Papel central del colonizador temprano Veillonella sp. en el estab estable leci cimi mien ento to de comu muni dades de bi ofil ms mul t i especí ficos con i ni ci al , medi o,yl osfinescol oni zadoresdeesma mal t e. l l onel l a Ti t ul oori gi nal : Cent r alRol eoft heEar l yCol oni zerVei sp.i nEst abl i shi ng Mul t i speci es Bi ofil m Comm mmuni t i es wi t hI ni t i al ,Mi Mi ddl e,and Lat e Col oni zer s of Ename mel .
Aut or es:Sar avananPeri asamyyPaulE.Kol enbr ander . Lugar:I nf ecci ón oralei nmuni dad r ama ma delI nst i t ut o Naci onalde I nvest i gaci ón Dent alycraneof aci al ,i nst i t ut osnaci onal esdesal ud,Bet hesda,Maryl and. Fecha:Reci bi doel16deDi ci emb mbr ede2009yAcept adoel4deFebr er ode2010.
I NTRO RODUCC CCIÓN La cavi dad or alhumana t i ene muchas bact er i as que r esi den en el l as que se di vi den en ci ent osdeespeci es.Seorgani zan en comu muni dadesmu mul t i especí ficos despuésdecadat r atami mi ent odehi gi eneor al ;porej emp mpl o,eldesarr ol l odel apl aca dent alen elesma mal t e comi mi enza con l os col oni zadores i ni ci al es est r ept ococos y l l onel l a,porl act i nomy mycesqueson segui dasporl at emp mpr anacol oni zaci ón deVei a col oni zaci ón deme medi oporphyr omo monas,Fusobact er i asyl at ardí acol oni zaci ón de aggregatibacters. Dur ant eeli ni ci odel abi opel í cul al osest r ept ococosyact i nomi mi cesseunen para est arenl asal i vapar aelrecubri mi ent odepel í cul adeesma mal t e. A su vez,ot r asespeci esseunen al ascél ul as,un pr ocesol l amadocoadhesi on. Est epr ocesoycoagregaci ón defini docomo moelr econoci mi ent oespecí ficodecél ul a acél ul a,asícomo moelcr eci mi ent odecél ul asadher ent esl oscual escont ri buyenal desarr ol l odel apl aca. Aunqueseconocequemet abol i zan l oscul t i vospur osdebact eri asor al esdel a di et adeazúcaresaáci dol áct i co,paraelcr eci mi ent odel acomu muni dadenl asal i va como mo úni ca f uent e de nut ri ent es.La mayorí a de l os cul t i vos pur os y muchas comb mbi naci onesdeespeci esson i ncapacesdecreceren t odal asal i va,queesun comp mpl ej of uent e nut ri ci onal .Elcr eci mi ent o podrí a,de hecho,r equeri r de l a or gani zaci ón espaci al y l as i nt er acci ones mut ual i st as ent r e especi es sel ecci onadas queson capaces deconver t i rl a nut ri ci ón l at ent een l a nut ri ci ón ut i l i z abl e. Losest r ept ococosf orman 60 a90% del apl acasupragi ngi valdebi oma masaenl as pri mer as24hdel acol oni zaci ón.Convi ert encarbohi dr at osaáci dosor gáni cosde l l onel l a cadena cor t a, t al es como mo el áci do l áct i co y el áci do pi rúvi co. Vei const i t uyen t ant o como mo 5% de l a bi oma masa i ni ci alde l a pl aca per o no pueden cat abol i zarazúcares.Sebasanenl af erment aci óndeáci dosor gáni cost al escomo mo
áci dol áct i coyasíest abl ecerunaconveni ent eal i ment aci ón decadename met aból i ca enl apl acadent al . l l onel l af Est udi osi nvi vocon r at asgnot obi ót i codemo most r aronqueVei uei ncapaces deest abl ecermonoi nf ecci ones.Sei nocul óen r at asyamo monoi nf ect ados con una r ept ococ cus mut ans c cepa de St ongregados con esa t ensi ón de Vei l l onel l a, el númer odeVei l l onel l aenl osdi ent esdel osani mal escoi nf ect adosf ue1, 000veces superi oralnúmer odecepanocoagr egaci óndeVei l l onel l a. Tambi én,enr at asgnot obi ót i co,l adi smi nuci óndel ascari esobt uvopunt uaci ones de pl aca de bi ofil ms de dos especi es que para l a col oni zaci ón de especi es l l onel l aq i ndi vi dual esporest r ept ococosei nserci óndeVei uer educel aact i vi dadde cari esyl adesmi mi neral i zaci óndelesma mal t eporl osest r ept ococos. Seyuxt aponenconelr ecept ordecoagr egaci onpol i sacári docoj i net eest r ept ococos en l as pri mer as comuni dades en vi vo y una r ápi da sucesi ón de fil ot i pos de Vei l l onel l aocurr eenest ascomuni dades.Est osi nf ormesof r ecenampl i aevi denci a queest án vi ncul adosenbi ofil msor al esVei l l onel l ayest r ept ococos.
