BIOPROCESOS II- CURVA DE CALIBRADO PARA AZUCARES REDUCTORES (DNS)
I.
OBJETIVOS
-Conocer la preparación y uso adecuada del reactivo DNS (Acido 3,5 dinitrosalicilico). -Construcción de una curva de calibrado para la determinación de a!cares reductores por el m"todo del DNS.
II.
MARCO TE TEÓRICO Azucares Reuc!"res
#ran$ %radley Armstron& Armstron&,, 'omas 'omas eter %ennett di*eron+ a mayora mayora de disac/ridos disac/ridos son aucares reductores por0ue uno de sus dos carbonos anom"ricos (&rupo aldedo o cetona reductor) de sus estructuras no est/ 1ormando enlace &lucosidico. 2na ecepción es la sacarosa (a!car no reductor) 0ue, tiene los dos carbonos anom"ricos 1ormando parte del enlace 0ue une los dos carbonos monosac/ridos4. n el libro libro Dicc Diccio iona nari rio o de la 6um 6umic icaa se mani mani1i 1iest estaa dicie diciend ndo+ o+ Au Auca care ress redu reduct ctor ores es++ 7onosac/ridos o disac/ridos 0ue puede ceder electrones a otras mol"culas y puede, por tanto, actuar como a&ente reductor. Aucares no reductores+ A!cares 0ue no son capaces de ceder electrones a otras mol"culas y, por tanto, no pueden actuar como a&entes reductores.4
Ac#" $%& #'#!r"sa#c##c" (DNS) l 8n&. 6umico 9amón 7"nde, de la 2niversidad Autónoma de 7"ico, menciona 0ue+ ara la determinación de aucares reductores se empleó el m"todo colorim"trico del DNS. ste m"todo se basa en 0ue los aucares reductores reaccionan con el /cido 3,5-dinitrosalicilico, reduci"ndolo ba*os ciertos condiciones y &enerando un color ro*io-amarronado.4
Cura e Ca#*rac#+' a 8n&. %io0umica Silvia 6uesada 7ora epresa, en su libro+ Si se diluye sucesivamente una sustancia coloreada y, de cada dilución, se mide el valor de absorbancia a una lon&itud de onda optima, al representar &r/1icamente estos valores (A vs %), se obtiene una curva de calibración de la sustancia. A partir de esta, es posible conocer la concentración de una muestra: para ello, se mide su absorbancia a la misma lon&itud de onda y, con base en ese valor, se interpola la concentración4.
Es,ec!r""!"e!r/a Carmen Silva ;arca < =os" ;arca %erme*o mencionan en su libro+ a espectro1otometra de absorción consiste en la medida de la radiación 0ue lle&a a un detector tras producirse un 1enómeno de absorción de lu por parte de una sustancia absorvente>4.
?arold #rederic @alton, =or&e 9eyes epresan+ 2n modo de aumentar la eactitud de las determinaciones 1otom"tricas, especialmente en los casos en 0ue las soluciones presentan 1uerte absorbancia, consiste en comparar la intensidad de la lu 0ue pasa por la solución con la intensidad de un a de lu de la misma l/mpara o 1oco luminoso, 0ue atraviesa una se&unda solución cuya concentración es conocida eactamente y 0ue es un poco menor 0ue la de la muestra 0ue se determina4.
RESULTADOS Curva de Calibrado para ;lucosa •
Se traba*ó con los si&uientes datos+
Tu*"s
A&ua destilada
Solución madre
CB &
Abs 5E nm
0 1 $ 2 & 3
5
E ml.
E
E
Fml.
E.E
E.FGGG
3
Gml.
E.EH
E.GIH
G
3ml.
E.FG
E.FGI
F
ml.
E.FI
E.5GHJ
E
5ml.
E.G
E.IKII
Curva DNS para Glucosa
f(x) = 3.48x - 0.01 R² = 1 Abs 40 !" #$!%a r (Abs 40 !")
CONCLUSIONES •
Se desarrolló con e1icacia un procedimiento para determinar la concentración de (a!cares reductores) por el m"todo del /cido 3,5 dinitro saliclico (DNS): la determinación de estos a!cares se realió para obtener una curva de calibración, con este reactivo (DNS) 0ue tiene capacidad de oidar a los a!cares reductores dando resultados colorim"tricos 0ue se pueden medir con una lon&itud de onda de 5Enm en el espectro1otómetro.
•
as &r/1icas muestran resultados satis1actorios ya 0ue el valor de
R
2
obtenidos tanto en la prueba de a!cares para ;lucosa y 1ructuosa 1ueron E.KKJ y >. respectivamente.
RE4ERENCIAS BIBLIO5R64ICAS -
&ra!'
ral%*
Ar"s+ro!,
/o"as
%+%r
%!!%++
(182)
$ou"$ca. -
S$lv$a 5u%saa 6ora (2007) 6a!ual % %xp%r$"%!+os % labora+or$o para b$ou"$ca.
-
Car"%! S$lva Garca 9os: Garca %r"%;o #u$s D%l Cas+$llo orr%s 9os: 6a!u%l A!$a alac$o < Do"$!,o G"%> 6ar+!%> (200?) :c!$cos @sp%c$al$s+as % #abora+or$o %l s%rv$c$o asco % Salu.
-
9os: Garca %r"%;o &ra!c$sca Colo" al$%!+% < 9ua! A!+o!$o 9ara"$llo SB!c/%> (2003) 6a!ual D%l Aux$l$ar % #abora+or$o.
-
Car"%! S$lva Garca < 9os: Garca %r"%;o (200?) :c!$co @sp%c$al$s+a %! #abora+or$o % A+%!c$! r$"ar$a D%l !s+$+u+o Ca+alB! % la Salu.
-
arol &r%%r$c Eal+o! * 9or,% R%*%s (183) A!Bl$s$s u"$ca % $!s+ru"%!+al "o%r!o.
-
Ra"! 6:!%> a"p! (2007) roucc$! l$"p$a %! la $!us+r$a % cur+$%"br%.
