Laporan Praktikum Biologi Oral Praktikum II
BIOFILM BAKTERI
Oleh: Kelompok B3-B4 Annisa Galuh Prase!o"#$$$$"%% Prase!o"#$$$$"%% Aulia Rama&hani "#$$$$"%' (hrisiana A!u Maharani"#$$$$"%) F!rial Puri *a+ila"#$$$$ *a+ila"#$$$$"%, "%, hian A.ri!ani"#$$$$"'$ !ah /ina Firiani"#$$$$"'# Firiani"#$$$$"'# Re0ina Purnama 1I"#$$$$ 1I"#$$$$"'3 "'3 Lia Ismaul M"#$$$$"'4 Fiesa e2! K"#$$$$"'% ina Puspiasari "#$$$$ "#$$$$"'' "''
oseph Leonar&o "#$$$$"') (ornelia Melin&a "#$$$$ "#$$$$"', "', *a!u *ur Annisa / "#$$$$")" *a+illa i&!a5i "#$$$$")# Muhamma& Tau.ik Ari / "#$$$$")6 Anasasia Au&re! "#$$$$")% 7illar! esiree Rahar!ani "#$$$$ "#$$$$")' ")' M Lu.i "#$$$$")) Ri5ka 8i *ur "#$$$$"), "#$$$$"),
eparemen eparemen Biolo0i Oral Fakulas Ke&okeran Gi0i 9 *AIR Semester Ganjil 2013/2014
0
BAB I PE*A7LA* $1$ Laar Laar Belakan0 Belakan0
Biofilm merupakan kumpulan beberapa jenis mikroba ang meng!asilkan matriks lipopolisakari"a #LPS$ "an mempro"uksi matriks polimer se!ingga memiliki kemampuan perlekatan% &al ini "igunakan bakteri untuk pemberi nutrisi' pelin"ung ter!a"ap efek antibiotik' antiseptik' "esinfektan' sistem imun !ost' maupun persaingan "engan bakteri lain% (nti (ntibi biot otik ik
ti"a ti"ak k
"apa "apatt
meng meng!i !ila lang ngka kan n
biof biofil ilm m
kare karena na
a"an a"an a
matri atriks ks
polisakari"a%(ntibiotik !ana "apat membunu! bakteri planktoni)' tetapi koloni bakteri ang pa"at "i "alam biofilm ti"ak terpengaru! ole! efek antibiotik "an tetap a"a "an "apat "apat terus terus berkem berkemban bang% g% Sala! Sala! satu satu sifat sifat biofil biofilm m a"ala! a"ala! "apat "apat melepas melepaskan kan sel*se sel*sell planktoni) ang nantina "apat menempel pa"a permukaan ang lain "an menja"i biofilm baru% (pabila bakteri "i "alam biofilm ini terus berkembang' maka kemungkinan terja"ina biofilm ang baru akan menja"i lebi! besar% Biofilm !ana "apat "i!ilangkan "engan )ara mekanik seperti sikat gigi% Pa"a rongga rongga mulut' mulut' tak semua semua bakter bakterii "apat "apat meng!as meng!asilk ilkan an biofil biofilm%+ m%+amu amun' n' bakteri*bakteri seperti (% a)tinom)etem)omitans' S% mutans' "an P% gingi,alis "apat membentuk biofilm "i "alam rongga mulut% -aka "ari itu' penting "iketa!ui bagaimana proses pembentukan "an karakteristik biofilm% b iofilm% &al ini "apat "igunakan untuk melakukan penelitian selanjutna seperti menanggulangi resistensi biofilm' agar bakteri penebab penakit gigi "an mulut "apat "i!ilangkan%
$1# Tu Tu;uan ;uan Prakikum Prakikum
-engeta!ui -engeta!ui kemampuan kemampuan beberapa ma)am bakteri bakteri "alam pembentukan pembentukan biofilm biofilm se)ara in ,itro' aitu bakteri A.actinomycetemcomitans bakteri A.actinomycetemcomitans%% P. P.gingivalis "an gingivalis "an S.mutans% S.mutans%
$1#1$ Tu;uan Khusus 1
1% -enumbu!kan biofilm A. actinomycetemcomitans sebagai bakteri penebab utama perio"ontitis agresif 2% -enumbu!kan biofilm P. gingivalis sebagai bakteri penebab utama perio"ontitis kronis 3% -enumbu!kan biofilm S. mutans sebagai bakteri penebab utama karies gigi% $13 Ala &an Bahan a1 +1 <1 &1 e1 .1 01 h1 i1
.aan petri -ikro pipet Eppendorf abung falcon Anaerobic jar Inkubator Oese abung reaksi Stok bakteri
k1 Stok bakteri S%mutans l1 al"u ke"elai rpti)ase
#B Biosstems$ m1 g glukosa / ltr pa"a 3 5 . "alam .O2 106% n1 P!osp!ate Buffer (%
a)tinom)etem)omitans ;1 Stok bakteri P%gingi,alis
Saline
#PBS$' p& '2 o1 ristal 7iolet atau Safranin atau rp!an Blue
$14 (ara Ker;a
Pa"a praktikum ini' stok "an kultur bakteri tela! "ipersiapkan sebelumna' se!ingga ti"ak "ilakukan proses persiapan bakteri saat praktikum% 1% -emanen sel ang melekat pa"a tabung reaksi "engan menggunakan ,orte8 "an "ilakukan sentifugasi% 2% -ensuspensikan en"apan/ pelet ang "i"apatkan pa"a PBS #p& '2$ se!ingga "i"apatkan kekeru!an ang "iinginkan setara "engan stan"ar 0'9 -):arlan"% 3% -elakukan penge)etan "engan menggunakan kristal ,iolet atau trp!an blue atau safranin setela! tabung kosong% 4% -enilai biofilm% Biofilm "inilai ber"asarkan "ari !asil pengamatan pa"a "in"ing tabung reaksi "an pengamatan "ilakukan ole! 3 #tiga$ orang pengamat in"epen"en % Pemberian skor pa"a biofilm ; 0 ; apabila ti"ak terbentuk biofilm' 1 ; pembentukan biofilm lema!' 2 ; pembentukan biofilm se"ang "an 3 ; pembentukan biofim kuat% emu"ian "i!itung reratana%
2
BAB II TI*AA* P/TAKA
#1$ Bio.ilm #1$1$ e.inisi
Biofilm a"ala! kolonisasi "ari mikroorganisme menempel permukaan substrat "an "ilapisi matriks ekstraseluler ang tipis% Biofilm bakteri melin"ungi bakteri "ari pengaru! negatif lingkungan%Bakteri menja"i lebi! ta!an ter!a"ap antibiotik% Bakteri memiliki kemampuan untuk menempel pa"a permukaan pa"at' pa"a saat kon"isi tersebut memungkinkan "ija"ikan sebagai me"ia pertumbu!an "an perkembangan bakteri tersebut maka lama kelamaan bakteri tersebut akan terakumulasi menja"i biofilm%
3
Biofilm a"ala! sekumpulan mikroorganisme ang menempel pa"a suatu permukaan pa"at ole! perantara senaa ekstraseluler ang "i pro"uksi ole! bakteri ang terlibat% :aktor ang mempengaru!i pembentukan biofilm "iantarana a"ala! jenis permukaan' asal isolat' kon"isi me"ia pertumbu!an' "an kon"isi anaerobik #.!ara)lis "an -ars!al' 1<<0$% #1$1# Proses pem+enukan +io.ilm