A.General i dadesdel asVeil l o ne l l as
Son f enot í pi came ment emu muysi mi l ares,si et eespeci essereconocen porelanál i si sde homo mol ogí a de su ADN.Est e géner o comp mprende un gr upo de di pl ococo gr am s s e r i anc e ae m. negat i vosanaerobi osest ri ct os,del af ami l i aNei
Su Habi t atsedaen l aboca,t r act oi nt est i nalyr espi r at ori odelhombr eyot r os ani mal es l l onel l a Lasespeci esde Vei figur an ent r el aspri mer ascol oni zant esdel acavi dad or aly una vezque han col oni zado t i enden a per si st i ren ese ambi ent e como mi cr obi ot anormal .Enl acavi dadoralsedet ect anenl amayorí adel assuper fici es mucosas,l asal i vayl aspl acasdent al est ant osubgi ngi valcomosupr agi ngi val es.
Elr equi si t opar al acol oni zaci ón mi crobi anai ni ci alesl aadherenci abact eri anaa l l o ne l l as pp. e l as superfici es or al es. La col oni zaci ón pri mari a con Vei nl as super fici esor al esesi ndependi ent edel apr esenci adedi ent eserupci onados.La l l one l l as pp.a l adher enci a de Vei os t ej i dos delhuésped y a l a hi dr oxi apat i t a cubi ert acon sal i vaespobr e,per opart i ci pan encongregaci onesi nt er bact eri anas, unmodoporelcualsefij an ví al auni ónsecundari aaot r asbact er i ascapacesde l aadhesi ónpri mari a. Dado que es t án i nvol ucr adas en i nt er acci ones benefici osas en l a cascada de col oni zaci ón oralyelmant eni mi ent odel ahomeost asi s,debeconocer sesu r ole i mpact oespecí fico
B.Caracterí sti casdel asVeil l onel l as l l onel l as Las Vei
de bl anco l a
son cocos gr amnegat i vos anaer óbi cos est ri ct osasoci adosconl asal udoral . Macr oscópi cament e, l as col oni as en medi osde Agarl act at o apar ecen en f orma di amant es o cor azón, l i so, opaco, gri sáceo ycon consi st enci a gr asosa como mant equi l l a. Mi cr oscópi cament emi den de0. 3 a0. 5 mi cr ómet r osdedi ámet r o.
l l o nel l as pp.pr Las col oni as de Vei oducen fluorescenci a r oj a vi si bl e con l uz ul t ravi ol et a,quedesapar ece.
C.Factoresdevi rul enci a No f orma espor as ni capsul as.Poco después del naci mi ent o, est a bact er i a aparecee nl abocahumana. El
i ncr ement oen elnúmer ode Vei l l onel l a ocurr e después de l a col oni zaci ón de l a
especi ebact eri anapr edomi nant e l l onel l a po Se ha sugeri do que l os cocos delgéner o Vei drí an cont r arr est ar l a f ormaci óndecari esdent al . l l o ne l l a par v ul a, Ve i l l o ne l l a al c al e sc e ns , Se conocen var i as especi es de Vei Ve i l l o ne l a di s c or de s,Ve i l l o ne l l ar e ni f o r me s,Ve i l l o ne l l ao r v i c ul at us y Ve i l l o ne l l a v ul v ov agi ni t i di s . De és t as, sol ol a Vei l l onel l a se ha encont r ado en abscesos
peri odont al es,gi ngi vi t i syal gunasi nf ecci onesuri nari as.
D.Caracterí sti casestructural es Losmi cr oor gani smospert eneci ent esalGéner o Vei l l onel l a met abol i zan l act at oy succi nat o,r educen l a ci st ei na,ci st i na,t i osul f at oydan l ugara l af ormaci ón de radi cal essul fihi dri l os( SH2) . Para su desarr ol l o ut i l i zan ci ert os met abol i t os i nt ermedi os como elpi ruvat o, l act at o, mal at o, f umarat o, y oxal oacet at o, j unt o con el di óxi do de car bono esenci al .Elmet abol i smodell act at opuededefini relgradodeaci dezdel apl aca dent al .
