1
2
Wawasan Kementerian kesihatan Malaysia Malaysia akan menjadi sebuah negara terdiri daripada individu,keluarga dan masyarakat yang sihat melalui kesihatan yang adil dan saksama, cekap, mampu disedia dan diperolehi,berteknologi sesuai, serasi pelenggan dan bersesuaian dengan persekitaran. Sistem ini juga akan mengutamakan kualiti, inovasi, promosi kesihatan, hormat kepada individu dan penyertaan masyarakat ke arah peningkatan mutu kehidupan.
Misi Kementerian Kesihatan Malaysia Mewujudkan penglibatan dan penyertaan masyarakat untuk kesihatan bagi merangsang dan memudahkan rakyat untuk :
Mencapai sepenuhnya kemampuan kesihatan mereka
Menghargai kesihatan sebagai asset yang bernilai
Mengambil langkah positif meningkatkan lagi dan mengekalkan status kesihatan bagi menikmati kehidupan yang lebih bermutu.
Objektif Kementerian Kesihatan Malaysia
Untuk membantu seseorang individu itu mencapai dan mengekalkan suatu taraf kesihatan bagi membolehkannya menjalankan kehidupan ekonomi dan sosial yang produktif dan dengan memberikan tumpuan kepada golongan yang kurang bernasib baik. Menyediakan perkhidmatan kesihatan asas untuk rakyat bagi mewujudkan kehidupan yang sihat dan bersih. Wawasan 3
Jabatan Kesihatan Wilayah Persekutuan Labuan
Kami akan menjadi pusat penggalakkan kesihatan dan perawatan perubatan yang utama melalui sistem penjagaan dan pencegahan yang adil dan saksama, cekap dan tersedia dalam teknologi yang serasi pelanggan mempratikkan sistem yang mengutamakan kualiti dan hormat kepada kemuliaan insan ke arah peningkatan mutu kehidupan.
Misi Jabatan Kesihatan Wilayah Persekutuan Labuan
Merangsang dan memudahakan rakyat mengekalkan status kesihatan mereka untuk menikmati kehidupan yang lebih bermutu dan produktif dari segi sosio-ekonomi mereka.
Objektif Jabatan Kesihatan Wilayah Persekutuan Labuan
Menyokong objektif kementerian kesihatan Malaysia dengan menyediakan perkhidmatan berbentuk penggalakkan, pencegahan, perawatan dan pemulihan yang cekap, berkesan dan serasi pelanggan.
Wawasan Hospital Wilayah Persekutuan Labuan Hospital Labuan akan menjadi perawatan perubatan yang utama melalui sistem perubatan dan kesihatan yang adil dan saksam, cekap dan tersedia dengan teknologi yang serasi pelanggan mempraktikkan system yang mengutamakan kualiti dan hormat kepada kemuliaan insan ke arah peningkatan mutu kehidupan. Misi 4
Hospital Wilayah Persekutuan Labuan Merangsang dan memudahkan rakyat mengekalkan status kesihatan mereka untuk menikmati kehidupan yang lebih bermutu dan produktif dari segi sosio-ekonomi mereka. Objektif Hospital Wilayah Persekutuan Labuan Menyediakan kemudahan rawatan perubatan yang cekap, cepat dan berkesan serta berfokuskan pelanggan supaya pelanggan dapat pulih dengan segera dan dapat menjalankan aktiviti kehidupan seharian dengan sempurna.
Visi Unit Makmal Menyediakan perkhidmatan Patologi yang cekap, tepat dan berinovasi berlandaskan system kualiti yang memenuhi kepuasan pelanggan. Misi Unit Makmal Perkhidmatan Patologi akan menjadi satu perkhidmatan yang cemerlang menggunakan teknologi yang sesuai, terkini dengan anggota yang berilmu, berjiwa murni, peka terhadap keperluan pelanggan berteraskan budaya kualiti dan kerja berpasukan serta profesionalisme demi kecemerlangan rawatan pesakit.
5
PENGENALAN HOSPITAL
Hospital Labuan mula dibina pada 10 Oktober 1991. Ianya terletak di Pulau Labuan berhampiran dengan Negeri Sabah dengan keluasan 12.047 hektar persegi dan keluasan tapak bangunan kira-kira 31,969 meter persegi. Ciri-ciri binaan tidak seperti hospital-hospital lain kerana bangunannya berkonsep nukleus seperti rajah 1.0. Kedudukannya adalah 6 km dari pusat bandar Wilayah Persekutuan Labuan dan lokasinya betul-betul ditengah Pulau Labuan.
6
Mula beroperasi pada 10 Jun 1995 dan telah dirasmikan oleh Bekas Perdana Menteri Tun Dr. Mahathir bin Mohamad pada 29 Ogos 1996 dengan mempunyai kapasiti 109 katil. Hospital Labuan merupakan hospital dengan pakar iaitu Pakar Perubatan, Pakar Bedah Am dan Pakar Bius. Pakar-pakar untuk disiplin seperti ENT,Paediatrik, Psikiatrik dan sebagainya adalah dari Hospital Queen Elizabeth, Hospital Likas atau Hospital Mesra Bukit Padang, Kota Kinabalu, Sabah. Kesemua pakar menjalankan klinik di Klinik Pakar. (Klinik Pakar 1,2,3 dan 4).
7
SEJARAH AWAL PENUBUHAN INDUSTRI Latarbelakang Labuan adalah sebuah pulau yang indah terletak di Malaysia Timur dibawah pentadbiran Wilayah Persekutuan. Kedudukannya berhampiran Negeri Sabah kira-kira 17 kilometer dari daerah Menumbok, tempat perhubungan yang paling hampir serta berhampiran dengan Negara Brunei Darussalam di sebelah barat laut Mempunyai keluasan 87.52 km persegi. Keadaan permukaan buminya adalah rata tetapi sedikit sebanyak berbukit-bukit di sebelah utara dan barat serta mempunyai pantai yang landai. Jarak bibir pantai Labuan dengan tanah besar Borneo.
Sejarah Hospital Lama Dalam tahun 1940-an Labuan masih lagi dibawah pemerintahan "The Straits Settlement". Purata bilangan penduduknya hanya seramai kira-kira 8,000 orang sahaja. Pada mulanya perkhidmatan perubatan cuma mempunyai empat buah khemah iaitu Kampung kerupang, Kampung Layang-layangan, Hospital Lama dan Kampung Lajau yang mana di masa tersebut kategori rawatannya adalah lebih merupakan bersifat ketenteraan. Perkhidmatan digelar sebagai"
North
borneo
Nursing
Services"(NBNS).
Hospital lama kemudiannya didirikan selepas Perang Dunia Kedua iaitu dalam tahun 1946 oleh kontraktor yang bernama Chin Kontraktor dengan jumlah katil (9Bed Strength) sebanyak 60 buah sahaja. Jumlah kakitangannya pula di antara 40 hingga 45 orang sahaja.
Rumah Sakit Labuan – 1947
8
Kategori kakitangan pada waktu itu diantaranya adalah terdiri daripada Pegawai Perubatan, ketua Jururawat, Ketua Pembantu Hospital, pembantu Hospital Kanan Pembantu Hospital, Jururawat Perbidanan,Tukang
masak,
Pemandu
dan
Atendan.
Mulai dari tarikh tersebut, Pentadbiran Hospital Lama mengalami berbagai-bagai perubahan pengurusan di antaranya ialah British Borneo Corporation, British Military Administration dan Colonial North Borneo sehinggalah diserahkan kepada pusat pentadbiran pusat selepas kemerdekaan.
