INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
CURSO PRÁCTICO DE BIOQUÍMICA CLÍNICA CLICLO NÚMERO 4. PERFIL LIPÍDICO. COLESTEROL TOTAL y HDL.
GRUPO: AQM1
SECCIÓN: 1
ARELLANO ORDOÑEZ JOSÉ OCTAVIO
FECHA DE ENTREGA: 04 DE MAYO DE 2017
PROFESOR: DR. JUAN CARLOS SANTIAGO HERNÁNDEZ
QUÍMICO BACTERIÓLOGO PARASITÓLOGO PERIODO ENERO – JUNIO 2017 (17/2)
COLESTEROL TOTAL Y HDL INTRODUCCIÓN En el organismo, los lípidos forman parte de las membranas celulares, componen las reservas energéticas dentro de las células, son precursores de hormonas y vitaminas liposolubles, así como tienen un papel fundamental en el transporte de energía en el organismo. Los lípidos plasmáticos están constituidos por el colesterol en su forma libre y esterificada, los triglicéridos, los fosfolípidos, los ácidos grasos libres y otros lípidos de menor importancia. El colesterol es un lípido sencillo, que se presente en el organismo de forma libre y esterificada (6070% del Colesterol Total), y puede ser colesterol exógeno, ingerido en la dieta y el endógeno que es sintetizado en el hígado. Por su naturaleza isoprenoide, la biosíntesis de colesterol se utiliza para su síntesis el Acetil CoA. La mayor parte de las células son capaces de sintetizar colesterol, sin embargo, del 90-100% es sintetizado por lo hepatocitos y los enterocitos, y su excreción se dá por vía hepática. Por razones de solubilidad, los lípidos no pueden circular de manera libre en el plasma sanguíneo, por lo que son transportados en estructuras de alto peso molecular llamadas quilomicrones, se forman a partir de la formación de un núcleo hidrofóbico por la unión de ésteres de colesterol y triacilglicéridos, envuelto por las Apoproteína B- 48, exponiendo al exterior su fracción hidrofílica, haciéndola “soluble” en el plasma sanguíneo. Cuando llega a la superficie del tejido muscular y adiposo, su unión a la Apoproteína C-II activa la Lipoproteín lipasa hidrolizan a los triacilglicéridos, y los ácidos grasos libres son aprovechados por los tejidos, y dejando como producto quilomicrones remanentes, que son ricos en ésteres de colesterol y son capturados por el hígado mediante los receptores B-48. Los quilomicrones, presentados como Proteínas de Muy Baja Densidad (VLDL), son estabilizados por la Apoproteína B-100, y los remanentes de su degradación por las lipasas son las Lipoporteínas de Baja Densidad (VLDL), y sucesivamente se degradan a Liporproteínas de Densidad Intermedia (IDL) o Lipoporteínas de Alta Densidad (HDL). Las LDL tienen la función de llevar el colesterol del Hígado a las células diana en la periferia, ya que estas tienen un receptor para la apoproteína APO B-100, mientras que las HDL se encargar del transporte inverso, es decir, de las células diana al Hígado, ya que son capaces de esterificar el colesterol libre para formar dichas partículas de alta densidad. El aumento en la concentración de Colesterol y las Lipoproteínas (Hipercolesterolemia y Lipoproteinemias, respectivamente), en especial el de las LDL, provoca daños en los vasos sanguíneos, debido principalmente a que éstas tienen a acumularse en el endotelio, induciendo una inflamación, que provoca una acumulación de residuos lipídicos en el vaso sanguíneo, produciendo que la arteria disminuya el diámetro de la luz, por lo que tiende a aumentar la presión sanguínea y el gasto cardiaco, así como el desprendimiento de una fracción de ésta placa de ateroma, que puede provocar obstrucción de las arterias, en particular de las arterias coronarias, que presentan menor diámetro, desencadenando en un evento de hipoxia y posterior necrosis o un infarto al miocardio. La importancia del monitoreo de estos analitos radica en que, en México, las enfermedades cardiovasculares, son la primera causa de muerte.
FUNDAMENTO COLESTEROL TOTAL La enzima colesterol estearasa (CHE) hidroliza los ésteres de colesterol a colesterol más ácidos grasos libre. A continuación, le enzima colesterol oxidasa (CHOD) oxida todo el colesterol a colestenona y peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrógeno es sustrato de una peroxidasa (POD) que junto con 4-amino fenazona (4-AP) da lugar a la formación de una quinona roja. La quinona formada es proporcional a la concentración de colesterol en la muestra.
