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COPROLOGIE PARASITAIRE

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La Physiologie Renale Dr

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République algérienne démocratique et populaire. Université Djillali Liabes Faculté de Médecine Département de Pharmacie

TP N°01 Dosage de la créatinine plasmatique.

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DOSAGE DE LA CREATININE PLASMATIQUE

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I-

Définition :

Créa vient du grec kreas qui veut dire chair. Une mesure de la créatinine donne informations sur deux points : la fonction rénale et la masse musculaire. La créatinine est une molécule chimique générée par le métabolisme musculaire. créatinine est produite à partir de la créatine, une molécule de première importance pour la production d'énergie dans les muscles. Environ 2 % de la créatine du corps sont convertis chaque jour en créatinine. La créatinine est transportée par le sang vers les reins. Pour un sujet donné, le taux plasmatique et la quantité de créatinine éliminée quotidiennement dans les urines constituent des paramètres biologiques remarquablement remarquablement fixes.

Pour ces raisons, la valeur de la clairance de la créatinine revêt une significatio séméiologique fondamentale lors de l'étude d'une insuffisance rénale. La claira de la créatinine est indépendante indépendante de la diurèse, elle mesure directement la filtration glomérulaire. Le taux plasmatique est indépendant de l'apport protéique alimentaire ; il reflè masse musculaire du sujet et son métabolisme propre. L'élimination est exclusivement urinaire, et donc toute variation de la clairance renseigne directement sur l'état fonctionnel du rein.

II- Métabolisme : 1- Rappel physiologique :

a- Origine métabolique : La créatinine provient de la déshydratation de la créatine, elle même présente dans le muscle strié où elle permet le stockage d'ATP sous form de créatine phosphate ou phosphagène par une réaction catalysée par la créatine kinase (CK). Sign up to vote on this title

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b- Comportement de la créatinine au niveau du néphron  Useful  Not useful La créatinine subit la filtration glomérulaire ; elle n'est par la suite ni réabsorbée ni excrétée au niveau du tubule. Sa clairance mesure le volum

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3- Formation de la créatinine : Le métabolisme de la créatine et donc celui de la créatinine peuvent être résumés dans ce schéma explicatif.


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III- Méthodes d’explorations : 1- Détermination de la créatinine sanguine

Le sang total renferme de la créatine et de la créatinine. La créatine se tro surtout dans les globules rouges à des taux faibles, alors que la créatinine également répartie entre les globules et le plasma. La concentration en créatinine totale du sang est remarquablement remarquablement constante chez un sujet donné, en fonction de sa masse musculaire. Elle ne dépend ni du régime, n l'exercice physique, ni même d'autres influences biologiques. C'est le constituant sanguin dont le taux est le plus fixe. La créatinine sanguine ne varie pratiquement que dans les lésions rénales. Son taux varie, chez l'adulte, de 50 à 105 pmol/l.

2- Clairance

Elle établit le rapport entre la quantité de cette substance apportée par le plasma au niveau du rein et la quantité de cette substance éliminée par le rein. C'est le coefficient d'épuration plasmatique ou nombre de ml de plas totalement épurés par le rein dans l'unité de temps. Ce volume théori s'exprime dans le cadre des unités SI en ml/seconde. Il est utile, pour manipuler simplement les clairances, de retenir que 24 h correspondent 440 minutes et 86 400 secondes.

C = U.V/P C = clairance = volume de plasma totalement épuré. U = concentration urinaire par litre. P = concentration plasmatique par litre. V = volume d'urines émises en une seconde (ou une minute).

Il suffit donc de doser la créatinine dans le plasma et dans l'urine, d'expri les résultats dans la même unité, de connaître la diurèse (débit urinaire) p seconde, pour calculer sa clairance. Il est essentiel au cours de l'épreuve ( ou mieux 24 h) de mesurer exactement laSign diurèse et de boire up to vote onfaire this title abondamment le sujet, afin d'avoir une diurèse à 1,5 1/24 h. L  Usefulsupérieure  Not useful valeur normale est de 2 ml/s.

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Sinon cette même DFG peut être calculé par la Formule de Cockcrott et

Gault (1976).

IV-



Clairance de la créatinine = K x Poids (kg) x [140-âge(ans)] / Créatinine(µmol/l) K = 1,05 chez la femme K = 1,25 chez l'homme



Clairance créatinine (homme) (homme) = Poids (kg) x [140-âge (ans)] / Créati (mg/l) x 7,2



Clairance créatinine (femme) (femme) = 0,85 x Poids (kg) ( kg) x [140-âge (ans)] / Créatinine (mg/l) x 7,2.



Conditions de l'utilisation de cette formule : Age : entre 18 et 110 ans Poids entre 35 et 120 kg Sérum créatinine : 6 et 70 mg/l

Méthodes de dosages :

Le sérum ou le plasma sanguin peuvent être utilisés indifféremment. Les échantillons de sérum ou de plasma ou d'urines peuvent être conservés plusi jours à l'abri de l'évaporation.