Sebilangan Kakitangan Hospital Labuan
Pegawai Perubatan "Pre-War" yang berakhir pada masa itu ialah Dr.On Kok Voo, Bahagian Jururawat pula ialah Ketua Jururawat Yolander Sia, manakala Ketua Pembantu Perubatanialah Dr.Abu Bakar diikuti oleh Mr.Lim See Loh dan Mr. Tan Kim Lee.
Latar Belakang Unit Makmal & Tabung Darah Unit makmal terbahagi kepada enam seksyen utama iaitu :
Patologi Kimia
Hematologi
Mikrobiologi Am 9
Tibi
Parasitologi
Kaunter
Setiap seksyen diselia oleh seorang Pegawai Sains (kecuali seksyen Hematologi dan Parasitologi).
Seksyen Patologi Kimia Berfungsi menjalankan semua ujian-ujian kimia rutin seperti Liver Function Test (LFT) dan ujian khas seperti ujian hormone dan tumor marker. Seksyen Hematologi juga terbahagi kepada dua fungsi utama iaitu ujian rutin seperti Full Blood Count (FBC) dan ujian tidak rutin seperti Peripheral Blood Film (PBF).
Seksyen Mikrobiologi merupakan seksyen terbesar di Makmal kerana mempunyai pelbagai subpengkhususan yang berbeza. Mikrobiologi Am menjalankan Culture and Sensitivity Test (C&S) bagi berbagai-bagai jenis smapel klinikal. Seksyen TB dan Parasitologi digabungkan buat masa ini sebagai Mikroskopi dan mengkhusus kepada ujian-ujian Acid-fast Bacteria (AFB), parasit darah terutamanya Malaria dan parasit usus. Hasil daripada polisi perkongsian hasil kerja,Mikrobiologi juga dipertanggungjawabkan untuk menjalankan ujian-ujian klinikal STAT seperti Urine FEME,Stool OB,Urine Pregnant Test dan sebagainya.
Seksyen kaunter merupakan satu usaha penambahbaikkan kepada perkhidmatan kaunter Makmal sejak tahun 2009. Sebelum tahun 2009, kaunter Makmal hanya menyediakan perkhidmatan pengambilan sampel pesakit luar. Dengan adanya kaunter dalaman, proses penerimaan sampel pesakit dan pengedaran laporan makmal dapat dijalankan dengan lebih sistemik. Unit Tabung Darah yang menyediakan Perkhidmatan Transfusi merupakan unit yang baru ditubuhkan di Hospital Labuan. Sungguhpun begitu,Perkhidmatan Transfusi telah lama wujud di Hospital Labuan dimana ia ditawarkan melalui Seksyen Tabung Darah dibawah Unit Makmal. Selaras dengan arahan penstrukutran semula (keputusan Mesyuarat JPPKK Bil 1/1997 dan Kertas Dasar Mesyuarat Perancangan dan Pembangunan Kementerian kesihatan Bil 6/1997), Unit Tabung Darah telah ditubuhkan pada tahun 2010. Walaubagaimanapun,Unit Tabung Darah tidak terpisah sepenuhnya daripada Unit Makmal.
10
Perkhidmatan Transfusi diselaraskan diperingkat Hospital melalui Jawatankuasa Transfusi darah. Jawatankuasa bertanggungjawab memastikan amalan transfuse yang selamat dan bersesuaian di Hospital Labuan. Jawatankuasa diberi kuasa menetapkan polisi dan amalan transfuse di Hospital Labuan. Pengurusan dan operasi harian Unit Tabung Darah dijalankan oleh anggota Unit dan diketuai oleh seorang Pegawai Y/M. Unit Tabung Darah terbahagi lagi kepada 3 seksyen utama iaitu Seksyen Perolehan, Seksyen Saringan Dan Seksyen Bekalan. Seksyen Perolehan Darah menjalankan 2 fungsi utama iaitu rekrutmen dan pengurusan penderna. Seksyen ini bertanggungjawab memastikan bekalan darah yang mencukupi untuk keperluan Hospital disamping menjaga keselamatan dan kebajikan penderma. Seksyen Saringan turut dikenali sebagai Transfusion Microbiology Laboratory (TML). TML bertanggungjawab menyaring semua darah penderma untuk memastikan bekalan daah bebas bebas daripada penyakit berjangkit bawaan darah iaitu HIV, Hepatitis B, Hepatitis C dan Sifilis. TML Hospital Labuan merupakan satu-satunya pusat saringan darah untuk Wilayah Persekutan Labuan. Seksyen Bekalan menjalankan operasi utama Perkhidmatan Transfusi iaitu pembekalan darah dan komponen darah yang telah disaring untuk kegunaan wad pesakit dalam Hospital. Bekalan darah yang disediakan termasuklah Whole Blood,Packed RBC,Platelet Concentrate (Whole Blood / Apheresis). Fresh Frozen Plasma dan Cryoprecipitate.
11
MAKMAL TABUNG DARAH
12
PENGENALAN Makmal tabung merupakan makmal yang terlibat dalam menguruskan beg darah bagi tujuan penyimpanan dan pengeluaran stok darah untuk pesakit. Unit Tabung Darah yang menyediakan Perkhidmatan Transfusi merupakan unit yang baru ditubuhkan di Hospital Labuan. Sungguhpun begitu,Perkhidmatan Transfusi telah lama wujud di Hospital Labuan dimana ia ditawarkan melalui Seksyen Tabung Darah dibawah Unit Makmal. Selaras dengan arahan penstrukutran semula (keputusan Mesyuarat JPPKK Bil 1/1997 dan Kertas Dasar Mesyuarat Perancangan dan Pembangunan Kementerian kesihatan Bil 6/1997), Unit Tabung Darah telah ditubuhkan pada tahun 2010. Walaubagaimanapun,Unit Tabung Darah tidak terpisah sepenuhnya daripada Unit Makmal. Perkhidmatan Transfusi diselaraskan diperingkat Hospital melalui Jawatankuasa Transfusi darah. Jawatankuasa bertanggungjawab memastikan amalan transfuse yang selamat dan bersesuaian di Hospital Labuan. Jawatankuasa diberi kuasa menetapkan polisi dan amalan transfuse di Hospital Labuan. Pengurusan dan operasi harian Unit Tabung Darah dijalankan oleh anggota Unit dan diketuai oleh seorang Pegawai Y/M. Unit Tabung Darah terbahagi lagi kepada 3 seksyen utama iaitu Seksyen Perolehan, Seksyen Saringan Dan Seksyen Bekalan. Seksyen Perolehan Darah menjalankan 2 fungsi utama iaitu rekrutmen dan pengurusan penderna. Seksyen ini bertanggungjawab memastikan bekalan darah yang mencukupi untuk keperluan Hospital disamping menjaga keselamatan dan kebajikan penderma. Seksyen Saringan turut dikenali sebagai Transfusion Microbiology Laboratory (TML). TML bertanggungjawab menyaring semua darah penderma untuk memastikan bekalan daah bebas bebas daripada penyakit berjangkit bawaan darah iaitu HIV, Hepatitis B, Hepatitis C dan Sifilis. TML Hospital Labuan merupakan satu-satunya pusat saringan darah untuk Wilayah Persekutan Labuan. Seksyen Bekalan menjalankan operasi utama Perkhidmatan Transfusi iaitu pembekalan darah dan komponen darah yang telah disaring untuk kegunaan wad pesakit dalam Hospital. Bekalan darah yang disediakan termasuklah Whole Blood,Packed RBC,Platelet Concentrate (Whole Blood / Apheresis). Fresh Frozen Plasma dan Cryoprecipitate.
13
CARTA ORGANISASI
MAKMAL BLOOD BANK
Siti Noor Aisyah Md Hussin Pegawai Sains C41
Raiman Lobungan JTMP U36
Rosnani Pelimin JTMP U29
Abdul Azis Ag. Basar JTMP U29
14
PENAKSIRAN HEMOGLOBIN Penaksiran Hemoglobin Menggunakan Kuprum Sulfat Peralatan yang diperlukan: A.
