MODIFIKASI PASCA TRANSKRIPSI RESUME untuk memenuhi tugas mata kuliah Genetika I yang dibimbing oleh Prof. Dr. A. Duran Corebima, M.Pd.
Kelompok Offering B Anggota: Didik Dwi Prastyo 130341624788 Imroatun Hasana 130341614818
UNIVERSITAS NEGERI MALANG FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM JURUSAN BIOLOGI Februari 2015
A. Pasangan Transkripsi dan Translasi pada Prokariot Pada prokariot, translasi terjadi sebelum transkripsi sepenuhnya dirampungkan. Hal ini dimungkinkan karena pada prokariot molekul mRNA di translasikan berdasarkan arah dari ujung 5` ke ujung 3`. Selain dari itu, pada prokariot tidak terdapat membran inti, sehingga tidak ada yang memisahkan transkripsi dan translasi (sebagaimana yang terjadi pada eukariot) sehingga translasi dapat segera dilakukan (Gardner, 1984). B. Transkripsi, Pengolahan dan Transport RNA, dan Translasi pada Eukariot Pada eukariot transkripsi terjadi tidak bersamaan dengan translasi. Dengan adanya membran inti, pada eukariot dapat dibedakan tempat terjadinya transkripsi dan translasi, transkripsi terjadi di dalam inti sedang translasi terjadi di sitoplasma. Waktunya pun tidak dapat terjadi secara bersamaan, sebab sebelum dapat melakukan translasi, harus merampungkan terlebih dahulu proses transkripsi. Proses transkripsi dan translasi pada eukariotpun lebih kompleks daripada prokariot (Gardner, 1984). Menurut Gardner (1984), mRNA pada eukariot berasal dari transkrip gen primer yang melalui beberapa proses, yaitu: 1. Pembelahan sebagian besar mRNA prekursor (pre-mRNAs) menjadi molekul mRNA yang lebih kecil. 2. Penambahan kelompok 7-methyl guanosin (mRNA “caps”) pada ujung 5’ molekul. 3. Penambahan kira-kira 200 nukleotida panjang yang merupakan urutan nukleotida adenilet (“poly-A tails”) pada ujung 3’ molekul. 4. Melengkapi formasi atau susunan dengan protein yang spesifik. Masing-masing gen transkrip dapat melakukan beberapa atau seluruh tipe proses tersebut. Sebagian besar RNAs non ribosomal disintesis oleh sel eukariot yang memuat molekul yang sangat besar dengan ukuran sekitar 10S sampai 200S, atau panjangnya sekitar
1.000-50.000 nukleotida. RNA ini
disebut heterogenous nuclear RNA, yang disingkat dengan hnRNA. Sekarang nampak jelas bahwa tidak semua hnRNA benar-benar pre-mRNA. Proses yang cepat dari pembentukan molekul raksasa hnRNA atau pre-mRNA di nucleus
segera mengakibatkan (1) bagian terbesar dari non ribosomal RNAyang disintesis di nucleus (kemungkinan segmen yang besar dari transkrip primer) dengan cepat terdegradasi (sekitar 30 menit) dan (2) formasi dari molekul mRNA yang lebih kecil ditransport menuju sitoplasma. Meskipun, ini belum jelas antara semua, sebagian besar, atau hanya bagian dari molekul hnRNA yang disintesis di nucleus dari sel eukariot, faktanya adalah molekul premRNA (Gardner, 1984). Bukti definitif untuk proses pre-mRNA dalam pembentukan mRNA eukariotik telah diperoleh dalam kasus gen transkripsi β-globulin dari tikus. Pada fenomena ini, sebuah 15S hnRNA (pre-mRNA, yang panjangnya 12001500 nukleotida) diproses menuju 9S (panjangnya sekitar 600 nukleotida) dari