E.Medi odecul ti voen l acualcrece Paracul t i vo:Medi osAgardel actat ooAgardecer ebr ocor azón i nf usi ón( BHI ) . Paraai sl ami ent osel ect i vo:Medi oAgardel act at ocon715mcg/mldevancomi ci na. Paraelmant eni mi ent o:l i ofil i zaci ón enl echedescr emadaparaal macenami ent oa l ar gopl azo. ParaI ncubaci ón
Temper at ur a:3037° C Ti empo:48hor as. Ambi ent e:anaer obi os. pH:6. 58. 0.
F.Patol ogí asqueproduceapart esdel adel acavi dadoral l l onel l ar La Vei ara vezesun pat ógeno i mport ant e.Est osor gani smospr oducen ser ol ógi coespecí ficasendot oxi nas( l i popol i sacári dos)quei nducen pi r ógenosyel f enómenodeSchwar zmanenconej os.
Lasi nf ecci onescausadasporest asbact eri asr aravezsei nf ormaron,yaqueenl a mayorí adel oscasossonconsi der adoscomoflor anormalomi cr oor gani smosno pat ógenos. Han si do ai sl ados de i nf ecci ones de cabeza y cuel l o, l a pi el e i nf ecci ones de t ej i dos bl andos e i nf ecci ones en elt r act or espi r at ori o,l í qui do per i t onealyl asangr eyt ambi én mor deri nf ecci onesdel aher i da La mayor í ade Vei l l onel l aspapart i rdemuest r ascl í ni cassonV.párvul a,si not ambi énV.di spar , V.At ypi caysehan ai sl adodemuest r ashumanasespeci er eci én descubi ert aV. mont pel l i er ensi s.Vei l l onel l a sp puede ocurr i r en i nf ecci ones graves como l a meni ngi t i syendocar di t i s. Vei l l onel l a sp.Tambi én se ha i dent i ficado como una causa de di sci t i s( una i nflamaci óndeldi scoi nt ervert ebral )anaeróbi ca. Se ai sl ó especi es Vei l l onel l a en sei s paci ent es con neumoni t i s anaeróbi co;t r es ai sl ami ent os se hi ci er on cr ecer en cul t i vo pur o. Tambi én cul t i var on est e or gani smo en cuat r o paci ent es cada uno con absceso pul monar y empi ema. Br ook7r evi sól os83ai sl ami ent osdeespeci esVei l l onel l aqueserecuper aron en 83ni ñosdur ant eunperí odode20años. En aspi r aci ón bact er i asanaer obi asneumoní a de un si t i odet r ansport enormal ( or of ari nge)pueden pasara ot r a área normal ment el i brede or gani smos par a pr oduci ri nf ecci ón en ese si t i o. Est os pat ógenos oport uni st as r ara vez se r ecuper an como ai sl ami ent os i ndi vi dual es.A menudo se mez cl an con ot r as bact eri asanaer obi asoaer obi as.
G.Sensi bi l i dad anti bi óti ca Vei l l onel l a spp.Son gener al ment esuscept i bl esa l a mayorí a del osant i bi ót i cos ut i l i zados para el t r at ami ent o de i nf ecci ones anaer obi os, i ncl uyendo l os ant i bi ót i cos βl act ámi cos ( peni ci l i nas y cef al ospori nas) , cl i ndami ci na, met r oni dazol .Si n embargo,Vei l l onel l a spp.Son gener al ment er esi st ent es a l a t et raci cl i naysól osonpocosensi bl esal aeri t romi ci na. Esi mper at i voquecadavezquel asi nf ecci onescausadasporVei l l onel l aspp.Se sospecha, se ut i l i zan agent es di st i nt os de ést os. Ai sl ados ocasi onal es de Vei l l onel l a spp.Puede,si n embar go,muest r an r esi st enci aal a peni ci l i na,así comoot r osagent es.
Tabl a 1.Di st ri buci ón de cepas Vei l l onel l a de acuer do a su sensi bi l i dad a l os ant i bi óti cosβl act ámi cos.
Det ermi nadoporEt est .
ᵃ
Númer oent r epar ént esi si ndi caelnúmer odecepaspr obadas.