Radas : lanset pakai buang, swab alkohol, mikropipet, tips
B.
Reagen : larutan kuprum sulfat
Objektif: Menganggar paras hemoglobin penderma secara semikuantitatif, iaitu melebihi 12.5 g/dl atau kurang dari 12.5 g/dl. Prosedur: 1.
Jari manis penderma dibersihkan dengan swab alkohol dan jari manis penderma dicucuk dengan menggunakan lancet pakai buang.
2.
Titisan darah pertama yang keluar dari jari yang dicucuk dilap.
3.
Dengan menggunakan mikropipet dan tips, 50μL darah kapilari penderma diambil dan darah tersebut dimasukkan ke dalam bekas berisi larutan kuprum sulfat.
4.
Titisan darah yang dimasukkan ke dalam larutan kuprum sulfat diperhatikan.
Keputusan: Sekiranya titisan darah penderma tenggelam di dasar bekas larutan kuprum sulfat dalam masa kurang dari 10 saat, paras hemoglobin dianggarkan melebihi 12.5 g/dl. Namun sekiranya titisan darah timbul atau berada di pertengahan larutan, maka paras hemoglobin dianggarkan kurang dari 12.5 g/dl.
PENYEDIAAN AMPAIAN SEL A, B DAN O UNTUK PENGUMPULAN ABO SERUM Penyediaan Ampaian Sel A, B, Dan O Untuk Pengumpulan ABO Serum Peralatan atau bahan yang diperlukan: A.
Radas : serofuge, tabung uji 10x75mm, pipet pasteur 15
B.
Reagen : sel A, B dan O yang diketahui, salin normal
Objektif: Memastikan penyediaan ampaian sel A, B dan O boleh dipercayai dan mengurangkan kesilapan. Prosedur: 1.
Pilih sel A, B dan O yang diketahui di mana tiada hemolisis atau kekeruhan pada supernatan melalui pemerhatian secara kasar dan negatif bagi semua penyaringan virologi.
2.
Tiga tabung uji dilabel sebagai A, B dan O dan 1 ml sel padat ditambah.
3.
Sel dicuci dalam setiap tiub dengan salin normal sebanyak tiga kali. Cara mencuci sel adalah dengan sebatikan sel padat dengan salin normal dan diempar pada kelajuan 3000 selama 50 saat.
4.
Tiga tabung uji baru dilabelkan dan labelkan dengan A, B dan O dan tambahkan setitik sel darah padat dengan 19 titik salin normal untuk menghasilkan ampaian sel 5%.
MENGUJI ANTISERA ABO & RH (D) DENGAN ‘KNOWN CELLS’
Menguji antisera ABO & Rh (D) dengan ‘Known Cells’
Bahan dan Radas 1. Jubin 2. Kayu aplikator 3. Tiub 4. Pipet 5. pengempar
16
Reagen 1. Darah „Known Cells‟ 2. Antisera A 3. Antisera B 4. Antisera AB 5. Antigen D
Prinsip ujian Prosedur ini telah dicadangkan bagi kegunaan reagen tersebut yang bertujuan untuk mengesan agglutinasi langsung yang terhasil daripada sel darah merah dimana sel ini membawa antigen yang spesifik dan juga kehadiran antibodi yang spesifik.
Kaedah ujian(Teknik Jubin) 1. Sediakan darah( known cells ) yang telah dikenalpasti kumpulan darahnya. 2. Titiskan 1 titik darah „known cells‟ keatas jubin mengikut ruangan kumpulan iaitu A, B, AB dan Anti-D. 3. Keluarkan antisera A, B, AB dan Anti-D. 4. Titiskan 1 titik bagi setiap antisera dan antigen D pada ruangan kumpulan tersebut. 5. Calitkan darah tersebut menggunakan kayu aplikator serta goyangkan jubin. 6. Perhatikan agglutinasi yang terhasil. 7. Catatkan pemerhatian.
Kaedah ujian(Teknik Tiub) 1. Sediakan darah(known cells) yang telah dikenalpasti kumpulan darahnya. 2. Sediakan 3 tiub yang berlabel darah A,B,AB dan anti-D. 3. Titiskan 1 titik darah ke dalam tiub yang berlabel dengan menggunakan pipet. 17
4. Keluarkan antisera A, B AB dan Antigen D. 5. Titiskan 1 titik antisera kedalam tiub tersebut dengan menggunakan pipet. 6. Empar pada 3000rpm dalam masa 15 saat. 7. Perhatikan angglutinasi yang terhasil. 8. Catatkan pemerhatian.
Interpretasi ujian Antisera Antisera A
Antisera B
Antisera AB
Antigen D
A
+
-
-
+
B
-
+
-
+
O
-
-
-
+
AB
+
+
+
+
Kump. Darah
PENGUMPULAN ABO PENUH DAN RHESUS-D MENGGUNAKAN KAEDAH JUBIN Pengumpulan ABO Penuh Dan Rhesus-D Menggunakan Kaedah Jubin Peralatan yang diperlukan: A.
Radas : jubin, kayu aplikator, pipet pasteur
B.
Reagen : anti-A, anti-B, anti-AB, anti-D, sel A, sel B, sel O
Prinsip:
18
Bagi pengumpulan ABO dan Rhesus D langsung, kehadiran aglutinasi sel darah merah dengan antisera yang diketahui menentukan kehadiran antigen yang melekat pada permukaan sel darah merah. Sekiranya terdapat aglutinasi pada sel darah yang diuji ini menunjukkan kehadiran antigen tertentu dan menentukan kumpulan ABO dan Rhesus D sel darah tersebut, sama ada A+, B+, AB+ atau O+. Kehadiran aglutinasi ini dikesan dengan menggunakan kaedah jubin. Manakala bagi pengumpulan ABO tidak langsung pula, tindak balas serum pesakit dengan reagen sel yang diketahui akan menghasilkan aglutinasi yang akan menentukan kehadiran antibodi di dalam serum. Ini kerana badan manusia menghasilkan antibodi terhadap antigen yang tidak dimiliki oleh individu. Oleh itu kumpulan darah ABO ditentukan berdasarkan kehadiran antibodi yang menunjukkan jenis antigen yang tiada dalam badan manusia. Objektif: Menentukan kumpulan darah ABO dan Rhesus D bagi sampel darah pesakit. Prosedur: 1.
Bahagian jubin yang telah dilabelkan dengan ANTI-A, ANTI-B, ANTI-AB, CELL A, CELL B, CELL O dan ANTI- D digunakan.
2.
Satu titik antisera (anti-A, anti-B, anti-AB dan anti-D) dititiskan ke atas jubin mengikut labelnya.
3.
Satu titik ampaian sel (sel A, sel B dan sel O) dititiskan ke atas jubin berdasarkan label.
4.
Satu titik darah pesakit dititiskan bagi pengumpulan ABO langsung dan Rhesus D, dan satu titis serum pesakit (pastikan sel darah dan serum adalah dari pesakit yang sama) dititiskan bagi pengumpulan ABO tidak langsung.
5.
Campuran sel dan antisera serta campuran serum dan reagen sel disebatikan dengan kayu aplikator sehingga membentuk syiling 5 sen.
6.
Aglutinasi yang terbentuk diperhatikan dan direkodkan.