a% Perlekatan aal bakteri i% Pembentukkan biofilm "iregulasi ole! faktor genetik "an lingkungan "ari bakteri% Stu"i genetik menunjukkan ba!a mobilitas bakteri' protein sel membran' "an ekstraseluler polisakari"a "an signal antar molekul memerankan peran ang penting "alam pembentukkan biofilm% Bakteri memiliki "ua tipe protein ang berkembang a"a permukaan bakteri' aitu flagel "an fimbri atau fili% :lagel memiliki bentuk ang panjang "an berbentuk spiral se!ingga memu"a!kan bakteri untuk bera"a pa"a me"ia ang )air' se"angkan fimbri memiliki bentuk ang pen"ek "an lurus ang memu"a!kan bakteri untuk bergerak pa"a permukaan substrat% -obilitas bakteri ole! flagella "ibutu!kan "alam koneksi antara bakteri "an permukaan'
se"angkan
fimbri
"iperlukan
"alam
pembentukkan
mikrokoloni bakteri% oneksi antara bakteri"an permukaan substrat "ijaga ole! protein sel membran ang spesifik aitu a"esin% =ika akti,itas a"esin "i!ambat' maka ti"ak akan terbentuk biofilm% b% Perlekatan permanen bakteri i% >ksopolisakari"a #>PS$ berperan penting "alam pembentukkan biofilms% (kti,asi gen "ibutu!kan untuk sintesis >PS% Sintesis >PS "apat terja"i setela! interaksi bakteri "an permukaan substrat tela! stabil% Bakteri akan ke!ilangan kemampuan membuat biofilm apabila gen ang bertanggung jaab "alam sintesis >PS mengalami inakti,asi% Selanjutna bakteri akan saling mengirim sinal "an membentuk koloni' se!ingga terbentuk biofilm ang merupakan organisme multiseluler% )% -aturasi "an perkembangan biofilm i% Bakteri ang tela!membentuk koloni akan mengalami pematangan "an selanjutna koloni bakteri tersebut akan siap untuk menebar "an membentuk koloni "itempat lain% Pa"a ta!ap ini bakteri memiliki 4
resistensi ter!a"ap faktor lingkungan ang "apat merusak bakteri tersebut seperti antibiotik "an faktor lainna% #-ari) S' et al' 200$ #1$13 Fun0si +io.ilm +a0i +akeri
:ungsi utama pembentukkan biofilm ole! bakteri a"ala! untuk berta!an !i"up "an melin"ungi "iri "ari lingkungan se!ingga bakteri "apat tumbu! "engan baik%#-a"igan -' et al' 200?$ 1% Perta!anan Biofilm berfungsi sebagai mekanisme perta!anan bagi bakteri "engan )ara meningkatkan resistensi ter!a"ap sel*sel ang "apat membunu! bakteri' fagositosis ole! sel*sel sistem imun tubu!' "an penetrasi "ari senaa bera)un seperti atibiotik% Bakteri "i "alam biofilm lebi! resisten 10*1%000 kali "iban"ingkan bila ti"ak "i "alam biofilm% 2% Pelekatan pa"a substrat engan menggunakan biofilm' bakteri "apat melekat pa"a permukaan ang kaa akan nutrisi seperti jaringan sel !ean' atau permukaan substrat pa"a sistem ang mengalir% 3% olonisasi Pembentukan biofilm membantu sel*sel bakteri untuk !i"up ber"ekatan "an membentuk koloni%memfasilitasi komunikasi antar sel "engan molekul sinal' "an meningkatkan peluang pertukaran materi genetik% 4% .ara !i"up alami bakteri i alam' biofilm a"ala! )ara !i"up alami bagi beberapa bakteri tertentu "engan alasan terbatasna nutrisi' ti"ak seperti me"ium buatan ang kaa akan nutrisi bagi bakteri% #-a"igan -' et al' 200?$
#1$14 Keunun0an &an keru0ian +io.ilm
Biofilm bisa bera"a "i lingkungan alam' in"ustri maupun "i kese!atan% ebera"aan biofilm bisa menguntungkan bisa merugikan' tergantung "imana "an kapan tumbu!na% Pa"a 9
instalasi
pengola!an
air
limba!'
bioreme"iasi
"an
biofilter'
biofilm
justru
"ipa)u
pembentukannna karena membantu proses treatment% i bi"ang kese!atan biofilm "ikenal sangat berba!aa karena menja"i penebab "ari 06 penakit% Biofilm "i kateter "an peralatan kese!atan lainna bisa menebabkan infeksi "an ba!kan juga penolakan implant% Beberapa penakit ang "isebabkan biofilm a"ala! "ental )aries' perio"onitis' en"o)ar"itis' infeksi paru' infeksi kan"ung kemi!' infeksi ang terkait "engan peralatan artifisial #implant$% i lain pi!ak "i "alam sistem pen)ernaaan' terutama "i usus besar kebera"aan biofilm sangat bermanfaat bagi kese!atan #!ttp;//%)!em*is*tr%org$% #1$16 Komposisi +io.ilm
omposisi biofilm ter"iri "ari sel*sel mikroorganisme' pro"uk ekstraseluler'"etritus' polisakari"a sebagai ba!an pelekat' "an air ang a"ala! ba!an penusun utama biofilm "engan kan"ungan !ingga <6% Polisakari"a #polimer "ari monosakari"a atau gula se"er!ana$ ang "ipro"uksi ole! mikrob untuk membentuk biofilm termasuk eksopolisakari"a #>PS$ aitu polisakari"a ang "ikeluarkan "ari "alam sel% >PS ang "isintesis ole! sel mikrob berbe"a be"a komposisi "an sifat kimiai "an fisikana% Beberapa a"ala! makromolekul ang bersifat netral' namun maoritas bermuatan karena kebera"aan asam uronat #(sam *glukuronat$' (sam * galakturonat' "an (sam *manuroniat% ("a biofilm ang bersifat kaku karena >PS*na ter"iri "ari ikatan @*1'4 atau @*1'3 glikosi"a #ikatan monosakari"a monomer penusun polisakari"a$ seperti >PS 8ant!an gum ang "i!asilkan ole! Aant!omonas )ampestristetapi a"a juga ang bersifat fleksibel karena memiliki ikatan *1'2 atau *1'? glikosi"a ang banak "itemukan pa"a "ekstran Beberapa )onto! >PS selain 8ant!an gum a"ala! asam kolanat ang "ipro"uksi ole! >s)!eri)!ia )oli' alginat ole! P% aeruginosa' "an galaktoglukan ole! 7ibrio )!olerae% Ba!an* ba!an
penusun
biofilm
ang
lain
)onto!na
a"ala!
