AZÚCAR. Métodos de análisis microbiológico en el azúcar refinada

NORMA TÉCNICA PERUANA Comisión de Reglamentos Técnicos y Comerciales-INDECOPI Calle de La Prosa 138, San Borja (Lima 41) Apartado 145

NTP 207.028-2 2005 Lima, Perú

O D L . U D S R O D W R AZÚCAR. Métodos de análisis microbiológico en el W azúcar refinada Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 SUGAR: Methods of assay microbiologycal in refined sugar

2005-08-04 5ª Edición

R.0065-2005/INDECOPI-CRT.Publicada el 2005-09-03 I.C.S.: 67.180.10 Descriptores: Azúcar, método microbiológico, azúcar refinada

Precio ba basado en en 17 pá páginas ESTA NORMA ES RECOMENDABLE

ÍNDICE página ÍNDICE

i

O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 PREFACIO

ii

1.

OBJETO

1

2.

REFERENCIAS NORMATIVAS

1

3.

CAMPO DE APLICACIÓN

2

4.

DEFINIC IONES

2

5.

REQUISITOS

4

6.

HIGIENE

5

7.

PRINCIPIOS

5

8.

DILUYENTES, MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS

6

9.

APARATOS

11

10.

MUESTRAS

12

11.

PROCEDIMIENTO

13

12.

EXPRESIÓN DE RESULTADOS

14

13.

ANTECEDENTES

15

ANEXO A

17

PREFACIO

A.

RESEÑA HISTÓRICA

O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 A.1 La presen sente Norma Téc Técnica Per Peruana ha sid sido elab laborada por el Co Com mité ité Técnico de Normalización de Azúcar y sus derivados, mediante el sistema 2 u ordinario, durante los meses de julio del 2001 a febrero del 2005, utilizando como antecedentes a los que se mencionan en el capítulo correspondiente.

A.2 El Co Comité Técnico de Normalización de Az Azúcar y sus de derivados, presentó a la Comisión de Reglamentos Técnicos y Comerciales – CRT, con fecha 2005-04-08, el PNTP 207.028-2:2005 para su revisión y aprobación, siendo sometido a la etapa de Discusión Pública el 2005-06-03. No habiéndose presentado observaciones fue oficializada como Norma Técnica Peruana NTP 207.028-2:2005 AZÚCAR. Métodos de análisis microbiológicos en el azúcar refinada, 5ª Edición, el 03 de setiembre del 2005.

A.3 Esta No Norma Té Técnica Pe Peruana re reemplaza a la NT NTP 20 207.028:1987. La La presente Norma Técnica Peruana Pe ruana ha sido estructurada de acuerdo a las l as Guías Peruanas GP 001:1995 y GP 002:1995.

B. INSTITUCIONES QUE PARTICIPARON EN LA ELABORACIÓN DE LA NORMA TÉCNICA PERUANA

Secretaría

Colegio de Ingenieros del Perú - Filial La Libertad

Presidente

Roberto Acosta Jarama - Empresa Agroindustrial Laredo S.A.A.

Secretario

Noé Costilla Sánchez- Colegio de Ingenieros del Perú - Filial La Libertad

ENTIDAD

REPRESENTANTE

Colegio de Ingenieros del Perú Filial La Libertad

Adela Rodríguez Paredes

Agroindustrial Paramonga S.A.

Marino Rodríguez Valverde

Empr Empres esaa Agro Agroin indu dust stri rial al Casa Casa Gran Grande de S.A S.A..

Juan Juan Pich Pichén én Saa Saave vedr draa

Comp Co mple lejo jo Ag Agrroin oindu dust stri rial al Cart Cartav avio io S.A S.A

Jaim Jaimee Cab Cabello elloss Va Varg rgas as

Cía. Peruana del Azúcar San Jacinto

Virgilio Rosell Dioses

Empresa Agroindustrial Tumán S.A.

Oscar Samamé Nevado

Empresa Agroind industr strial Pucalá S.A.

Lorenzo Melgarejo Casimi imiro

Empresa Azucarera Andahuasi S.A

Dante Barzola Cámara

Ministerio de Agricultura

Dacio Muñoz Alva

INDECOPI

José Alvarez Castañeda

Embotella lladora Latinoamericana S.A.

Víctor Quispe Car Carranza

Industrial Cartavio S.A.

Fredy Chávez Cruzado

Universidad Nacional del Santa

Gilbert Rodríguez Páucar

CERPER S.A.