β-globulin mRNA (Gardner, 1984). Bukti yang identik untuk proses hnRNA atau pre-mRNA pada formasi dari molekul mRNA matang sekarang tersedia dari banyak gen transkripsi eukariotik yang lain. Proses ini sering melibatkan penghilangan noncoding intervening sequances atau intron yang lokasinya antara sequence terkode (disebut exons) (Gardner, 1984). Sebagai tambahan, mRNA dari beberapa virus eukariotik yang telah diketahui mengandung leader sequence (sequence dari ujung 5’ ke kodon inisiasi translasi dari mRNAs) yang telah digambarkan di potongan DNA yang tidak bersebelahan dengan gen structural. Beberapa mungkin berbeda, faktanya mengandung potongan leader yang identik. Potongan leader ini nampaknya bersambungan dengan ujung 5’ dari gen transkripsi selama proses berlangsung. Hal ini dipercaya bahwa potongan leader ini harus dikaitkan pada regulasi dari translasi. Bagaimanapun fungsi pastinya belum diketahui (Gardner, 1984). Translasi pada eukariot terlihat analog dengan translasi pada prokariot, kecuali (1) grup amino dari methionyl-tRNA imet (inisiasi tRNA) tidak terbentuk. (2) sebagian besar mRNAs eukariot dibelajari melalui monogenic, seperti hanya 1 spesies polipeptida yang tertranslasi dari dari setiap mRNA. Pada prokariot, banyak mRNAs adalah polygenic, dua atau
lebih polipeptida yang berbeda disintesis dari segmen yang tidak saling tumpang tindih dari sebuah mRNA tunggal (Gardner, 1984). Sintesis dari satu protein eukariot, protein sutra fibroin, dapat divisualisasikan menggunakan mikroskop electron menggunakan teknik yang dikembangkan oleh O. L. Miller, B. A. Hamkalo, dan rekan-rekan. Fibroin tidak dilipat kearah permukaan ribosom sebagai polipeptida-polipeptida lain yang berada pada kondisi biasanya. Sebagai hasilnya, timbul rantai polipeptida dari pemanjangan, dapat terlihat perlekatan ribosom dari satu pindaian
dari ujung polisome raksasa menuju ujung yang lain (Gardner,
1984). C. Pemindahan Sekuen Intron dengan Penyambungan RNA Kebanyakan gen nukleus yang mengkode protein pada eukariot multiseluler mengandung intron. Lebih sedikit, namun masih banyak, gen eukariotik uniseluler seperti ragi mengandung intron. Gen langka dari archaea dan beberapa virus prokariota juga mengandung intron. Dalam kasus ini "split" gen, transkrip primer mengandung seluruh urutan gen, dan urutan intron yang dipotong selama pemrosesan RNA (Gardner, 1984). Untuk gen yang mengkode protein, mekanisme penyambungan harus tepat; harus bergabung urutan ekson dengan akurasi dengan nukleotida tunggal untuk memastikan bahwa kodon dalam ekson distal intron dibaca dengan benar. Akurasi untuk gelar ini tampaknya akan membutuhkan sinyal splicing tepat, urutan nukleotida mungkin dalam intron dan pada persimpangan ekson-intron. Namun, dalam transkrip utama gen nukleus, hanya urutan benar-benar dilestarikan intron berbeda urutan dinukleotida di ujung intron, yaitu
Urutan ditampilkan di sini adalah untuk untai DNA nontemplate (setara dengan transkrip RNA, tetapi dengan T ketimbang U). Selain itu, ada urutan konsensus singkat di persimpangan ekson-intron (Gardner, 1984).