Prélèvements Prélèvements :

•

-

Sang veineux : Matériel nécessaire : Garrot, seringue et aiguille, désinfectant, coton, sparadrap, tubes avec ou sans anticoagulant, gants.  Mode opératoire : Sign up to vote on this title Le prélèvement se fait habituellement au du coude, peut aussi le Useful useful  pli  Noton réaliser en cas de problèmes sur la face dorsale de la main. Prévoir tout d'abord les tubes nécessaires, mettre éventuellement

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Ne jamais remplir de tubes avec une seringue sur laquelle on a pas enle l'aiguille (risque d'aérosols, d'éclaboussures et d'expulsion brutale de l'aiguille).

-

Urine :

Matériel nécessaire: Un flacon pour analyse d'urine ou à défaut un récipient fermé propre et Mode opératoire : Pour mesurer la clairance de la créatinine ou exprimer la protéinurie en mg/jour, on pratique un prélèvement d'urine de 24 heures. Il est donc préférable que le malade reste une journée et deux nuits à proximité du laboratoire, ou qu'il effectue ce prélèvement chez lui, si on lui a bien expliqué. Le matin, faire uriner le malades dans les latrines. Il doit boire normalem pendant l'épreuve. Recueillir ensuite dans une grande jarre (minimum 3 litres) toutes les urines de la journée, de la nuit et enfin celles du petit matin au réveil. Boucher la jarre, puis l'agiter. Mesurer précisément le volume en ml grâ une éprouvette graduée en plastique de 2000 ml. Procéder ensuite à un dosage de la créatinine urinaire. Pour doser la créatinine, plusieurs méthodes ont été mises au point, parmi ci :

1- Méthodes enzymatiques : a- Méthode enzymatique à lecture UV : Créatinine

é é

>

Créatine + ATP

Phospho-énol-pyruvate Phospho-énol-pyruvate + ADP Pyruvate + NADH.H+





> Créatine(P) +

 

> Pyruvate + ATP

> Lactate + NAD+. Sign up to vote on this title

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Useful  Not useful  du La cinétique décroissante de disparition NADH.H+ suivie à 340nm e proportionnelle à la quantité de créatinine initiale présente.

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2- Méthode par réflectométrie :

C’est le cas des appareillages de chimie sur support solide. Exemple : plaque « VITRAS » de dosage enzymatique de la créatinine sur u plaque. La plaque contient une série de couches afin de réaliser une cascade de réactions enzymatiques. La créatinine est tout d’abord hydrolysée en créatine : Créatinine + H20 Créatine + H20

é

> créatine.

é

> sarcosine + Urée.



Sarcosine + 02 + H20

H202 + leucodérivé

 

> glycine + formaldéhyde + H 202



proportionnelle à la > coloration proportionnelle

concentration en créatinine.

La créatine est alors hydrolysée en sarcosine, elle-même oxydée pour produire du peroxyde d'hydrogène (eau oxygénée). L'eau oxygénée, en présence de peroxydase, oxyde un leucodérivé qui se colore, et la vitesse d coloration est alors mesurée en cinétique par réflectométrie. réflectométrie. La vitesse réaction est proportionnelle à la concentration de créatinine présente dan sérum. Rmrq : Ces précédentes méthodes bien que très spécifique sont énormément couteuses ce qui limite probablement leurs application générale dans le laboratoire de biochimie.

3- Méthode colorimétrique cinétique de Jaffe :




Décrite pour la première fois en 1886, dans une solution alcaline, la useful  Useful  Notjaune-rouge. créatinine réagit avec le picrate pour former un produit  

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créatinine, appelées chromogènes chromogènes non créatinine. Les protéines, protéines, le gluco l'acide ascorbique, les céphalosporines et les α-céto-acides comme l'acétoacétate l'acétoacétate et le pyruvate font partie de ces chromogènes non spécifiqu réagissant à la méthode de Jaffé. Selon leur concentration, ces composés peuvent provoquer une surestimation de 18 à 20 µmol/L (0,2-0,4 mg/dL la concentration de créatinine. En même temps, l'augmentation de la concentration concentration de bilirubine masqu développement de la couleur, donnant des résultats de créatinine erronément bas. Plusieurs médicaments couramment employés peuvent également affecter les résultats de l'évaluation. Depuis sa première application, de nombreuses modifications de la réaction de Jaffé ont été décrites, concernant la composition du réactif ainsi que la procédure de mesure.

Rmrq : Plusieurs personnes ont affirmé que, ni la méthode de Jaffé, ni la méthode enzymatique ne procure de résultats acceptables dans le contexte cliniqu Selon Thomas Hostetter, MD, MPH au National Kidney Disease Education Program du National Institute of Health (USA) : “le rendu de résultats de créatinine sérique peut varier de 30 % pour des laboratoires certifiés de qualité”. La connaissance de la méthodologie utilisée pour la mesure de la créatin est donc essentielle du fait que les interférences méthodologiques peuven altérer significativement les résultats et influencer i nfluencer ainsi les décisions thérapeutiques.

V-

Valeurs normales : 1- Créatininurie : ♂ : 1 à 1,8 g/24H. (9 - 16 mmoles/24H); ♀ : 0,8 à 1,2 g/24H. (7 – 10,5 mmoles/24H).

