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Facultad de Medicina Humana
ASIGNATURA
:
BIOLOGIA CELULAR
TEMA
:
MICROSCOPIA, TECNICAS DE COLORACIÓN,
PREPARCIÓN EN FRESCO Y EN SECO
DOCENTE
:
ALUMNOS
:
CICLO
:
Dr. NESTOR RODRIGUEZ ALAYO
HINOSTROZA HUAMAN ADLER
I
LAMBAYEQUE, 03 DE SEPTIEMBRE DEL 2011
CONTENIDO I.
INTRODUCCIÓN
II.
FUNDAMENTO TEÓRICO
III.
OBJETIVOS
IV.
MATERIALES
V.
PROCEDIMIENTO
VI.
RESULTADOS
VII.
DISCUSIÓN
VIII.
CONCLUSIONES
IX.
CUESTIONARIO
X.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
I.
INTRODUCCIÓN
El hombre en
su afán de llegar siempre más lejos en la investigación de la
naturaleza de lo que los límites de sus órganos sensoriales le imponen, el hombre ha construido múltiples instrumentos que le han permitido acceder allí donde los sentidos no podían penetrar. El microscopio hizo posible conocer los mundos de dimensiones ínfimas, entre ellos la célula, base de la vida y por lo tanto poder diferenciar una célula normal de una patológica El microscopio es un instrumento fundamental en cualquier laboratorio de análisis biológico, como en los análisis bioquímicos y microbiológicos. El término microscopio procede de micros: pequeño y scope: observar. Su descubrimiento se debe a Jean Faber, miembro de la antigua academia de los Lincel (1624), el holandés Antoni Van Leewenhoek (1632 – 1723); fue el verdadero impulsador de la microscopía, construyó microscopios con lentes muy convexos y realizó observaciones especiales, adquiriendo gran renombre como anatomista y fisiólogo.
El microscopio ha sido una de las herramientas esenciales para el estudio de las ciencias de la vida. Abrió el ojo humano hacia una nueva dimensión. Tanto es así que actualmente, el microscopio nos permite observar el "corazón" mismo de la materia: los átomos
MICROSCOPÍA II.
FUNDAMENTO TEÓRICO
MICROSCOPIO COMPUESTO Un microscopio compuesto es un microscopio óptico que se compone de una serie de lentes para conseguir imágenes aumentadas de objetos diminutos que por su extrema pequeñez no son visibles al ojo humano. Los microscopios compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en láminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imágenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio óptico común está conformado por tres sistemas:
EL SISTEMA ÓPTICO. Está constituido por: Objetivos: sistema de lentes convergentes que actua como una lente que se encuentran montados en el revólver. Lo usual es que cada microscopio tenga cuatro objetivos de diferentes aumentos (4x, 10x, 40x, 100x) los que se clasifican en: Objetivos en seco: en los que el aire se interpone entre la lente y la preparación Objetivos de inmersión: en el cual un líquido (aceite) se interpone entre la lente y la preparación. Ocular: El ocular es una lente convergente que recoge la imagen intermedia producida por el objetivo y forma una nueva imagen virtual, derecha, y amplificada un cierto número de veces (x veces, según se indica en el propio ocular). Los aumentos más comunes son 10x y 16x.
EL SISTEMA DE ILUMINACIÓN comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observación a través del microscopio. Condensador: sistemas de lentes convergentes que concentra el haz de luz sobre la preparación Diafragma: Sirve para regular la cantidad de luz que llega a la preparación. Fuente de luz: Puede ser natural o artificial (ampolleta) Portafiltro: Opcional, sirve para colocar filtro de distintos colores para mejorar el contraste.
EL SISTEMA MECÁNICO está constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes, que permiten el movimiento para el enfoque. La parte mecánica del microscopio comprende el pie, el tubo, el revólver, el asa, la platina, el carro, el tornillo macrométrico y el tornillo micrométrico. Estos elementos sostienen la parte óptica y de iluminación; además, permiten los desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto. El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general forma de Y o bien es rectangular. Tubo óptico. Tiene forma cilíndrica y está ennegrecido internamente para evitar las molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan los oculares. El revólver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan los objetivos. Al girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posición de trabajo, lo que se nota por el ruido de un piñón que lo fija. La columna, llamada también asa o brazo, es una pieza colocada en la parte posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porción superior y por el extremo inferior se adapta al pie.
La platina. Es una pieza metálica plana en la que se coloca la preparación u objeto que se va a observar. Presenta un orificio, en el eje óptico del tubo, que permite el paso de los rayos luminosos a la preparación. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece inmóvil; en otros casos puede ser giratoria; es decir, mediante tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos circulares.
o
Carro. Es un dispositivo, colocado sobre la platina, que permite deslizar la preparación con movimiento ortogonal de adelante hacia atrás y de derecha a izquierda.