Subskrip
numerik
menunjukkan
frekuensi
persentase
basis
konsensus pada setiap posisi; dengan demikian, 100 subscript menunjukkan bahwa dasar selalu hadir di posisi itu. N dan Py menunjukkan bahwa salah satu dari empat nukleotida standar atau baik pirimidin, masing-masing, dapat hadir pada posisi yang ditunjukkan. Persimpangan ekson-intron yang berbeda untuk gen tRNA dan gen struktural dalam mitokondria dan kloroplas, yang memanfaatkan mekanisme RNA splicing berbeda. Namun, spesies yang berbeda lakukan menunjukkan beberapa urutan konservasi di persimpangan ekson-intron (Gardner, 1984). Penelitian terbaru menunjukkan bahwa splicing dan intron urutan dapat mempengaruhi ekspresi gen. Bukti langsung untuk kepentingan mereka telah disediakan oleh mutasi di situs tersebut yang menyebabkan fenotipe mutan dalam banyak eukariotik yang berbeda. Memang, mutasi tersebut kadang-kadang bertanggung jawab untuk penyakit warisan pada manusia, seperti gangguan hemoglobin (Gardner, 1984). Penemuan noncoding intron dalam gen mendorong intens antar est dalam mekanisme (s) dimana urutan intron dikeluarkan selama ekspresi gen. Demonstrasi awal bahwa urutan intron dalam gen eukariotik yang ditranskrip bersama dengan urutan ekson penelitian terfokus pada pengolahan transkrip gen primer. Sama seperti sistem in vitro memberikan informasi penting tentang mekanisme skripsi transponder dan terjemahan, kunci untuk memahami peristiwa splicing RNA adalah pengembangan in vitro sistem splicing. Dengan menggunakan sistem ini, para peneliti telah menunjukkan bahwa ada tiga jenis yang berbeda dari intron sion exci- dari transkrip RNA (Gardner, 1984). 1. Intron tRNA prekursor yang dipotong oleh tepat belahan dada litik endonucleo- dan reaksi ligase
2. Intron beberapa prekursor rRNA dihapus autocatalytically dalam reaksi yang unik dimediasi oleh molekul RNA itu sendiri. (Tidak ada aktivitas enzimatik proteinyang terlibat.) 3. Intron nukleus pre-mRNA (hnRNA) transkrip yang disambung dalam reaksi dua langkah yang dilakukan oleh partikel ribonucleoprotein kompleks yang disebut spliceosome. Ketiga mekanisme intron eksisi dibahas dalam tiga bagian berikut. Ada mekanis melain intron eksisi, tapi untuk singkatnya mereka tidak dibahas di sini. Menurut angka tulisan dibawah garis menunjukkan presentase frekuensi dari consensus dasar di tiap-tiap posisi ; demikian 100 dibawah garis menunjukkan bahwa dasar selalu hadir pada posisi itu. N menunjukkan bahwa yang mana empat standar nucleotide mungkin hadir pada posisi yang ditunjukkan. Sambungan exon-intron berbeda dalam kasus dari gen tRNA dan struktur gen dalam mitokondria dan kloroplas, yang mana menggunakan perbedaan mekanisme sambungan RNA. Disini hanya satu sekuen terpelihara pendek dalam intron dari gen nuclear, yang disebut “TACTAAC box” dan ini kurang baik dipelihara. “TACTAAC box” memperlihatkan pilihan kuat untuk salah satu purin atau pirimidin pada tiap tempat sebagai berikut : Py80 N Py80 Py87 PU75 A100 Py95 Adenine residu pada posisi 6 di “TACTAAC box” sepenuhnya terpelihara dan diketahui berperan penting pada reaksi splicing (sambungan). Sisa sekuen dari intron (sering banyak sekali) dari gen nuclear itu sangat berbeda dan kelihatan menjadi sekuen bebas seluruhnya. Intron dari gen mitokondria dan kloroplas mengandung sekuen terpelihara yang berbeda dari gen nuclear (Gardner, 1984). D. Tiga Tipe Berbeda dari Penyambungan RNA Penemuan dari intron bukan pengkode pada gen menimbulkan perhatian yang besar pada mekanisme pemindahan sekuen intron selama ekspresi gen. Berdasarkan penelitian penyambungan RNA secara in vitro, terdapat tiga tipe khas penghilangan intron dari transkrip RNA. Tiga kelas
