ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE AGUA Welington Vivanco Laboratorio De Microbiología. Facultad De Ciencia E Ingeniería En Alimentos. Universidad Técnica De Ambato.
RESUMEN En la prctica prctica se reali!" reali!" anlisis anlisis microbiol"gi microbiol"gico co del agua especí#icam especí#icamente ente de agua empo!ada utili!and utili!ando o para esto $agar C%romocul C%romocult&' t&' el cual es un medio selectivo selectivoss reali!o el recuento recuento de coli#ormes tanto totales ( #ecales con la a(uda de calorimetría (a )ue las colonias de coli#ormes totales totales son ro*o salm"n ( las coli#ormes coli#ormes #ecales #ecales son a!ul violeta' violeta' los niveles de contaminaci"n contaminaci"n encontrados #ueron altos
INTRODUCCIÓN Los miembros de la #amilia Enterob #amilia Enterobacteriaceae acteriaceae son bacilo +ram negativos' inm"viles o m"viles con #lagelos. ,eritricos se desarrollan en medios medios arti#iciales arti#iciales ( todas las especies #orman cido o cido cido ( gas a part partir ir de glucosa glucosa.. -u composic composici"n i"n antigéni antigénica ca es un mosaico mosaico )ue interrelac interrelaciona iona sero serol" l"gi gicam camen ente te vari varios os géne género ross ( aun aun #ami #amili lias as'' muc% muc%as as de esta estass bacterias son pars parsito itoss de animales ( otros pat"genos $Alarc"n' //0&.
,ara en*uiciar en*uiciar la calidad de las aguas aguas se recorr recorree a parme parmetro tro #ísico #ísico )uímico )uímico ( biol"g biol"gico ico.. Los parmetros bacteriol"gicos tienen ma(or importancia para dictmenes %igiénicos1 es preciso %allar el n2mero n2mero de gérmen gérmenes es sapr"# sapr"#ito itoss o de coli coli ( de bacter bacterias ias proced procedent entes es del intest intestino ino %umano %umano como indicadores indicadores de de la contaminaci"n contaminaci"n.. Conviene destacar la importancia )ue tienen las ci#ras de coli ( coli#ormes' pertenecientes a las enterobacterias )ue #ermentan lactosa con producci"n producci"n de de gas ( cido $,rescott' 3arle(' 4lein' 5 de la 6asilla' //7&
Los Los
coli coli#o #orm rmes es
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#am #amilia ilia
Enterobac Enterobacteria teriaceae' ceae' de mor#ologí mor#ologíaa bacilar' bacilar' +ram negativas negativas'' aerobias aerobias anaerobia anaerobiass #acultati #acultativas' vas' o8idasa negativa' no espatuladas ( )ue #ermentan la lactosa con producci"n de cido a 9:;C en 7< 7= %oras.$>andevenne 5 6ibes' //& Las muestras )ue se tomarn para el anlisis deben ser representativas para poder determinar así su calidad calidad microbiol microbiol"gic "gica. a. 3a( normas para las tomadas tomadas muestras muestras de aguas seg2n sus distinta distintass
procedencias $gri#os' po!os' dep"sitos' lagos' ríos' manantiales' etc.&. ,ara su recogida debe utili!arse #rascos estériles ( debe recolectarse cantidades comprendidas entre ?// (0/// ml. En todos los casos los envases se llenarn por completo para e8cluirle aire $6odrigue!' /0/&
Teniendo en cuenta los parmetros mencionados en la prctica se busca anali!ar la muestra de agua ( así determinar si e8iste contaminaci"n o no tomando como re#erencia a los coli#ormes
METODOS Y MATERUIALES ,rimeramente se procede a esterili!ar los materiales a utili!ar como tubos de ensa(o' ca*as ,etri ( puntas utili!ando un autoclave $All American' U-A&' luego se prepara agar C%romocult $Merc@' Alemania&' este agar no se autoclave' después se procede con las diluciones seriadas de la muestra )ue se obtuvo %asta 0/ < ( se inocula /'0 ml por método de di#usi"n en placa utili!ando de bolas de lte8' este proceso se lo reali!a en la cmara de #lu*o laminar $-treamline' U-A&. Luego se incuba en una estu#a $Memmert' Alemania& a 9/ por 7 %oras' luego se reali!a en conteo de colonias ( se identi#ica su coloraci"n con la #inalidad de conocer )ue microorganismos se %an desarrollado.