El tornillo macrométrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del microscopio, deslizándose en sentido vertical gracias a una
cremallera. Estos movimientos largos permiten el enfoque rápido de la preparación. El tornillo micrométrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nítido de la preparación. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm., que se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos. TIPOS DE MICROSCOPIOS Existen diversas clases de microscopios, según la naturaleza de los sistemas de luz, y otros accesorios utilizados para obtener las imágenes. EL
MICROSCOPIO COMPUESTO
u óptico utiliza lentes para ampliar las
imágenes de los objetos observados. El aumento obtenido con estos microscopios es reducido, debido a la longitud de onda de la luz visible que
impone limitaciones. El microscopio óptico puede ser monocular, y consta de un solo tubo. La observación en estos casos se hace con un solo ojo. Es binocular cuando posee dos tubos. La observación se hace con los dos ojos. Esto presenta ventajas tales como mejor percepción de la imagen, más cómoda la observación y se perciben con mayor nitidez los detalles.
MICROSCOPIO
ESTEREOSCÓPICO:
el microscopio estereoscópico hace
posible la visión tridimensional de los objetos. Consta de dos tubos oculares y dos objetivos pares para cada aumento. Este microscopio ofrece ventajas para observaciones que requieren pequeños aumentos. El óptimo de visión estereoscópica se encuentra entre 2 y 40X o aumento total del microscopio.
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA: La fluorescencia es la propiedad que tienen algunas sustancias de emitir luz propia cuando inciden sobre ellas radiaciones energéticas. El tratamiento del material biológico con flurocromos facilita la observación al microscopio.
MICROSCOPIO
DE CONTRASTE DE FASES :
es útil para poner de manifiesto
diferentes recorridos ópticos debidos a zonas de distinto índice de refracción o grosor, cuando estas diferencias son demasiados pequeñas para ser vistas con el microscopio normal. La microscopia de contraste de fases resulta muy útil para el examen de células y tejidos transparentes vivos, cristales, plásticos, emulsiones, etc. El microscopio de fases tiene un disco anular en el condensador para limitar la luz a un cono hueco sintético, con el que queda enfocado en el objetivo como un anillo brillante de luz si no hay ninguna preparación. Se utiliza cuando se necesitan ver objetos incoloros. Si la amplitud de la luz que incide apenas cambia, se obtiene un contraste muy malo. Se usa entonces una iluminación por varios sitios y se miden diferencias de fase para poder "ver" el objeto.
MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO :
es aquél que utiliza electrones en lugar de
fotones o luz visible para formar imágenes de objetos diminutos. Los microscopios electrónicos permiten alcanzar una capacidad de aumento
muy superior a los microscopios convencionales (hasta 500.000 aumentos comparados con los 1000 de los mejores microscopios ópticos) debido a que la longitud de onda de los electrones es mucho menor que la de los fotones.
Comparación del microscopio de luz, electrónico de transmisión y electrónico de barrido
III.
OBJETIVOS Reconocer las partes del microscopio óptico. Señalar las partes del mismo en el dibujo adjunto
MEDICIÓN A TRAVÉS DEL MICROSCOPIO
Para calcular el aumento que está proporcionando un microscopio, basta multiplicar los aumentos respectivos debidos al objetivo y el ocular empleados. Por ejemplo, si estamos utilizando un objetivo de 45X y un ocular de 10X, la ampliación con que estamos viendo la muestra será: 45X x 10X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del objeto está ampliada 450 veces, también expresado como 450 diámetros.
MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO
El microscopio debe estar protegido del polvo, humedad y otros agentes que pudieran dañarlo. Mientras no esté en uso debe guardarse en un estuche o gabinete, o bien cubrirlo con una bolsa plástica o campana de vidrio.
Las partes mecánicas deben limpiarse con un paño suave; en algunos casos, éste se puede humedecer con xilol para disolver ciertas manchas de grasa, aceite de cedro, parafina, etc. Que hayan caído sobre las citadas partes.
La limpieza de las partes ópticas requiere precauciones especiales. Para ello debe emplearse papel "limpiante" que expiden las casas distribuidoras de material de laboratorio. Nunca deben tocarse las lentes del ocular, objetivo y condensador con los dedos; las huellas digitales perjudican la visibilidad, y cuando se secan resulta trabajoso eliminarlas.
Para una buena limpieza de las lentes puede humedecerse el papel "limpiante" con éter y luego pasarlo por la superficie cuantas veces sea necesario. El aceite
de cedro que queda sobre la lente frontal del objetivo de inmersión debe quitarse inmediatamente después de finalizada la observación. Para ello se puede pasar el papel "limpialentes" impregnado con una gota de xilol. Para guardarlo se acostumbra colocar el objetivo de menor aumento sobre la platina y bajado hasta el tope; el condensador debe estar en su posición más baja, para evitar que tropiece con alguno de los objetivos. Guárdese en lugares secos, para evitar que la humedad favorezca la formación de hongos. Ciertos ácidos y otras sustancias químicas que producen emanaciones fuertes, deben mantenerse alejados del microscopio.
