ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DEL REACTIVO La suspensión del antígeno siempre debe refrigerarse cuando no se utilice. Proteger de la luz ¡No congelar!. El antígeno es es table sin abrir y almacenado entre 2-8°C, 2-8°C, hasta la fecha de caducidad marcada en su respectiva etiqueta. Los controles son estables hasta la fecha de caducidad indicada en su etiqueta cuando se almacenan entre 2-8°C. Lleve a temperatura ambiente la suspensión del antígeno y los controles antes de utilizarse.
RPR
MATERIAL PROPORCIONADO
Prueba Rápida de Reagina (Sífilis)
q
Prueba en placa de floculación con carbón activado para la determinación cualitativa y cuantitativa de anticuerpos reagínicos en suero o plasma
q
q
Pipetas/ agitadoras utilizadas para dispensar aproximadamente 50 mL (0.05 mL) de muestra. Tarjetas de Prueba (círculos de aproximadamente 18 mm). Utilice como superficie de prueba. Se debe tener cuidado en la manipulación de las tarjetas de prueba para evitar introducir contaminantes al circulo de prueba. Extienda cada muestra sobre el total del área del círculo de prueba.
RESUMEN Y PRINCIPIO La prueba de RPR es una prueba de floculación no treponémica macroscópica que es utilizada para detectar y cuantificar reaginas, un anticuerpo anti-lipídico encontrado en el suero o plasma de personas con sífilis y ocasionalmente en personas con infecciones agudas o crónicas en otras condiciones aparte de la sífilis.
Aguja No. 18 sin bisel utilizada para dispensar aproximadamente 17mL de la suspensión del antígeno.
Nota: Deseche la aguja cuando el equipo se haya utilizado completamente.
El antígeno utilizado en el equipo es una modificación del antígeno VDRL que contiene micropartícula s de carbón para realzar la diferencia entre un resultado positivo y negativo. Si una muestra contiene reaginas, ocurre la floculación con las partículas de carbón contenidas en la suspensión del antígeno, la cual aparece como un cúmulo negro. Las muestras no reactivas se observan con un ligero color gris.
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO PROPORCIONADOS
PRESENTACIONES
RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Equipo para 50 pruebas Equipo para 200 pruebas Equipo para 300 pruebas Equipo para 500 pruebas
REACTIVOS q
q q
q q
q
Solución salina (0.9%)
q
Cronómetro
q
Lámpara
ESTABILIDAD DE LA MUESTRA
Suspensión de Antígeno RPR. Suspensión de cardiolipina 1, conteniendo micropartículas de carbón activado. Control Positivo RPR. Control líquido estabilizado, reactivo con antígeno RPR. Control Negativo RPR. Control líquido estabilizado, no reactivo con antígeno RPR.
Precauciones: Unicamente para uso diagnóstico
Rotador (100 ± 2 rpm)
Las muestras pueden ser sueros activados o inactivados o plasmas recolectados con EDTA como anticoagulante. Evite la hemólisis. La lipemia no interfiere con la suspensión del antígeno, sin embargo, si la muestra esta severamente lipémica de manera que se obscurece el estado de las partículas de antígeno, la muestra no debe ser utilizada.
Equipo para 100 pruebas
q
q
in-vitro .
PREPARACIÓN DEL REACTIVO La suspensión del antígeno debe agitarse por 5 a 10 segundos antes de abrirse, para resuspender las partículas de carbón. Los controles están listos para su uso.
Las muestras de suero se reportan estables por 5 días, almacenadas entre 2-8°C. 2-8°C. Los plasmas recolectados con EDTA y almacenados entre 2-8°C 2-8°C se reportan es tables hasta 24 hrs.2
SUSTANCIAS INTERFERENTES Como con todos los antígenos tipo cardiolipina, pueden ocurrir resultados falsos positivos. Estos resultados pueden ser causados por enfermedades como lepra, lupus eritematoso, mononucleosis infecciosa, paludismo y neumonía viral. Varios reportes indican la presencia de resultados falsos positivos en el embarazo.3,4 Enfermedades autoinmunes y adicciones narcóticas pueden dar reacciones falso-positivas. 5
PROCEDIMIENTO
8.
Añadir una gota de la suspensión del antígeno previamente resuspendido, exactamente sobre cada una de las gotas de las diluciones anteriores utilizando el frasco gotero al cual se le ha insertado la aguja No. 18 sin bisel.
9.
Agite por 8 minutos a 100 rpm en un rotador mecánico.
Procedimiento cualitativo
1.
Lleve a temperatura ambiente la suspensión del antígeno de RPR, los controles y las muestras.
2.
Tome la pipeta/agitador del extremo sellado. Al tiempo que oprime y mantiene presionado dicho extremo, coloque la pipeta dentro de la muestra. Suelte para permitir que la pipeta aspire un poco de muestra.
3.
4.
5.