ᵇ
MATERIALESY MÉTODOS
Cepasbacteri anasycondi ci onesdecul ti vo.Rut al i s i nari ament esecul t i vaS.or Ac t i nomyc es or i s ATCC 43146 e 34 y n Todd - Hewi t t cal do. ( THB) ( Di f co l l onel l a Laborat ori es,Det r oi t ,MI )oen agarTHB.Vei sp.cepa PK1910 f uecr eci do en THB compl ement ado con 0. 6% de áci do l áct i co ( THBL) . A. act i nomycet emcomi t ansJP2 ( un bueno r egal o de D.Demut h,l a Uni ver si dad de Lousvi l l e,Loui svi l l e,KY)secul t i vabaen cer ebr ocorazón i nf usi ón supl ement ado ( BHI )( Di f co)con bi car bonat o de sodi o 0. 04% y ext r act o de l ev adur a 2%. f usobac t er i um ATCC 10953 f Nucl eaci ón de uecr eci doen BHIsupl ement adocon 0. 25% L -áci do gl ut ámi co.Ext r act o de Porphyr omonasgi ngi val i sATCC 33277 ( un buenor egal odeR. J Lamony ,Uni ver si t yofFl ori da,Gai nesvi l l e,Fl ori da)f ue cul t i vada en BHU supl ement ado con 0, 1% de l evadura,0. 5% de hemi na y menadi ona de 0. 001%.Todas l as especi es f uer on cul t i vadas en una Bact r on anaer obi o( N2CO2-H2 90: 5: 5)cámara ambi ent al( Shel don Manuf act uri ngI nc. , Cornel i us,OR)a37°C. Preparaci ón desal i va.Sal i vade6a10i ndi vi duossanosf uer ecogi doen elhi el o, agrupado en elhi el oyt r at ado con di t hi ot hei t olde 2, 5 mM por10 mi n con agi t aci ón para r educi rl a agregaci ón de pr ot eí nas sal i val es. La sal i va f ue cent ri f ugada ypr ocesada como sedescri bi ó ant er i orment e( 17) .Br evement e,el sobr enadant esedi l uyócon aguadest i l adaparapr oduci r25% sal i vay l uegose fil t r óat r avésde un 0. 22 -μ m acet at o de cel ul osa l i br e de t ensi oact i vosde t amañodepor o( SFCA)fil t r odebaj apr ot eí nadeuni ón( Nal geNuncI nt ernat i onal , Rochest er .NY)yal macenadoa20°C.Ant esdesu uso,l asal i vasedescongel an y secent ri f ugó parar emovercual qui erpreci pi t ado r esul t ant edel a congel aci ón y descongel aci ón. Anál i si s de l actato.Concent r aci ones de l act at o( μM)se cal cul an a part i rde curv as est ándarobt eni das medi ant edi l uci onesser i adas 2 vecesdel act at o.Se cuant i ficar on l asconcent r aci onesdeáci do l áct i co en fil t r o -sal i va est éri len el depósi t oyl asal i vadeefluent edel asal i dadel acél ul adefluj oen 4hy18hcon un ki t de anál i si s aci do l áct i co ( Bi o vi si ón,Mount ai n Vi ew,CA) .La sal i va efluent essefil t r óat r avésdeun0. 22-μm ant esdefil t r oparaanál i si s. Preparaci ón del acél ul adefluj o.Dost r acks( cadapi st aer a40mm del argo,3 mm deanchoy2mm prof undo)semuel enenunbl oquedepol yer t hyl enedeal t a densi dad,r esul t ando en doscompart i mi ent os,cada unocon un vol umen deμl 240 –.Un cubr eobj et osdevi dri oquesi rv ecomoelsust r at odefij aci ón paral a bi opel í cul a cr eci ent e,f ue asegur ado a l as cél ul as de fluj or eut i l i zabl e con un adhesi vodesi l i cona.Lascél ul asdefluj of uer on l i mpi adasdur ant el anochecon
0. 1m HCLyenj uagacon5mldeaguadest i l ada,segui dadei nyecci óndeet anolal 70% enl ascél ul asdefluj oei ncubardur ant e20mi n.Lascél ul asdefluj of uer on t r at adas l uego con sal i va humana es t ér i ldel25% por15 mi n a 37°C en una cámaradeanaer obi apar aacondi ci onarl asuperfici edevi dri ocon component es s a l i v a l e s .