intron merupakan paling umum dan paling penting dari seluruh ekspresi gen eukariot menurut Gardner (1984), yaitu 1. Intron dari prekursor tRNA dihilangkan oleh reaksi pemotongan dan penyambungan endonukleotik yang tepat yang dikatalisis oleh aktivitas special splicing endonuclease dan ligase. 2. Intron dari prekursor rRNA Tetrahymena dipindahkan secara autokatalitik dalam reaksi khusus yang dimediasi oleh molekul RNA itu sendiri (tidak ada aktivitas protein enzimatik yang terlibat). 3. Intron dari transkrip nuclear pre-mRNA (hnRNA) dipindahkan dalam dua tahap reaksi yang dilaksanakan oleh partikel ribonukleorotein kompleks yang disebut “spliceosomes”. Sebagian besar gen mengandung bayak intron (contohnya gen α2 kolagen dari ayam mengandung lebih dari 50 intron), mendorong munculnya pertanyaan tujuan dari penghilangan intron yang banyak tersebut. Intron lain telah ditemukan untuk menjalani jalur alternatif dari pemotongan menyisakan mRNAs yang menghasilkan protein berbeda (dengan kata lain, dengan beberapa keadaan dan beberapa sekuen asam amino yang berbeda). Akhirnya, satu intron pada gen b sitokrom dari mitokondria ragi termasuk bagian dari sekuen pengkode untuk protein, “RNA maturase”, yang bertanggung jawab untuk menghilangkan intron kedua dari transkrip gen tersebut (Gardner, 1984).
Gambar 1.1 Pemotongan dari Sekuen Intron dari Transkrip Primer oleh pemotongan RNA. Mekanisme pemotongan harus tepat pada nukleotida tunggal untuk menghasilkan kodon sehingga proses penerjemahan secara tepat menghasilkan sekuen asam amino yang sesuai pada hasil polipeptida (Snustad, 2012). E. Penyambungan Prekursor-Prekursor tRNA: Nuklease dan Ligase yang Khas Reaksi pemotongan prekursor tRNA telah dipelajari secara rinci pada ragi Saccharomyces cerevisiae. Sistem pemotongan secara in vitro dan pemotongan pada mutan yang sensitif terhadap temperatur telah digunakan dalam pemotongan mekanisme pemotongan tRNA pada S. cerevisiae. Penghilangan intron dari prekursor tRNA ragi terjadi dalam 2 tahap. Pertama, membran nuklear mengikat splicing endonuclease membuat dua potongan yang tepat pada akhir dari intron. Selanjutnya, pada susunan komplek yang biasa dari reaksi, splicing ligase ikut pertengahan kedua dari RNA untuk menghasilkan RNA yang siap dari molekul tRNA. Pemotongan dari prekursor tRNA menghasilkan ujung 5’-OH dan 2’-3’ grup fosfat silik pada ujung 3’. Tahap kedua dari proses penyambungan secara nyata melibatkan 4 reaksi terpisah (Gardner, 1984). 1. Reaksi pertama adalah penambahan grup fosfat pada ujung 5’-OH, reaksi ini membutuhkan aktivitas kinase dan donor fosfat (ATP)
2. Selanjutnya, grup 5’ fosfat diaktivasi oleh transfer grup AMP pada terminus dari sebuah intermediet AMP-ligase (AMP mula-mula telah berasal dari ATP juga) 3. 2’-3’ fosfat siklik dibuka oleh aktivitas cyclic phosphodiesterase yang menghasilkan 2’ fosfat dan 3’ hidroksil bebas 4. Reaksi penyambungan akhir terjadi melalui pemecahan nucleophilic dari 3’-OH bebas pada bagian dalam 5’ fosfat dengan melepas AMP. Seluruh empat reaksi tersebut dikatalisis oleh splicing ligase. Akhirnya grup 2’ fosfat (sisa dari 2’-3’ fosfat siklik dihasilkan oleh reaksi pemecahan semula) dipindahkan oleh aktivitas phosphatase untuk menghasilkan molekul tRNA dewasa (Gardner, 1984). Dua tahap keseluruhan dari cara penghilangan intron tRNA nampak terjadi pada organisme lain. Mekanisme dapat melibatkan reaksi yang sama pada tumbuhan. Namun, pada mamalia reaksinya tidak sama. Pemotongan masih terjadi dalam dua tahap namun reaksi penyambungan muncul secara langsung ikut 2’-3’ fosfat siklik terminus ke 5’-OH terminus. Rincian dari proses dari pemotongan prekursor tRNA pada sel mamalia masih belum secara jelas (Gardner, 1984). F. Penyambungan Autokatalitik dari Prekursor Rrna Tetrahymena Pokok umum dalam biologi adalah bahwa metabolisme terjadi melalui sekuen dari reaksi katalisis oleh enzim. Lebih dari itu, seluruh enzim yang penting ini secara umum merupakan protein, walaupun kadang-kadang berupa polipeptida tunggal dan kadang-kadang heteromultimer komplek, yang membutuhkan kofaktor non protein untuk melaksanakan fungsinya. Ketika ikatan kovalen berubah (dipindahkan, ditransfer, atau dibentuk), kita menduga bahwa reaksi tersebut dikatalisis oleh enzim. Dengan demikian, penemuan bahwa intron pada prekursor rRNA dari Tetrahymena thermophile dihilangkan tanpa keterlibatan dari protein lain cukup mengejutkan para biologis. Akan tetapi, sekarang ditetapkan dengan jelas bahwa aktivitas pemotongan yang menghilangkan intron dari prekursor rRNA adalah intrinsik dari molekul RNA itu sendiri. Selain itu, pemotongan sendiri atau aktivitas autokatalitik
telah ditunjukkan terjadi pada prekursor rRNA dari beberapa eukariot rendah dan sejumlah besar prekursor rRNA, tRNA, dan mRNA pada mitokondria dan kloroplas dari beberapa spesies berbeda. Pada sebagian besar kasus dari intron ini (disebut kelompok I intron) pada molekul prekursor RNA, mekanisme pemotongan sendiri adalah sama atau mirip dengan prekursor rRNA Tetrahymena yang akan dideskripsikan senjutnya. Untuk lainnya (disebut kelompok II intron), mekanisme pemotongan sendiri mirip dengan mekanisme pemotongan yang diamati dengan prekursor mRNA nuclear kecuali bahwa hal tersebut tidak membutuhkan aktivitas “spliceosome” (Gardner, 1984). Penghilangan autokatalitik dari intron pada precursor rRNA Tetrahymena (dan kelompok I intron lainnya) tidak membutuhkan sumber energi dari luar (tanpa ATP dan sebagainya) dan tanpa protein. Malahan, melibatkan serangkaian transfer ikatan fosfoester, dengan tanpa ikatan yang hilang atau penambahan pada proses ini. Reaksi melibatkan nukleosida atau nukleotida guanine dengan kelompok 3’-OH bebas. (GTP, GDP, GMP, atau guanosin seluruhnya bekerja) sebagai kofaktor dengan kation monovalen dan kation divalen. Kebutuhan terhadap G-3’-OH adalah mutlak, tidak ada komponen pokok lain yang dapat digantikan pada kofaktor nukleosida dan nukleotida. Intron dihilangkan dengan jalan transfer 2 ikatan fosfodiester, dan intron yang hilang dapat membentuk sikular dengan jalan transfer ikatan fosfodister lain. Sirkularisasi autokatalitik dari penghilangan intron memberi kesan bahwa pemotongan sendiri prokursor rRNA ini terletak secara primer dalam struktur intron itu sendiri. Kiranya, aktivitas autokatalitik tergantung pada aktivitas sekunder dari intron atau sedikitnya struktur sekunder dari molekul precursor RNA. Struktur sekunder dari pemotongan sendiri RNAs harus membawa grup reaktif sekitar juxtaposisi untuk mengizinkan transfer ikatan fosfoester terjadi. Sejak pemotongan sendiri transfer ikatan fosfoester berpotensi
reaksinya
berlangsung
reversibel,
degradasi
cepat
dari
penghilangan intron atau ekspor dari pemotongan rRNAs ke sitoplasma dapat mengendalikan pemotongan didepannya (Gardner, 1984). Poin
utama
dari
reaksi
pemotongan
autokatalitik
adalah
intramolekular di alam, dan demikian tanpa bergantung konsentrasi. Selain itu,
precursor RNA mampu membentuk pusat aktif pada ikatan kofaktor guanosin3’-OH. Tempat katalitik tidak membatasi protein, tetapi catatan juga bahwa tidak ada aktivitas katalitik trans sebagai enzim, hanya aktivitas katalitik cis (Gardner, 1984).