protein'
lipi"'
"an
lektin
#!ttp;//i"%ikipe"ia%org/iki/Biofilm$% Struktur "ari suatu biofilm a"ala! unik tergantung "ari lingkungan tempatna bera"a' )onto!na a"ala! kan"ungan nutrisi "an kea"aan fisik% Selain itu' "i alam' sangat jarang ter"apat biofilm ang !ana ter"iri "ari satu spesies' biasana biofilm tersusun "ari beberapa spesies "alam lapisan*lapisan ang berbe"a% Biasana mikroorganisme fotosintetik a"a "i permukaan paling atas' mikroorganisme kemoorganotrof anaerob fakultatif "i bagian tenga!' se"angkan "i ?
bagian "asar a"ala! mikroorganisme anaerob pere"uksi sulfat% Pa"a bagian atas' )a! aa mata!ari lebi! mu"a! "i"apat se!ingga "apat "igunakan untuk fotosintesis' se"angkan bagian tenga! "apat "i!uni ole! mikrob kemoorganotrof fakultatif anaerob karena "apat mentolerir kan"ungan u"ara ang se"ikit serta banak "apat mengakses ba!an organik sebagai sumber energina%Pa"a bagian "asar' ti"ak ter"apat kan"ungan u"ara se!ingga mikrob anaerob pere"uksi sulfat "apat tumbu! "an energi "engan )ara mere"uksi sulfat #!ttp;//%permi%or%i"/in"e8$% Pertumbu!an biofilm ini bergantung pa"a substansi matri8 ba!an ang "igunakan% -atri8 ba!an ang "igunakan ini akan mene"iakan aseptor elektron bagi mikroba untuk proses oksi"asi "alam rangka meng!asilkan energi% Selain itu' pembentukan biofilm ini bergantung pa"a keragaman/,ariasi jenis mikroba ang tumbu!% Biofilm "apat "ibentuk "ari satu jenis mikroba saja' namun se)ara alami !ampir semua jenis biofilm ter"iri "ari )ampuran berbagai jenis mikroba% Sebagai )onto! fungi' alga' east #ragi$' amuba #bakteri$ "an jenis mikroba lainna% Semakin beragam mikroba ang tumbu!' maka biofilm ang terbentuk akan semakin )epat "an kompetitif% Biofilm akan terbentuk pa"a permukaan ang lembab' !al ini "isebabkan mikroba "apat berta!an !i"up jika ia men"apatkan kelembaban ang )ukup% Pa"a prosesna biofilm mengeksresikan suatu ba!an ang li)in #berlen"ir$ pa"a sebua! permukaan' kemu"ian akan menempel "engan baik "i permukaan tersebut jika kea"aan minimum bakteri tersebut terpenu!i% Beberapa lokasi ang "apat "ija"ikan tempat !i"up biofilm meliputi material alami "i atas "an "i baa! tana!' besi' plastik "an jaringan sel #(llison' 2000$% Biofilms menjaga kesatuan formasina "engan saling berikatan satu sama lain pa"a untaian molekul gula% &al tersebut ang kemu"ian "isebut sebagai >PS atau e8tra)ellular unsur polmeri)' aitu terbentukna polimer antar biofilm' se!ingga kemungkinan untuk melepas menja"i sulit% arena "engan mengekskresikan >PS ini' masing*masing biofilm sangat mungkin saling mensuport untuk berkembang "alam "imensi ang kompleks "an sangat erat #utu!$% -atriks ang terbentuk "engan >PS ini akan melin"ungi sel "an memu"a!kan komunikasi antar sel melalui isarat biokimia% Beberapa biofilms bera"a "alam fasa )air' "imana kea"aan tersebut membantu sel "alam men"istribusikan Cat ang "ibutu!kan "an memberi sinal molekul pa"a sel #Lappin an" &illar' 2003
%$
#1# Streptococcus mutans #1#1$ e.enisi &an Mor.olo0i
Streptococcus mutans termasuk kelompok Streptococcus viridans ang merupakan anggota floral normal rongga mulut%S. mutans memiliki sifat *!emolitik "an komensal oportunistik%Bakteri inipaling berperan "alam proses terja"ina karies gigi% Streptococcus mutans merupakan bakteri gram*positif #D$ ang ter)at biru gelap atau ungu "engan pearnaan gram% &al ini "ikarenakan sifat fisik "in"ing selna ang tebal "an "apat memperta!ankan arna kristal ,iolet% in"ing selna ter"iri "ari pepti"oglikan #murein$ "an asam teikoat ang men)ega! protoplasma mengalami lisis osmotik "an memberi bentuk pa"a sel#Ean' 2004$% Streptococcus mutans berbentuk kokus #bulat$ "engan formasi rantai panjang apabila "itanam pa"a me"ium ang "iperkaa seperti pa"a Brain Heart InfusionBroth #B&IB$' se"angkan bila "itanam "i me"ia agar akan memperli!atkan rantai pen"ek "engan bentuk sel ti"ak beraturan% Streptococcus mutans ini merupakan bakteri anaerob fakultatif ang bersifat non motil #ti"ak bergerak$' ber"iameter 1*2 Fm' ti"ak membentuk spora%Bakteri ini tumbu! se)ara optimal pa"a su!u sekitar 10. * 400.%Streptococcus mutans bersifat asi"ogenik #meng!asilkan asam$ "an asi"urik #mampu tinggal pa"a lingkungan asam$' "an meng!asilkan suatu polisakari"a lengket ang "isebut "engan "e8tran#Ean' 2004$% Gambar 1% Strepto)o))us mutans #Pan"it et al' 2011$
#1#1# Fakor irulensi
Sala! satu faktor ,irulensi Streptococcus mutans a"ala! kemampuanna untuk menempel pa"a permukaan gigi "an membentuk biofilm% Streptococcus mutans menempel ke permukaan
