UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS ESCUELA DE INGENIERÍA EN INDUSTRIAS ALIMENTAR ALIMENTARIAS IAS
NOMBRE
: RUBY MAGALY ARIAS TUCO
CÓDIGO
: 2014-111008
CURSO
: ANALISIS INSTRUMENTAL DE ALIMENTOS
DOCENTE
: DR. MIGUEL A. LARREA CÉSPEDES
TURNO
: MIERCOLES 11-13 PM TACNA – PERÚ 2016
Los El método de Lowry es una técnica colorimétrica que permite calcular la concentración de proteínas totales presentes en una disolución o extracto biológico. El método se basa en el empleo de dos reactivos. El componente fundamental del Reactivo A es el CuSO4, que aporta iones Cu2+. En medio alcalino, estos iones reaccionan con aquellas moléculas que tengan varios enlaces peptídicos consecutivos, es decir, péptidos y proteínas, dando lugar a complejos solubles que presentan un color azul pálido. El Reactivo B, también conocido como reactivo de Folin-Ciocalteau o reactivo de fenoles, reacciona con aquellos aminoácidos de la proteína que lleven en su cadena lateral grupos fenólicos (la tirosina, la fenilalanina y el triptófano), dando lugar a un color azul intenso. La intensidad del color producido en el tubo de ensayo, que se mide con un espectrofotómetro, es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la disolución, lo que permite cuantificar ésta si se compara con tubos preparados de forma similar con cantidades conocidas de una proteína de referencia, con los que se hace una recta de calibrado.
Determinar la cantidad de proteínas en una muestra de frejol molido, aplicando el método de Lowry.
El método de Lowry (1951) o método de folin-fenol— es un análisis colorimétrico de valoración cuantitativa de las proteínas. A la muestra se añade un reactivo que forma un complejo coloreado con las proteínas, siendo la intensidad del color proporcional a la concentración de proteínas, según la ley de Lambert-Beer, ya vista anteriormente.
Los iones Cu2+, en medio alcalino, se unen a las proteínas formando complejos con los átomos de nitrógeno de los enlaces peptídicos. Estos complejos Cu2+-proteína tienen un color azul claro. Además, provocan el desdoblamiento de la estructura tridimensional de la proteína, exponiéndose los residuos fenólicos de Tyr que van a participar en la segunda etapa de la reacción. El Cu2+ se mantiene en solución alcalina en forma de su complejo con tartrato.
La reducción, también en medio básico, del reactivo de FolinCiocalteau, por los grupos fenólicos de los residuos de Tyr, presentes en la mayoría de las proteínas, actuando el cobre como catalizador. El principal constituyente del reactivo de Folin-Ciocalteau es el ácido fosfomolibdotúngstico, de color amarillo, que al ser reducido por los grupos fenólicos da lugar a un complejo de color azul intenso. El color azuloso desarrollado es leído a 750 nm (alta sensibilidad para una concentración proteica baja) o a 500 nm (alta sensibilidad para una concentración proteica alta).
Muy sensible. El rango es de 0,1 a 1 mg/mL.
Menos afectado por la turbidez de la muestra.
Más específico que la mayoría de los otros métodos.
Relativamente simple.
Se puede completar en 1 a 1,5 h.
El color varía con diferentes proteínas (más que el método de Biuret).
El color no es estrictamente proporcional a la concentración de proteínas.
La sacarosa, lípidos, buffers fosfato, monosacáridos y hexoaminas interfieren con la reacción.
Las altas concentraciones de azúcares reductores, sulfato de amonio y compuestos con sulfidrilo interfieren con la reacción.
El reactivo de Folin-Ciocalteu (FCR) o reactivo de Folin-Denis es una mezcla de fosfomolibdato y fosfotungstato, usado para la determinación de antioxidantes fenólicos y polifenólicos.1 Funciona midiendo la cantidad de sustancia analizada que se necesita para inhibir la oxidación del reactivo.2 Sin embargo, este reactivo no sólo mide los fenoles totales, sino que reaccionará con cualquier sustancia reductora. En consecuencia, el reactivo mide la capacidad reductora total de una muestra, no sólo el nivel de compuestos fenólicos. Este reactivo forma parte del ensayo de proteínas de Lowry, y también reaccionará con algunos compuestos que contienen nitrógeno, como la hidroxilamina y la guanidina.3 Este reactivo no debe ser confundido con el reactivo de Folin, que es usado para detectar aminas y compuestos que contienen azufre.
Tamiz 60 mesh
Mortero
Centrifuga
Tubos de ensayo de 10 ml
Balanza analítica
Espectrofotómetro
Pipetas
NaCl 0.15 M
NaOH
Sulfato de cobre
Reactivo de biuret
Albumina de suero bovina frijol
Para la determinación de azucares totales se utilizó el método de lowry.