Keputusan: Kehadiran aglutinasi : positif Tiada aglutinasi : negatif
19
Keputusan pengumpulan ABO dan Rhesus D (pengumpulan langsung sahaja) adalah berdasarkan jadual berikut : Anti A
Anti B
Anti AB
Anti-D
Sel A
Sel B
Sel O
Kumpulan darah
+
0
+
+
0
+
0
A+
0
+
+
+
+
0
0
B+
0
0
0
+
+
+
0
O+
+
+
+
+
0
0
0
AB+
PENGUMPULAN ABO DAN RHESUS-D PENUH DENGAN KAEDAH TIUB Pengumpulan ABO Dan Rhesus-D Kaedah Tiub Peralatan yang diperlukan: A.
Radas : serofuge, tiub kaca (10 x 75mm), pipet pasteur, bikar, rak tabung uji.
B.
Reagen : anti-A, anti-B, anti-D, sel A, B dan O yang diketahui, salin normal.
Spesimen: Sampel darah yang telah beku atau darah yang disimpan dalam tiub EDTA. Prinsip: Aglutinasi langsung sel darah merah dengan reagen tertentu menentukan kehadiran antigen tertentu. secara umumnya, tiada aglutinasi menunjukkan ketidakhadiran antigen tersebut. Kumpulan ABO dan rhesus D ditentukan dari corak reaksi dengan reagen yang diuji (anti-A, anti-B dan anti-AB serta anti-D). Serum kebanyakan individu berusia lebih dari enam bulan menghasilkan antibodi terhadap antigen ABO yang tidak dimiliki oleh individu berkenaan. Pengumpulan serum, menggunakan sel A1, B dan O digunakan untuk mengesahkan keputusan pengumpulan ABO sel. Skop ujian:
20
Prosedur ini digunakan untuk semua protokol ujian yang memerlukan pengumpulan ABO dan rhesus D. Keadaan berjaga-jaga: 1.
Tindak balas negatif palsu atau lemah di luar jangkaan mungkin berlaku apabila sampel darah dengan subkumpulan A atau B ataupun sel kord merah daripada bayi baru lahir. Tindak balas seperti ini juga boleh berlaku dengan sel yang telah disimpan dalam jangka masa lama.
2.
Pemboleh ubah ujian seperti teknik yang tidak betul, pengemparan atau pengemparan yang salah, alat radas kaca yang tidak dibersihkan dengan betul dan bahan terkontaminasi boleh mengakibatkan keputusan negative palsu atau positif palsu.
3.
Anomaliti serological boleh berlaku seterusnya menyebabkan tindak balas di luar jangkaan atau kepincangan pengumpulan ABO langsung dan tidak langsung.
Prosedur: A.
Pengumpulan ABO dan Rhesus D langsung 1.
Ampaian sel 3 hingga 5% disediakan dalam salin normal.
2.
Satu titik anti-A, anti-B, anti-AB dan anti-D ditambah ke tiub yang telah dilabelkan.
3.
Setitik ampaian sel ditambah ke dalam tiub dan disebatikan.
4.
Dimparkan pada kelajuan 3000 rpm selama 15 saat. Setiap tiub digoncang untuk diperiksa aglutinasi. Agglutinasi diredkan dan keputusan dilaporkan.
B.
Pengumpulan ABO serum/tidak langsung 1.
Setitik serum atau plasma dimasukkan ke dalam tiub yang telah dilabelkan.
2.
Setitik ampaian 2% sel A1, B dan O ditambah ke dalam tiub berdasarkan label.
3.
Disebatikan dan diempar pada 3400 rpm selama 15 saat. Setiap tiub untuk digoncang dan diperiksa aglutinasi. Agglutinasi digredkan dan keputusan dilapor.
Keputusan: Kehadiran aglutinasi : positif Tiada aglutinasi : negatif Keputusan pengumpulan ABO dan Rhesus D (pengumpulan langsung sahaja) adalah berdasarkan jadual berikut : 21
Anti A
Anti B
Anti AB
Anti-D
Sel A
Sel B
Sel O
Kumpulan darah
+
0
+
+
0
+
0
A+
0
+
+
+
+
0
0
B+
0
0
0
+
+
+
0
O+
+
+
+
+
0
0
0
AB+
PENYEDIAAN COOMB’S CONTROL CELL (CCC)
Penyediaan Coomb’s Control Cell (CCC)
Peralatan yang diperlukan : A.
Radas : Tiub, Pipet, Inkubator, Pengempar
B.
Reagen : Normal Saline, AHG
Spesimen : Sel darah merah O yang kuat
Prinsip :
22
Sel darah merah yang tersensitasi dengan serum globulin adalah digunakan sebagai kontrol positif untuk menguji fungsi AHG. Ia mengandungi IgG yang mana akan bertindak balas dengan AHG(mengandungi Anti-IgG). Anti-IgG di dalam AHG akan mengikat molekul IgG seterusnya membentuk agglutinasi.
Prosedur : 1. Tandakan 1 tabung uji (10x75mm) „CCC‟ dan masukkan 19 titik larutan salin. 2. Masukkan 1 titik Anti-D (cairan 1/20) dan sebatikan. 3. Tambahkan 4 titik SDM padat dari kumpulan O Rh(D) positif ke dalam tabung uji dan sebatikan dengan sempurna. 4. Eramkan tabung uji pada suhu 37°C selama 15 – 30 minit. 5. Basuh sel-sel
3 – 4 kali dengan larutan salin. Pastikan setiap pembasuhan dilakukan
dengan sempurna. 6. Buangkan semua larutan saline dengan sempurna pada pembasuhan yang terakhir. 7. Sediakan cairan 1/10 „CCC‟ dengan memasukkan 36 titik larutan salin ke dalam tabung uji. (Sebanyak 4 titik SDM padat telah dimasukkan ke dalam tabung uji ini semasa permulaan ujian). 8. Uji „CCC‟ yang disediakan dengan reagen AHG. Ia seharusnya memberikan reaksi agglutinasi positif 2+. 9. „Coomb‟s Control Cell‟ ini boleh digunakan untuk beberapa hari jika ia disimpan pada 4°C. (Jika sel-sel diampaikan di dalam larutan „Alserver‟s ia boleh disimpan hampir sebulan pada suhu 4°C.)
Interpretasi ujian A. 4+ = agglutinasi yang sangat banyak B. 3+ = agglutinasi yang banyak C. 2+ = agglutinasi sederhana banyak D. 1+ = agglutinasi sedekit E. 0+ = tiada pembentukan agglutinasi 23
UJIAN KESERASIAN DARAH (CROSSMATCHING) Ujian Keserasian Darah Pengenalan: Ujian keserasian darah terbahagi kepada dua jenis berdasarkan prinsipnya, iaitu : 1.
Ujian keserasian darah major : serum pesakit diuji dengan sel darah penderma bagi menentukan keserasiannya. Ujian keserasian major merupakan jenis ujian keserasian darah yang dijalankan di Unit Tabung Darah Hospital Queen Elizabeth.
2.
Ujian keserasian darah minor : sel darah pesakit diuji dengan serum penderma bagi menentukan keserasiannya.
Peralatan yang diperlukan: 1. 2.
adas : tabung uji, pipet pasteur, pengempar, mesin pengeraman 37C Reagen : LISS, AHG, saline normal, CCC (Coomb‟s Control Cell)
Prinsip: Ujian keserasian darah dilakukan berdasarkan prinsip aglutinasi. Serum pesakit ditambah kepada sel darah penderma. LISS (low ionic strength solution) ditambah untuk mempercepat tindak balas antigen-antibodi. Selepas pengeraman antibodi yang tidak terikat akan disingkirkan melalui proses pencucian sel dan reagen AHG (anti human globulin) ditambah. Kehadiran hemolisis atau aglutinasi menunjukkan kehadiran antibodi terhadap antigen tertentu pada sel darah merah penderma. Prosedur: 1.