gigi' meng!asilkan len"ir' membela! "an meng!asilkan koloni "alam lapisan len"ir serta membentuk biofilm#Pan"it et al' 2011$% Streptococcus mutans menempel se)ara spesifik pa"a pelikel gigi' tumbu! "an mensintesis kapsul "ekstran ang menempelkan bekteri ini ke enamel% Streptococcus mutans juga mampu meme)a! sukrosa menja"i glukosa "an fruktosa% Glukosa "ipolimerisasi menja"i polimer "ekstran ekstraseluler ang membentuk matriks plak% Glukosa juga "igunakan sebagai sumber karbonse!ingga terja"i pro"uksi asam laktat "alam biofilm #plak$ "an menebabkan karies gigi% Selain itu' Streptococcus mutans juga memiliki toleransi asam ang relatif tinggi #aciduricity$ se!ingga "apat berta!an "i tempat "engan p& ang asam% Streptococcus mutans juga bersifat acidogenic ang "apat mempro"uksi asam laktat "ari gula "iet se)ara )epat #Lin !u et al' 200?$% #1#13Pao0enesa &alam Karies
Streptococcus mutans merupakan spesies patogen "an agen primer penebab karies gigi' terutama "alam ta!ap inisiasi "an perkembangan karies%etika Streptococcus mutans tumbu! "alam biofilm' sel*sel menjaga keseimbangan metabolisme ang melibatkan pro"uksi "an "etoksifikasi% Biofilm a"ala! agregat "ari mikroorganisme "i mana sel*sel menempel satu sama lain#Ean' 2004$% Biofilm oral terus*menerus bera"aptasi ter!a"ap peruba!an lingkungan%alam menanggapi peruba!an tersebut' koloni bakteri berkembang "an berta!an !i"up "i rongga mulut "engan fungsi spesifikna#Pan"it et al' 2011$% Streptococcus mutans mempunai strategi untuk ber!asil berkoloni "an "ominan "alam rongga mulut%Pertumbu!an "an metabolisme Streptococcus mutans meruba! kon"isi lingkungan' seperti p&' koagregasi' "an keterse"iaan substrat' se!ingga memungkinkan organisme sekun"er lain juga berkolonisasi "an membentuk plak gigi% Plak gigi merupakan prekursor kerusakan gigi ang berisi lebi! "ari ?00 mikroorganisme ang berbe"a#Ean' 2004$% Streptococcus mutans memainkan peran
utama
"alam kerusakan
gigi "engan
memetabolisme sukrosa menja"i asam laktat menggunakan enCim glukansukrase% Proses metabolisme sukrosa ini mengakibatkan peruba!an lingkungan rongga mulut menja"i asam se!ingga menebabkan enamel gigi ter"emineralisasi "an rentan ter!a"ap kerusakan% Streptococcus mutans menggunakan sukrosa untuk meng!asilkan polisakari"a berbasis "ekstran ang
lengket "an memungkinkan Streptococcus mutans beragregasi "an membentuk
plak%Streptococcus
mutans
meng!asilkan
"ekstran
melalui
enCim
"ekstransukrase <
#!eksosltransferase$ menggunakan sukrosa sebagai substrat "engan reaksi sebagai berikut; #7inogra"o, et al' 2004$ n sukrosa H #glukosa$ n D n fruktosa #1#14 Bio.ilm &an S.Mutans
arena sel biofilm berusia 3*!ari S% mutans menunjukkan pola ekspresi pro*proteinna berbe"a "iban"ingkan "engan sel planktonik' protein mantan pression "alam sel biofilm baru terbentuk "iseli"iki untuk meli!at apaka! peruba!an ang terja"i langsung setela! kontak "engan permukaan%alam stu"i ini' gel ke)il # )m strip kering immobiline$ "igunakan karena beban protein terlalu ke)il untuk penggunaan besar #14 )m$ gel% Eesolusi gel ke)il lebi! ren"a! "aripa"a gel besar "an karena protein ang lebi! ren"a! beban !ana protein "engan kelimpa!an tinggi akan terungkap% ari 124 protein "ianalisis' 29 menunjukkan peningkatan EES sementara menunjukkan EES berkurang%Satu protein !ana "isajikan "alam sel biofilm sementara 9 protein "iekspresikan "alam sel planktonik saja%ua pulu! tiga protein "ii"entifikasi "engan ekstrapolasi i>+*tifi)ations "ari gel besar "ari per)obaan sebelumna% Peruba!an ang paling menonjol "alam sel*sel biofilm baru "itaati a"ala! ekspresi "isempurnakan enCim glikolitik% uju! enCim; enolase' kinase p!osp!ogl)erate' gliseral"e!i"a* 3*fosfat "e*!"rogenase' ?*fosfofruktokinase' fruktosa bisp!osp!ate al"o*lase' kinase piru,at kinase "an p!op!ogl)erate' semua milik jalur glikolisis' ang "itingkatkan% #+eilan"s' 200$ #13 Actynobaccilus actynomicetemcomitans
Actinobacillus actinomycetemcomitans merupakan gram negatif' )o))oba)illus' non motil ang berkolonisasi pa"a rongga mulut% A. actinomycetemcomitans a"ala! sala! satu bakteri penebab beberapa penakit perio"ontal ang para!' termasuk localized juvenile periodontitis early!onset periodontitis dan rapidly progressive periodontitis. A. actinomycetemcomitans "apat masuk ke"alam submukosa "an menebabkan infeksi non*oral' termasuk ba)teremia' infeksi en"okar"itis "an abses lokal #aplan =B' et al. 2003$% #131$ Mor.olo0i koloni A<ino+a
10
-orfologi koloni biofilm A.Actinomycetemcomitansseperti to"er! and mushroom!shaped angumumna "apat "iamati pa"abakterilain' seperti Pseudomonasaeruginosa' P.fluorescens #ibrioparahaemolyticus' P.putida #.cholerae' "an Salmonellaspp% #2$% Selain itu'koloni biofilm A.actinomycetemcomitansmenunjukkanperbe"aan' siklus !i"upfenotipik perlekatan
selplanktonke
permukaan'
pertumbu!anasimetris'
ang"itan"ai ole!