José Valdivia Ilizarbe

SAT - SAC

Diana Quispe Ramírez

Universidad Nacional de Trujillo

Carlos Vásquez Blas

Instituto del Azúcar del Perú

Ketty Vásquez Santiago

Ministerio de Agricultura SENASA

Ulises García Armas

Facultad de Ciencias Agrarias Universidad Particular Antenor Orrego

Luis Marquez Villacorta

SGS del Perú

Ricardo Saavedra Zapata

O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 ---oooOooo---

NORMA TECNICA PERUANA

NTP 207.028-2 1 de 17

AZÚCAR. Métodos de análisis microbiológico en el azúcar refinada

O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 1.

OBJETO

Esta Norma Técnica Peruana establece los métodos de análisis microbiológico, por el método de vertido en placas (oficial), para determinar los siguientes microorganismos en el azúcar refinada:

2.

-

Microorganismos aerobios mesófilos viables

-

Mohos y levaduras

-

Enterobacteriáceas:

-

Coliformes totales

-

E. Coli

-

Salmonella sp.

-

Esporas termófilas

-

Totales

-

Flat Sour

-

Anaeróbicas no productoras de H 2S

-

Anaeróbicas productoras de H 2S

REFERENCIAS NORMATIVAS

No hay normas normas especificas, especificas, ni ni disposiciones disposiciones,, que sean citadas citadas como referencia referencia en el presente presente texto que constituyan requisitos de esta Norma Técnica Peruana.


3.

NTP 207.028-2 2 de 17

CAMPO DE APLICACIÓN

O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 Esta Norma Técnica Peruana se aplica a la determinación de bacterias aerobias mesófilas viables, levaduras, mohos, enterobacteriáceas (coliformes totales, E. Coli y Salmonella) y esporas termófilas en azúcar refinada.

4.

DEFINICIONES

Para los propósitos de esta Norma Técnica Peruana se aplican las siguientes definiciones.

4.1 azúcar: Es el producto sólido cristalizado obtenido de los jugos de la caña de azúcar (Saccharum sp.) o de remolacha ( Beta vulgaris L. variedad rapa), mediante centrifugación de la masa cruda.

Al estado puro el azúcar es un hidrato de carbono denominado sacarosa cuya fórmula general es C 12H22011 .

4.2 azúcar refinada: Es el azúcar obtenida mediante procedimientos industriales de refinación del azúcar crudo por carbonatación, fosfatación o intercambio iónico. Hay varias clases o grados de azúcar refinada y éstas son:

− − −

Azúcar refinada farmacopea Azúcar refinada industrial Azúcar refinada doméstica

4.2.1 azúcar refinada farmacopea: Es un azúcar refinada de alta pureza inodora, estable al aire y en solución neutra.


NTP 207.028-2 3 de 17

4.2.2 azúcar refinada industrial: Es aquel azúcar refinada usada en el ámbito industrial y que reúne condiciones de pureza suficientes para tal empleo y que se definen en sus características. 4.2.3 azúcar refinada doméstica: Es aquel azúcar refinada de menor grado de pureza, definida por su estándar estándar y que es apta para el consumo humano. humano.

O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 4.3 bacterias mesófilas: Son las que tienen su crecimiento óptimo entre 20 ºC y 45 ºC. La temperatura de incubación seleccionada es un promedio para un crecimiento óptimo. Las condiciones favorables para el crecimiento de amplio espectro de bacterias son establecidas por el uso de medios de cultivo general.

4.4 levaduras y mohos: Son microorganismos, que forman colonias a 30 ºC en un medio selectivo a pH bajo (<5) o en presencia de un antibiótico. El mismo medio soporta el crecimiento de levaduras y mohos e inhibe el crecimiento de bacterias.

4.5 enterobacteriáceas: Familia de bacterias lactosa + y lactosa – utilizadas como indicadores de contaminación.

4.6 recuento de colonias: Es la enumeración de unidades formadoras de colonia (U.F.C.). Los resultados son reportados r eportados en U.F.C./10 g.

4.7 vertido en placas: Estas son placas de agar las cuales han sido inoculadas por mezclar cantidades conocidas de muestra diluida con medio de agar líquido (47 ºC ± 1 ºC).

4.8 bacterias termofílicas formadoras de esporas: Las bacterias termofílicas formadoras de esporas pueden ser seleccionadas porque sus endosporas son resistentes al calor. Las células de bacterias formadores de esporas morirían después de un periodo de ebullición de 5 minutos a 100 ºC y el crecimiento de las endosporas sería estimulado.