Condi ci ones de creci mi ento de bi ofil m en l as cél ul as de fluj o.Cul t i vos bact eri anosdur ant el anochef uer oncosechadasporcent ri f ugaci ónyl avadosdos vecescon sal i va humana est éri l25% yl a densi dad ópt i ca a 600 nm seaj ust ó usandosal i vaen0, 1,queesequi val ent eapr oxi madament ea1x107 a3x107 cél ul as/ml .fluj odel ascél ul asf uer on i nocul adocualuna,dosot r esespeci es. Dos –especi es.Dos –especi esy t r es–especi esi nocul aci onesf uer on pri mer o coagr egant es( mez cl ando por ci onesde0. 1 mlde combi naci onesapr opi adas de Vei l l onel l a sp. al i s, A. or i s, F, nucl et um, P . gi ngi v al i s y A. , S. or act i nomycet emcomi t ans [ equi val ent eaal r ededorde1 x106a3x106cél ul asde cadaespeci es] ) ,quef uesegui dasporl ai ncubaci ón del ascél ul asdefluj oen l a l l onel l a cámaraanaer óbi caparapr oporci onarun ambi ent ef avor abl eal a Vei sp., P . gi ngi v al i syF .nuc l e at um,que son anaer obi os est ri ct os.La úni ca f uent e nut ri ci onalf uesal i vade25% est ér i lsumi ni st r adoconuncaudalde0, 2ml /mi n, queapr oxi mósi nest i mul arelfluj osal i valenl aboca. Bi ofil m de ti nci ón.Ti nci ón del ascél ul asvarí aen l osdi f er ent esexperi ment os. Cuando l as cepas f uer on cr eci endo como monocul t i vos.Se vi sual i zar on por i nmunofluorescenci apri mari aconcadaAl exaFl uor488( I nvi t r ogen)–conj ugada i nmunogl obul i naG deunant i sueropol i cl onalyS.oral i s,a.oral i s,Vei l l onel l asp. Cuando vari as especi es f uer on i nocul ared,vi sual i zaci ón de especi es f ue por i nmunofluor escenci a pri mari a con Al exa Fl uor 488,Al exa Fl uor 633, Al exa Fl uor 488,Al exa Fl uor546,Al exa Fl uor488 -yAl exa Fl uor546 –conj ugada al i s,Vei l l onel l a A al i s, i nmunogl obul i naG deunant i suer opol i cl onalaS.or sp . , .or F. nucl eat um, A. ac t i nomyc e t emc omi t ans ngi v al i s y P. gi , respect i vament e. I nmunofluorescencef uereal i zadopori nyecci ón deant i cuerpos( 5μg/mlenfil t r o est eri l i zadof osf at ot ampón sal i no[ PBS]quecont i eneal búmi nadesuer obovi no 1% wt /vol )enl api st adel acél ul adefluj oapr opi adoei ncubardur ant e20mi n. Un úl t i mo l avado con PBS habí a precedi do mi cr oscopí a de l áserconf ocal . No hubo r eact i vi dad cr uzadacon cepasnohomol ogasobser vóbasadoenl at i nci ón deant i cuerpos. I magen yanál i si sestadí sti co.TCS-SP2conf ocalmi cr oscopi o( Lei ca,Ext on,PA) con un 40 x 1, 25aper t ur a numér i ca ( NA)acei t ei nmer si ón l ent ef ueut i l i zada
par a gr abarmont onesde i magen conf ocalen ci nco l ugar esalazarcer ca del cent r odel ascél ul asdefluj o,al t erarquef ot osi nt ét i cadebi ofil m sedet ermi nar on por anál i si s vol umét ri co ( I MARI S ver si ón 5, 71;Bi t pl ane AG,Zuri ch,Sui za) . Umbr al es de bi ofil t r os fluor escenci a f uer on fij ados manual ment e para pí xel es r oj os,v er desy azul es,con voxel s cúbi cos ut i l i zados para l a det ermi naci ón del bi ovol umen.Ci ncoconj unt osdedat osconf ocal esseanal i zar on par acadapunt o del t i empo, y se cal cul ar on l a medi a y desvi aci ón est ándar . Un anál i si s uni di r ecci onalde var i anza en elni velde confianza del95% con un Tukeyno paramét ri ca prueba decomparaci ón de paresse ut i l i zópara det er mi narsil os medi osf uer on est adí st i ca ysi gni ficat i vament edi f er ent esent r el ospunt os4hy 18 h det i empoparacadacondi ci ón ( uno,dosyt r esespeci es)en l asal i vadel a cél ul adefluj o.Todasl asi mágenespresentadasson pr oyecci onesmáxi masdel a pi l adei magenconf ocalcomopr oduci dosporelsof t waredeLei caTCS( Lei ca) .
RESULTADOS Ensayo de áci do l ácti co.Secuant i ficóeláci dol áct i codesi ni nocul arsal i vay sal i va efluent es de fluj o cel ul ar de unodos,y cél ul as de fluj ot r es especi es i nocul adasen 4 h y18 h dei ncubaci ón.Elcont eni dodeáci dol áct i codesal i va quef ue16μM al i s Ent r eeli nócul odeunaespeci e,sól oS.or pr oduceáci dol act i codel asal i vay l l onel l as A i s sóloVei p. ut i l i z aác i dol ác t i c o ; .or par ecequenopudousaroproduci r áci do l áct i co ( Fi g. 1B) . Áci do l áct i co no f ue pr oduci do o consumi do por F. nuc l e at um, A. ac t i nomyc e t emc omi t ans y p. g i ng i v al i s ( dat os no most r ados) . Vei l l onel l a sp. r al i so A.or i s ,en col aboraci ón con S.o ut i l i zaron áci dol acti co a ni vel esdepordebaj ode5μM ( Fi g.1) .Encomparaci ónconsucapaci daddepar a l l onel l a sp f ut i l i zar eláci do l áct i co por sími smo ( Fi g.1B) ,Vei ue cl arament e capacesder educi rl aconcent r aci ón deáci dol áct i coaun ni velmuchomenoren dosespeci esdebi ofil mscon est r ept ococoso act i nomyces( Fi g.1 C) ,sugi ri endo esovei l l onel l aecr ecen bi en con est osdoscol oni zadoresi ni ci al es.En bi ofil msde t r es especi es ( Fi g. 1) , áci do l áct i co f ue ut i l i zado r ápi dament e( en 4 h) por A.or i syP .gi ngi v al i s,do vei l l onel l ae,except ocon ndeeláci dol áct i cof ueut i l i zado másl ent ament e.