lekukanmikrokoloni
ang
menunjukkan)iri morfologikompleks' "ana"ana pelepasansel"aribiofilmkoloni #aplan =B' et al. 2003$% aplan
"an
:ine
menunjukkan
(% Actinomycetemcomitansmampumeng!asilkan selke"alamme"ia
)air"ansel*sel
pa"apermukaankultur"an
ang
sel
ba!a
koloni
tunggalatau
"i!asilkan
biofilm
sekelompokke)il
tersebut"apatmenempel
membentukkolonibiofilmbaru'
ang
memungkinkanbiofilmuntukmenebar #aplan =B "an :ine &' 2002
%$#131# Tahap Pem+enukan Bio.ilm Bakeri
Pembentukan biofilm "ibagi menja"i tiga ta!ap' aitu; perlekatan sel ke permukaan' pertumbu!an sel menja"i koloni biofilm "an detachment sel "ari koloni ke lingkungan sekitarna#Eosan "an Lamont' 2000$% 1$ a!ap pertama Pa"a ta!ap aal' interaksi re,ersibel antara sel bakteri "an permukaan "ime"iasi ole! non!specific $ifshitz!van der %aals' asam*basa Leis "an gaa elektrostatik% Perlekatan sementara ini "iperkuat ole! host "an a"!esin jaringan spesifik ang terletak pa"a permukaan sel bakteri atau pelengkap seluler seperti pili "an fimbriae #Eosan "an Lamont' 2000$% Proses tersebut meng!asilkan perlekatan ire,ersibel "ari sel bakteri ke permukaan% alam plak gigi' ang "apat ter"iri "ari ratusan spesies bakteri' kolonisasi pa"a permukaan gigi mengikuti ordered progression' aitu "engan a"!esi aalspesies pioneer ke permukaan enamel "iikuti ole! perlekatan spesies koloni lanjutan "ari koloni ang su"a! melekat sebelumna #-ars!' 2004$% 2$ a!ap ke"ua Pembentukan biofilm melibatkan multiplikasi bakteri pa"a permukaan "an seiring "engan sintesis matriks polimer ekstraseluler% -atriks memegang sel*sel bakteri se)ara bersamaan "alam massa "an perlekatan kuat massa bakteri ke permukaan "asarna% Beberapa )onto! komponen polimer matriks biofilm ang "ipro"uksi ole! bakteri rongga 11
mulut termasuk polisakari"a glukan Streptococcus mutans #Banas "an 7i)kerman'2003$' protein fimbriae ang "ipro"uksi ole! Aggregatibacter actinomycetemcomitans "an Porphyromonas gingivalis #Lamont et al % ' 2002$' "an e&tracellular polymeric substance #>PS$' untaian gan"a +( "alam biofilm ang "i!asilkan ole! A. actinomycetemcomitans S. mutans dan S. intermedius #Inoue'et al %' 2003$% Biomassa biofilm <06 ter"iri "ari >PS ang mene"iakan struktur scaffold untuk koloni biofilm% Selain itu' >PS juga berfungsi melin"ungi microenvironment "ari sekresi enCim "an larutna nutrisi' serta molekul biologi lain "an Cat antibiotik ang berasal "ari luar biofilm% -atriks >PS juga "apat meningkatkan resistensi ter!a"ap antibiotik "an perta!anan host ang "itunjukkan ole! sel*sel biofilm baik sebagai diffusion barrier ' atau sebagai pengikat agen antimikroba se)ara langsung "an men)ega! akses ke sel biofilm #-a! "an Ooole' 2001$% emu"ian pertumbu!an sel*sel bakteri pa"a permukaan mengara! ke kematangan perkembangan koloni biofilm ang mengan"ung jutaan sel ang pa"at berkumpul menja"i massa berbentuk pillar! and mushroom!shaped #&all*Stoo"le'et al %' 2004$% Struktur tersebut "iselingi "engan saluran berisi )airan ang bertin"ak sebagai sistem sirkulasi primitif' ang memungkinkan pertukaran nutrisi "an pro"uk !asil metabolisme sel bakteri "engan fase bul' fluid % Selain itu' "i"alam biofilm ter"apat ruang internal ang ti"ak mengan"ung sel% engan "emikian' struktur koloni biofilm "easa ang komplekssangat berbe"a% Perbe"aan microenvironment seperti p&' konsentrasi oksigen' nutrisi "an "ensitas sel "alam koloni biofilm akan meng!asilkan !eterogenitas akti,itas metabolisme "an repro"uksi sel*sel ang terletak pa"a bagian koloni ang berbe"a% Sel angti"ak aktif se)ara metabolik terletak pa"a bagian "alam koloni mungkin resisten ter!a"ap tin"akan agen antimikroba ang menargetkan sel*sel ang tumbu! se)ara aktif#:u8 .('et al %' 2004$% 3$ a!apketiga a!ap terak!ir pembentukanbiofilma"ala!detachment sel"ari kolonibiofilm "anpenebaranna
ke
lingkungan%&al
inimerupakan
ta!appenting
"arisiklus
!i"upbiofilmang berkontribusi untukpenebaranbiologi' kelangsungan !i"up bakteri' "anpenularan penakit%Sepertita!ap pembentukan biofilm lain' penebaranbisa menja"i proses kompleks ang melibatkanbanaksinallingkungan' jalur trans"uksi sinal' "an efektor%i"ak
a"amekanisme
tunggalpenebaranbiofilm
ang
"igunakanole!