2- Créatininémie : ♂ : 6,8 à 13 mg/l. (60 – 115 µmoles/l); ♀ : 5,65 à 11,3 mg/l. (50 – 100 µmoles/l).Sign up to vote on this title  Enfant : 3,5 à 7,5 mg/l. (31 – 66 µmoles/l).  Useful  Not useful Nouveau née / Nourrisson : 2,3 à 5,6 mg/l. (20 – 50 µmoles/l).

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VI- Application (TP) « Echantillon 92 » : La méthode utilisée est celle de la coloration de Jaffe.

1- Préparation des réactifs : •

Acide picrique (17,5 mmol/l) : MM= 229,1 g/mol. V= 100 ml. M= X. X= 17,5 * 10-3 * 229,1 / 10. X= 0,400925 g.

•

NaOH (0,29 mol/l) : MM= 40 g/mol. V=100 ml. M=Y. Y= 0,29 * 40 /10. Y=1,16 g.

2- Manipulation : Solution de travail Echantillon A B

Etalo

2ml

200µ

2ml

200µl

Pour chaque fois on mesure l’absorbance à 512nm à 30’’ puis à 90’’, la concentration en créatinine est obtenue par l’équation suivante : C (échantillon) =

A B

     

[Etalon]

DO à 30’’ Sign up to vote on this title DO à90’’ 0,506 0,524

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4- Conduite à tenir devant une hypercréatininémie :

Dans ce chapitre nous nous limiterons à la découverte d’une insuffisan rénale débutante. a- Circonstance de découverte : En-dehors de quelques complications bruyantes souvent trompeu (syndrome œdémateux ou élévation tensionnelle aigue orientant souvent le malade vers le cardiologue) cardiologue) ou tardives (anémie, troubl phosphocalciques), phosphocalciques), l’insuffisance rénale chronique se manifeste pa peu de symptômes cliniques. Ceci est particulièrement vrai pour l’insuffisance rénale débutante dont le caractère asymptomatiqu indolent, sont volontiers considérés comme synonyme de « peu grave », à la fois par les malades et les praticiens. C’est pourtant à c stade débutant que les possibilités thérapeutiques thérapeutiques sont les plus nombreuses et les plus efficaces pour influer sur le cours évolutif d néphropathie.

b- Diagnostique (+) de l’insuffisance rénale : L’interprétation de la créatinine plasmatique reste un point impor du dépistage et du diagnostic de l’insuffisance rénale. L’augmentation de la créatinine plasmatique n’est qu’un signe peu sensible et tardif pour dépister une altération débutante de la fonc rénale. En pratique, les valeurs “normales” de la l a créatinine plasmatique ne définissent que la distribution gaussienne de la créatinine plasmatique mesurée dans la population (moyenne ± 2 mais n’indiquent pas les seuils de valeurs définissant l’insuffisance rénale. Pour sensibiliser l’évaluation de la fonction rénale a partir créatinine plasmatique, il est recommande recommande de recourir systématiquement à la clairance estimée par la formule de Cockcro et Gault (COcr).


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Un autre avantage lié à la créatinine corrigée selon Cockcroft est q les variations de la clairance estimée vont dans le même sens et grossièrement corrélées aux variations de la filtration glomérulair (intérêt évolutif +++ pour le suivi de la fonction rénale chez une personne en l’absence de variation de la masse musculaire). L’interprétation de la COcr est la suivante : 

Une COcr > 90 ml/min. correspond à une fonction rénale norma  Une COcr < 60 ml/min. traduit une insuffisance rénale modérée L’interprétation d’une COcr comprise entre 90 et 60 ml/min. doit prendre en compte les signes rénaux associés et l’âge :

Une COcr comprise entre 90 et 60 ml/min. associée à des signes biologiques (protéinurie, hématurie), radiologiques ou histologiqu de néphropathie correspond à une insuffisance rénale débutante.

Une COcr comprise entre 90 et 60 ml/min. sans aucun autre signe néphropathie peut correspondre à une fonction rénale normale ba ou à une néphropathie débutante. C’est l’évolution sous surveillan qui tranchera entre les deux situations. Cette situation est particulièrement particulièrement fréquente chez les sujets âgés (influence ++ de l’â dans la formule de Cockcroft) et l’on parle volontiers de vieillissem “physiologique” de la fonction rénale. Cette notion est cependant erronée car la diminution de la filtration glomérulaire et de la clairance selon Cockcroft Cockcroft n’est pas systématique avec l’âge (1/3 de individus restent stables) et elle est habituellement associée à une HTA et/ou un terrain athéromateux (néphropathie vasculaire a minima probable).

c- Diagnostic différentiel IR chronique vs. Aiguë Pour affirmer le caractère chronique d’une insuffisance rénale, il existe 3 critères :  Critère anamnéstique : antécédent de maladie rénale, dosages  élevés anciens de créatininémieSign up to vote on this title  Critère échographique échographique : la taille des reins  estNot diminuée au cours Useful useful l’IRC : <10 cm à l’échographie (ou < 3 vertèbres sur un cliché d’ASP).

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