UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA FACULTAD DE EDUCACION Y CIENCIAS H UMANAS MICRO BIOL BIOLOGÍA LABORATORIO N° 2 TECNICAS DE OBSERVACIÓN DE BACTE RIAS INTRO DUCCIÓ DUCCIÓN
Las bacterias Las bacterias son los organismos más abundantes del mundo, que no pueden ser observados a simple vi vista. Estas pueden causar enfermedades a los seres vivos, un pequeño grupo de bacterias juegan un papel importante en la biosfera, algunas desempeñan un papel importante en el ciclo del nitrógeno, nitrógeno, azúfre y carbono, otras atrapan la energa del sol o de sustancias inorgánicas y algunas ayudan a la digestión de alimentos en algunos animales. El estudio microscópico de la c!lula bacteriana es el primer paso para la identificación identificación y clasificación de un g!nero bacteriano por tanto es de gran ayuda en la investigación de los mismos. La observación al microscopio de las bacterias nos permite diferenciar formas tpicas como lo son los cocos, bacilos y espirales. "e bido a que las bacterias tienen un tamaño pequeño, se requiere de tinciones especiales para especiales para el estudio y visualización de su estructura e#terna e interna. En $%%& 'ans (ristian )ram, desarrolló un procedimiento de tinción *tinción de )ram+, que separa las bacterias en dos grupos )ram positivas positivas y )r am negativas. or otro lado, en las bacterias e#isten estructuras especiales como la capsula, que necesitan de m!todos especiales de tinción para poder p oder observarlo -t!cnicas selectivas. La capsula bacteriana es la capa rgida con borde de definido formada por una serie de polmeros orgánicos que en las bacterias se deposita en el e#terior de su pared celular. celular. )eneralmen )eneralmente te contiene contiene glicoprote glicoprotenas nas y un gran número de polisacáridos diferentes, incluyendo ndo polialco/ polialco/oles oles y aminoazúcares aminoazúcares.. 0l utilizar las t!cnicas normales normales de coloración no es posible visualizar la eciales. cápsula, po cápsula, por lo tanto es necesario aplicar t!cnicas es peci OBJETIVOS 1ue el est estudiante2 $. (onozca algunas t!cnicas en el estudio de las ba bacter ias. correctamente las partes del micr oscopio 3. 4tilice correctamente
MATERIALES 5 6rasco gotero con agua destilada 5 6rasco gotero con lugol 5 7icroscopio compuesto 5 orta y (ubre ob je jetos8 5 0sa ba bacter iológica 5 7ec/ero de alco/ol 5 (ristal violeta solución acuosa -$9 5 :ulfato de cobre -solución al 3;9 5 (ultivo de Klebsiella de Klebsiella pneumoniae, St ap aph ylococcu s aureus y E. coli 5 )uantes descar ta bles8 :olución salina isotónica 5
5 =ogurt con cultivos pr ob obióticos8 5 apel secante8 5 >inagre de plátano8 5 (ristal violeta 5 0lco/ol acetona 5 0zul de metilileeno 5
PRO CEDIMIENTO:
?ealizar los siguientes procedimientos de acuerdo con las muestras biológicas indicadas por el docente. TINCIÓN SIMPLE 2 es la tinción en que se utiliza un solo colorante. (omo colorantes utilizaremos el azul de metileno o la safranina, ambos de naturaleza básica. La t!cnica es la siguiente2 $. 'acer el frotis, secarlo y f ijar lo. 3. (ubrir con colorante la preparación y dejarlo actuar durante un minuto. @. Lavar suavemente con agua destilada para eliminar el e#ceso de color ante. &. :ecar al aire y observar al microscopio con el objetivo de inmersión -$;;# empleando el aceite a pr opiado. Esta t!cnica permite observar la morfologa y tamaño de las bacterias, as como los tipos de agrupaciones que forman. Muest!s e"#$e%&!&!s: =ogur con cultivos probióticos, vinagre de plátano, E. coli.
TINCIÓN NEGATIVA: 0ntes debe limpiar con alco/ol la lámina portaobjetos a utilizar, para quitar restos de grasa. "espu!s proceda como sigue. $' (olocar una pequeña gota de tinta c/ina en el e#tremo de un portaobjeto, colocar junto una gota del cultivo y mezclar cuidadosamente con la tinta c/ina. 3. "istribuir la mezcla a lo anc/o del portaobjeto, colocando otro por taob jeto perpendicular en ángulo de &A grados sobre la muestra. @. desplazar poco a poco el segundo por taob jeto a lo largo del primero para /acer una capa fina de la mezcla. &. dejar secar al a ir e. A. Bbservar al microscopio -$;;C
Muest!s e"#$e%&!&!s: E. coli., Klebsiella pneum oniae
TINCIÓN DE GRAM: 5 0plique una capa delgada del esp!cimen en el portaobjetos, d!jelo secar ó fjelo flameando con calor utilizando un mec/ero, @ a & veces por la llama, por la cara opuesta a la que tiene la muestra. 5 (úbralo con cristal violeta durante $ minuto, lávelo con agua. 5 0plique solución yodada durante $ minuto, lávelo con agua. 5 (uidadosamente decolore la laminilla con alco/olDacetona /asta que el color azul se torne en celeste clar o. 5 0plique solución de safranina por un minuto, lávelo con agua, secando la laminilla con papel f iltr o. Las bacterias gram positivas se tiñen de color azul violeta. Las bacterias gram negativas se tiñen de color rosado.
Muest!s e"#$e%&!&!s: E. coli., S ta ph ylococcu s aureus, Y o g ur.
TINCIÓN DE SELECTIVA: P!! t(%"()% &e "!*su+!s'
M,t#&# &e A%t-#%.2
&. Lave la placa en la caja con solución de sulfato de cobre al 3;9 A. :aque la placa de la caja y d!jela secar al aire en posición ver tical . Bbserve con objetivo de inmer sión F. 'aga esquemas y dibuje lo observado.
Muest!s e"#$e%&!&!s: St aph ylococcu s aureus, Klebsiella pneum oniae
(oloque las preparaciones en la platina del microscopio, enfoque primero con seco d!bil y luego con seco fuerte. G1u! otros detalles ve con seco fuerteH 0gregue una gota de aceite de inmersión en el frotis y observe a/ora con el objetivo de inmersión. El aceite forma un medio continuo entre el vidrio y el sistema de lentes del ob jetivo, lo cual permite un mayor aumento de la imagen del objeto obser vado.
DISCUSIÓN DE R ESULTADOS: $. E#plique porque las bacterias )ram negativas se tiñen de rosado a diferencia de las )ram positivas -morado siendo el procedimiento de tinción el mismo 3. (uál es el pr opósito de flamear la muestra. @. (ómo argumenta usted la presencia de bacterias en el yogur t
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS $. 1u! diferencias e#iste entre un desinfectante y un antis! ptico 3. En qu! consiste el proceso de esterilización y la importancia de este. @. E#plique la importancia de la pasteurización de la lec/e @. Gqu! dificultades se tendra si no se adiciona la safranina al final de la tinciónH &. E#plique el fundamento de la tinción negativa realizada en la práctica. G1u! tipo de información se obtieneH. A. Investigue otra t!cnica de tinción selectiva que permita observar estas estructuras bacter ianas. . ?ealiza una lista de bacterias que sinteticen cá psulas.
BIBLIOGRAFIA
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