semuabakteri#aratan "anJatni)k' 200<
%$12
#14 Porphyromonas gingivalis
Porphyromonas (ingivalis merupakan bakteri anaerob gram negati,e' berbentuk batang' ti"ak berspora' tak puna alat gerak #non!motile$% ebanakan sel "i "alam me"ia' berukuran ke)il "ari 0'9*0' !ingga 1'0*1'9 Fm' tetapi terka"ang a"a ang lebi! panjang 4*? Fm' !al ini mungkin "isebabkan ole! peruba!an bentuk% Permukaan koloni pa"a me"ia "ara!' berarna !itam' lembut' berkilauan' )embung' berbentuk sirkuler%oloni "apat beruba!*uba!%oloni ka"ang ti"ak berpigmen Jarnana mulai menggelap "ari tepi keara! pusat setela! 4* !ari% #Kni,ersit of (lberta' 2003$ P%gingi,alis "apat "ii"entifikasi melalui karakteristikna ang berpigmen !itam' ka"ang* ka"ang berkapsul' anaerob' golongan )o)oba)illus gram negati,e% #Brunner et al' 2010$% Pigmen !itam tersebut berasal "ari akumulasi !aem ang tumbu! pa"a me"ia ang mengan"ung "ara!% omponen !aem tersebut merupakan "eri,at proteolitik' pro"uk "egra"asi !emoglobin' "an protein ang membaa !aem seperti !aemape8in "an !aemalbumin% #Smalle et al' 2011$ Pertumbu!an P% gingi,alis "ipengaru!i ole! a"ana protein !"rolsates' seperti ; trpti)ase' proteose peptone "an ekstrak east% Pertumbu!anna "apat "itingkatkan "engan a"ana 0'9 0'6 +a.l "alam "ara!% Pro"uk fermentasi aang utama a"ala! n*butirat "an asam asetat% Kntuk tingkat ang lebi! ren"a! juga "ipro"uksi asam propionat' iso*butirat' fenilasetat' "an iso,aleri)% .steine proteinases "an )ollagenases juga "ipro"uksi% in"ing sel pepti"ogl)an mengan"ung lisin sebagai asam "iamino% e"ua*"uana 3*!"ro8late" fatt a)i" "an non* !"ro8late" ter"apat "i "alamna% Kntuk non!"ro8late" ter"iri atas sebagian besar iso* met!l ang ber)abang' "engan iso*.19;0%< #)itiCen"ium' 2013$ Bakteri ini banak "itemukan "alam rongga mulut' "i mana P% gingi,alis terlibat "alam bentuk*bentuk tertentu "ari penakit perio"ontal' serta peakit saluran pen)ernaan bagian atas' saluran pernapasan' "an usus besar% Bakteri ini mengeluarkan enCim kolagenase se!ingga menebabkan "egra"asi kolagen pa"a penakit perio"ontal kronik% &al ini tela! "itunjukkan "alam uji in ,itro ba!a P% gingi,alis "apat menerang fibroblast gingi,a "an "apat berta!an !i"up "i "alamna ba!kan "engan a"ana antibioti)% P% gingi,alis juga menerang sel*sel epitel gingi,a "alam jumla! tinggi' "i mana kasus% ke"ua bakteri "an sel*sel epitel berta!an selama
13
aktu
ang
lama% inggina
ka"ar
antibo"i spesifik
"apat
"i"eteksi
pa"a pasien
menembunikan P% gingi,alis%#-% +aito' et al'200$ #141$ Kemampuan Mem+ua Bio.ilm
Pembentukan biofilm plak gigi ti"ak tergantung pa"a satu atau ba!kan sejumla! spesies% +amun a"a interaksi ang kompleks antara spesies berbe"a karena proses adherence pa"a permukaan keras' "engan bakteri pioneer #terutama bakteri )o))oi"al$' koloni ke"ua' "an ak!irna koloni ak!ir% Bakteri P. gingivalismemiliki :im( atau fimbriae maor ang berperan "alam perlekatan juga me"iator in,asi "an kolonisasi pa"a sel !ost% Bakteri ini juga memiliki :imbriae minor #-fa1$ ang memiliki peran "alam perkembangan biofilm "an perlekatan "engan bakteri lain% Selain itu' bakteri P. gingivalismemiliki gen penan"i Egp(' GP "an !emaglutinin ( #&aga$ ang "iekspresikan setela! inkubasi "engan ). denticola%Protein !emagglutinin berperan meningkatkan kapasitas melekat P.gingivalis "engan spesies bakteri lainna% Gen tersebut juga berperan "alam perkembangan "an maturasi biofilm%#-euri) 7' et al' 2013 omponen utama ang mengatur kolonisasi "an ,irulensi P%gingi,alis a"ala! ekspresi "ari ke"ua fimbriae' baik fimbria panjang "an pen"ek% :imbriae panjang ter"iri "ari subunit protein :im(' se"angan fimbriae pen"ek ter"iri "ari subunit protein -fa1% :ungsi "ari fimbriae panjang a"ala! untuk perlekatan "an in,asi ke sel epitel gingi,al' resorpsi tulang' ko*agregasi "engan isolate rongga mulut lainna' serta pembentukan biofilm% :imbriae pen"ek "ibutu!kan "alam proses autoagregasi% #.!ristop!er et al' 2010M &ajis!engallis et al' 2011M ribble et al' 2013$ olonisasi "ental plak biofilm ole! P%gingi,alis juga "ime"iasi ole! perlekatan ter!a"ap molekul sali,a "an juga ter!a"ap koloni*koloni bakteri ang su"a! terlebi! "ulu a"a seperti strepto)o))i% P%gingi,alis "apat melekatkan "iri ke Strepto)o))us gor"onii melalui fimbria #:im($*"epen"ent manner "an membentuk mikrokoloni "ari biofilm untuk men"ukung lingkungan mikro ang men"ukung berkembangna biofilm% #Aie et al' 2004$
14
BAB III 7A/IL PRAKTIKM
1% ultur ketiga bakteri setela! "i*centrifugeuntuk men"apatkan pellet "an supernatan
2% Pellet ang tersisa setela! supernatant "iambil' lalu "itamba!kan larutan PBS sebanak 2 ml' "ilanjutkan "engan )entrifuge
3% Proses pen)u)ian seperti pa"a poin 2 "ilakukan sebanak tiga kali
19
4% Supernatan ang "i!asilkan "ari )entrifuge pa"a proses pen)u)ian ang terak!ir "ipin"a!kan ketabung eppen"orf untuk menimpan kultur bakteri
9% Pellet ang tersisa lalu "ilakukan penge)atan "engan menamba!kan
larutan safranin
sebanak 2 ml
ari gambar !asil ak!ir "i atas' "i"apatkan !asil lapisan biofilm "ari kuman A. actinomycetemcomitans #tabung paling kiri$ ang paling nata "an jelas terli!at' ang akan "ijelaskan pa"a bagian pemba!asan%
1?