Cél ul asi nocul adascon unaespeciedefluj o.S.oral i s,A.or i s,yVei l l onel l as p. f uer on i nocul adas en cél ul as de fluj o separ ado. I mágenes de l a bi opel í cul a f ormada seobt uvi er on despuésde 4 h y 18 h de i ncubaci ón y ut i l i zada para cuant i ficarl ascél ul asdel abi opel í cul acomodelbi ovol umen. Cadaespeci emost r óapegoal asuper fici edesal i vacondi ci onadaal as4 h ( Fi g. S.or al i s 2) .Despuésde18h dei ncubaci ón,elnúmer ode or gani smos parecen aument ar ( Fi g. 2, panel es super i or es) , per o l os i ncr ement os no f uer on l l onel l a si gni ficat i vas( Fi g.3) .Cr eci mi ent odeA.ori shasi dode3 veces,per o Vei ngi v al i s ,F.nuc l e at um y A. sp.no cr eci ó( Fi g.3) .Se i nf ormó ant es que P.gi act i nomycet emcomi t ans noc reci ócomosol aespeci e( 19–21) .
Fl uj odecél ul asi nocul adascon dosespeci es.Enelfluj odecél ul asi nocul adas l l onel l a r al i s,ambosadj con congr egadosdeVei sp.yS.o unt oa l a super fici ede sal i vacondi ci onada, como se mues t r a por l as especi es et i quet ado con l l onel l a ant i cuerposespecí ficos( Fi g.4,panel esi nf eri or es) .Laf ot osi nt et i ca de Vei al i s s p. .yS.or cadaaument o8vecesent r e4hy18h( Fi g.5A) ,l oquei ndi caque ambasespeci escreci er on ensal i va.Despuésdel ai nocul aci óndeVei l l onel l asp.y a.ori s,cada 7vecesmayorentr e4 h y18 h ( Fi g.4,panel essuper i oresy 5B) , i ndi candoqueambasespeci escr ecí anensal i va.
Fl uj odecél ul asi nocul adascontresespeci es. S.o r al i s e at um,per creci ócuando f ueasoci adocon F.nucl onocreci ócuandose A.ac t i nomyc e t emc omi t ans( .gi ngi val i s asoci ócon dat osnosemuest r a)o P .Est a l l onel l as especi fici dad f ueexpl or ada más i ncl uyendo a l a Vei p.como l at er cer a especi e yexami nandol af ormaci ón decomuni dadesdet r esespeci esr esul t ant es al i s, Vei l l onel l a encél ul asdefluj osal i vaal i ment adas.Curi osament e,S.or sp,yF. nuc l e at um f ot osi nt ét i ca aument a( Fi g.6,panel es super i ores)163,100y 23 A.ac t i nomyc e t emc omi t ans veces,r espect i vament e( Fi g.5) .Con ,f ot osi nt éti cadeS. or al i s y Ve i l l o ne l l a sp. aument o de 9-veces y 13- veces, r espect i vament e;l a
A. ac t i nomyc e t emc omi t ans aument f ot osi nt et i ca de l a ado 4 ( Fi g. 6, panel es r al i s,V ei l l onel l a .gi ngi v al i s i nf eri ores,y5D) .Fotosi nt ét i cadeS.o sp. .yP aument ó si gni ficat i vament e( 9,13y9veces,r espect i vament e)( Fi g.7,panel essuperi or esy al i s A.or i s.di Fi g.8A) .En cambi o,r eempl azar S.or con ol ugar a l a menor i syP .gi ngi v al i s( f ot osi nt éti cad A e .or Fi g.8B) ,aunquei ni ci alal asal i varecubi erta l l onel l as desust r at of ueexcel ent e( Fi g.7,panel esi nf eri ores) .Sól o Vei p.parece cr ecer a l as 18 h ( Fi g. 8B) . Est os dat os i ndi can al t a especi fici dad de l as
comuni dadesdet r esespeci esdecr eci mi ent oensal i va.
