UJI STERILITAS MENURUT FARMAKOPE INDONESIA EDISI 5
Prosedur farmakope ini didesain bukan untuk menjamin bahwa satu bets produk adalah steril atau telah disterilkan. Hal ini terutama harus disertai diser tai dengan validasi proses sterilisasi atau prosedur proses aseptik. Uji sterilitas sterilitas ditujukan ditujukan untuk menganalisis menganalisis senyawa-seny senyawa-senyawa, awa, sediaansediaansediaa sediaan, n, atau alat-ala alat-alatt keseha kesehatan tan yang yang berdas berdasark arkan an farmako farmakope pe dipersy dipersyarat aratkan kan steri steril. l. Hasil Hasil uji uji dika dikata taka kan n meme memenu nuhi hi syara syaratt jika jika tida tidak k ditem ditemuk ukan an adan adany ya kontaminasi mikroorgnisme di dalam suatu sedian uji selama kondisi pengujian.
1.
Tind Tindak akan an Penc Penceg egah ahan an terh terhad ada a K!nt K!nta a"ina "ina#i #i Mikr Mikr!$ !$a a Pengujian sterilitas dilaksanakan pada kondis aseptik. Untuk mencapai
kondis kondisii tersebu tersebut, t, lingku lingkunga ngan n penguj pengujian ian harus harus dibuat dibuat sama sama seperti seperti uji steri sterili litas tas dilak dilakuk ukan an..
Tinda indaka kan n
menc menceg egah ah kont kontam amin inasi asi tida tidak k
bole boleh h
mempengaruhi mikroba yang ada dalam pengujian.
%.
Media dan S&h& Ink&$a#i edia-media yang digunakan dalam pengujian harus diuji terlebih dahulu
steri sterili litas tas !be bas dar i kont kontam amin inasi asi mikr mikroo oorg rgan anism isme" e" dan dan fert fertil ilita itasny snyaa !kemampuan untuk menumbuhkan mikroorganisme". edia yang digunakan untuk pengujian sterilitas adalah • Media 'air Ti!g(ik!(at Terutama digunakan untuk pertumbuhan bakteri anaerob, namun bisa juga digunakan untuk pertumbuhan bakteri aerob. #iinkubasi pada suhu $%-$& %'. Untuk sediaan yang mengandung pengawet rakasa yang tidak bisa diuji menggunakan metode penyaringan membran, edia 'air 'air Tiogl Tiogliko ikolat lat diinku diinkubasi basi pada pada suhu suhu (%-(& (%-(&%' sebagai sebagai pengga pengganti nti
SoyaBean-Casein Digest Medium yang telah tervalidasi yang tertera
•
pada uji )ertilitas *naerob, *erob, dan +apang. SoyaBean-Casein Digest Medium edia ini sesuai untuk pertumbuhan kapang dan bakteri aerob. edia
•
ini diinkubasi pada suhu ((,&(,& % Media &nt&k )!(!ngan Peni#i(in dan Se*a(!#!rin odifikasi pembuatan media, baik media asukkann SoyaBeanCasein Digest Medium dan edia 'air Tioglikolat yaitu dengan memasukkan secaar aseptic pada tiap wadah media sejumlah laktamase yang diperlukan untuk menginaktifkan sejumlah antibiotik, menggunakan sediaan -laktamase yang sebelumnya telah diuji inaktivasi daya hambat dari penisilin atau sefalosporin
e di a dikatakan steril dan sesuai untuk pengujian jika tidak terdapat kontaminasi mikroorganisme di dalam media tersebut setelah masa inkubasi selama / hari.
+.
U,i Ferti(ita# &nt&k Aer!$- Anaer!$ dan Kaang
0akukan uji fertilitas terhadap tiap lot media siap pakai dari tiap bets dari media yang dibuat menggunakan media kering atau dari dari bahannya. •
Untuk pengujian fertilitas edia cair Tioglikolat yaitu kedalam sejumlah media
terpisah
dinokulasikan
dengan
Clostridium
sporogenes,
Pseudomonas aeruginosa, dan Staphylococcus aureus !tidak lebih dari %%
•
koloni". Untuk pengujian fertilitas media 1Soybean Casein Digest Medium” yaitu media diinokulasikan dengan Aspergillus brasiliensis, Bacillus subtilis dan Candida Albicans !!tidak lebih dari %% koloni".
•
2nkubasi dilakukan tidak lebih dari $ hari untuk bakteri dan tidak lebih dari
•
& hari untuk kapang. edia dapat digunakan jika terlihat pertumbuhan mikroba yang jelas.
3eberapa cara untuk menghilangkan aktivitas bakteriostatik 4 fungistatik dalam sampel adalah5 •
Pe"$erian at enetra( #teri(
isalnya
penambahan en6im beta laktamase
mengandung
yangmengandung
antibiotika
pada sediaan yang golongan
penisiln
dan sefalosporin. •
Pengenceran #engan pengenceran sampel dengan larutan pengencer yang steril
sehingga konsentrasi yang dihasilkan tidak lagi memiliki kemampuan
•
menghambat pertumbuhan mikroba uji. Fi(tra#i Me"$ran #engan filtrasi menggunakan membran
diharapkan
larutan
yang
mengandung 6at bakteriostatik4fungistatik dapat lolos melewati membran sementara mikroba dapat bertahan pada membran.