BAB I PEMBA7A/A* A* KE/IMPLA*
41$ Pem+ahasan Biofilma"ala!kumpulansel mikroorganisme'
k!ususna bakteri' ang
melekat
"i
suatupermukaan"an"iselimutiole!pelekatkarbo!i"ratang "ikeluarkanole!bakteri%Biofilmterbentukkarenamikroorganisme)en"erungmen)iptakanlingkunga nmikro"anrelung
#niche$
merekasen"iri%Biofilm
memerangkapnutrisiuntukpertumbu!anpopulasimikroorganisme"anmembantumen)ega!lepasna sel*sel"aripermukaanpa"asistem ang mengalir% Praktikum ini "ilakukan untuk mengeta!ui kemampuan beberapa ma)am bakteri "alam pembentukan biofilm se)ara in ,itro' aitu bakteri A.actinomycetemcomitans' P.gingivalis "an S.mutans%
"ari
!asil
praktikum "apat
"ili!at
jika
lapisan biofilm
"ari
bakteri A.
actinomycetemcomitans #tabung paling kiri$ ang paling nata "an jelas terli!at' se"angkan bakteri S.mutans terli!at namun paling ti"ak jelas "iban"ingkan ketika bakteri tersebut% A. actinomycetemcomitansa"ala! bakteri gram negatif "alam rongga mulut ang merupakan sala! satu penebab penakit perio"ontal%etika "ikultur "alam )rypticase Soy Broth #)SB$' A. actinomycetemcomitansmembentuk lapisan biofilm pa"a permukaan ka)a%plastik' atau saliva!coated hydro&yapatite' !al
ini "iperkirakan memiliki peran penting "alam
kemampuan bakteri menebabkan penakit "i rongga mulut% =ika lapisan ini "ili!at "i mikroskop maka akan terli!at morfologi koloni biofilm A. actinomycetemcomitans ang tumbu! pa"a ka)a% apat "ili!at ba!a A. actinomycetemcomitans berkembang asimetris' koloni biofilm memiliki bentuk ang kompleks' termasuk lapisan sel pa"at "i luar koloni "an sel nonaggregate" ng besar' rongga transparan "i bagian "alam koloni% oloni biofilm ang mature merilis sel tunggal atau kelompok ke)il sel ke "alam me"ia% Sel*sel ini "irilis melekat ke permukaan "an membentuk koloni baru' ang memungkinkan biofilm untuk menebar#aplan et al 2003$% Ber"asarkan !asil praktikum "apat "ili!at jika bakteri A.actinomycetemcomitans mampu membentuk biofilm paling )epat "iantara ketiga bakteri tersebut% Pa"apraktikumini"ilakukanpenumbu!an biofilm pa"a 3 bakteri"iantarana biofilm A. actinomycetemcomitanssebagaibakteripenebabutama
perio"ontitis
agresif'
biofilm
P.
1
gingivalissebagaibakteripenebabutama
perio"ontitis
kronis'
"an
biofilm
mutanssebagaibakteripenebabutamakariesgigi%Setela!"ilakukanpen)u)iansebanak
S.
3
kali
"enganmenggunakan PBS #p&;'2$' "i"apatkanen"apan/pellet se!inggater"apatkeru!an ang "iinginkansetara"enganstan"ar 0'9 -):arlan" ang "apat"igunakankembaliuntukpemeriksaan biofilm berikutna"aribakteritersebut% emu"iansetela!tabungkosongmakapa"atabungreaksi"ilakukanpenge)atan"enganmengg unakankristal
,iolet
atautrp!an
blue
atausafranin%
Setela!itu"ariketigabakteritersebut"i"apatkan!asilber"asarkan"ari!asilpengamatanpa"a"in"ingta bungreaksi%Kntuk (% Actinomycetemcomitans"iberiskor 3 karenaterli!atpembentukan biofilm ang
kuatpa"a"in"ingtabung
karenaterli!atpembentukan
reaksi'
biofilm
kemu"ian P.
ang
gingivalis"iberi
se"ang"anStreptococcus
skor
2
mutans"iberiskor
1
karenaterli!atpembentukan biofilm anglema!% 41# Kesimpulan
Praktikum ang "ilakukan untuk mengeta!ui kemampuan beberapa "alam
pembentukan
biofilm
se)ara
actinomycetemcomitanssebagaibakteripenebabutama gingivalissebagaibakteripenebabutama
in
ma)am bakteri
,itro'
aitu
perio"ontitis
agresif'
perio"ontitis
kronis'
"an
biofilm A. biofilm biofilm
P. S.
mutanssebagaibakteripenebabutamakariesgigi meng!asilkan kesimpulan ba!a kemampuan setiap
bakteri
untuk
mempro"uksi
(% Actinomycetemcomitans"iberiskor
3
biofilm
berbe"a
karenaterli!atpembentukan
be"a%
Kntuk
biofilm
ang
kuatpa"a"in"ingtabung reaksi' kemu"ian P. gingivalis"iberi skor 2 karenaterli!atpembentukan biofilm ang se"ang"anStreptococcus mutans"iberiskor 1 karenaterli!atpembentukan biofilm anglema!%
1
AFTAR P/TAKA
(llison' % #2000$% .ommunit Stru)ture an" .o*Operation in Biofilms% .ambri"ge; .ambri"ge Kni,ersit Press% Banas =(' 7i)kerman --% 2003% Glu)an*bin"ing proteins of t!e oral strepto)o))i% .rit Ee, Oral Biol -e" 14;<* <<% Brunner =' S)!eres +' I"rissi + B >' eng -' Laine - =' 7an Jinkel!olf ( =' .rielaar" J% 2010% !e .apsule of Porp!romonas gingi,alis Ee"u)es !e Immune Eesponse of &uman Gingi,al :ibroblast% B-. -i)robiolog 2010' 7ol% 10' Issue 9% pp% 1*11% .!ara)lis' J%G% 1<4% Biofilm Pro)esses% In J%G% .!ara)lis "an %G -ars!all #e"s$% Biofilm' p% 1<9*232% =!on Jile% +e Nork .!ristop!er ( B' (rn"t (' .ugini .' a,e - >% 2010% ( Strepto)o))al >ffe)tor Protein t!at In!ibits Porp!romonas gingi,alis Biofilm e,elopment% -i)robiolog 2010' 7ol% 19?% pp% 34?<34% .itiCen"ium'
Porp!romonas
gingi,alis
a,ailable
from