l l onel l as LasVei yl osest r ept ococosson met aból i cament evi ncul adosa t r avésde f erment aci ónest r ept ocóci cadeazúcar esenáci dol áct i co,l acualesunaf uent ede carbonopar al aVei l l onel l asacar ol í t i ca.Además,l ar el aci ón espaci alent r eest as especi esi nfluyen en l ar egul aci ón de genesi n vi t r o,eli nt er cambi o deseñal es l l onel l asp.c r e pt o c c o c us di f usi bl eent r eelsoci ocoagregado Vei epaPK 1910 ySt go r di ni iV288 r esul t aron en l ar egul aci ón posi t i vadeun pr omot ordelgen del a ami l asa en l a cepa es t r ept ocóci ca. Est os dat os sugi er en una asoci aci ón met aból i cacer cadel asdosespeci es.En elpr esent eest udi osei nf ormaeláci do l l onel l asp. S.or al i s l ácti co queseut i l i zaen l abi opel í cul aVei yenl osbi ofil msde ngi v al i s. t r es especi es con F. nucl eat um, A. act i nomycet emcomi t ans, o P. gi l l onel l a sp. S. Most r amos aquíquel a ut i l i zaci ón deáci do l áct i coa part i rde Vei or al i s dos es peci es de bi opel í cul as se pr oduce más r ápi do que l o hace con Vei l l onel l a s p. A. or i s dos bi opel í cul as especi es, l o que sugi er e que l os est r ept ococossepr efier enensoci ocomuni t ari osobr eact i nomi cesi nvi vo.
Lasespeci escon mayorpr obabi l i dad deest arpresent et empr anoen vi voson l os est r ept ococos de col oni zaci ón i ni ci alyact i nomi ces.La col oni zaci ón mi cr obi ana delesmal t e es un proceso r epet i bl e y sel ect i vo que i mpl i ca una especi e de sucesi ón. Medi ant e el uso de mét odos mol ecul ar es para car act eri zar t empor al ment el a di ver si dad mi cr obi ana en un model o de esmal t erecuperabl e,
St r e pt o c o c c us ,Ac t i no my c esyVei l l onel l a seencont r aron quepuedeest arent r el os
géner osdomi nant esdent r odel ospri mer os4dí asdel acol oni zaci ón.Losgéner os Fus o bac t e r i um yPor phyr omonas est aban pr esent esensól ounbaj opor cent aj ede secuenci as anal i zadas y porl ot ant o se consi der an col oni zadoresmedi as;del géner o Aggr egat i bact erno se det ect ó y se consi der a un col oni zadort arde.En nuest r ai nvest i gaci ón act ualdel as comuni dadesdelbi ofil m dedosespeci esi n l l o nel l as p. al i s ,A. vi t r o,Vei esun mi embroact i vocuandosecombi naconl a S.or or i s,P .gi ngi v al i s,F .nuc l eat um i nomycet emco mi t ans yA.act ,quei l ust r aun papel Vei l l onel l as cent r alde enelpr ocesosel ect i vodel acol oni zaci ón.Delmi smomodo, al i syF .nuc l e at um, i ncl uyendoVei l l onel l asp.comounat er cer aespeci econ S.or al i s i nomycet emcomi t ans al i syP .gi ngi v al i s conS.or yA. .act ,ocon S.or resul t aron enunexcel ent ecr eci mi ent odet odasl asespeci es. al i s,Ve i l l one l l a sp. ,y F .n uc l e at um Curi osament e,l os bi ovol umenes de S.or aumentar on si gni ficat i vament e ent r e 4 h y 18 h, cosa que demuest r a que Vei l l onel l asp. obrasdet eat r oypapeli nt egralen l af orest aci ón creci mi ent odel a al i s. comuni dadr obust aent r el oscongr egadosconS.or
Aunquehemospr obadosól osei sgéner osdebact eri asor al esenest osest udi osde cél ul asdefluj o,est ásur gi endounai magendecompat i bi l i dad comuni dadsal i vae at um ( al i ment adosy especi fici dad.Ant eri orment e,sei nf ormódeque F.nucl un i s col oni zadori ni ci aldelesmal t e)r equi ered eA.or ( un col oni zadori ni ci al ) ,con el fin de cr eceren pr esenci a de S.or al i s( un col oni zador i ni ci al ) ,elapoyo a l a sucesi ón conoci da de l as especi esen f orma or albi ofil ms.Además,sei nf ormó i nomyc e t emc omi t ans ( ant eri or ment e que A. act un col oni zador t arde) cr ece e at um c mut ual i st a con Vei l l onel l a sp.( un col oni zador pr ecoz)o F.nucl uando empar ej ados en un bi ofil m de dos especi es,per o no most r ar on un cr eci mi ent o si gni ficat i vocuando secombi nacon est ossoci oscoagr egados en un bi opel í cul a al i s e at um, det r esespeci es.Ennuest r oest udi oact ualsust i t ui mosS.or porF.nucl al i s l l onel l asp.c con elr esul t adodequeS.or yl aVei reci eron si gni ficat i vament e A.ac t i nomyc e t emc omi t ans no l per o de nuevo o hi zo,l o que sugi er e que el creci mi ent odeunabi opel í cul adet r esespeci esrequi eredi f erent esi nt eracci ones ent r e especi es que l o hace elcr eci mi ent o en una de dos especi es de A. act i nomycet emcomi t ans bi i s ( ofil m no puede cr ecer con S. oral dat os no .gi ngi v al i s( r al i sy most r ados) ;P un col oni zadormedi o)nopueden cr ecercon S.o de P .gi ngi v al i s S.or al i sA.act i nomycet emco mi t ans det r esespeci esde bi ofil m, l l onel l asp. ni ngunocrecer .Aquínosmuest r an queenunP.gi ngi val i sS.oral i s-Vei l as t r es especi es delbi ofil m l as t r es especi es cr ecen,si n embar go en un P.