4.9 bacterias formadoras de mucílago: Estas son bacterias que crecen en substratos conteniendo sacarosa y forman cápsulas brillantes, especialmente las cepas de Bacillus, Streptococcus y Leuconostoc. 4.10

esterilización: Acción y efecto de esterilizar.


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O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 4.11 esterilizar: Destrucción total de las formas viables y esporuladas de microorganismos. La elección del método depende de la naturaleza física del Material que va a ser esterilizado.

5.

REQUISITOS

5.1

Los azúcares refinados deberán cumplir los siguientes tes requisit sitos:

TABLA 1 - Requisitos microbiológicos del azúcar refinada doméstica expresados en U.F.C./10 g (unidades formadoras de colonias) n - Numeración de bacterias aerobias mesófilas viables 5 - Numeración de levaduras 5 - Numeración de mohos 5 - Detección de Enterobacteriáceas 5

m M 0 < 200 0 < 50 0 < 10 Ausencia en 10 g

C 2 2 2 0

TABLA 2 - Requisitos microbiológicos del azúcar refinada industrial expresados en U.F.C./10 g (unidades formadoras de colonias)

Tipo 1 Azúcar refinada industrial

- Numeración de bacterias aerobias mesófilas viables

n 5 5 5 5 5 5

- Numeración de levaduras - Numeración de mohos - Detección de Enterobacteriáceas - Numeración de esporas termófilas totales - Numeración de esporas termófilas “Flat Sours” - Detección de esporas anaeróbias termófilas no productoras de H2S 5 - Numeración de esporas anaeróbicas termófilas productoras H2S 5 * tubos

m M 0 < 200 0 < 10 0 < 10 Ausencia en 10 g 50 150 10 75

C 2 2 2 0 3 3

0/6*

4/6*

3

1

5

2


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O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 Donde:

n = Es el número de unidades de muestra que deben ser examinadas de un lote de alimentos, para satisfacer los requerimientos de un plan de muestreo particular.

m = Límite menor de microorganismos.

M = Es un criterio microbiológico que en un plan de muestreo separa calidad marginalmente aceptable de calidad defectuosa. Valores mayores a “M” son inaceptables.

c = Es el número máximo permitido de unidades de muestra defectuosa. Cuando se encuentran cantidades mayores de este número el lote es rechazado.

6.

HIGIENE

Se recomienda que el producto regulado por las disposiciones de esta NTP se prepare de conformidad con las secciones I al X del Código Internacional recomendado de prácticas: Principios Generales de Higiene de los Alimentos del Codex Alimentarius.

7.

PRINCIPIO

7.1

Para bacterias aerobias mesófilas viables, levaduras y mohos

Alícuotas diluidas de las muestras son mezcladas con volúmenes pequeños de un agar fundido y tibio (47 ºC) en placas de Petri. Estas placas luego son incubadas y las colonias que desarrollan son contadas. El medio de cultivo es selectivo y específico para cada microorganismo.

7.2

Para enterobacteriáceas


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O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 Muestras pesadas de azúcar son adicionadas a un medio líquido de enriquecimiento para enterobacterias. Son incubadas a 37 ºC por 20 h a 24 h. La presencia de turbidez es consecuencia del crecimiento bacteriano, esta muestra se siembra por estría en placas de agar específico y se incuba a 37 ºC por otras 20 h a 24 h. Las colonias de color rojo con halo de precipitación rojiza se consideran tentativamente como pertenecientes a la familia de enterobacteriáceas. Con pruebas bioquímicas se determinan la presencia o ausencia de enterobacterias.

7.3

Para bacterias termófilas formadoras de esporas

Alícuotas de la muestra diluida son mezcladas con volúmenes pequeños de agar fundido enfriado en placas de Petri. Se usa un medio de cultivo selectivo para bacterias termófilas. Se incuban las placas y se cuentan las colonias que desarrollan.

7.4

Para bacterias formadoras de mucílago

Alícuotas diluidas de la muestra son mezcladas con el medio de cultivo selectivo líquido en placas de Petri e incubadas cuando el medio de agar ha solidificado. Material de vidrio estéril y una técnica aséptica se emplea en el desarrollo de estos métodos.

8.

DILUYENTES, MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS

8.1

Agua destilada estéril autoclavada a 121 ºC por 15 minutos.