!ttp;//en%)itiCen"ium%org/iki/Porp!romonasQgingi,alis a))esse" on +o,ember 10' 2013 :u8 .(' Jilson S' Stoo"le P% 2004% eta)!ment )!ara)teristi)s an" o8a)illin resistan)e of Stap!lo)o))us aureus biofilm emboli in an in ,itro )at!eter infe)tion mo"el% = Ba)teriol 1?;44?*44<1% Grenier ' anabe S% 2010% Porp!romonas gingi,alis Gingipains rigger a Proinflammator Eesponse in &uman -ono)te*"eri,e" -a)rop!ages !roug! t!e p3 -itogen*a)ti,ate" Protein inase Signal rans"u)tion Pat!a% o8ins 2010' 7ol% 2% pp% 341*392% &ajis!engallis G' Liang S' Pane - S' &as!im (' =otani E' >skan - (' -)Intos! - L' (lsam (' irkoo" L' Lambris = ' ar,eau E P' .urtis - (% 2011% Lo (bun"an)e Biofilm Spe)ies Or)!estrates Inflammator Perio"ontal isease t!roug! t!e .ommensal -i)robiota an" .omplement% .ell &ost R -i)robe #2011$' "oi;10%101?/j%)!om%2011%10%00?% pp% 1*10% &all*Stoo"le L' .osterton =J' Stoo"le P% 2004% Ba)terial biofilms; from t!e natural en,ironment to infe)tious "iseases% +ature Ee, -i)robiol 2;<9*10% Inoue ' S!ingaki E' Sogaa +' Sogaa .(' (saumi =' okegu)!i S' et al% 2003% Biofilm formation b a fimbriae* "efi)ient mutant of ()tinoba)illus a)tinom)etem)omitans% -i)robiol Immunol 4;*1% =essi)a +eilan"s% 200% ()i" oleran)e of Strepto)o))us mutans% -almo Kni,ersit :a)ult of O"ontolog epartment of Oral Biolog% pp 20*22' 4?*4%
1<
aplan =B an" :ine &% 2002% Biofilm "ispersal of +eisseria subfla,a an" ot!er p!logeneti)all "i,erse oral ba)teria% (ppl% >n,iron% -i)robiol% ?;4<43*4<90% aplan =B' -een!ofer -: an" :ine &% 2003% Biofilm Grot! an" eta)!ment of ()tinoba)illus a)tinom)etem)omitans% =ournal of Ba)teriolog% 7ol% 19% +o% 4% pp% 13<<*1404% aratan >' Jatni)k P% 200<% Signals' regulator netorks' an" materials t!at buil" an" break ba)terial biofilms% -i)robiol -ole) Biol Ee, 3;310*34% Lamont E=' >l*Sabaen (' Park N' .ook GS' .osterton =J' emut! E% 2002% Eole of t!e Strepto)o))us gor"onii SspB protein in t!e "e,elopment of Porp!romonas gingi,alis biofilms on strepto)o))al substrates% -i)robiolog 14;1?2*1?3?% Lappin*S)ott' &ilar #2003$% -i)robial Biofilms% .ambri"ge; .ambri"ge Kni,ersit Press% Lin !u' =ens ret!' Sara! >% .ross' =ames % GimCeski' Jenuan S!i' an" :eng8ia i% 200?% T:un)tional .!ara)teriCation of .ell*all*asso)iate" Protein Jap( in Strepto)o))us mutansT% A *ournal of the Society for (eneral +icrobiology -a"igan -' -artinko =-' Bro)k % 200?% Broc' Biology of +icroorganisms% 11t! >"% +e =erse; Pearson Prenti)e &all% &al; ?1*?1<% -a! :' OUoole G(% #2001$% -e)!anisms of biofilm resistan)e to antimi)robial agents% ren"s -i)robiol <;34*3<% -ari) S' 7ranes =% 200% .!ara)teristi)s an" signifi)an)e of mi)robial biofilm formation% Perio"i)um biologorum% 7ol 10<;2% p% 2 -ars! P% 2004% ental plaVue as a mi)robial biofilm% .aries Ees 3;204*211% -euri) 7' -artin B' Guo"o &' Eouillon (' amanai*S!a)oori ' Barlo*&ubler :' Bonnaure*-allet -% reponema "enti)ola impro,es a"!esi,e )apa)ities of Porp!romonas gingi,alis% -ol Oral -i)robiol 2013M2#1$;40*93 +aito -' &irakaa &' Namas!ita (' et al #(ugust 200$%Tetermination of t!e Genome SeVuen)e of Porp!romonas gingi,alis Strain (.. 332 an" Genomi) .omparison it! Strain J3 Ee,eale" >8tensi,e Genome Eearrangements in P% gingi,alisT% +( Ees% 19 #4$; 21929%"oi;10%10<3/"nares/"sn013% P-. 299?%P-I 1924 Pan"it' Santos!M im' &e*=inM im' =eong*>unM =eon' =ae*Gu% 2011% TSeparation of an >ffe)ti,e :ra)tion from urmeri) against Streptococcus mutansBiofilms b t!e .omparison of .ur)uminoi" .ontent an" (nti* a)i"ogeni) ()ti,itT% ,ood -hemistry 12? #4$; 19?90% Eosan B' Lamont E=% #2000$% ental plaVue formation% -i)robes Infe)t 2;19<<*1?0%
20
Ean =' Ea .G% 2004 % Sherris +edical +icrobiology #4t! e"%$% -)Gra &ill% Smalle = J' Brne P' Birss ( =' Jojtoi)C (' Sroka (' Potempa =' Ol)Cak % 2011% &muN &aemop!ore an" Gingipain Proteases .onstitute a KniVue Sntrop!i) Sstem of &aem ()Vuisition b Porp!romonas gingi,alis% PLoS O+> :ebruar 2011' 7ol% ?' Issue 2' e112% pp% 1*10% ribble G ' err >' Jang B N% 2013% Geneti) i,ersit in !e Oral Pat!ogen
Porp!romonas gingi,alis;
-ole)ular -e)!anisms an" Biologi)al .onseVuen)es% :uture -i)robiol% 2013' 7ol% ' Issue 9% pp% ?0?20% Kni,ersit
of
(lberta
Porp!romonas
gingi,alis
a,ailable
from
!ttp;//is!art%biolog%ualberta%)a/Ba)-ap/)gi/getSpe)ies.ar"%)giWa))essionX+.Q002<90RrefXin"e8Q19%!tml a))esse" on 10t! of +o,ember 2013 7inogra"o, (-' Jinston -' Eupp .=' Stoo"le P% 2004% TE!eolog of Biofilms :orme" from t!e ental PlaVue Pat!ogen Streptococcus mutansT% Biofilms $; 4<9?% Aie &' oClo,a +' Lamont E =% 2004% Porp!romonas gingi,alis Genes In,ol,e" in fim( Eegulation% Infe)t Immun% :ebruar 2004' 7ol% 2' Issue 2% pp% ?91?9% NilmaC O% 200% !e .!roni)les of Porp!romonas gingi,alis; !e -i)robium' !e &uman Oral >pit!elium an" !eir Interpla% -i)robiolog 200' 7ol% 194% pp% 2<2<03%
21