PROCEDIMIENTO DE LA PRÁCTICA Nº 1
OBJETIVOS:
Manejar adecuadamente los instrumentos y materiales de laboratorio
Conocer las diferentes funciones de cada uno de estos materiales
Dar el uso debido uso del microscopio conociendo cada uno de sus partes
Mediante observaciones en el
microscopio observar los diferentes
aumentos de las muestras en fresco y en seco
MATERIALES:
Lamina portaobjetos
Laminilla cubreobjetos
Microscopio compuesto
Agua estancada
Sarro dental:
Hisopo
Safranina :
Pipetas pasteur
Eosina
Agua destilada
Mechero
Azul de metileno
Aceite de inmersión
PROCEDIMIENTO:
PREPARADOS EN FRESCO: 1. Colocar una gota de agua estancada en una lámina.
2. Colocar una laminilla cubreobjetos.
3. Observar.
4.- Resultado observado:
Paramecio
PREPARADOS EN SECO: 1. Extracción de muestra a utilizar de uno de nuestros compañeros
2.- Secamos la muestra en un mechero de alcohol
3.-Realizamos la coloración respectiva agregando azul de metileno. 4.-Observamos al microscopio 5.- Resultados observados
Bacilos
OBSERVACIÓN DE GLÓBULOS ROJOS :
1.- Extracción de sangre a uno de nuestros compañeros 2.-Colocacion de la muestra en la lamina portaobjetos 3.- Observamos al microscopio.
Glóbulos Rojos
DISCUSIÓN:
El microscopio óptico se compone de una parte mecánica, que sirve de soporte, y una parte óptica, constituida por tres sistemas de lentes: el condensador, el objetivo y el ocular. La finalidad del condensador es proyectar un cono de luz sobre las células que están siendo examinadas en el microscopio. Después de atravesar a las células,
ese haz luminoso, en la forma de cono, penetra en el objeto. El objetivo proyecta una imagen aumentada en el plano focal del ocular, que nuevamente la amplia. Por fin, la imagen provista por el ocular puede ser percibida por la retina como una imagen situada a 25cm de la lente ocular o también, puede ser proyectada sobre un telón o una película fotográfica. La ampliación total dada por un microscopio es igual al aumento del objetivo multiplicado por el aumento del ocular. Se llama poder de resolución de un sistema óptico a su capacidad de separar detalles. En la práctica, el poder de resolución es expresado por el límite de resolución, que es la menor distancia que debe existir entre dos puntos para que ellos aparezcan individualizados. Por ejemplo: dos partículas separadas por 0,3 um aparecen individualizadas cuando son examinadas en un sistema óptico con un límite resolutivo de 0,2 um, pero aparecen como una partícula única cuando el límite resolutivo es de 0,5 um. Lo que determina entonces, la riqueza de detalles de la imagen provista por un sistema óptico es su límite de resolución, y no su poder de aumentar el tamaño de los objetos. La propiedad de aumentar solamente tiene valor práctico si es acompañada de un aumento paralelo del poder resoluto. El límite de resolución depende esencialmente del objetivo. El ocular no puede detalles de una imagen; su función es solo aumentar de tamaño a la imagen, que es proyectada en su plano de foco por el objetivo. El límite de resolución depende, sobre todo, de la abertura numérica (AN) del objetivo y de la longitud de onda de la luz utilizada.
CONCLUSIONES: El Microscopio es: cualquiera de los distintos tipos de instrumentos que se utilizan para obtener una imagen aumentada de objetos minúsculos o
detalles muy pequeños de los mismos. El microscopio simple o lente de aumento es el más sencillo de todos y consiste en realidad en una lupa que agranda la imagen del objeto observado. Las evidentes limitaciones de este sistema, conocido desde la antigüedad, y el desarrollo de la óptica y de la construcción de lentes hizo que surgieran en el siglo XVII los microscopios compuestos, diestramente utilizados por el holandés Antonie van Leewenhock en el estudio de la microfauna de los estanques y charlas. Estas observaciones, unidas a las de Robert Hooke, establecieron la microscopia como poderosa herramienta científica.
Dos lentes convexas bastan para construir un microscopio. Cada lente hace converger los rayos luminosos que la atraviesan. Una de ellas, llamada objetivo, se sitúa cerca del objeto que se quiere estudiar. El objetivo forma una imagen real aumentada e invertida. Se dice que la imagen es real porque los rayos luminosos pasan realmente por el lugar de la imagen. La imagen es observada por la segunda lente, llamada ocular, que actúa sencillamente como una lupa. El ocular está situado de modo que no forma una segunda imagen real, sino que hace divergir los rayos luminosos, que al entrar en el ojo del observador parecen proceder de una gran imagen invertida situada más allá del objetivo. Como los rayos luminosos no pasan realmente por ese lugar, se dice que la imagen es virtual.
BIBLIOGRAFÍA:
Biología Celular y Molecular de De Robertis. 12ª edición. Buenos Aires. Ateneo 2007
Biología Celular y Molecular. Junqueira, Carneiro 6ª edición
Enciclopedia Encarta 2009. Microsoft Corporation
Enciclopedia Hispánica Millennium. (2000). Volumen 10. Caracas.
Mazparrote, Serafín. (2000). Biología. 9no. Grado. Editorial Biosfera. Caracas