Tomar 50gr de frijol y moler hasta una granulometría menor a 60mesh.
Preparar suspensiones de 10% en soluciones de cloruro de sodio 0.15M y agitar por 1 hora.
Centrifugar y medir el volumen del sobrenadante.
70 ml de sobrenadante
Determinar el contenido de proteínas por el método de lowry. Hacer una diucion de 1/25 ml y tomando alícuotas de 0.2 y 0.3 ml.
A partir del extracto salino obtenido, se toma alícuotas de 0.2 ml (muestra 1) y 0.3ml (muestra2). Seguidamente completar a 1.0ml con agua destilada, adicionar 5 ml de mezcla reactiva, esperar 10 minutos y adicionar 0.6 ml de reactivo follin y realizar la lectura después de 30min a 660nm. Del mismo modo se prepara una curva padrón a partir de suero de albumina bovina en la concentración de 50 mg/100ml.
-
Pesar 50mg de suero albumina bovina y 0.1ml de NaOH 1 N.
-
disolver con agua destilada y completar para 100ml (sin mucha agitación)
-
esta concentración equivale a 50mg/100ml
Numero de tubo
Padrón gluc. (ml)
H2O ml
Mezcla Folin (ml) Reac.(ml)
0.1
0.9
5.0
0.6
0.2
0.8
5.0
0.6
0.3
0.7
5.0
0.6
0.4
0.6
5.0
0.6
0.5
0.5
5.0
0.6
0.6
0.4
5.0
0.6
0.7
0.3
5.0
0.6
---
1.0
5.0
0.6
Conc (mg)
Abs (660 nm)
---
0.000
Grafico N°1: Curva de calibracion a 660nm 0.75 0.7 0.65
y = 1.7443x + 0.0623 R² = 0.9984
0.6 0.55
m0.5 n a i 0.45 c 0.4 n a0.35 v r o 0.3 s b0.25 A 0.2
0.15 0.1 0.05 0 0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
Concentracion mg
0.2 0.3
=
0.3349 − 0.0623 1.7443
0.3349 0.5304
= .
0.3
0.35
0.4
El peso de la muestra es 10 gramos de frejol molido.
10 gr 100 ml 70 ml 1 ml 25 ml 0.2 ml
0.1563 mg X
0.2 ml 25 ml 19.5375 mg
19.5375 mg X
1 ml 70 mg
1367.625 mg=1.368 gr 1.368 gr X
=
0.5304 − 0.0623 1.7443
10 gr 100 gr
= .
El peso de la muestra es 10 gramos de frejol molido.
10 gr 100 ml 70 ml 1 ml 25 ml 0.3 ml
0.2684 mg X
0.3 ml 25 ml 22.3667 mg
22.3667 mg X
1 ml 70 mg
1565.669 mg=1.566 gr 1.566 gr X
10 gr 100 gr
Este porcentaje es para las
Según la página web InformaciónNutricional.com nos informa lo siguiente:
Lo que se obtuvo fue 5.74 gr de proteína por 100 gr de frijol, se explicó que al momento de preparar la muestra el frijol ya estaba remojado, saliendo así las albuminas del frejol reduciendo el porcentaje de proteínas que debía de estar entre 19-25 % de proteínas. Las proteínas de almacenamiento representan en el frijol el 50% de la proteína que contiene el grano (Samour et al., 2007) y de estas, las albúminas representan un 14,8 - 20,8%, las globulinas 33 - 45%, las glutelinas 12,8 - 41,2% y las prolaminas en general, menos del 1% (Perazzini et al., 2008). Por tal motivo se pierde porcentaje en proteínas. Es necesario hacer una buena preparación de la muestra ante de enviarla a analizar, generalmente para obtener una buena muestra en este caso de frijol esta debe remojarse en agua para que pueda salir la proteína, debido a ello la muestra molida de estar por lo menos 3 – 4 horas, nosotros trabajamos con una agitador y la muestra se expuso al agitador una hora, hubiera sido recomendable más tiempo de reposo y agitación para la muestra para obtener datos más exactos.
Se determinó que hubo 14.67% Se aplicó el método de espectrofotómetro en región de UV. Se observó que durante la realización de la práctico se pueden cometer muchos errores que son parte de la balanza, de los productos hidrofilicos, la humedad del aire, del espectrofotómetro (por vibraciones de la tierra). Las proteínas son las moléculas más importantes en nuestra dieta alimenticia. Así que debemos de saber qué cantidad de proteínas consumimos, para no presentar déficit, por ello es necesario este tipo de pruebas de determinación de proteínas para saber la calidad del cereal que estamos consumiendo.
http://drcormillot.com/diccionario/
D. PARSON, Manual de técnicas de Laboratorio para el Análisis de los Alimentos.