en general a células intermedias profundas, con mayor variación en la forma celular. Algunas células son poligonales u ovaladas; otras presentan características citoplasmáticas de metaplasia inmadura. También se pueden encontrar células fusadas y de formas bizarras. La variación en la forma y tamaño de los núcleos y la alteración de la relación núcleo/citoplasma es mayor que en la displasia leve. Existe mayor hipercromatismo, pero la cromatina aún se dispone en gránulos finos uniformes. Nucléolos ausentes. En la actualidad los cambios citopáticos producidos por la infección por VPH son considerados dentro de este grupo. Displasia Severa, Neoplasia Intraepitelial Cervical 3 (NIC III), Lesión Escamosa Intraepitelial de Alto Grado (LIE AG). Las alteraciones descritas son más marcadas en la displasia avanzada, en la que se observan numerosas células de tipo parabasal, siendo posible reconocer células poligonales y aun, en ocasiones, células aplanadas queratinizadas de citoplasma anaranjado, signo de que persiste tendencia a la diferenciación del epitelio. La relación núcleo/citoplasma es mayor a 2/3. Puede haber nucléolos eosinofílicos, aunque generalmente están oscurecidos por la cromatina densa. La buena salud también puede prevenir o disminuir la displasia. Un sistema inmunológico sano puede ayudar a prevenir la displasia. Las mujeres con la infección del VIH tienen más probabilidades de desarrollar displasia. La displasia es más común en mujeres que: * Fuman * Presentan infecciones por VPH. * Tienen más de un(a) compañero(a) sexual * Tienen relaciones sexuales por primera vez a una edad muy temprana * Tienen deficiencias de vitaminas y mala nutrición

* MATERIAL: * Microscopio Facultad de Bioanálisis, Región Veracruz.


* Aceite de inmersión * Laminillas fijadas y teñidas por la técnica de Papanicolaou.

* METODOLOGÍA: Una vez fijada y teñidas (tinción modificada de Papanicolaou) nuestras muestras de estudio citológico cérvico-vaginal, se procede a la observación de las mismas, para lo cual se requiere de un microscopio óptico., el cual deberá estar limpio y con la iluminación regulada, posteriormente se coloca la laminilla en la platina y se enfoca la muestra con el objetivo de 10 X , después, se procede a la observación con el objetivo seco fuerte (40 X), la cual debe realizares de manera sistemática y precisa para dar un resultado preciso.

* OBSERVACIONES: Displasia leve Displasia grave

Displasia moderada

RESULTADOS: Después de haber hecho una revisión y observación detallada de las muestras, se obtuvieron los siguientes resultados: Displasia leve:

Flora bacteriana cocoide (+ +). Reacción inflamatoria (+ +). Eritrocitos (+ +). Células del epitelio cérvico-vaginal con alteraciones de Displasia Leve, asociada a infección por VPH y Gardnerella vaginalis. Papanicolaou Negativo Clase III. NIC I. LIE Bajo grado. Facultad de Bioanálisis, Región Veracruz.


Displasia moderada:

Flora bacteriana cocoide (+ +). Reacción inflamatoria (+ + +). Lectura hormonal no fue posible. Células del epitelio cérvico-vaginal con alteraciones de displasia moderada. Papanicolaou Negativo Clase III. NIC II. Displasia grave + VPH:

Flora bacteriana bacilar (+ +). Reacción inflamatoria (+). Lectura hormonal no fue posible. Células del epitelio cérvico-vaginal con alteraciones de discariosis, pleomorfismo y coilocitosis que integran el diagnóstico de Displasia Grave, asociada a infección por VPH. Papanicolaou Negativo Clase III. NIC III. LIE Alto grado.

Practica No. 7

OBSERVACIÓN DE CÁNCER IN SITU Y CÁNCER INVASOR * FUNDAMENTO: Existen alteraciones morfológicas, que en conjunto caracterizan a las células tumorales malignas. Estas alteraciones se conocen como criterios de malignidad (Frost, 1979). Sin embargo, es indispensable precisar que no existe un signo morfológico patognomónico de cáncer. Por otra parte, no siempre todos los signos de malignidad se encuentran en cada célula cancerosa. Por estos hechos la citología, como método de colaboración diagnóstica, requiere de gran experiencia y ponderación.



Los criterios de malignidad se clasifican en: alteraciones de la célula, alteraciones del núcleo y alteraciones de la relación entre las células.