8.2

Medios de cultivo

8.2.1

Para bacterias aerobias mesófilas viables


-

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Agar Nutriente (1 L)

O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 Ingredientes: Extracto de carne Extracto de levadura Peptona Cloruro de sodio Agar pH

-

Medio para recuento en placa (PCA) (1L)

Ingredientes: Peptona Extracto de levadura Glucosa Agar pH

8.2.2

g/l 1 2 5 5 15 7,5

g/l 5 2,5 1 12 7

Para levaduras y mohos

Utilizar uno de los tres medios siguientes:

-

Agar Mosto ( 1L)

Ingredientes : Extracto de malta Peptona Maltosa Dextrina Glicerol Sulfato de Potasio hidrogenado Cloruro de amonio Agar pH

-

g/l 15 0,78 12,75 2,75 2,35 1,00 1,00 15,00 4,8

Agar Ag ar Ext Extract ractoo de leva levadu dura ra –glu –gluco cosa sa-- clo cloranf ranfeenic nicol (1 L)


Ingredientes: Extracto de levadura Glucosa Cloranfenicol Agar pH

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g/l 5 20 0,1 15 6,6

O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 NOTA: La oxitetraciclina puede ser usada en lugar del cloranfenicol. La oxitetraciclina oxitetracicl ina es sensible al calor, por lo que deberá ser adicionada al medio justo antes de su uso, en forma de solución esterilizada por filtración.

-

Agar micofílico (1 L)

Ingredientes: Peptona fitona Glucosa Agar pH

g/l 10 10 16 4,0

NOTA: Ajustar el pH a 4,0 por adición al 15 ml, de ácido láctico estéril al 10 % (v/v) por cada litro de medio estéril diluído antes de plaquear.

8.2.3

Para en enterobacteriáceas

-

Caldo de Enriquecimiento para enterobacteriáceas (según Mossel)

Ingredientes: Peptona Glucosa Fosfato monohidrógenodisódico Fosfato monopotásico dihidrógeno Bilis de Buey desecada Verde brillante (solución acuosa al 0,5 %, m/v) pH

g/l 10 5 8 2 20

3 cm 3 ó 0,015 mg 7,3

NOTA: Este medio se utiliza a doble concentración. Para lo cual se duplica las cantidades de ingredientes.


-

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Agar bilis lactosa – glucosa rojo neutro cristal violeta

O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 Ingredientes: Extracto de levadura Peptona de carne Cloruro sódico Sales biliares # 3 Lactosa Glucosa Agar Rojo neutro Cristal violeta pH

-

Agar Mac Conkey

Ingredientes: Peptona de caseina Peptona de carne Cloruro de sodio Lactosa Mezcla de sales biliares Rojo neutro Cristal violeta Agar

8.2.4

g/l 3 7 5 1,5 10 10 15 0,03 0,002 7,4

g/l 17 3 5 10 1,5 0,03 0,001 13,5

Para bacterias termófilas formadoras de esporas

-

Agar dextrosa triptona (1 L)

Ingredientes: Triptona (tripticasa) Dextrosa Púrpura de bromocresol Agar pH

g/l 10 5 0,04 12 7


-

NTP 207.028-2 10 de 17

Agar sulfito (1 L)

O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 Ingredientes: Triptona Sulfito sódico (anhidro) Agar

g/l 10 1 20

NOTA: Adicionar 10 ml de una solución de citrato citr ato férrico al 5 % para 1 litro lit ro y distribuir en tubos a razón de 15 ml por tubo.

-

Caldo infusión de hígado (1 L)

Ingredientes: Infusión de hígado de ternera Triptona o peptona Almidón soluble Fosfato dipotásico pH

-

Shapton Agar (1 l)

Ingredientes: Extracto de carne Peptona Extracto de levadura Púrpura de Bromocresol Agar pH

8.3

g/l 500 10 1 1 7,6

g/l 3 5 1 0,25 15 7,5

Para bacterias formadoras de mucílago -

Medio de Weman (1 L) Ingredientes:

g/l


Azúcar crudo Cloruro de sodio Sulfato de Magnesio Sulfato ferroso Tiza precipitada Fosfato ácido disódico Agar pH

NTP 207.028-2 11 de 17

40 0,5 0,1 0,01 10 2 20 5,0

O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 -

Medio de McClesky-Faville (1 L)

Ingredientes: Triptona Extracto de levadura Azúcar crudo Agar pH

8.4

Oxitetraciclina.