/. U,i #teri(ita# Sediaan J&"(ah $ahan 0ang 0ang di&,i +ecuali dinyatakan lain, gunakan jumlah wadah sesua yang tertera pada tabel
berikut5 7umlah wadah dalam bets
7umlah inimum wadah yang diuji tiap media
Sediaan arentera( Tidak lebih dari %% wadah
%8 atau / wadah, diambil yang lebih
besar 0ebih dari %%, tetapi tidak lebih dari % wadah
&%% wadah 0ebih dari &%% wadah
(8 atau (% wadah, diambil yang lebih
9ediaan volume besar
kecil (8 atau % wadah, diambil yang lebih kecil
Terdapat dua cara pengujian sterilitas5 a.
Pen0aringan "e"$ran
9ampel yang berupa cairan dilewatkan ke suatu membran steril yang memiliki ukuran tertentu yang dapat menahan lewatnya bakteri. embran tersebut kemudian diinokulasikan ke media pengujian. Penyaringan embran digunakan untuk sampel yang sesuai, yaitu untuk sediaan yang mengandung air dan dapat disaring, sediaan yang mengandung alkohol atau minyak, dan sediaan yang dapat dicampur dengan atau yang larut dalam pelarut minyak, dengan ketentuan bahwan pelarut tidak mempunyai efek antimikroba pada kondisi pengujian. :unakan penyaring membran dengan porositas tidak lebih dari %,/&;m yang telah terbukti efektif menahan mikroba. - Penyaring selulosa nitrat digunakan utnuk larutan yang mengandung air, minyak dan larutan yang mengandung alcohol berkadar rendah. - Penyaring selulosa asetat digunakan untuk larutan mengandung alkohol berkadar tinggi.
'airan pengencer dan pembilan untuk penyaringan membrane .
'airan *
0arutkan g peptic digest of animal tissue dalam air hingga liter, jika perlu saring atau sentrifus hingga jernih, atur pH <,%,(. 3agikan ke dalam wadah dan sterilisasi menggunakan proses yang telah divalidasi (.
'airan # Untuk setiap liter cairan * tambahkan mol polisorbat 8 P , atur Ph hingga <,%,(, bagikan ke dalam wadah dan sterilisasi menggunakan proses yang telah divalisasi. :unakan cairan ini untuk bahan uji yang mengandung lesitin atau minyak, atau untuk alat kesehatan yang beretiket lumen steril.
$.
'airan + 0arutkan & g peptic digest of animal tissue= $ g beef a!tract dan % g polisorbat 8 P , dalam air hingga liter. *tur pH hingga setelah steril pH >,?%,(.
$.
In!k&(a#i Lang#&ng 9ampel berupa sediaan obat atau alat kesehatan langsung diinokulasikan
ke media pengujian. Pindahkan sejumlah sediaan uji ke dalam media hingga volume sediaan tidak lebih dari %8 volume media, kecuali dinyatakan lain. 7ika sediaan uji mempunyai aktivitas antimikroba, lakukan uji setelah dinetralisasi dengan bahan penetral yang sesuai atau dengan cara mengencerkan dalam sejumlah media yang sesuai. 0arutan minyak • :unakan media yang telah ditambahkan bahan pengemulsi yang sesuai,
•
misalnya polisorbat @% P dengan % g per liter. 9alep dan +rim 9iapkan dengan mengencerkan lebih kurang dalam % dengan bahan pengemulsi yang sudah dipilih ke dalam pengencer steril yang sesuai.
Pindahkan sediaan yang telah diencerkan ke dalam media yang tidak mengandung bahan pengemulsi.2nkubasi media yang telah diinokulasi
•
selama / hari. Aat Padat *mbil sejumlah sediaan dalam bentuk kering padat !atau yang terlebih dahulu dibuat suspensi dalam pengencer steril dalam kemasan langsung". Pindahkan bahan yang diperoleh ke dalam (%% ml media cair tioglikolat dan campur. #engan cara yang sama pindahkan juga ke dalam (%% ml 9oybean 'asein #esign edium dan campur.
Penga"atan dan Pena*#iran 2a#i( U,i Pada interval waktu tertentu dan akhir periode inkubasi, amati secara
visual adanya pertumbuhan mikroba dalam media. 7ika bahan uji menimbulkan kekeruhan pada media sehingga tidak dapat ditetapkan secara visual ada atau tidaknya pertumbuhan mikroba, / sejak dimulai inkubasi, pindahkan sejumlah media ke dalam media segar yang sama, kemudian inkubasi bersama-sama tabung awal salaam tidak kurang dari / hari. Jika tidak ter,adi ert&"$&han "ikr!$a- "aka $ahan &,i "e"en&hi er#0aratan #teri(ita#. 7ika terbukti terjadi adanya pertumbuhna mikroba, maka
bahan uji tidak memnuhi syarat sterilitas, kecuali dapat ditunjukkan bahwa uji tidak absah disebabkan oleh hal yang tidak berhubungan dengan bahan uji. Uji dikatakan tidak abash jika satu atau lebih kondisi dibawah ini dipenuhi5 - #ata pemanatauan mikrobiologi terhadap fasilitas uji sterilitas
-
menunjukkan ketidaksesuaian. Pengkajian prosedur uji yang digunkan delama pengujian menunjukkan
-
ketidaksesuaian Pertumbuhan mikroba ditemukan pada kontrol negative
-
9etelah dilakukan identifikasi mikroba yang diisolasi dari hasil uji, pertumbuhan mikroba dapat dianggap berasal dari kesalahan pada bahan uji, atau teknik pengujian yang digunakan pada proseduruji sterilitas. 7ika pengujian dinyatakn tidak abash maka lakukan uji ulang dengan
jumlah dan bahan yang sam dengan uji awal. 7ika ditemukan pertumbuhan mikroba pada uji ulang, maka sampel tidak memenuhi uji syarat sterilitas.
