ODONTOLOGÍA
LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR
Fraccionamiento subcelular
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ALUMNOS:
PROFESOR(ES):
27- Mayo - 2014
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Juan CaniuCantillana Ximena Gálvez González Paulina Gatica Fernández Hernán Manque Armijo Eduardo Albornoz Balmaceda Gustavo Jiménez Alarcón
INTRODUCCIÓN La célula se define como la unidad fundamental de los seres vivos, poseen estructuras complejas que realizan diversos procesos vitales, y que además se reproducen, pueden nutrirse, crecer y morir, sin embargo, la cantidad de células que existen no son iguales, y según su estructura podemos diferenciar células eucariontes de procariontes. (1) Las células procariontes poseen una estructura muy sencilla, su límite celular es la membrana plasmática y hacia dentro de esta se encuentra el citoplasma con el material genético (ADN) disperso, y que no presenta organelos. Los organismos procariontes son unicelulares (compuestos solo por una célula), un ejemplo son las bacterias. Por otro lado tenemos las células eucariontes, que también están rodeadas por una membrana plasmática que las separa del medio externo, pero a diferencia de las células procariontes, en su citoplasma poseen una serie de subdivisiones denominadas organelos que poseen formas y funciones definidas, y su material genético se encuentra al interior de un organelo al que llamamos núcleo celular. Los organismos compuestos por estas células incluyen tanto seres unicelulares y organismos pluricelulares. Enfocamos este informe en el reconocimiento de organelos, tales como el núcleo, mitocondrias, retículo endoplasmático liso, retículo endoplasmático rugoso, citoplasma, membrana plasmática, aparato de Golgi, ribosomas, peroxisomas, lisosomas, cloroplastos, citoesqueleto. El hallazgo de estos organelos se debe principalmente a la existencia del microscopio, sin embargo el interés de caracterizarlos por función, y composición condujo al desarrollo de nuevas técnicas, una de ellas es el fraccionamiento subcelular, la cual se basa en la separación de los distintos organelos mediante ruptura de la célula y posterior centrifugación, para que por medio de un campo gravitacional, estos vayan separándose en relación a su tamaño y peso. El siguiente trabajo tiene como finalidad los siguientes objetivos:
Comprender la técnica de fraccionamiento subcelular por medio del rompimiento de la célula.
Aprender sobre la separación de organelos mediante un campo gravitacional
Reconocer las dos fases en un tubo al término de una centrifugación.
Reconocer y distinguir el sobrenadante y el p ellet
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MATERIALES Y MÉTODOS
En este práctico de laboratorio En las actividades se usaron distintos métodos:
ACTIVIDAD N°1: ACTIVIDAD N°2: Procedimos a observar una muestra que se nos entregó la cual correspondía a hígado de rata, esta fue observada en el microscopio con los objetivos 4, 10 y 40X. Finalmente observamos con el objetivo 100X (también conocido como objetivo de inmersión), para poder realizarla debimos adicionar aceite de inmersión a la muestra. Una vez finalizado el procedimiento limpiamos el microscopio cuidadosamente con una papel especial absorbente embebido en xilol.
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RESULTADOS ACTIVIDAD N°1:
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ACTIVIDAD N°2: Cuando ya teníamos todos los materiales, comenzamos con la actividad. Encendimos y preparamos el microscopio, ajustamos la muestra y comenz amos observando fijando el objetivo menor, el cual corresponde al 4X 4 X y la imagen observada fue fu e la siguiente:
Como se trata del primer objetivo, observamos una estructura no muy bien definida, donde se aprecian las células teñidas en conjunto, y algunas partes más pequeñas que llamaban la atención por su forma. Luego observamos con el objetivo 10X
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Con este objetivo ya es mas fácil observar las células, estructuras que estas forman, y estpacios que hay entre estas. Luego pasamos a observar con el aumento 40X:
Aquí se observaron las células que forman el h ígado de rata con ma yor claridad y, junto con ellas, sus núcleos. Observamos la estructura que está en la foto (que en realidad no sabemos que qu e representa) que forma parte del hígado. Por último aplicamos el aceite de inmersión a la muestra y procedimos a observar con el aumento de inmersión o 100X.
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DISCUSIÓN Ya con los registros de los resultados respectivos a cada muestra, debemos analizar los detalles de cada actividad.
ACTIVIDAD N°1: En la primera actividad luego del centrifugado, pudimos observar dos fases en el tubo, una sólida depositada en el fondo, la cual corresponde al pellet, y una líquida sobre este la cual corresponde al sobrenadante. El pellet obtenido corresponde al núcleo de las células, debido a que estos son los organelos más grandes, y por ende son los primeros en decantar, debido a esto podemos decir que el primer centrifugado corresponde a la fracción nuclear, luego en el segundo centrifugado obtuvimos los mismos resultados, solo con una degradación de color en ambas fases, en donde la materia que decantó corresponde a las mitocondrias, lisosomas y peroxisomas, por lo que podemos decir que corresponde a la fracción mitocondrial, y al sobrenadante como fracción microsomal, ya que su contenido correspondía a la membrana plasmática y retículo endoplasmático, debido a que estos son los más pequeños de las células.
ACTIVIDAD Nº3: En la segunda actividad se observo la muestra de higado con los objetivos 4x y 10x,los cuales no se pudo obserbar ninguna estructura llamativa ,solo se ve una imagen morada. en cambio en el objetivo 40x ya se pueden observar los nucleo con una distincion levemente morada ,ademas del citoplasma rosado ya que esta muestra esta teñida con hematoxilina y eosina. tambien en el objetivo 10x con aceite de inmersión en cual se observa con mas detalles los nucleos y si se observa con mayor detalle se puede percatar de la cromatina desenrollada.
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CONCLUSIÓN En síntesis podemos mencionar , que la identificación de un fraccionamiento subcelular, permite identificar los distintos organelos y la importancia de su existencia en la célula, debido a que estos en general producen todas las reacciones dentro de la célula. De manera general pudimos constatar que finalizada la actividad práctica, se pudo establecer un análisis acerca del fraccionamiento subcelular, y que el proc eso de centrifugación permite identificar y diferenciar claramente el pellet del sobrenadante. Como fue de esperar pudimos comprobar que con los conocimientos, estudios y posteriores investigaciones al terminar el práctico, nos dio paso a la comprobación de lo que anteriormente habíamos podido notar durante el laboratorio. Pudimos comprobar que el fraccionamiento subcelular es una técnica que nos permite obtener diferenciadamente cada uno de los organelos celulares, los cuales poseen diferentes componentes, los que reaccionan de distinta manera según sea s ea su metabolismo enzimático.
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BIBLIOGRAFÍA
Introducción a la biología celular y molecular, Albert 2° Edición
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