Gambar 1.2 Mekanisme Pemotongan Sendiri dari Prekursor rRNA Tetrahymena thermophila dan sirkularisasi dari intron yang terpotong (Snustad, 2012).
G. Penyambungan pre-mRNA: snRNAs, snRNPs, dan Spliceosome Intron pada nuclear precursor mRNA (nuclear pre-mRNAs) dihilangkan dalam dua tahap seperti intron pada pre-tRNAs ragi dan prerRNAs Tetrahymena. Intron tidak dihilangkan dengan pemotongan nuclease dan ligase sederhana atau secara autokatalitik. Malahan, pemotongan nuclear pre-mRNA dilaksanakan oleh struktur RNA atau protein komplek yang disebut spliceosome. Spliceosome ini berada dalam jalur yang berbeda seperti ribosom kecil. Spliceosome mengandung kumpulan molekul RNA kecil yang disebut snRNAs (small nuclear RNAs) dan kumpulan protein yang masih belum dikenal secara lengkap. Dua tahap dari pemotongan pre-mRNA nuclear telah diketahui, namun beberapa rincian dari proses pemotongan masih belum diketahui (Gardner, 1984). Lima snRNAs yaitu U1, U2, U4, U5, dan U6 terlibat dalam pemotongan pre-mRNA nuclear sebagai komponen dari spliceosome (snRNA U3 terdapat dalam nukleolus dan kemungkinan terlibat dalam pembentukan ribosom). Pada mamalia, rentangan ukuran snRNAs dari 100 nukleotida (U6) sampai 215 nukleotida (U3). Beberapa snRNAs pada ragi S. cerevisiae lebih besar. snRNAs ini tidak ada sebagai molekul RNA bebas. Malahan, terdapat sebagai kompleks RNA-protein nuclear kecil yang disebut snRNPs (small nuclear ribonucleoprotein). Karakteristik dari snRNPs telah difasilitasi oleh penemuan bahwa beberapa pasien dengan penyakit yang disebut sistemik lupus erythematosus menghasilkan antibodi yang bereaksi dengan protein snRNPs. Antibodi ini disebut dengan autoantibodi karena bereaksi dengan protein milik pasien (“self” protein), secara normal, hanya antibodi yang bereaksi dengan protein asing akan diproduksi oleh oleh sistem imun. Antibodi ini dapat digunakan untuk mempercepat snRNPs, dengan demikian antibodi dapat memfasilitasi dengan baik pemurnian dari snRNPs untuk pembelajaran strukturan dan fungsional (Gardner, 1984). snRNAs U1, U2, dan U5 dihadirkan dalam tiga partikel snRNP berbeda, masing-masing mengandung snRNA tunggal. snRNAs U4 dan U6 dihadirkan bersama dalam snRNP keempat, snRNAs U4 dan U6 mengandung dua bagian dari komplemen intramolekuler yang kemungkinan adalah dasar
pasangan pada snRNP U4/U6. Masing-masing empat tipe dari partikel snRNP mengandung kumpulan pokok dari tujuh karakteristik protein snRNP dengan satu atau lebih protein khusus sampai tipe partikular dari partikel snRNP. Seluruh empat kompleks snRNP ditampilkan dalam spliceosome yang diisolasi (Gardner, 1984). Tahap pertama dalam pemotongan pre-mRNA nuclear melibatkan pemecahan pada 5’ intron splice site (
GT-intron) dan susunan dari ikatan