RESULTADOS De las muestras obtenidas de agua residual en dos lugares di#erentes $alcantarilla e inodoro& se pudo obtener di#erentes colonias $tabla 0&' de lo cual aplicando la ecuaci"n 0' se puede determinar U#cBml' el cultivo selectivo C%romocult permite di#erenciar enterobacterias' las cuales de acuerdo a su color pueden ser a!ul
Clc!lo "e !#c$%l en %!e&t'a& "e ag!a 'e&i"!al &o('e aga' C)'o%oc!lt Ec* + D,n"eN- de colonias $9/<9//&
ufc N ∗ FD = ml Vi
.D- #actor de diluci"n Vi- volumen inoculado U#c$%l- unidades #ormadoras de colonias por mililitro de diluci"n ufc 94∗10 = 0,1 ml ml
0
ufc 3 = 9 , 4∗10 ml
Ta(la +* Colonias presentes en medio de Agar C%romocult Dil!ci,n
N/%e'o "e colonia& Blanca&
Ro0a&
9 ? <<<
09 <<< <<<
O'iginal +12+ +123 Ela(o'a"o 4o'- >ivanco . FCIAL.UTA./07. .!ente- Laboratorio de Microbiología I.
En la tabla 0 se muestran valores de U#cBml de las muestras' se calcul" las u#cBml solamente para la diluci"n original (a )ue esta estuvo en el rango de 9/ a 9//.
DISCUSIÓN Las en#ermedades entéricas causadas por bacterias coli#ormes se transmiten casi e8clusivamente por contaminaci"n de origen #ecal en aguas ( alimentos (a )ue este tipo de microorganismos se encuentra radicado de mamí#eros ( animales de sangra caliente' la contaminaci"n vía suministros de agua es la contaminaci"n porcentualmente ms importante' %abiendo sido anteriormente de epidemias masivas como #iebre ti#oidea ( c"lera' de a)uí la importancia de anlisis de bacteria en aguas de consumo para comprobar la ine8istencia de este tipo de bacterias $,rescott et al.' //7& Los coli#ormes son bacilos +ram negativos #ermentadores de lactosa con producci"n de cido ( gas $4oneman 5 Allen' //=& Los coli#ormes #ecales tienen gran signi#icado sanitario ( son los )ue ms interesan en el anlisis microbiol"gico $ICCA' //0&
Una de las características de los coli#ormes #ecales es )ue tiene la capacidad para desarrollarse en presencia de sales biliares' resistentes a la penicilina pero son sensibles a los cidos. Tanto coli#ormes totales como #ecales no deben estar presentes en un agua de consumo $M-. AC3& lo cual nos indica )ue el agua empo!ada no es apta para el consumo (a )ue podría traer graves peligros para la salud si la bebemos debido a los coli#ormes #ecales presentes en la misma' un agua de consumo debe estar libre de estos microorganismos adems de presentar buenas características #ísicas para )ue sea aceptable su consumo' en el caso del agua anali!ada presentaba 3
u#cB ml igual a 9,4∗10
lo cual muestra claramente )ue se sale de la norma establecida
Al utili!ar medio selectivo como el medio C%romocult' permite mediante colorimetría di#erenciar entre coli#ormes totales ro*o
CUESTIONARIO 56!7 &on la& (acte'ia& coli#o'%e&8 Los coli#ormes totales son las Enterobacteriaceae lactosa
)ue
por
criterios
ta8on"micos.
,ertenecen
a
la
#amilia
Enterobacteriaceae ( se caracteri!an por su capacidad para #ermentar la lactosa con producci"n de cido ( gas' ms o menos rpidamente' en un periodo de 7= %oras ( con una temperatura de incubaci"n comprendida entre 9/<9:;C $Madigan' Martin@o' 5 ,ar@er' //9&
A %& "e la& (acte'ia& coli#o'%e&9 :!e ot'o& %ic'oo'gani&%o& &e "ete'%inan "!'ante !n anli&i& "e ag!a* La inocuidad del agua no depende 2nicamente de la contaminaci"n #ecal. Algunos microorganismos proli#eran en las redes de distribuci"n de agua $por e*emplo' Legionella&' mientras )ue otros se encuentran en las aguas de origen $el drac2nculo' Dracunculus medinensis& ( pueden ocasionar epidemias ( casos aislados. ,ara otros microbios $por e*emplo' las cianobacterias t"8icas& deben adoptarse medidas de gesti"n especí#icas. En algunos casos' puede ser adecuado complementar el recuento de coli#ormes con mediciones de otros grupos de organismos' por e*emplo' los estreptococos #ecales' el interés se centra en los microorganismos pat"genos' )ue son los di#erentes tipos de bacterias' virus' proto!oos ( otros organismos' )ue transmiten en#ermedades como' en el caso de las bacterias se