gi ngi v al i sA.o r i sVei l l onel l a sp.de t r es especi es de bi ofil m ni nguno cr ecer de
maner asi gni ficant e. La i magen que surge es que sól o ci er t as combi naci ones de especi es son compat i bl escon elcr eci mi ent oyqueelcr eci mi ent omut ual i st aenbi opel í cul asde dos especi es no pr edi ce elcr eci mi ent o de bi opel í cul as en t r es especi es.Por .g i ngi v al i sA.or i sVei l l onel l asp. ej empl o,ni nguna del asespeci escr ecen en l aP bi ofil m det r esespeci es,aunqueporpar ej as,t odoscr ecenmut uament e. l l onel l asp.e Cl arament e,l aVei sun part i ci pant ei nt egr alen l ascomuni dadesde especi esmi xt asquef orman secuenci al ment een eldesarr ol l ot empr ano,l apl aca al i syF .n uc l e at um,l dentalmedi ayt ar dí a.Cuando se mezcl a con S.or a Vei l l onel l a sp.ex hi be elmayor i ncr ement o cr eci mi ent o que hemos obser vado hast al af echa,l oquesugi er equel ar ápi daut i l i zaci ón deest acomuni dad det r es especi esdeláci dol ácti co. l l onel l asp.s Además,nuest r osr esul t adosi ndi can quel aVei on mej orpar ej ascon S.or i squec A.or i s .gi ngi v al i s on cuandoP eselt ercersoci o.Est aobservaci ón se ve corr obor ada por l a ut i l i zaci ón más r ápi da deláci do l áct i co en elde t r es al i sVei l l onel l asp. P .gi ngi v al i s especiesS.or .Pr oponemosqueest epapelcent r alde l l onel l as e l as Vei n l af or maci ón de especi es múl t i pl es de l a comuni dad, especi al ment e con l os est r ept ococos, es un el ement o cl ave para f aci l i t ar l a sucesi óndeespeci eseneldesarr ol l odel apl acadent ali nvi vo.
CONCLUSI ÓN l l onel l as LaVei oncocosgramnegat i vosanaerobi osasoci adoscon sal udoral .Para suai sl ami ent o,sehanr eport adodi f er ent esmedi osdecul t i vo l l onel l a or Est os r esul t ados i ndi can que l a Vei alhumana en t r es especi es se di st ri buyenenl assuper fici esoral esquet ambi énest án ocupadasporsussoci os decoagregadasyporl ot ant opr oporci onan evi denci af uert edecol oni zaci ón j uega unpapelf undament alenl aecol ogí abact eri anadel acavi dadbucal .
RELEVANCI ACLI NI CA l l onel l aapar Comosedemues t r aenelest udi ol aVei eceen di f erent esestadi osdel a Pl aca Dent alsobr evi vi endo a l a pl aca i ni ci al ,madur a,subgi ngi valadheri da al di ent e,enpl acaf osasyfisuras,pl acaproxi mal .
Raravezsepr esent aen l aecol ogí abact eri anadelconduct or adi cul ar( abscesos pe ri api c al es ,c el ul i t i syf as ci t i s . Se encuent r a en l a Mi cr obi ol ogí a de l a i nf ecci ón per i odont al ( gi ngi vi t i s i nespecí ficasasoci adasapl acas) .