*Alteraciones de la célula: Las células cancerosas exfoliadas presentan variaciones en el tamaño (anisocitosis) y en la forma (polimorfismo), la que en ocasiones puede ser muy anormal, como en las células en forma de fibra o de raqueta. El citoplasma puede ser cianófilo (signo de menor diferenciación), pudiendo presentar características de diferenciación anómala (queratinización intensa o gran acumulación de mucus en una gran vacuola que desplaza al núcleo hacia la periferia). Pueden presentar numerosas mitosis; siendo el hallazgo más importante, pero poco frecuente, las mitosis atípicas. *Alteraciones del núcleo Son las de mayor valor en la estimación de malignidad. Los núcleos presentan variaciones de tamaño (anisocariosis); generalmente son mayores que los de las células normales. El aumento del núcleo es proporcionalmente mayor que el de la célula, por lo que la relación núcleo/citoplasma está aumentada. En algunas células tumorales el citoplasma es reducido a una delgada banda alrededor del núcleo, que sólo se ve con los mayores aumentos del microscopio. Se observan también alteraciones en la forma del núcleo (polimorfismo): el borde nuclear puede tener angulaciones y pliegues y la membrana nuclear presentar grosor irregular. La densidad de la cromatina puede estar aumentada (hipercromatismo), ya sea en forma difusa o en gruesos grumos que alternan con espacios ópticamente vacíos Los nucléolos pueden estar aumentados en número y tamaño; a menudo de contorno irregular y angulado. Puede haber multinucleación, *Alteración de la relación entre las células La cohesión entre las células es menor en los tumores malignos, por eso en general se exfolian abundantes células y una gran proporción de ellas se desprenden aisladas o en grupos pequeños. A diferencia de los conjuntos de células normales, que se desprenden, estos grupos son irregulares, por lo cual, el extendido se observa superposición de núcleos y pueden no observarse los bordes celulares. En algunos frotis obtenidos de tumores malignos, las células forman estructuras que normalmente no existen en el órgano de origen; por ejemplo, células endometriales dispuestas en forma de papilas. Cáncer se define como crecimiento desordenado de un tejido. El cáncer cervicouterino, es una enfermedad en la cual se encuentra células cancerosas (malignas) en los tejidos del cuello uterino. El cuello uterino es la abertura del útero, el órgano hueco en forma de pera donde se desarrolla el feto, y lo conecta con la vagina (canal de nacimiento). El cáncer cervicouterino suele crecer lentamente por un período de tiempo. Antes de que se encuentre células cancerosas en el cuello uterino, sus tejidos experimentan cambios y empiezan a aparecer células anormales Facultad de Bioanálisis, Región Veracruz.


(proceso conocido como displasia). La prueba de Papanicolaou generalmente encuentra estas células. Posteriormente, las células cancerosas comienzan a crecer y se diseminan con mayor profundidad en el cuello uterino y en las áreas circundantes. Ya que en general no hay síntomas asociados con el cáncer cervicouterino, el médico debe hacer una serie de pruebas para buscar el cáncer. La primera prueba es la de Papanicolaou, que se lleva a cabo usando un pedazo de algodón, un cepillo o una espátula de madera pequeña para raspar suavemente el exterior del cuello uterino con el fin de recoger células. Si se encuentra células anormales, el médico tendrá que extraer una muestra de tejido (este procedimiento se conoce con el nombre de biopsia) del cuello uterino y lo observará a través del microscopio para ver si hay células cancerosas. El pronóstico (posibilidades de recuperación) y la selección del tratamiento dependen de la etapa en que se encuentra el cáncer (si se encuentra en el cuello uterino o si se ha diseminado a otros lugares) y el estado de salud en general de la paciente.

* MATERIAL: * Microscopio * Aceite de inmersión * Laminillas fijadas y teñidas por la técnica de Papanicolaou.

* METODOLOGÍA: Una vez fijada y teñidas (tinción modificada de Papanicolaou) nuestras muestras de estudio citológico cérvico-vaginal, se procede a la observación de las mismas, para lo cual se requiere de un microscopio óptico., el cual deberá estar limpio y con la iluminación regulada, posteriormente se coloca la laminilla en la platina y se enfoca la muestra con el objetivo de 10 X , después, se procede a la observación con el objetivo seco fuerte (40 X), la cual debe realizares de manera sistemática y precisa para dar un resultado preciso. * OBSERVACIONES:



* RESULTADOS: Después de haber hecho una revisión y observación detallada de las muestras, se obtuvieron los siguientes resultados Cáncer In situ:

Flora bacteriana cocoide (+ +). Reacción inflamatoria (+ + +). Células del epitelio cérvico-vaginal con alteraciones de hipercromasia, pérdida de la relación núcleo-citoplasma, que integran el diagnóstico de Cáncer Epidermoide In situ asociado a infección por VPH. Papanicolaou Positivo Clase IV. LIE Alto grado. NIC III. Cáncer Invasor de células pequeñas:

Flora bacteriana cocoide (+). Reacción inflamatoria (+ +). Eritrocitos (+ +). Lectura hormonal no posible. Células del epitelio cérvico-vaginal con alteraciones de Cáncer epidermoide invasor de células pequeñas. Papanicolaou Positivo Clase V. OBSERVACIONES: Se recomienda toma de biopsia por colposcopía para iniciar tratamiento. Cáncer invasor:

Flora bacteriana mixta (+ +). Reacción inflamatoria (+ +). Células del epitelio cérvico-vaginal con alteraciones de hipercromasia, pleomorfismo, pérdida de la relación núcleo-citoplasma, células fibroideas y células en raqueta, que integran el diagnóstico de Cáncer Epidermoide invasor. Papanicolaou Positivo Clase V.