anali!a la presencia de coli#ormes totales' coli#ormes #ecales' estreptococos #ecales ( clostridios sul#ito
D!'ante !n anli&i& %ic'o(iol,gico "el ag!a9 5ai&la%o& e i"enti#ica%o& lo& %ic'oo'gani&%o& 4at,geno& o /nica%ente ave'ig!a%o& &i e;i&te conta%inaci,n "e o'igen #ecal8 E;4li:!e &! 'e&4!e&ta* -olo anali!ar la presencia de coli#ormes #ecales pues la e8istencia de estos es parmetro su#iciente para saber )ue el agua est contaminada
•
Con&!lte la no'%a o legi&laci,n ec!ato'iana < ot'a no'%a inte'nacional9 co%4'ela& con lo& 'e&!lta"o& o(teni"o& < e%ita !na concl!&i,n :!e 4e'%ita co%4'en"e' el 4o':!7 "e la& "i#e'encia& o &i%ilit!"e&* La norma técnica IGEG GTE 00/= menciona )ue el límite m8imo permisible es menor a 0U#cB0//ml de muestra' es decir /'/0 U#cBml' lo )ue seg2n la norma no debe presentar #ormaci"n de colonias para coli#ormes totales ( #ecales. -eg2n la Gorma AC3 de la M-' no debe presentar #ormaci"n de colonias para coli#ormes totales ni muc%o menos #ecales' seg2n GM, es de //B0//ml de muestra. Como el reglamento interno ecuatoriano se rige a otro estatuto internacional como es la M-' es l"gico )ue deba poseer similitudes en cuanto a su rango de salubridad' la ausencia de coli#ormes totales ( #ecales es un indicador de la inocuidad del agua de consumo' los resultados obtenidos para coli#ormes totales en agua de alcantarilla #ueron de 7':80/ 9U#cBml ( para coli#ormes #ecales $ E. coli& #ue de 9'780/9U#cBml' lo )ue indica )ue esta agua no est apta para el consumo mientras )ue para el agua de inodoro el n2mero de U#c #ue de cero' debido a la diminuta cantidad de colonias #ormadas.
Lo& 4a'%et'o& "e cali"a" %ic'o(iol,gica "el ag!a "e4en"en "e 4a'%et'o& co%o el "e&tino #inal "el ag!a9 en e&te &enti"o in"i:!e :!e 4a'%et'o& "e(e c!%4li' el ag!a 4a'a !&o "o%7&tico o 4ota(le9 ac!ic!lt!'a9 "e4!'a"a 4a'a el ve'ti"o* G'a#ico 3*2 ,armetros de calidad para agua de consumo.
.!ente- Gorma IGEG 00/=' /00.
CONCLUSIONES En la muestra anali!ada se comprob" la e8istencia de coli#ormes #ecales lo cual )uiere decir )ue el agua incumple con la norma IGEG 00/=' el agua puede tener otros usos distintos a la de ser destinada para el consumo' es mu( importante conocer la presencia de este tipo de bacterias sea en agua como en otro tipo de alimentos (a )ue pueden ser causantes de epidemias masivas.
BIBLIOGRA.=A Alarc"n' L. 6. $//0&. Manual de practicas de Microbiología básica y Microbiología de alimentos. Programa de Nutrición. UACH. ICCA. $//0&. Manual de Procediminetos Para El Control Microbiologico de limentos . ib. rton IICA B CATIE. 6etrieved #rom %
[email protected]@sK id3csAAAIAAH 4oneman' E. .' 5 Allen' -. $//=&. !oneman. Diagnostico Microbiologico" Microbiological diagnosis# $e%to & tlas En Color" $e%t and Color tlas . Ed. Médica ,anamericana. Madigan' M. T.' Martin@o' H.' 5 ,ar@er' H. $//9&. 'iologia De Los Microorganismos $Decima Ed&. Madrid EspaNaJ ,earson Educaci"n. rgani!ation' . 3. . ,. A. 3. $0=:&. (uías para la calidad del agua potable . rgani!aci"n ,anamericana de la -alud' #icina -anitaria ,anamericana' #icina 6egional de la rgani!aci"n Mundial de la -alud. ,rescott' L. M.' 3arle(' H. ,.' 4lein' D. A.' 5 de la 6asilla' C. +. $//7&. Microbiología. Mc+raO< 3illBInteramericana. 6odrigue!' M. $/0/&. Enterobacterias. 6etrieved #rom %ttpJBBOOO.#acmed.unam.m8BdeptosBmicrobiologiaBpd#BEnterobacteriasPMedicine/0/.pd# >andevenne' C. A.' 5 6ibes' M. E. $//&. M)todos de análisis microbiológicos de alimentos . DQíRa! de -antos. 6etrieved #rom %
[email protected]@sKidP3,@mO4dS/C IGEG 00/=. $/00&. gua potable. *e+uisitos. Instituto Ecuatoriano de Gormali!aci"n. Cuarta 6evisi"n. uito ecuador. 6etrieved #romJ %ttpsJBBlaO.resource.orgBpubBecBibrBec.nte.00/=./00.pd# M-. AC3. ///. (uía Microbiológica para ealuar la calidad del agua de consumo. Tercera Edici"n. M-. 6etrieved #romJ %ttpJBBOOO.O%o.intBOaterPsanitationP%ealt%BdO)BguidelinesBesB.