Data pesakit pada borang permohonan bersama-sama spesimen yang dihantar diperiksa bagi mengesan sebarang kepincangan maklumat. Serum pesakit dipisahkan ke dalam tabung uji berlainan dan dilabelkan dengan nama dan nombor kad pengenalan pesakit beserta tarikh ujian dijalankan. 24
2.
Pek darah dikeluarkan dari kumpulan ABO yang sama dengan pesakit mengikut bilangan yang diminta dari peti simpanan darah.
3.
Tabung uji disediakan mengikut bilangan yang dikehendaki (2 tiub bagi setiap unit darah untuk kegunaan ampaian sel dan ujian keserasian darah) dan dilabelkan.
4.
segmen dari tiub pek darah dipotong dan ampaian sel darah penderma 2 hingga 5% disediakan.
5.
Dua titk serum pesakit ditambah ke dalam setiap tabung uji (satu tabung uji bagi setiap pek darah yang diminta).
6.
Pengumpulan ABO dan Rhesus D (teknik langsung) menggunakan anti-A, anti-B, anti-AB dan anti-D dijalankan.
7.
Setitik ampaian sel darah penderma 2 hingga 5% ditambah ke dalam tiub yang mengandungi serum pesakit.
8.
Sel darah penderma diuji dengan anti-A dan anti-B (pengumpulan semula darah penderma).
9.
Campuran serum pesakit-sel darah penderma disebatikan dan diemparkan pada kelajuan 3000 selama 15 saat.
10.
Tabung uji diperiksa secara makroskopik untuk mengesan kehadiran aglutinasi dengan menggoncangkan tabung uji perlahan-lahan. Tindak balas positif boleh digredkan dari 4+ sehingga 1+. ekodkan “0” untuk tindak balas sekiranya tiada aglutinasi dikesan.
11.
Dua titik LISS ditambah. Disebatikan dan dieram pada suhu 37 C selama 15 hingga 30 minit.
12.
Selepas pengeraman, tabung uji diempar pada kelajuan 3000 rpm selama 15 saat.
13.
Kehadiran aglutinasi atau hemolisis diperiksa secara makroskopik.
14.
Sekiranya keputusan adalah negatif, sel dicuci sebanyak tiga kali dengan saline normal. Saline normal dibuang selengkapnya selepas cucian ketiga.
15.
Dua titik AHG ditambah pada setiap tabung uji.
16.
Disebatikan dan diemparkan pada kelajuan 3000 rpm selama 15 saat.
17.
Kehadiran aglutinasi diperiksa secara makroskopik dengan menggoncangkan tabung uji perlahan-lahan. Ketiadaan aglutinasi diinterpretasikan sebagai “serasi” dan kehadiran aglutinasi sebagai “tidak serasi”.
18.
Semua keputusan (suhu bilik, 37 C dan AHG) direkod pada borang permohonan.
19.
Sekiranya ujian keserasian darah menunjukkan ketidakserasian antara darah pesakit dengan darah penderma sebelum darah dikeluarkan, permohonan darah tersebut dibatalkan dan dapatkan beg darah lain untuk diuji keserasiannya. 25
20.
Nombor beg darah, tarikh dan masa ditulis pada borang permohonan.
21.
Data dimasukkan ke dalam sistem komputer dan label dicetak untuk transfusi darah.
22.
Label tersebut dilekat pada beg darah yang diminta.
23.
Beg darah yang telah diuji keserasiannya dengan darah pesakit disimpan ke dalam peti sejuk.
Keputusan: 1.
Sekiranya tiada tindak balas (aglutinasi atau hemolisis) antara darah pesakit dan darah penderma, darah penderma adalah serasi untuk pesakit berkenaan dan boleh digunakan bagi tujuan pemindahan darah.
2.
Namun jika terdapat tindak balas (aglutinasi atau hemolisis) antara darah pesakit dan darah penderma, ini bermakna darah penderma adalah tidak serasi dan darah penderma lain hendaklah diuji keserasiannya dengan pesakit berkenaan.
UJIAN KESERASIAN DARAH ( GEL CARD)
Ujian keserasian darah(Gel Card)
Peralatan yan diperlukan: Pipet, gel card, tiub kaca
Spesimen : Serum pesakit, ampaian sel darah merah 5% dari penderma
Kaedah ujian 1. Terima sampel daripada kaunter 2. Pastikan nama pada tiub dan borang pesanan adalah sama. Jika tidak sama, hantar kembali ke kaunter
26
3. Rekodkan maklumat pesakit ke dalam buku daftar harian ujian keserasian & pembekalan darah/komponen darah. 4. Emparkan sampel pada kelajuan 3500 rpm selama 5 minit 5. Tentukan kumpulan darah pesakit. (Rujuk proses kerja ujian kumpulan darah ABO dan Rhesus) 6. Sediakan ampaian sel 5 % sel darah merah penderma yang mempunyai kumpulan darah ABO dan Rhesus yang sama dengan pesakit. 7. Labelkan mikrotiub (Gel Card) dengan nama pesakit dan no beg darah 8. Masukkan 50 ul ampaian sel darah merah penderma di langkah 5, kepada mikrotiub di langkah 6. 9. Tambahkan 25 ul serum pesakit ke mikrotiub di langkah 7. Sebatikan. 10. Eramkan mikrotiub selama 15 minit pada suhu 37°C dalam incubator 37SI 11. Kemudian, emparkan mikrotiub di langkah 9, selama 10 minit pada 1030 rpm menggunakan ID Centrifuge 6S 12. Semak keputusan (rujuk pengendalian ujian unit tabung darah & kawalan kualiti). Jika keputusan meragukan, ulangi ujian. 13. Rekodkan keputusan pada borang ujian keserasian dan buku daftar harian ujian keserasian & pembekalan darah/komponen darah. 14. Hantarkan borang ujian keserasian ke kaunter
Interpretasi ujian Interpratasi 4+ to 1+
Reaktif(incompatible)
Neg
Tidak reaktif(Compatible)
27
UJIAN COOMB’S (Ab Screening) Ujian Coomb’s-Direct
Peralatan yan diperlukan: A.
Radas :
pengempar, tabung uji, pipet
B.
Reagen : 0.9 natrium klorida (NaCl), AHG, CCC
Spesimen : 1. Sel darah merah
Prinsip: Reagen antihuman globulin polispesifik (AHG) digunakan untuk pengesanan aloantibodi rutin, ujian keserasian dan ujian antiglobulin langsung (Direct Antiglobulin Test, DAT). HAG polispesifik mengandungi antibody terhadap IgG manusia dan komplemen C3d dan turut bertindak balas terhadap molekul IgA dan IgM. Keputusan DAT positif menunjukkan bahawa sel darah merah tersensitasi secara in vivo dengan immunoglobulin atau komplemen.
Kaedah ujian 1. Masukkan o.5ml cell(EDTA) ke dalam tiub dan emparkan pada kelajuan 2000rpm dalam masa 15saat. 2. Basuhkan 3-4 kali dengan larutan saline. 3. Sediakan 2-3% suspensi sel. 4. Masukkan 1 titik 2-3% sel yang telah dibasuh ke dalam tiub. 5. Masukkan 1 titik AHG dan sebatikan. 6. Empar pada kelajuan 1000rpm dalam masa 60 saat. 7. Baca secara makroskopik dan mikroskopik. 8. Tambahkan reagen CCC 28
9. Emparkan pada kelajuan 2000rpm dalam masa 60 saat. 10. Baca secara makroskopik dan mikroskopik. 11. Catatkan keputusan samada negative atau positif.
Interpretasi ujian Negatif – Agglutinasi Positif – Tidak beragglutinasi
Ujian Coomb’s-Indirect Peralatan yan diperlukan: A.
Radas :
pengempar, tabung uji,pipet
B.
Reagen : 0.9 natrium klorida (NaCl), AHG, CCC, Screening Cell
Spesimen : Serum pesakit.