Sostenga en posición vertical la pipeta/agitador directamente sobre un círculo de la tarjeta de prueba y coloque una gota de muestra sobre esta área. Utilizando el extremo plano de la pipeta/agitador, extienda la muestra para cubrir el total de la superficie del círculo. Deseche la pipeta/agitador. Repita el mismo procedimiento para cada muestra. Agite el frasco de la suspensión del antígeno antes de utilizarlo. Sosténgalo en posición vertical y dispense varias gotas en la tapa del frasco para asegurarse de que el paso por la aguja es correcto. No limpie la aguja. Coloque una gota de la suspensión del antígeno sobre cada muestra. NO EXTIENDA!
10. Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y agítela breve y suavemente. 11. Leer el resultado macroscópicamente.
RESULTADOS CUANTITATIVOS La última dilución que contenga agregados macroscópicos indica el título de la muestra. Ejemplo:
Tubo No.
Dilución del suero
Resultado
1
1:2
Positivo
2
1:4
Positivo
3
1:8
Positivo
4
1:16
Negativo
6.
Agite por 8 minutos a 100 rpm en un rotador mecánico.
7.
Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y agítela breve y suavemente.
El título del suero problema será: 1:8.
8.
Lea macroscópicamente bajo una lámpara de luz intensa.
LIMITACIONES
RESULTADOS CUALITATIVOS Reactivo:
Presencia de flóculos grandes o pequeños en el centro o la periferia del círculo de prueba. Débil reactivo :
Presencia de flóculos pequeños pero
definidos. No reactivo :
Apariencia lisa, uniforme pero sin flóculos
visibles. Los resultados positivos deben ser confirmados mediante pruebas de las muestras utilizando procedimientos cuantitativos. Se recomiendan pruebas serológicas confirmativas como el ensayo de microhemaglutinación para anticuerpos treponémicos (MHA-TP). El diagnóstico final debe estar en base a la correlación de los resultados de prueba junto con otros hallazgos clínicos. (Véase Limitaciones)
El diagnóstico de la sífilis no debe ser hecho basado en un resultado positivo único de una prueba no treponémica, sin el soporte de una historia positiva o evidencia clínica. Las muestras de suero que son reactivas en pruebas cualitativas deben ser cuantificadas para establecer un tratamiento en el cual los cambios de título puedan ser determinados como un indicador de la respuesta al mismo. Las muestras de plasma no deben ser utilizadas para pruebas cuantitativas. Las muestras que son no-reactivas pero dudosas, se deben de repetir y cuantificar ya que se pueden detectar reacciones poco frecuentes de prozona.
CARACTERÍSTICAS DE FUNCIONAMIENTO Se obtuvieron 625 muestras de laboratorios públicos de salud y fueron sujetos a comparación e ntre la prueba de RPR Sífilis y Tarjetas de Prueba Macro-Vue TM RPR (BBL Division of Becton Dickinson and Company) con los siguientes resultados:
Procedimiento cuantitativo
1.
Seleccione los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa.
2.
Colocar en una gradilla cuatro tubos 12 x 75 mm y numerarlos.
3.
Agregar a cada uno de ellos 0.5 mL de solución salina.
4.
Depositar 0.5 mL de suero problema en el tubo No. 1 y mezclar.
5.
Pasar 0.5 mL del tubo No. 1 al tubo No. 2 y mezclar.
6.
Continuar esta operación hasta el tubo No. 4.
7.
Depositar 0.05 mL de cada una de las diluciones sobre anillos diferentes de la placa de reacción. Extienda sobre el total de la superficie de cada círculo donde se colocaron las diluciones.
RPR Sífilis
Macro-VueTM
No-reactivo
431
433
Reactivo
194
192
Hubo una concordancia de 431 de los sueros no reactivos y de 194 de los sueros reactivos. Esto representa un 99.4% de concordancia. Veinticinco (25) de los sueros reactivos probados por ambos procedimientos fueron seleccionados al azar y comparados en un procedimiento semi-cuantitativo descrito anteriormente. Los títulos se extendieron de 1:4 a 1:512. Hubo concordancia en la dilución final en 22 casos . Los otros 3 resultados fueron como se mencionan a continuación:
RPR Sífilis
Macro-VueTM
A.
1:4
1:8
B.
1:128
1:64
C.
1:32
1:16
Rev. 11/07/02 IN-118 Fabricado en México por:
Laboratorios Licon S.A. Esto representa una concordancia dentro de una dilución en todos los casos.
BIBLIOGRAFÍA 1.
MANUAL OF TESTS FOR SYPHILIS, 1990, APHA publication.
2.
Larsen, SA, Pettit DE, Perryman MW, Hambie EA, Mullally R, Whittington W. EDTA-treated plasma in the rapid plasma reagin card test and the toluidine red unheated serum test for serodiagnosis of syphilis. J Clin Microbiol 1983; 17:341-345.
3.
Walker, An. N: Brit. Jr. Ve. Dis., 47:259-262, August 1971.
4.
Garner, M.F. & Backhouse , J.L.: Med. Jr. Australia, 1:737739, April 1973.
5.
Kaufman, R.E.: Weiss, S, Moore, J.D.; Falcone, V. And Weisner, P.J.: Brit. Jr. Ven. Dis., 50:350-353, 1974.
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