COLESTEROL HDL (INMUNOSEPARACIÓN) La determinación del colesterol HDL se realizaba antes con métodos de precipitación que requerían mucho tiempo. El método de inmunoseparación es un método homogéneo para la determinación del colesterol HDL sin centrifugación. Se utilizan anticuerpos contra lipoproteínas humanas para la formación de complejos antígenoanticuerpo con LDL, VLDL y quilomicrones de forma que sólo se determina selectivamente el colesterol HDL mediante una medición enzimática del colesterol.
OBJETIVOS a) Determinar el Colesterol Total en muestras de Suero. b) Determinar el HDL y LDL en muestras de Suero, y calcular el índice aterogénico.
RESULTADOS TABLA 1. DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL (MÉTODO DE COLESTEROL ESTERASA) Y COLESTEROL HDL (MÉTODO DE INMUNOSEPARACIÓN) VALOR INTERVALO DE VALORES DE COLESTEROL CONCENTRACIÓN ESPERADO CONFIANZA REFERENCIA TOTAL (C2) 112 mg/dL 137 – 177 mg/dL TOTAL (C3) 250 mg/dL 248 – 322 mg/dL <200 mg/dL Deseado TOTAL 139.3 mg/dL *155.3 mg/dL 200 – 239 mg/dL (MUESTRA) Límite alto HDL ≥ 40 – 60 mg/dL 23.12 mg/dL ** (MUESTRA) *Valor obtenido de una media consenso. **No existe un valor esperado para esta muestra. TABLA 2. EVALUACIÓN DE LA CORRIDA DE LA DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL (MÉTODO DE COLESTEROL ESTERASA) Y COLESTEROL HDL (MÉTODO DE INMUNOSEPARACIÓN) PARÁMETRO COLESTEROL TOTAL HDL % ERROR 10.3% CVS 7.6% PIV 135.52 PUNTUACIÓN DEL PIV REGULAR CÁLCULOS COLESTEROL TOTAL (mg/dL) = ∆ abs Muestra
abs Muestra
abs Estándar
HDL (mg/dL) = ∆ abs Estándar x [STD] = %Error =
(% Error)
PIV =
0.426 0.227
(Valor observado-Valor esperado)
CV
Valor esperado
x 100=
10.3% 7.6%
x [STD] =
0.234 0.346
x 206 mg/dL = 139.3 mg/dL.
x 43.4 mg/dL = 23.12 mg/dL.
x 100=
139.3 - 155.3 155.3
x 100 = 10.3%.
x 100 = 135.52.
DISCUSION DE RESULTADOS Durante la práctica se realizó la determinación de Colesterol Total por medio del método de Colesterol Esterasa, y la determinación de Lipoproteínas de Alta Densidad (HDL) mediante el método de inmunoseparación, en los que se puede observar que no se puede validar la corrida de la determinación de colesterol, debido a que el control C2 presenta resultados que salen fuera de los intervalos de confianza, sin embargo el valor obtenido en la determinación de la muestra problema presenta una concentración similar a la del valor esperado, con un porcentaje de error del 10.3% y un valor del PIV 135.52, con una calificación del trabajo de Regular, mientras que la determinación de HDL no pudo ser evaluada mediante el PIV, debido a que la muestra es un problema que no fue tratado en las mismas
condiciones de la práctica y no existe un valor esperado, y no podemos descartar los datos, ya que no se nos indicaron los intervalos de confianza de esta determinación, por lo que se sugiere realizar nuevamente ambas determinaciones con las correcciones analíticas pertinentes para la obtención de resultados confiables. Si consideramos los valores obtenidos en ambas determinaciones para realizar la correlación clínica, podemos observar que en la determinación de colesterol total, la concentración obtenida de 139.3 mg/dL se encuentra dentro de los límites altos de concentración, lo que indica que el paciente comi enza a presentar problemas en el metabolismo de los lípidos, que pueden ser producidos por la ingesta excesiva de ácidos grasos, así como una complicación de algún trastorno crónico como la diabetes o la hipertensión arterial, por lo que en este caso se sugiere la realización de pruebas complementarias para determinar la causa de la elevación de este metabolito en el paciente y así brindar un tratamiento oportuno y eficaz para evitar las consecuencias en el sistema cardiovascular. En la determinación de HDL, se puede observar que la concentración obtenida, que es de 23.12, se encuentra por debajo de los valores de referencia, por lo que los valores bajos representan un riesgo considerable del padecimiento de enfermedades cardiovasculares, por lo que en este caso se sugiere la determinación de todos los analitos que conforman el perfil lipídico, para determinar la causa de la disminución de este metabolito en sangre. CONCLUSIONES
Durante la práctica no pudo validarse la determinación de Colesterol Total. La determinación de Colesterol Total presentó un porcentaje de error del 10.3%. La calificación del PIV en la determinación de Colesterol Total es de Regular. La correlación clínica de los resultados indica que el paciente tiene altos riesgo de padecer enfermedades en el sistema cardiovascular.
BIBLIOGRAFÍA
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