Kaedah ujian 1. Terima sampel daripada kaunter 2. Pastikan nama pada tiub dan borang pesanan adalah sama. Jika tidak sama, hantar kembali ke kaunter 3. Daftarkan maklumat pesakit dan permohonan ujian di buku daftar harian ujian AHG/GSH/Ab identification. 4. Labelkan 3 tiub dengan SI, SII, SIII ( bergantung bilangan Screening Cell yang digunakan) 29
5. Masukkan 2 titik serum yang hendak diuji ke dalam setiap tiub ujian di langkah 4 ( SI, SII, SIII) 6. Tambahkan 2 titik Screening Cell bagi setiap tiub di langkah 5. Sebatikan. 7. Emparkan tiub di langkah 6, pada kelajuan 1000 rpm selama 15 saat. 8. Periksa sampel daripada langkah 7, secara makroskopik & mikroskopik. 9. Semak keputusan (rujuk pengendalian ujian unit tabung darah & kawalan kualiti). Jika keputusan meragukan, ulangi ujian. 10. Masukan 2 titik LISS ke tiub di langkah 8. 11. Eramkan selama 15 minit pada suhu 37°C 12. Kemudian, emparkan pada kelajuan 1000 rpm selama 15 saat 13. Periksa sampel daripada langkah 12, secara makroskopik & mikroskopik. 14. Semak keputusan (rujuk pengendalian ujian unit tabung darah & kawalan kualiti). Jika keputusan meragukan, ulangi ujian. 15. Lakukan cucian berulang ke tiub di langkah 13, sebanyak 3 kali dengan saline. 16. Seterusnya, tambahkan 2 titik AHG . Sebatikan 17. Emparkan pada kelajuan 1000 rpm selama 15 saat 18. Periksa sampel daripada langkah 17, secara makroskopik & mikroskopik. 19. Semak keputusan (rujuk pengendalian ujian unit tabung darah & kawalan kualiti). Jika keputusan meragukan, ulangi ujian. 20. Jika keputusan negatif, tambahkan 1 titik Coombs Control Cell (CCC) dan keputusan mesti positif. 21. Rekodkan keputusan pada borang dan buku daftar harian ujian AHG/GSH/Ab identification. 22. Hantarkan keputusan bersama borang ke kaunter Interpretasi ujian Negatif – Agglutinasi Positif – Tidak beragglutinasi
30
UJIAN D Ujian D
Pengenalan : Ujian D adalah untuk pengesanan antigen D yang lemah pada darah pesakit. Antigen rhesus utama boleh hadir dalam pelbagai kombinasi dimana ia terdiri daripada 417 asid amino yang merentasi membrane sel darah merah sebanyak 12x. Lekuk kecil berada atas membran selebihnya terbenam dalam kript membran sel.
Peralatan yang digunakan : A.
Radas : Tabung uji, pipet, mesin pengempar dan inkubator
B.
Reagen : Normal salin, AHG dan CCC
Spesimen : Sel dara merah
Prosedur : 1.
Cuci sel sebanyak 3 kali dengan saline dan sediakan 5% suspensi.
2.
Tambah 2 titik Anti-D dan 1 titik suspensi 5% ke dalam tabung uji yang dilabelkan
3.
Emparkan tiub tersebut dan perhatikan agglutinasi.
4.
Eram pada suhu 37°C selama 15 minit.
5.
Keluarkan tabung uji dan cuci sel sebanyak 3 kali.
6.
Tambahkan 2 titik AHG.
31
7.
Empar pada 1000rpm selama 1 minit.
8.
Periksa sekiranya terdapat agglutinasi secara makroskopik.
9.
Sekiranya negatif, tambahkan 1 titis CCC untuk mengesahkan ujian dan reagen AHG adalah berkeadaan baik.
Interpretasi keputusan : Terdapat agglutinasi – Darah adalah rhesus positif, terdapat kehadiran antigen D yang kuat. Tiada agglutinasi – Darah adalah rhesus negatif, tidak terdapat kehadiran antigen D yang lemah.
PENYEDIAAN KOMPONEN-KOMPONEN DARAH
Penyediaan Komponen-komponen Darah
Peralatan yang digunakan: A.
Radas : Beg darah, mesin pengempar beg darah
B.
Reagen : CPD, CPDA
Spesimen : Darah penuh. 32
Packed cell 1. Biarkan darah penuh mendap pada 4°C atau emparkan pada 4100 rpm/5°C selama 5 minit. 2. Plasma dipindahkan pada beg kedua (packed cell dan plasma diasingkan) 3. Packed cell boleh disimpan pada 2-6°C selama 21 hari.
Platelete concentrate & Freeze Frozen Plasma 1. Blood pack digunakan (triple bag/satellite bag) 2. Biarkan darah penuh mendap pada 4°C atau emparkan pada 4100 rpm/5°C selama 5 minit. 3. Plasma dipindahkan pada beg kedua (packed cell dan plasma diasingkan). 4. Plasma diempar pada 4100 rpm selama 5 minit. 5. Supernatan plasma akan dibekukan dan dijadikan sebagai freeze frozen plasma. 6. Mendapan (kira-kira 50ml plasma) akan dibiarkan pada suhu bilik di atas „slow rotater‟ bagi mengelakkan platelet berkelompok. 7. Tempoh penyimpanan adalah selama 5-7 hari.
Cryoprecipitate 1. Whole blood diempar pada 4000 rpm selama10 minit dengan suhu 8°C. 2. Pindahkan 2/3 plasma ke beg kedua. 3. Tutup tiub dan asingkan Packed Cell (simpan pada 2.- 6°C) 4. Dalam 2 jam selepas SDM dipisahkan, plasma dibekukan pada -30°C 5. Biarkan kandungan cair pada 2 – 6°C selama 16 – 18 jam. 6. Emparkan dengan suhu 2 - 4°C pada 4100rpm selama 5 minit. 33
7. Terbalikkan beg dan biarkan supernatant mengalir masuk ke beg ketiga (Cryoprecipitate) dalam 10 – 15 ml plasma. 8. Simpan pada -18°C selama 12 bulan atau pada -30°C untuk mengekalkan faktor VIII.
34
MAKMAL HEMATOLOGI
35
MAKMAL HEMATOLOGI PENGENALAN Makmal Hematologi di Hospital Nukleus Labuan menjalankan beberapa jenis ujian iaitu ujian Full Blood Count (FBC), ujian Prothrombin Time (PT), ujian Partial Thrombopastin Time (PTT), ujian Eritrosit Sedimen Retikulosit (ESR), ujian Pencelupan Vital Supra (RETIC COUNT, ujian penyedian Filem Darah Nipis (FDN), dan ujian G6PD.
Ujian FBC dijalankan bagi
mengesan jumlah sel darah merah dan sel darah putih serta platelet samada dalam julat normal ataupun abnormal. ujian PT, PTT dijalankan bagi mengesan untuk memastikan samada pesakit tersebut mempunyai haemostasis yang normal ataupun abnormal. Disamping itu, terdapat beberapa ujian lain yang dilakukan di dalam Makmal Hematologi salah satunya adalah ujian G6PD. Ujian G6PD dilakukan biasanya pada bayi yang baru lahir. Terdapat juga ujian D–Dimer yang dilakukan dalam Makmal Hematologi, iaitu merupakan ujian khas dan hanya dilakukan oleh kaki tangan makmal sahaja. Dalam Makmal ini mempunyai dua kaunter penerimaan spesimen iaitu kaunter luar terutamanya untuk pesakit luar seperti KP1 (Klinik Pakar 1), KP2 (Klinik Pakar 2) dan KP3 (Klinik Pakar 3). Manakala kaunter dalam penerimaan spesimen dari semua wad yang berada dalam Hospital ini dan penerimaan spesimen dari OPD (Out Patent Department).