8.5

Desinfectante para el área de trabajo.

9.

APARATOS

9.1

Ambiente de trabajo estéril.

g/l 10 5 100 20 6,5

9.2 Autoclave: Para la esterilización de medios de cultivo, aguas y material de desecho a 121 ºC ± 1 ºC.

9.3 Incubadora: Para la incubación de placas inoculadas a 30 ºC ± 1 ºC, 37 ºC ± 1 ºC y (44 ºC a 55 ºC) ± 1 ºC, según el análisis. 9.4

Horno: Para la esterilización de material de vidrio a 200 ºC.


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O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 9.5 Balanza de laboratorio: Para pesar medios de cultivo, reactivos y muestras de azúcar, de 0 g a 220 g.

9.6 Potenciómetro: Para ajustar a ± 0,1 unidades de pH a 25 ºC (medios de cultivo y soluciones). 9.7

Estufas eléctricas: Para la preparación de medios de cultivo.

9.8

Equipo contador de colonias: Para la obtención de resultados.

9.9 Mechero de Bunsen: Para mantener la esterilidad del área durante la realización de los análisis.

9.10 plástico.

Placas de Petri: De 90 mm a 100 mm de diámetro, estériles de vidrio o

9.11

Frascos: Estériles para la toma de muestras.

9.12 Pipetas graduadas: 1 ml, 5 ml para la distribución de muestras y 10 ml para las diluciones. 9.13 muestras.

Matraces Erlenmeyer: Graduados, de 200 ml para la preparación de

9.14

Tubos de prueba: Para la preparación de diluciones.

9.15 Equipo de baño-maría: Para mantener los medios de cultivo a temperatura de 47 °C, para uso inmediato. 9.16 reactivos.

Cápsulas metálicas y espátulas: Para pesar muestras, medios de cultivo y


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O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 10.

MUESTRAS

Tomar muestras representativas de 200 g (peso mínimo) en frascos estériles. Retener las muestras testigo por un período de por lo menos un mes después de realizado el análisis.

11.

PROCEDIMIENTO

11.1

Preparación del ambiente

Limpiar y desinfectar el área de trabajo antes de comenzar el análisis.

Marcar las placas de Petri estériles con fecha, muestra y tipo de medio.

11.2

Preparación del medio

Medio de agar: Siguiendo las instrucciones del productor cuidadosamente, rehidrate el medio con agua destilada o desionizada. Coloque el medio en frascos de vidrio y esterilice a 121 ºC por 15 minutos.

Los medios para uso inmediato después de esterilizados deben enfriarse a 47 ºC en baño maría y ser depositados en placas de Petri. Alternativamente debe permitírseles solidificar y ser almacenadas en oscuridad entre 0 ºC a 5 ºC por un periodo máximo de 1 mes. Los medios pueden ser refrigerados para su utilización posterior.

11.3

Preparación de material de vidrio

Esterilizar frascos, matraces, placas y pipetas en el equipo de esterilización en seco (170 ºC a 180 ºC) durante 1 hora.


11.4

NTP 207.028-2 14 de 17

Preparación de la muestra

O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 En forma aséptica pesar 10 g de azúcar en cristales y colocar en un matraz de 200 ml de capacidad, agregar agua estéril hasta la marca de 100 ml. Agitar vigorosamente hasta disolver.

11.5

Inoculación e incubación

Tomar dos placas estériles y pipetear 1 ml de la solución en cada placa. Si es necesario prepare una de la suspensión inicial (10 -1) adicionando 1 ml a 9 ml de agua estéril en el tubo de prueba quedando series de 10 -2, 10-3, etc y poner la muestra en placas y el medio. Adicionar aproximadamente 15 ml de medio de cultivo diluido y enfriado a cada placa y mezclar con la muestra con movimientos rotatorios, permitir que la mezcla solidifique. Preparar una placa control conteniendo el medio de cultivo para chequear la esterilidad. Invertir las placas e incubar a 30 ºC por 48 h a 72 h.

12.

EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS

-

Para ba bacterias ae aerobias me mesófilas vi viables

Contar las colonias en cada placa usando el equipo cuenta colonias. Para placas que muestren más de 200 colonias examine las diluciones. Esta técnica no es útil cuando las placas tienen menos de 10 colonias y se tendría que usar el método de Membranas filtrantes inmediatamente.