Práctica No. 5

AGENTES BIOLÓGICOS VIRUS, BACTERIAS, HONGOS Y PARÁSITOS * FUNDAMENTO: Mediante el examen citológico podemos diagnosticar enfermedades infecciosas como las ocasionadas por: virus, bacterias, hongos y parásitos. VIRUS: La identificación de estas infecciones tiene implicaciones de tipo venéreo, perinatal y neoplásico. Ejemplos: Herpes, condiloma, varicela, citomegalovirus. Virus de Papiloma Humano (VPH): Los papilomavirus son virus DNA y de

los 41 tipos identificados, el 16, 18, 45, 56, se relacionan con el cáncer cervicouterino. El 6 y el 11 se encontraron en el condiloma acuminado y neoplasia leve, mientras que el 16 y el 18 se relacionan con lesiones premalignas de alto grado de cáncer invasor. Patrón clínico en la infección por VPH: * Coliocitosis * Macronucleosis * Binucleación * Anfofilia * Distribución irregular de la cromatina. Herpes.- Es un virus de DNA transmitido habitualmente por relación sexual.

Periodicidad de 1 a 3 meses, relaciones prolongadas después de 7 años. Presenta imagen citológica en “Vidrio esmerilado”, núcleo con aumento de tamaño y multinucleación; apariencia en bolsa de canicas. Entre las bacterias que más frecuentemente causan infecciones del tracto genital femenino, se encuentran: Chlamydia trachomatis.- Interviene de manera importante en la etiología de cervicitis mucopurulenta, en la enfermedad pélvica inflamatoria aguda y LGV. Vacuolización en células basales (grandes burbujas en el citoplasma). No se puede establecer un diagnóstico certero mediante la técnica de Papanicolaou. Gardnerella vaginalis.- Puede aparecer en forma de cocos o bacilos; presencia de células indicio (clue). Cuadro clínico vulvovaginitis. BACTERIAS:



Lepthrotrix actinomyces.- Grandes bacilos que se entrelazan y dan una

apariencia de madejas de cabellos. Candida albicans.- Más frecuente en mujeres embarazadas, diabéticas, que toman anticonceptivos orales. En el frotis se observan como hifas o esporas, que se tiñen en color pardo rojizo y se ven refringentes al microscopio. Entre los protozoarios que infectan al aparato reproductor femenino se encuentran las Tricomonas y las amebas. Trichomonas vaginalis.- tiene forma oval o de pera; la imagen citologica es de color gris o verde con núcleo oval o redondo excéntrico. PARÁSITOS:

* MATERIAL: * Microscopio * Aceite de inmersión * Laminillas fijadas y teñidas por la técnica de Papanicolaou.

* METODOLOGÍA: Una vez fijada y teñidas (tinción modificada de Papanicolaou) nuestras muestras de estudio citológico cérvico-vaginal, se procede a la observación de las mismas, para lo cual se requiere de un microscopio óptico., el cual deberá estar limpio y con la iluminación regulada, posteriormente se coloca la laminilla en la platina y se enfoca la muestra con el objetivo de 10 X , después, se procede a la observación con el objetivo seco fuerte (40 X), la cual debe realizares de manera sistemática y precisa para dar un resultado preciso.

* OBSERVACIONES: VPH

HERPES



CHLAMYDIA TRACHOMATIS

CANDIDA ALBICANS

GARDNERELLA VAGINALIS

LEPTHOTRIX ACTYNOMICES



CÁNDIDA ALBICANS ERITROCITOS

ENTAMOEBA HISTOLYTICA. DIGIRIENDO

* RESULTADOS: Se observaron laminillas que presentan diversas alteraciones celulares debida a agentes biológicos tales como: virus, bacterias, hongo y parásitos. Después de haber hecho una revisión y observación detallada de las muestras, se obtuvieron los siguientes resultados:

VPH Flora bacteriana mixta +++ Rx. Inflamatoria ++ Lectura hormonal no posible CECV con alteraciones inflamatorias específicas por VPH Papanicolaou negativo. Clase II. LIE bajo grado. HERPES Flora bacteriana mixta ++ Rx. Inflamatoria +++ Lectura hormonal no posible CECV con alteraciones inflamatorias específicas por infección viral (herpes) Papanicolaou negativo. Clase II Gardnerella vaginalis Flora bacteriana mixta ++ Rx. Inflamatoria ++ Índice de Frost 0/70/30= 68 de valor estrogénico CECV con alteraciones inflamatorias específicas por infección viral (herpes) Facultad de Bioanálisis, Región Veracruz.