36
MAKMAL HEMATOLOGI
Raja Saidatul Nadia PSKH (Kimia Hayat) C41
Aisah Bt. Diman JTMP U32
Christina Nuri JTMP U29
Ajijah Ismail JTMP U29
37
Tajuk Ujian : Ujian Full Blood Count (FBC). FBC adalah sel-sel yang beredar dalam aliran darah pada amnya terbahagi kepada tiga jenis iaitu sel-sel-sel darah putih (Leukosit), sel-sel darah merah (Eritrosit), dan platelet (Trombosit). Pengiraan yang yang tinggi atau rendah mungkin menunjukkan kehadiran pelbagai bentuk penyakit, dan seterusnya pengiraan jumlah darah adalah yang paling kerap dilakukan dalam bidang perubatabn, kerana pengiraan jumlah darah ini dapat menggambarkan keseluruhan status kesihatan am pesakit.
Bahan dan radas: I.
Mesin analyzer CELL – DYN Ruby
Reagen : I.
WBC lyse
II.
HGB lyse
III.
Diluent/sheath
Sampel : I.
Sel darah merah
Prinsip : SEL – DYN Ruby merupakan sistem penganalisa dalam makmal hematologi yang mempunyai pelbagai parameter automatik yang direka khas untuk mendiagnos sel secara klinikal di dalam makmal yang digunakan secara in vitro. Instrumen ini menggunakan teknologi MAPSS (Multi – Angle Polarized Scatter Separation) untuk mendiagnos, menganalisis, mengira dan membezakan sel – sel (sel darah putih, sel darah merah dan platelet) pada sampel darah pesakit. Selain itu, instrumen ini menggunakan laser dan memancarkan cahaya optik untuk menganalis tanpa memerlukan refleks kepada mod ujian yang lain. Tahap hemoglobin akan ditentukan dengan kaedah kolorimetri dan pembilangan sel – sel adalah tertakluk kepada saiz dan ukuran setiap sel darah pesakit.
38
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah bersesuaian dengan pemohonan ujian.
II.
Sampel yang diterima mestilah mempunyai label dan maklumat pesakit yang lengkap pada borang dan tiub sampel.
III.
Borang dan sampel yang tidak lengkap akan ditolak dan pemberitahuan akan dilakukan kepada wad atau klinik berkenaan.
IV.
Sampel yang mengandungi label dan borang yang lengkap akan diambil dan pendaftaran pesakit serta pemohonan ujian pesakit akan dilakukan.
V.
Bagi ujian FBC, tiub yang digunakan adalah tiub EDTA bewarna ungu.
Prosedur : I.
Sampel yang diterima akan disebatikan dengan menggunakan mesin „mixer‟ sebelum ujian dijalankan.
II.
Nama dan kad pengenalan pesakit akan ditaip pada skrin mesin.
III.
Letakan tiub yang mengandungi spesimen darah menyentuh „ probe‟.
IV.
Tekan panel dibelakang „ probe „ untuk memulakan sedutan spesimen.
V.
Biarkan spesimen disedut sehingga „probe‟ naik keatas yang menandakan proses sedutan telah tamat.
VI.
Letakan spesimen di rak yang disediakan.
VII.
Spesimen tadi akan melalui proses pencairan dan pengiraan sel- sel darah putih, sel darah merah dan platelet.
VIII.
Setelah pengiraan selesai keputusan akan keluar di skrin dan direkod dalam borang permintaan ujian.
IX.
Keputusan akan dikaji, sekiranya memuaskan laporan akan direkod dan dikeluarkan. Tetapi jika keputusan tidak memuaskan, ujian akan diulangi.
Interpretasi ujian :
Julat Normal Total White Blood Cell ( TWBC)
Dewasa
4.00 – 11.0 x 10 9/L
Bayi
10.00 – 26.0 x 10 9/ L 39
Kanak – kanak 1tahun Haemoglobin ( HB%)
Lelaki
13.5 – 18.0 g/dl
Perempuan
11.5 – 16.5 g/ dl
Bayi ( darah tali pusat )
13.6 – 19.6 g/dl
Bayi kurang 3 bulan
9.5 – 12. 5 g/dl
Budak 1 tahun
11.0 – 13.0 g/dl
Budak 10 – 12 tahun
11.5 – 14.8 g/dl
Packed cell Volume ( PVC )
37.7 – 53.7
Total Red Blood Cell ( TRBC )
4.06 – 4.69
Mean Cell Volume ( MCV )
81.1 – 96.0
Mean Cell Haemoglobin ( MCH)
27.0 – 31.2 picogram
Mean Cell Haemoglobin Concentration ( MCHC )
31.8 – 35.4
Neutrofil (NEU)
39.3 – 73.7 %
Lymposyte (LYM)
18.0 – 48.3 %
Monosyte (MONO)
4.40 – 12.7 %
Eosinofilik (EOS)
0.600 – 7.30 %
Basofilik (BASO)
0.00 – 1.70 %
40
Tajuk Ujian : Ujian Prothombine Time (PT) Ujian PT dijalankan bersama- sama dengan ujian PTT bagi mengesan pesakit tersebut telah mengalami pendarahan atau lebam yang tidak dapat dijelaskan,tromboemlism,keadaan akut seperti pembekuan sebagai faktor yang digunakan pada kadar normal yang atau dengan keadaan yang kronik seperti penyakit hati. Apabila seseorang mempunyai kes trombotik atau keguguran labih dari satu kali,PTT merupakan sebahagian daripada penilaian untuk antikoagulan pecah atau antikardiolipin antibodi.
Bahan dan Alat Radas : I.
Kuvet
II.
Bering
III.
Mikropipet
IV.
Finnipipette
Reagen : I.
Neoplastine
Sampel : II.
Serum
Prinsip : Prinsip ujian ini terdiri daripada penggunaan Tromboplastin kalsium untuk mengukur masa pembekuan plasma atau serum pesakit dan untuk membandingkan dengan julat normal. Secara keseluruhannya, aktiviti pembekuan faktor II (protrombin), faktor V (proaccelerin), faktor VII (proconvertin), faktor X (stuart faktor) dan faktor I (fibrinogen).
Kaedah Ujian : I.
Sampel yang diterima mengandungi label dan borang yang di isi dengan lengkap.
II.
Pemohonan ujian yang diminta mestilah bersesuaian dengan sampel yang diterima.
III.
Bagi ujian PT dan PTT, sampel yang diterima mestilah didalam tiub yang bewarna biru kerana tiub ini mengandungi antikoagulan sodium sitrat. 41
IV.
Setelah itu, sampel yang diterima mestilah diempar terlebih dahulu untuk memisahkan sel darah merah dengan serum.
V.
Sampel disimpan pada rak berdekatan dengan mesin incubate PT dan PTT.
VI.
Pendaftaran dan pemohonan ujian akan dilakukan bagi sampel dan borang yang lengkap.
VII.
Manakala bagi sampel atau borang yang tidak lengkap akan ditolak dan pemberitahuan akan dilakukan pada wad atau klinik yang berkenaan.
Prosedur : I.
Masukkan baring di dalam kuvet dan di simpan pada incubate.
II.
50ul plasma atau serum di masukkan ke dalam kuvet tadi.
III.
Tekan „1‟ „test mode‟ dan tekan (
IV.
Tekan „1‟ untuk ujian PT dan tekan (
V.
Tekan „1‟ untuk kedudukan kuvet pada incubate dan tekan (
VI.
Incubate dilakukan selama 60 saat.
VII.
Kuvet tadi di pindahkan setelah berbunyi dan finnpipette – positif „4‟, Neoplastine Cl plus
). ). ) sebanyak dua kali.
