Determinación de Nitrógeno por el método de kjeldahl

c

 



 
 


ë
 
     


      El contenido total de proteínas en los alimentos está conformado por una mezcla compleja de proteínas. Estas existen en una combinación con carbohidratos o lípidos, que puede ser física o química. Actualmente todos los métodos para determinar el contenido protéico total de los alimentos son de naturaleza empírica. Un método absoluto es el aislamiento y pesado directo de la proteína pero dicho método se utiliza sólo a veces en investigaciones bioquímicas debido a que es dificultoso y poco práctico En 1883 el investigador danés Johann Kjeldahl desarrolló el método más usado en la actualidad para el análisis de proteínas (método Kjeldahl) mediante la determinación del nitrógeno orgánico. En esta técnica se digieren las proteínas y otros componentes orgánicos de los alimentos en una mezcla con ácido sulfúrico en presencia de catalizadores. El nitrógeno orgánico total se convierte mediante esta digestión en sulfato de amonio. La mezcla digerida se neutraliza con una base y se destila posteriormente. El destilado se recoge en una solución de ácido bórico. Los aniones del borato así formado se titulan con HCl (o H2SO4) estandarizado para determinar el nitrógeno contenido en la muestra. El resultado del análisis es una buena aproximación del contenido de proteína cruda del alimento ya que el nitrógeno también proviene de componentes no protéicos. El método Kjeldahl ha sufrido varias modificaciones. Originalmente se utilizó permanganato de potasio para llevar a cabo el proceso de oxidación (digestión), sin embargo, los resultados no fueron satisfactorios, de manera que este reactivo se descartó. En 1885 Wilforth encontró que se podía acelerar la digestión utilizando ácido sulfúrico y añadiendo un catalizador. Gunning en 1889 propuso añadir sulfato de potasio que eleva el punto de ebullición del ácido sulfúrico utilizado en la digestión para disminuir el tiempo de la reacción. En la actualidad se utiliza principalmente Sulfato de Cobre penta hidratrado CuSO4.5H2O como catalizador. @ 
  


   2 2 2

Apropiado para varios tipos de productos. Alta fiabilidad. Usado como método de referencia.

ë  
  


   2 2 2

Interfieren compuestos nitrogenados no proteicos. Uso de catalizadores tóxicos o caros. Elección del factor de conversión.

÷     Exige deshidratación al vacío para no alterar sus componentes. Envasada herméticamente la leche en polvo, se conserva bien. Excepcionalmente pueden enranciarse las grasas. Con 125 g de leche en polvo se reconstruye un litro de leche


 






c

 



 
 


líquida, es decir, cada kilogramo del producto desecado rinde 8 litros de leche para el consumo. Se puede encontrar en tres clases básicas: entera, semi-descremada y descremada. Además puede o no estar fortificada con vitaminas A y D. La leche en polvo contiene un elevado contenido en calcio. Así por 100 g de leche entera en polvo se obtienen 909 mg de calcio frente a los 118 mg que se obtienen por la misma cantidad de leche entera. c  

La característica principal del procesado es la atomización. El procesado depende en gran parte de la temperatura necesaria para su elaboración, que suele ser por regla general alta (180 °C), media o baja (temperatura de pasteurización). Se vigila en todo momento la existencia de gérmenes o de impurezas que induzcan a una disminución de la calidad del producto final. El proceso de deshidratación es capaz de reducir al 50% de los contenidos hídricos existentes en el contenido de la leche inicialmente. El envasado más efectivo para este producto lácteo es el de envases de hojalata al que se le suele añadir una cierta cantidad de dióxido de carbono.

Contenido en 100 gramos de Leche Nido Energía: Glúcidos: Proteínas: Lípidos: Nitrógeno: Fibra Total: Agua: Grasas: Ceniza:

501 Kcal 51 g 26 g 20 g 2.88 g 3g 2.5 g 27g 6.1

   

Se procedió a pesar la muestra.

Se coloco en un matraz de Kjeldahl, le adicionamos la mezcla digestora, junto con el acido sulfhídrico y unas cuantas perlas de ebullición.

Se colocaron los matraces Kjeldahl en el extractor previamente prendido asi como las parrillas para el calentamiento de la solución.


 






c

 



 
 


Y Se observo un color negro con precipitado.

Al observar un líquido verde casi transparente sin precipitados, se detuvo el proceso en el extractor.

ë 
 En un matras EM se agregaron el acido borico diliudo, con algunas gotas de rojo de metilo, se procedio a colocarlo en la parte de las mangueras del extractor.

Mientras tanto en el matraz Kjeldahl que contiene la solución (previamente enfriado) se le agrego agua destilada, granadallas de zinc y sosa al 50 %, la mezcla tomo un color azul obscuro.

Se procedió a mezclarlo y a ponerlo en las parrillas superiores encendidas, para proceder a la destilación y obtener 150 ml de líquido. 
 Y Y El liquido contenido en el matraz es de un color amarillo trasparente. Y Y


 






c

 



 
 


Se procedió a titularse con HCl hasta el cambio a un color canela o rosa pálido. Donde los ml gastados de HCl fueron ocupados para la determinación de Nitrógeno orgánico y proteínas de la leche. Y Y Y Y Y Y Y Ê  % N = (ml problema ± ml blanco) (meqN) (N HCl)/ (Peso de la muestra) x 100 % N = (80-0) (0.014) (0.1) / (1.1) x 100 % N = 10.18% % de proteína = (% N) 6.25 % de proteína = (10.18) 6.25 % de proteína = 64.95% o .64 grs Ê    Gracias a esta práctica pudimos aprender el método para la determinación de nitrógeno orgánico asi como de proteína total de un alimento en este caso la leche para lactantes, que se determina obteniendo dicho porcentaje del nitrógeno. La realización es algo tardía pero siempre y hay que tener especial cuidado con la titulación para no pasarnos mas allá.  !" http://www.grupo-selecta.com/notasdeaplicaciones/analisis-alimentarios-y-de-aguasnutritional-and-water-analysis/determinacion-de-proteinas-por-el-metodo-de-kjeldahlkjeldahl-method-for-protein-determination/ http://www.fao.org/docrep/010/ah833s/Ah833s17.htm Y