-

Para levaduras y mohos


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Contar las colonias de levadura de cada placa conteniendo no más de 150 colonias usando el equipo cuenta colonias. Las levaduras son opacas, blancas, amarillas o rosadas, mientras que los mohos forman un micelio el cual frecuentemente es blanco, con esporas negras, marrones o verdes. Para placas con recuentos altos, examine la dilución.

O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 12.1

Recuento en placa Σ

c

=

U.F.C./g de azúcar

(n1 + 0,1 n2 ) d

c

=

Suma de colonias contadas sobre todas las placas.

n1

=

Nº de pla placa cass co contad ntadas as en la prim primer eraa dil diluc ució ión. n.

n2

=

Nº de pla placa cass co contad ntadas as en la seg segunda unda diluc ilució ión. n.

d

=

Dilu Diluci ción ón de la cual cual fue fue obte obteni nido do el prim primer er recu recuen ento to

Σ

Ejemplo: Fueron incubadas dos placas de Petri por dilución Dilución 10-1

1ra Placa 2da Placa

97 U.F.C. 110 U.F.C.

Dilución 10-2

1ra Placa 2da. Placa

35 U.F.C. 46 U.F.C.

97 + 110 + 35 + 46 (2 + 0,1 x 2) x 10 - 1

= 288 0,22

= 1309 g UFC

Por 10 g de azúcar el resultado es: 1,3 x 10 4 U.F.C./10 g

13.

ANTECEDENTES


NTP 207.028-2 16 de 17

13.1 ICUMSA GS 2/3 – 43 (1998) De Detterminac inaciión de Bacter terias ias Mesóf sófilas Totales. Recuento en productos de azúcar refinado por el método de vertido en placas – Oficial.

O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 13.2 ICUMSA GS 2/3 – 47 (1998) De Detterminac inaciión de levaduras y mohos en en productos de azúcar refinado refinado por el método de vertido vertido en placas. 13.3 ICUMSA(Tentativo) Detección de Enterobacteriáceas Sétima recomendación, 21 reunión de (1994). Detección de patógenos (Salmonella)

13.4 ICUMSA. GS GS 2/ 2/3 – 49 (1 (1998) De Determinación de de Ba Bacter terias ias Te Termofílicas formadoras de esporas en productos de azúcar refinado por el método de vertido en placas o el método de Membrana Filtrante (Oficial) 13.5 ICUMSA GS GS 2/ 2/3 – 45 (1 (1998) De Determinació aciónn de de Ba Bacter terias fo formadoras de de mucílago. Recuento en productos de azúcar refinado por el método de Vertido en placas o método de membrana Filtrante (Tentativo). 13.6

NTP 207.028:1987

Métodos de Ensayo Microbiológicos en el Azúcar Refinado.

13.7

NTP 207.032:2005

Métodos de Ensayo Microbiológicos en el Azúcar Refinado con uso de membranas Filtrantes

13.8

NTP 207.050-1:2005

AZÚCAR. Az Azúcar ru rubia. De Determinación y recuento de microorganismos


NTP 207.028-2 17 de 17

ANEXO A (INFORMATIVO)

O D L . U D S R O D W W R Q y L . . X G R U S U H V X D G L E L K R U 3 DIAGRAMA DE PROCEDIMIENTO DETERMINACIÓN DE SALMONELLA

Muestra

25 g

Pre-enriquecimiento en medio líquido no selectivo Agua peptonada bufferada, 225 ml, 37 ºC, 16 h - 20 h

Enriquecimiento selectivo en medio líquido 10 ml en medio selenito cistina, 0,1 ml en medio R.V. 37 ºC, 18 h – 24 h

42 ºC, 18 h – 24 h

Aislamiento Plaquear sobre Medio selectivo sólido Agar (BPLS) Agar Verde Brillante-rojo de fenol Agar (XLD) Agar Xilosa-lisina, desoxicolato 37 ºC, 24 h (48 h si es necesario)

Identificación Seleccionar las colonias, por forma y 5 características de las colonias o de cada medio selectivo, rayar sobre la superficie de placas con Agar nutriente previamente secadas 37 ºC, 18 h – 24 h Confirmación Bioquímica

Confirmación Serológica

Interpretación de resultados Cepas las cuales son consideradas Salmonella o que pueden ser Salmonella serán enviadas a un Centro de referencia para Salmonella para su tipificación definitiva

AZÚCAR. Métodos de análisis microbiológico en el azúcar refinada

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