fosfodiester intramolekular antara 5 karbon dari G pada pemecahan tempat dan 2’ karbon dari residu A dihemat dekat akhir 3’ dari intron. Tahap ini terjadi pada spliceosome dan membutuhkan hidrolisis ATP. Bukti-bukti menunjukkan bahwa U1 snRNP harus terikat pada tempat pemotongan 5’ sebelumnya sebagai inisial reaksi pemecahan. Pengenalan dari tempat pemecahan pada akhir 5’ dari intron kemungkinan melibatkan pasangan dasar antara sekuen konsensus pada tempat ini dan sekuen komplemen dekat ujung 5’ dari snRNA U1. Namun, kekhususan dari ikatan pada pada kurang dari beberapa snRNPs ke sekuen consensus intron melibatkan snRNAs dan protein snRNP spesifik, selanjutnya pasangan dasar antara intron sekuen konsesnsus 5’ dan sekuen komplementer pada snRNA dapat menyediakan hanya satu bagian dari pengkhususan untuk ikatan fungsional dari U1 snRNP ke molekul pre-mRNA (Gardner, 1984). snRNP kedua ditambahkan untuk memotong komplek, muncul untuk menjadi U2snRNP, yang terikat pada sekuen konsensus yang mengandung 100 persen penghematan residu A yang membentuk titik percabangan pada struktur lariat dari intron yang terpotong. Setelah itu, U5 snRNP terikat pada tempat pemotongan 3’, dan U4/U6 snRNP ditambahkan pada komplek untuk menghasilkan spliceosome yang lengkap. Ketika tempat pemotongan 5’ intron dipotong pada tahap pertama, U4 snRNA dkeluarkan dari spliceosome (secara in vitro). Pada tahap 2 dari reaksi pemotongan, tempat pemotongan 3’ dari intron dipecah, dan dua exon disambung oleh ikatan fosfodiester normal 5’ ke 3’. mRNA yang telah terpotong sekarang siap untuk dikeluarkan ke sitoplasma dan menjalani translasi oleh ribosom (Gardner, 1984).
Gambar 1.3 Postulat dari snRNA yang mengandung snRNPs nuklear pemotong pre-mRNA (Snustad, 2012).
Daftar Pustaka Gardner, E.J., dan Snustad, D.P. 1984. Principle of Genetics 6th edition. NewYork: John Wiley and Sons.Inc.
Snustad, D.P. dan Simmons, M.J. 2012. Principles of Genetics 6th edition. USA: John Wiley and Sons.Inc. (ebook). Pertanyaan 1. Didik Dwi P Bagaimana konsep eksperimen hibridisasi penjenuhan RNA-DNA? Jawab: RNA diekstrak dari tipe sel tertentu dan dibiarkan berhibridisasi dengan DNA inti total (di-denaturasikan). RNA ditambahkan ke reaksi hibridisasi dalam jumlah yang banyak (relatif terhadap konsentrasi DNA) sehingga sekuen DNA berkomplementer dengan sekuen-sekuen yang representatif pada populasi RNA dan akan membentuk hibrid DNA-RNA, hasil penentuan tersebut akan dipakai sebagai data pendukung perkiraan terhadap proporsi genom yang direpresentasikan melalui sekuen-sekuen dalam populasi RNAd pada tipe sel tertentu tersebut. 2. Imroatun Hasana Mengapa intron pada prekursor rRNA dari Tetrahymena thermophile dihilangkan tanpa keterlibatan dari protein lain? Jawab: Hal tersebut dikarenakan aktivitas pemotongan yang menghilangkan intron dari prekursor rRNA adalah intrinsik dari molekul RNA itu sendiri. Pemotongan nuklear pre-mRNA dilaksanakan oleh struktur RNA atau protein komplek yang disebut spliceosome. Spliceosome ini berada dalam jalur yang berbeda seperti ribosom kecil. Spliceosome mengandung kumpulan molekul RNA kecil yang disebut snRNAs (small nuclear RNAs) dan kumpulan protein yang masih belum dikenal secara lengkap. Lima snRNAs yaitu U1, U2, U4, U5, dan U6 terlibat dalam pemotongan pre-mRNA nuclear sebagai komponen dari spliceosome.