Papanicolaou negativo. Clase II

Leptothrix actynomices Flora bacteriana mixta ++ Rx. Inflamatoria ++ Índice de Frost 0/100/0= 55 de valor estrogénico CECV con alteraciones inflamatorias específicas por Leptothrix actynomices Papanicolaou negativo. Clase II Cándida albicans Flora bacteriana bacilar ++ Rx. Inflamatoria + Índice de Frost 0/80/20= 64 de valor estrogénico CECV con alteraciones inflamatorias específicas por Cándida albicans Papanicolaou negativo. Clase II Trichomonas vaginalis Flora bacteriana cocoide +++ Rx. Inflamatoria ++ Índice de Frost 0/40/60= 82 de valor estrogénico CECV con alteraciones inflamatorias específicas por T. vaginalis Papanicolaou negativo. Clase II Práctica No. 3

TINCIÓN DE PAPANICOLAOU * FUNDAMENTO: La constante exfoliación de células de los estratos tisulares mas superficiales del epitelio de revestimiento mezclados con otros elementos celulares de la sangre y liquido intersticial o moco secretado, es la base del método. El citograma será diferente de acuerdo con el órgano del cual se obtuvo el material a examinar. Se deben considerar: 1.- Recolección del material 2.- Preparación de los extendidos 3.- Manejo del material obtenido 4.- Tinción de los extendidos 5.- Interpretación microscópica

Recolección del material: El órgano que se va a estudiar debe estar en condiciones fisiológicas, sin manipular, sin lavar, y sin medicamentos; si esto no se puede evitar debe informarse por escrito en la solicitud de estudio. Además la recolección del material a examinar será diferente para cada órgano. Facultad de Bioanálisis, Región Veracruz.


Preparación de los extendidos: El material que será objeto de estudio

debe llegar al laboratorio de citología lo más pronto posible para ser procesado debidamente. En forma ideal, el clínico debería conocer los primeros pasos y llevarlos a efecto en el momento de la toma. El material a examinar se toma sobre una laminilla portaobjeto limpia y seca; se hace un extendido delgado y uniforme de la muestra representativa; se sumerge en alcohol etílico de 96 o se rocía con líquido fijador a base de polietileglicol e isopropil (spray normal). Si se usa el alcohol las laminillas deben permanecer dentro del fijador durante 10 minutos como mínimo.

Manejo del material obtenido: El material, una vez fijado, puede ser transportado a cualquier distancia en estuches que prevean su destrucción. Las laminillas deben identificarse con nombre, fecha o número en un extremo utilizando lápiz diamante. Se puede utilizar plomo si las láminas tienen extremo mate. Tinción de los extendidos: Existen varias coloraciones. No obstante, la mas utilizada es la tinción de Papanicolaou modificada, ya que resulta ser mas útil tanto para el diagnostico de alteraciones tisulares como para la valoración hormonal. Y se basa en la reacción química de los colorantes con los elementos celulares; su captación varía de acuerdo con el pH del medio intracelular. Es tricrómica a base de: hematoxilina, Orange G y EA 50. La primera tiñe los núcleos, la segunda los citoplasmas transparentes y la tercera los citoplasmas mas densos. Interpretación microscópica: Todo citólogo antes de revisar una laminilla debe conocer los datos aportados por el clínico en la solicitud; edad, sexo, diagnostico clínico probable, órgano del cual se obtuvo el material, hallazgos durante el examen clínico, tratamiento previo y diagnostico citológico anterior. El medico solicitante debe conocer las posibilidades y limitaciones de la citología para que pueda aprovechar en su diagnostico y tratamiento los datos proporcionados por el citólogo. La evaluación de los extendidos requiere experiencia. La toma del producto puede hacerla el citóloga o el medico en el consultorio, siempre que este conozca perfectamente las técnicas y posibles causas de error. El 50% del éxito en el diagnostico dependerá de la toma y fijación de la muestra. El envío de ella puede hacerse en el fijador o bien sacando la laminilla y cubriéndola con una gota de glicerina y otro portaobjeto. La laminilla debe observarse a seco débil recorriéndola en zigzag, de tal manera que el circulo luminoso del ocular corresponda al principio del circulo del campo siguiente a observar; no deberá pasarse sin observar ningún campo de la preparación. * MATERIAL:



* Portaobjetos * Aplicadores y espatulas * Cubreobjetos * Microscopio

* REACTIVOS: * Los siguientes colorantes: hematoxilina de Harris, OG-6 y EA-50. * Alcohol de 96° * Alcohol ácido * Xilol * Alcohol absoluto * Resina sintética

