El método DNS El método DNS (técnica de miller) es una técnica colorimétrica que emplea ácido 3,5 dinitrosalicílico para la hidrólisis de polisacáridos presentes en una muestra. Determina las asorancias por medio de un espectro!otómetro a 5"#nm. Esta técnica sir$e para cuanti%car los a&ucares reductores producidos durante una !ermentación o para cuanti%car los productos de una reacción en&imática. 'a cur$a de caliración es la representación rá%ca en un ee de coordenadas, de la *sorancia (ee de ordenadas+ ) !rente a la -oncentración (ee de ascisas+ ). Se ensa/an $arias soluciones de concentración conocida / se determinan sus asorancias, constru/éndose la cur$a de calirado, que es una recta. 'a concentración de una solución prolema (desconocida), se a$eriua por interpolación de la *s de la solución en la cur$a de caliración, o a tra$és de la ecuación de la recta (/ 0 m1 2) donde+ *sorancia (/) 0 constante (m) 1 concentración 2 asorancia del lanco. El DNS reacciona nicamente con los a&cares reductores. 'a sacarosa es un disacárido no reductor, pero tras su hidrólisis en medio ácido se lieran lucosa / !ructosa que sí son reductores / reaccionan reaccionan con el DNS enerando un producto coloreado. coloreado. 'a intensidad del color, que se puede medir por métodos espectro!otométricos espectro!otométricos es proporcional proporcional a la concentración de sacarosa.
Ventajas Ventajas y aplicaciones del Metodo DNS Esta técnica es aplicale a todos los procedimientos de sistemas de culti$os de medios líquidos / sólidos cu/a molécula de sustrato sean a&cares reductores como lucosa, 1ilosa, entre otros Simple, la coloración %nal desarrollada desarrollada es estale durante 4" hrs, hr s, sensile / adaptale durante la manipulación de un ran nmero de muestras a la $e&.
Cuantifcación de azúcares reductorespor el método de DNS
Este procedimiento se !undamenta !undamenta en la reacción de los los rupos reductores reductores de los a&cares con el reacti$o o1idante ácido dinitrosalicílico dinitrosalicílico (DNS).El reacti$o reacti$o consiste en una disolución !ormada !ormada por los siuientes compuestos+ ácidodinitrosalicílico ácidodinitrosalicílico (ácido 4hidro1i3,5dinitroen&óico), 4hidro1i3,5dinitroen&óico), que acta como o1idante6 Sal de7ochelle (tartrato sódicopotásico), que impide la disolución de o1íeno en el reacti$o /hidró1ido /hidró1ido sódico, que aporta el medio requerido para que se produ&ca la reacciónredo1. reacciónredo1. De esta !orma, el ácido 4hidro1i3,5dinitroen&óico 4hidro1i3,5dinitroen&óico se reduce, en presencia delrupo reductor de la lucosa, !ormando el ácido 3amino5 nitrosalicílico, mientras que el rupo aldehído reductor reductor se o1ida, para !ormar un rupo caro1ílico. En este método analítico el DNS está en e1ceso !rente a los rupos reductores / en todas las muestras se adiciona la misma cantidad, de tal
!orma que ma/ores concentraciones de a&caresreductores pro$ocan una ma/or coloración de la muestra. Estas di!erencias decoloración pueden determinarse por espectro!otometría $isile, a la lonitud de onda demá1ima asorancia de 5"# nm. Preparación del reactivo del cido !"# dinitrosalic$lico en caliente Se pesan 5 de ácido 3,5 dinitrosalicílico (DNS), 85# de 9artrato de Na: / ; deNa<=. Se disuel$e el Na<= en 4## m' de aua destilada / se a>ade en aitación el9artrato de Na: lentamente.Se completa con aua destilada hasta "## m' / se comien&a a a>adir lentamente elácido 3,5 dinitrosalicílico. Se dea en aitación toda la noche, se enrasa a 5## m' / se%ltra. Se uarda en !rasco color amar, ao re!rieración.'a preparación del reacti$o DNS en caliente se hace con aitación manética /calentamiento (?ello., 4##@)