METODO DE METENAMINA DE PLATA
Existen varias tinciones argénticas que incorporan metenamina, metenamina, entre las que se encuentran:
Tinción de metenamina plata de Grocott, Grocott, ampliamente utilizada para revelar microorganismos fúngicos. microorganismos fúngicos. Tinción de Jones, una Jones, una tinción de metenamina-plata-Ácido metenamina-plata -Ácido periódico de Schiff que tiñé membranas basales, basales, permitiendo ver la membrana basal glomerular "espinada" asociada con glomerulonefritis con glomerulonefritis membranosa.
PLATA METENAMINA: El fundamento de esta técnica es la oxidación de los H d C mediante el ácido crómico y el ácido peryódico. Estos H d C oxidados reducen las sales de Ag que contiene el reactivo, haciendo precipitar la plata metálica sobe la l a estructura a teñir. _ La sal de plata empleada es el complejo metenamina argéntica – Es – Es inestable y sólo se mantiene como tal a pH alcalino entre 8.3 y 9.2, fuera de éste se disocia en sus dos componentes – – La técnica debe realizarse con un control continuo de pH, de modo que la precipitación de la plata métalica no ocurra oc urra anticipadamente – – Por sus características especiales, esta técnica se emplea para visualizar membranas basales – – sobre todo en el riñón (glomerulonefritis), compuestas en gran medida por hidratos de carbono del tipo glicoproteínas y que, por tanto, son además PAS + La técnica de GOMORI MODIFICADO Es una variante de la plata metenamina. Lo que correspondería a PAS+ se teñirá de negro: glucógeno, mucina, hongos, membranas basales, reticulina y elastina.
La plata metanamina de Grocott es Grocott es un método de tinción de tinción especial más empleado para hongos. para hongos. La La reacción tintorial está basada en que, en presencia de ácido peryódico, los peryódico, los polisacáridos de la pared la pared celular de los hongos son oxidados son oxidados a aldehídos; éstos, aldehídos; éstos, a su vez, reducen el complejo nitrato-plata nitrato-plata metanamina (o metenamina) produciendo una coloración de café a negra, debido al depósito de plata reducida en los lugares de localización de los aldehídos.
También se utiliza para la identificación de la melanina. Este pigmento es producido en la piel por los melanocitos. En los humanos la melanina se encuentra en piel, cabello, en el recubrimiento de la retina. Aunque los seres humanos generalmente poseen una concentración similar de melanocitos en su piel, estos expresan en algunos individuos y en algunas etnias más frecuentemente el gen productor de melanina, por lo que se confiere una mayor concentración de melanina en la piel. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA El tejido debe ser fijado en formol para mejores resultados, y seccionado a 5 micras. REACTIVOS 1. Solución de ácido bórico (solución A): 1. 3,09 g de ácido bórico. 2. 250 cc de agua destilada. 2. Solución de tetraborato sódico (solución B): 1. 4,77 g de tetraborato sódico. 2. 250 cc de agua destilada. 3. Solución buffer borato (comprobar que el pH sea 8.2) 1. 13 cc de solución A. 2. 7 cc de solución B. 4. Solución de plata metanamina: 1. 42,5 cc de metanamina (hexametilentetranamina) 3%. 2. 2,5 cc de nitrato de plata 5%. 3. 12 cc de buffer borato (pH 8.2). PROCEDIMIENTO Debe evitarse, durante todo el proceso, el uso de instrumentos metálicos, ya que la plata precipitaría sobre ellos. 1. 2. 3. 4.
Desparafinar e hidratar. Añadir ácido peryódico 0,5%, 12 minutos. Lavar con agua destilada. Sumergir los cortes en la solución de plata metanamina, 1 hora mínimo a 60 ºC; a partir de este tiempo comprobar regularmente al microscopio. 5. Lavar con agua destilada. 6. Añadir cloruro de oro, 1 minuto.
7. Lavar con agua destilada. 8. Añadir tiosulfato sódico 3%, 1-2 minutos. 9. Lavar con agua corriente. 10. Tinción de contraste (rojo nuclear, hematoxilina, verde luz...), 1 minuto. 11. Deshidratar, aclarar, montar.
RESULTADOS
Reticulina, membranas basales, hongos, mucinas, glucógeno: negro. Fondo: según tinción de contraste. Nucleos: marrón oscuro a negro