* METODOLOGÍA: Inmediatamente que se toma la muestra, y se extiende sobre el portaobjetos, se introduce dentro de alcohol de 96°. Y se procede con la tinción: 1.- Se introduce en una tina con hematoxilina de Harris durante 3 minutos. 2.- Se lava con agua corriente. 3.- Se introduce en alcohol ácido (un baño). 4.- Se enjuaga con agua corriente. 5.- Se introduce en alcohol de 96° (10 baños) 6.- Se introduce en alcohol de 96° (10 baños) 7.- Se introduce dentro del colorante OG-6 durante 30 segundos y no se enjuaga. 8.- Se introduce en una tina con alcohol (10 baños) 9.- Se introduce en una tina con alcohol (10 baños) 10.- Se introduce en una tina con alcohol (10 baños) 11.- Se introduce en una tina con el colorante EA-50 durante minuto y medio. 12.- Se introduce en alcohol (10 baños) 13.- Se introduce en alcohol (10 baños) 14.- Se introduce en alcohol (10 baños) 15.- Se introduce en xilol (10 baños) 16.- Se introduce en xilol (10 baños) 17.- Se deja secar. 18.- Se le coloca resina sintética y se le pone un cubreobjetos.

* OBSERVACIONES: Inmediatamente se toma la muestra, se debe realizar el extendido e introducir en alcohol de 96°, es decir, no se debe esperar a que seque la muestra. Los colorantes utilizados dentro de la tinción de Papanicolaou son: Facultad de Bioanálisis, Región Veracruz.


Hematoxilina de Harris: tiñe los núcleos de las células. OG-6: tiñe los citoplasmas de las células superficiales e intermedias. EA-50: tiñe los citoplasmas de las células basales y parabasales.

* RESULTADOS: Se obtiene una lámina perfectamente teñida por Papanicolaou, lista para ser leída al microscopio.



Un cáncer incipiente y no invasivo ( carcinoma in situ ) puede ser tratado con una operación mínima, mientras que un cáncer invasivo suele requerir una histerectomía (extirpación de cérvix y útero y posiblemente de otros órganos de la pelvis. •

•

Colposcopía: Técnica para estudiar el cérvix o cuello del útero mediante la visión) para examinar las células cervicales más detalladamente con aparatos de aumento especiales. Conización, una forma más extensiva de biopsia en la cual se extrae una cuña del cérvix. CÁNCER CERVICAL.- El

cáncer cervical o de cérvix uterino es uno de los más comunes, y en México es el más frecuente. En el pasado era una de las mayores causas de muerte por cáncer, pero gracias a los nuevos conocimientos sobre la enfermedad y a los avances hechos para detectarlo en su primera etapa, es hoy uno de los más curables. El cáncer cervical se desarrolla en cualquier lugar del cérvix o en la porción inferior del útero. El cáncer cervical, como su nombre indica, se sitúa en el cérvix uterino, porción inferior y estrecha del útero que desemboca en la vagina. En este lugar, las células del cérvix se malignizan originando el cáncer. SIGNOS Y SÍNTOMAS Hemorragia anormal Aumento de flujo vaginal Dolor en el pubis Dolor durante el coito

Cáncer cervical .-El desarrollo del cáncer cervical es gradual y se inicia como una condición pre-cancerosa que se denomina displasia. Por lo general, es un cáncer de lento crecimiento y si se detecta de manera temprana puede tratarse con éxito. La realización de exámenes rutinarios de Papanicolaou puede detectar en forma temprana los cambios celulares en el cuello uterino, lo que permite una detección a tiempo del cáncer cervical. Los principales factores de riesgo identificados en la aparición del cáncer cervicouterino son: Clase I: negativa Clase II: atipias Clase III: sospechoso Facultad de Bioanálisis, Región Veracruz.


Clase IV: muy sugestivo de malignidad Clase V: conclusivo de malignidad Con el paso de los años la clasificación evolucionó y el reporte se informaba como: PAP I: negativo PAP II: atipias benignas – Atipias severas o metaplasia escamosa PAP III: displasia ligera, moderada o severa PAP IV: carcinoma in situ PAP V: carcinoma invasor En el año 1966 R. Richart propuso adoptar el sistema NIC (Neoplasia Intraepitelial Cervical), que se reporta así: NIC I: displasia leve NIC II: displasia moderada NIC III: displasia severa – Carcinoma in situ Carcinoma de células escamosas Luego aparece el sistema Bethesda que se reporta así: Normal Normal inflamatorio LIE bajo grado LIE alto grado Células sospechosas de cáncer invasor Un informe citológico debe contener: • Descripción de la muestra como adecuada o inadecuada • Descripción de cambios reparativos o reactivos • Diagnóstico de la flora microbiana como hongos, bacterias, protozoos, virus. • Descripción de las anormalidades epiteliales de las células escamosas. Etapas del cáncer cervicouterino Una vez detectado (diagnosticado) el cáncer cervicouterino, se harán más pruebas para determinar si las células cancerosas se han diseminado a otras partes del cuerpo. Este proceso se conoce como clasificación por etapas. El médico necesita saber la etapa de la enfermedad para planear el tratamiento adecuado. Las siguientes etapas se usan en la clasificación del cáncer cervicouterino:

Etapa 0 o carcinoma in situ El carcinoma in situ es un cáncer en su etapa inicial. Las células anormales se encuentran sólo en la primera capa de células que recubren el cuello uterino y no invaden los tejidos más profundos del cuello uterino. Etapa I El cáncer afecta el cuello uterino, pero no se ha diseminado a los alrededores. etapa IA: una cantidad muy pequeña de cáncer que sólo es visible a través del microscopio se encuentra en el tejido más profundo del cuello uterino etapa IB: una cantidad mayor de cáncer se encuentra en el tejido del cuello uterino Facultad de Bioanálisis, Región Veracruz.


Etapa II El cáncer se ha diseminado a regiones cercanas, pero aún se encuentra en la región pélvica. etapa IIA: el cáncer se ha diseminado fuera del cuello uterino a los dos tercios superiores de la vagina etapa IIB: el cáncer se ha diseminado al tejido alrededor del cuello uterino Etapa III El cáncer se ha diseminado a toda la región pélvica. Las células cancerosas pueden haberse diseminado a la parte inferior de la vagina. Las células también pueden haberse diseminado para bloquear los tubos que conectan los riñones a la vejiga (los uréteres). Etapa IV El cáncer se ha diseminado a otras partes del cuerpo. etapa IVA: el cáncer se ha diseminado a la vejiga o al recto (órganos cercanos al cuello uterino) etapa IVB: el cáncer se ha diseminado a órganos distales como los pulmones Recurrente La enfermedad recurrente significa que el cáncer ha vuelto (reaparecído) después de haber sido tratado. Puede volver al cuello uterino o a otro lugar. PRACTICA No. 10

CANCER BRONQUIAL El cáncer bronquial constituye el 30% de todas las neoplasias del ser humano. La mortalidad por cáncer bronquial ha aumentado en las últimas décadas y en Chile se estima en 18 hombres y 5 mujeres por 100.000 habitantes. Afecta con mayor frecuencia a hombres de edad promedio 60 años. La frecuencia ha aumentado especialmente en mujeres y en estrecha relación con el hábito de fumar. La sobrevida a un año del diagnóstico es de 20% y a los 5 años de 5%. Para los casos con tumor extirpable quirúrgicamente puede aumentar a 35% a los 5 años. ETIOLOGIA hay que considerar factores ocupacionales, hereditarios, contaminación ambiental y hábitos personales. Los trabajadores de industrias convencionales y nucleares en que se utilizan sustancias químicas para la manufactura de materiales, instrumentos, maquinarias, etc tienen mayor incidencia de cáncer bronquial. En estas condiciones los trabajadores están expuestos a radiaciones y sustancias tales como uranio, níquel, hierro metálico, sales de cromo, óxidos de hierro, asbesto, arsénico, berilio, gas de mostaza, etc. En el aire contaminado de las grandes ciudades se encuentran además de los irritantes comunes, sustancias carcinógenas tales como 3,4benzopireno, 1,12-benzoperileno, óxido arsenioso, trazas de elementos radiactivos, gases de aceite de petróleo, ozono, polvo de asbesto, trazas de níquel, cromo, compuestos de arsénico, óxido de nitrógeno, formaldehído, hidrocarburos aromáticos y alifáticos. Sin embargo, estos factores Facultad de Bioanálisis, Región Veracruz.


representan una proporción infinitesimal de causas cuando se comparan con el cigarrillo Está comprobada la relación causal entre humo de cigarrillo y cáncer bronquial (pipa y cigarro también). El humo del cigarrillo contiene benzopireno y otros cancerígenos, así como irritantes. Existiría una relación entre daño epitelial y el efecto de los irritantes, tales como cianuro, acroleína, formaldehído y óxido nitroso. El epitelio bajo y el metaplásico, que reemplazan al epitelio respiratorio destruído por los irritantes del humo del cigarrillo, son más sensibles a la acción de los carcinógenos y la ausencia de factores defensivos mecánicos y funcionales favorece la penetración de los carcinógenos y el contacto de éstos con las células en fase proliferativa.

LESIONES PRECURSORAS Se consideran lesiones precursoras (precancerosas) de la mucosa bronquial : hiperplasia de células basales y de células caliciformes, metaplasia epidermoide, displasia y carcinoma in situ. En la hiperplasia el epitelio esté engrosado (más de 50 µm), debido a un aumento en el número de células basales, de células caliciformes o de ambas. En la metaplasia epidermoide el epitelio respiratorio normal está reemplazado por uno plano estratificado maduro. Se distinguen tres grados de displasia: leve, moderado y avanzado, según la intensidad de las atipias y la extensión de la distorsión arquitectural del epitelio. Las alteraciones estructurales son estratificación, espesor irregular, reemplazo total o parcial de las células normales por las atípicas y discontinuidades de la membrana basal. En el carcinoma in situ las alteraciones citológicas e histológicas mencionadas alcanzan su máxima expresión. Todo el espesor del epitelio está reemplazado por células atípicas, habitualmente es un foco pequeño, con irregularidades y discontinuidades evidentes de la membrana basal. En la mucosa adyacente al carcinoma in situ hay frecuentemente signos de displasia y metaplasia. En casos de carcinoma bronquial manifiesto, en las zonas vecinas se encuentran la hiperplasia y la metaplasia casi en el 90% de los casos, displasia en alrededor del 40% y carcinoma in situ en 20-30%. El tiempo de transformación calculado citológicamente para la fase displasia moderadacarcinoma invasor es de 3,2 años. CLASIFICACIÓN HISTOLÓGICA DEL CÁNCER BRONQUIAL Existe una gran variedad de tumores, siendo los más frecuentes los carcinomas. Los tipos histológicos de este grupo, según la clasificación de la OMS, son: Carcinoma epidermoide o escamoso.-Es el prototipo del carcinoma bronquial. Se origina aparentemente en los bronquios mayores y medianos. Es el tipo histológico más frecuente en las biopsias (cerca del 45% de todas las biopsias bronquiales positivas). Es más frecuente en el hombre y la sobrevida a los 5 años es de 22%. Histológicamente son carcinomas sólidos con diferenciación córnea (perlas córneas y disqueratosis) o presencia de Facultad de Bioanálisis, Región Veracruz.


abundantes puentes intercelulares, o ambas. Tiende a ser multifocal en un 20%.

Carcinoma indiferenciado de células pequeñas.-Representa alrededor del 20% de todos los carcinomas bronquiales y el 40% de todas las biopsias positivas. Afecta predominantemente a hombres en proporción de 19 : 1. Al momento del diagnóstico mas del 80% tiene extensión extratorácica. La sobrevida a los 5 años es de 2%. Es un tumor constituido por células uniformemente pequeñas (10-15 µm), de escaso citoplasma, núcleos pequeños, redondos o fusados, de cromatina fina y en grumos regulares, con o sin focos de diferenciación glandular o córnea. Las células tumorales pueden ser argentafines. Adenocarcinoma .-Representa alrededor del 10% de los carcinomas en el hombre y el 50% en las mujeres. Es predominantemente periférico. Sobrevida a los 5 años es de 10%. Es el tipo más frecuente en no fumadores. Se asocia en 45-65% de los casos a cicatrices de infarto, tuberculosis y otros granulomas. Los criterios histológicos son presencia de secreción mucosa, estructuras glanduliformes o papilares y vacuolas citoplasmáticas con mucus. El carcinoma bronquíoloalveolar es una variedad de adenocarcinoma, que tiende a ser multicéntrico, multinodular, de aspecto bronconeumónico. Carcinoma indiferenciado de células grandes .-Se presenta como un carcinoma sólido, constituido por células uniformemente grandes (20 µm o más), de núcleos polimorfos y frecuente canibalismo celular. Histológicamente, no presentan ninguno de los caracteres histológicos mencionados en los otros tipos. Es un diagnóstico de exclusión. Carcinoma combinado adeno-epidermoide o adeno-escamoso .Corresponde a un tumor en cuya masa coexisten un carcinoma epidermoide y un adenocarcinoma. Constituye el 0,4 - 3% de los casos.







PRACTICA 9 CANCER MAMARIO El cáncer de mama, que por lo general se presenta en mujeres, es una enfermedad en la que células malignas (cancerosas) crecen dentro del tejido mamario. Cada mama contiene entre 15 y 20 lóbulos, los que poseen secciones menores llamadas lobulillos. Los lóbulos y lobulillos están conectados por conductos llamados ductos. El tipo más frecuente de cáncer mamario nace en los ductos a partir de células ductales. Los que surgen en los lóbulos o lobulillos son llamados cánceres lobulillares. Éstos afectan con mayor frecuencia ambas mamas, a diferencia de otros tipos de tumores. El cáncer inflamatorio de la mama es una clase especial de cáncer de mama, bastante poco frecuente. El aspecto de la mama se parece a una inflamación o quemadura de sol. Se ve inflamada, roja y caliente. Tiende a avanzar con rapidez. Lo más importante es no confundirlo con una mastitis, Existen formas hereditarias de cáncer mamario, que representan alrededor del 5-10% de todos los casos. Por otro lado, la mayoría de los casos corresponde al llamado cáncer esporádico de mama, en donde no existe una alteración genética heredada que sea responsable de su aparición. También hay otros factores relacionados con el cáncer de mama como nuliparidad, primera menstruación precoz y menopaucia tardía, entre otros. Algunos estudios sugieren que el uso de terapia de sustitución hormonal se asocia a un riesgo un poco mayor de desarrollar cáncer mamario. Se debe consultar a un especialista si se notan cambios de coloración en la piel de la mama, un nódulo o retracción del pezón. Una radiografía especialmente diseñada para la mama que es capaz de detectar nódulos que no son palpables. Dependiendo de las características del nódulo, con frecuencia es necesaria una muestra de ese tejido para ser analizada bajo el microscopio, procedimiento que se llama biopsia. La muestra de tejido se puede obtener usando una aguja especial o mediante una pequeña operación. Las probabilidades de mejoría (pronóstico) y la elección del tratamiento dependen del estado de avance de la enfermedad (si se ubica en la mama o se ha extendido fuera de la glándula); del tipo de cáncer de que se trate; de algunas características de las células tumorales que tienen que ver con la agresividad del tumor, y de si está comprometida una o las dos mamas. La edad, el peso, el estado menstrual y las condiciones generales de salud también afectan el pronóstico y el tratamiento necesario.

- Estadio 0: Es la forma más temprana que puede tener un cáncer de mama. Existen dos Facultad de Bioanálisis, Región Veracruz.


tipos: carcinoma in situ ductal (carcinoma intraductal) y el carcinoma in situ lobulillar. El carcinoma lobulillar in situ NO es realmente un cáncer sino más bien un indicador del riesgo de desarrollarlo (25% de probabilidades de tener un cáncer en un plazo de 25 años; puede afectar a cualquiera de las dos mamas). - Estadio I: El tumor se encuentra confinado a la mama y es menor de 2 cms. de diámetro máximo. - Estadio II: Incluye las siguientes situaciones: - El tumor mide menos de 2 cms. Pero existen metástasis en los ganglios de la axila. - El tumor mide entre 2 y 5 cms., con o sin metástasis en los ganglios de la axila. - El tumor mide más de 5 cms., y NO existen metástasis en los ganglios de la axila.

- Estadio III: Se divide en IIIA y IIIB. IIIA - El tumor mide menos de 5 cms. y existen metástasis en los ganglios de la axila que provocan que se adhieran unos con otros, o a estructuras vecinas. - El tumor mide más de 5 cms. y existen metástasis en los ganglios de la axila. IIIB - El tumor ha invadido la piel o la pared del tórax (músculos o costillas). - Existen metástasis en los ganglios que se encuentran detrás del esternón. - Estadio IV: El cáncer se ha extendido lejos de la mama y la axila, comprometiendo otros órganos, frecuentemente los huesos, pulmones, hígado o cerebro. - Cáncer de Mama Recurrente Es cuando el tumor vuelve a aparecer después de haber sido tratado. Esta reaparición o recurrencia puede ser en la mama, en alguna otra parte de la pared torácica o en cualquier otra zona del cuerpo. Esta condición si se limita a la mama puede ser tratada con muy buenos resultados, sin que aumente la mortalidad. El cáncer mamario se puede clasificar como: Inicial (in situ): Este comienza en las células que revisten los conductos que conectan las glándulas productoras de leche como el pezón. El cáncer que se detecta en esta etapa es curable en más del 95% de los casos.



Invasivo: El cáncer se ha diseminado más allá de los conductos y ha llegado al tejido circundante y más tarde a los ganglios linfáticos contiguos. Metastásico: Este cáncer se ha diseminado a otras regiones del organismo, como ganglios linfáticos distantes, huesos, pulmones, hígado o cerebro.

Los tipos de cáncer de mama se clasifican en: El carcinoma ductal in situ se origina en las células de las paredes de los conductos mamarios. Es un cáncer muy localizado, que no se ha extendido a otras zonas ni ha producido metástasis. Por este motivo esta enfermedad 'premaligna' puede extirparse fácilmente. La tasa de curación ronda el 100%. Este tipo de tumor se puede detectar a través de una mamografía. El carcinoma ductal infiltrante (o invasivo) es el que se inicia en el conducto mamario pero logra atravesarlo y pasa al tejido adiposo de la mama y luego puede extenderse a otras partes del cuerpo. Es el más frecuente de los carcinomas de mama, se da en el 80% de los casos. El carcinoma lobular in situ se origina en las glándulas mamarias (o lóbulos) y, aunque no es un verdadero cáncer, aumenta el riesgo de que la mujer pueda desarrollar un cátumor en el futuro. Se suele dar antes de la menopausia. Una vez que es detectado, es importante que la mujer se realice una mamografía de control al año y varios exámenes clínicos para vigilar el posible desarrollo de cáncer. El carcinoma lobular infiltrante (o invasivo) comienza en las glándulas mamarias pero se puede extender y destruir otros tejidos del cuerpo. Entre el 10% y el 15% de los tumores de mama son de este tipo. Este carcinoma es más difícil de detectar a través de una mamografía.


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