„100ul‟ di masukkan kedalam kuvet tadi. VIII. IX.
Tekan (
) untuk incubate.
Tunggu sehingga result keluar dan rekod.
Interpretasi ujian :
Julat Normal Prothrombin Time
11.5 – 14.5 sec
Tajuk Ujian : Ujian Partial Thrombopastin Time (PTT) Ujian Partial Thrombopastin Time (PTT) adalah ujian darah yang dijalankan pada beberapa masa diambil untuk darah membeku. Ia boleh membantu mengesan jika pesakit mempunyai masalah pendarahan atau pembekuan.
Bahan dan Alat Radas : 42
I.
Kuvet
II.
Bering
III.
Mikropipet
IV.
Finnipipette
Reagen : I.
CK Prest
II.
CaCl2
Sampel : I.
Serum
Prinsip : Ujian Partial Thrombopastin Time melibatkan recalcification plasma dalam kehadiran jumlah cephalin yang standad (pengantian platelet) dan faktor XII pengaktif (kaolin). Ujian PTT melibatkan laluan pembekuan intrinsik (faktor XII, XI, IX, VIII, X, V, II dan I) kecuali platelet. Kaedah Ujian : I.
Sampel yang diterima mengandungi label dan borang yang di isi dengan lengkap.
II.
Pemohonan ujian yang diminta mestilah bersesuaian dengan sampel yang diterima.
III.
Bagi ujian PT dan PTT, sampel yang diterima mestilah didalam tiub yang bewarna biru kerana tiub ini mengandungi antikoagulan sodium sitrat.
IV.
Setelah itu, sampel yang diterima mestilah diempar terlebih dahulu untuk memisahkan sel darah merah dengan serum.
V.
Sampel disimpan pada rak berdekatan dengan mesin incubate PT dan PTT.
VI.
Pendaftaran dan pemohonan ujian akan dilakukan bagi sampel dan borang yang lengkap.
VII.
Manakala bagi sampel atau borang yang tidak lengkap akan ditolak dan pemberitahuan akan dilakukan pada wad atau klinik yang berkenaan.
Prosedur : I.
Masukkan baring di dalam kuvet dan di simpan pada incubate.
II.
50ul plasma atau serum di masukkan ke dalam kuvet tadi.
III.
Masukkan CK prest „50ul‟ pada kuvet tadi. 43
IV.
Tekan „1‟ “test mode” dan tekan (
).
V.
Tekan „2‟ untuk ujian APTT dan tekan (
VI.
Tekan „1‟ untuk kedudukan kuvet pada incubate dan tekan (
VII.
Incubate dilakukan selama 180 saat.
VIII.
Kuvet tadi di pindahkan apabila berbunyi dan finnpipette – positif „2‟, CaCl2 0.025 „50ul‟
). ) sebanyak dua kali.
di masukkan ke dalam kuvet tadi. IX.
Tekan (
) untuk incubate.
X.
Tunggu sehingga result keluar dan rekod.
Interpretasi ujian :
Julat Normal Partial Thromboplastine Time
28.0 – 45.0 sec
Tajuk Ujian : Eritrosit Sedimen Rate (ESR), Kadar Pemendapan Eritrosit. ES
berdiri untuk kadar pemendapan eritrosit. Ia juga dikenali sebagai „kadar sed‟. Ia adalah
ujian yagn secara tidak langsung mengukur berapa banyak keradangan ada di dalam badan. Bahan dan Alat Radas : I.
Tiub Westergent
II.
Mesin ESR
Sampel : I.
Sel Darah Merah
Prinsip : Kadar pemendapan eritrosit (ESR), ialah kadar di mana sel – sel darah merah mendap dalam tempoh 1 jam. Ia adalah ujian hematologi umum dan untuk menjalankan ujian, darah anticougulate diletakkan dalam tiub yang tegak, yang dikenali sebagai tiub Westergent dan kadar pemendapan sel – sel darah marah diukur dan dilaporkan dalam mm/h. Sejak di
44
perkenalkan penganalis automatik ke dalam makmal klinikal, ujian ESR telah dilakukan secara automatik. Kaedah Ujian : I.
Tekan „ON‟.
II.
Masukkan empat „SENSO TEST CUVETTES‟.
III.
Tekan (
IV.
Tekan ( UN) sehingga „SENSO
V.
Tunggu sehingga „SENSO TEST OK‟.
VI.
Tekan (
) tiga kali sehingga „SENSO TEST‟ kelihatan. TEST
UN‟ kelihatan.
) untuk sambungkan ujian.
Prosedur : I.
Pindahkan sampel darah ke dalam kuvate.
II.
Masukkan kuvate ke dalam „MINI VES‟.
III.
Tekan (
IV.
Tekan (RUN).
V.
Tekan (
) sehingga „WESTE GENT 1H‟kelihatan.
) untuk tengok result.
Interpretasi ujian :
Julat Normal Kaedah Westergen (ESR) :
mm/hr
Lelaki
:
0.15 mm/hr
Perempuan
:
0.20 mm/hr
Tajuk Ujian : Ujian Pencelupan Vital Supra (Reticulocyte Count). Ujian pengiraan jumlah retikulosit adalah ujian yang dijalankan apabila RBC yang menurun atau hemoglobin menurun dan hematokrit bagi mengesan fungsi sumsum tulang. Jika pengesanan yang kurang pasti,kaedah ini boleh memastikan lagi jika pesakit tersebut mempunyai keabnormalan pada sumsum tulang nya. Ujian ini juga dapat dijalankan andainya pesakit disyaki mempunyai gejala atau simptom seperti pucat,keletihan,kelemahan,sesak nafas atau 45
najis berdarah. Pengiraan retikulosit dilakukan bersama-sama dengan mengira 1 RBC, hematokrit, hemoglobin untuk memantau bagi fungsi sumsum dan tindakbalas kepada rawatan.
Bahan dan Alat Radas : I.
Tabung uji
II.
Maker
III.
Mikropipet
IV.
Incubater
V.
Slaid
VI.
Sisip kaca
VII.
Mikroskop
Reagen : I.
Larutan „Supra-Vitral‟
Sampel : I.
Sel Darah Merah
Prinsip : Reticulocyte adalah sel – sel darah merah muda yang mengandungi baki „basophilic ribonucleoprotin‟ dalam struktur nukleusnya. Bahan „Basophilic‟ ini akan bergantung dengan pewarna seperti Brilliant Cresyl Blue atau New Methylene Blue untuk membentuk mendapan biru yang berbintik – bintik atau berantai – rantai.
Kaedah Ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah bersesuaian dengan pemohonan ujian.
II.
Sampel mestilah mempunyai label dan maklumat pesakit yang lengkap pada borang dan tiub sampel.
III.
Borang dan sampel yang tidak lengkap akan ditolak dan pemberitahuan akan dilakukan kepada wad atau klinik berkenaan.
46
IV.
Sampel yang mengandungi label dan borang yang lengkap akan diambil dan pendaftaran dan pemohonan ujian pesakit akan dilakukan.
V.
Bagi ujian Reticulocyte, tiub yang digunakan adalah tiub EDTA bewarna ungu.
Prosedur : I.
1 tabung uji diambil dan dilabelkan nama pesakit atau nombor bagi pemohonan ujian yang banyak.
II.
50ml sampel darah dan 50ml reagen retic akan di pipetkan kedalam tabung uji tadi.
III.
Sebatikan tabung uji yang berisi sampel dan reagen tadi.
IV.
Masukkan kedalam incubater selama 30 minit.
V.
Buat smear, smear yang dibuat mestilah mengandungi ciri – ciri yang betul (mempunyai kepala, badan dan ekor).
VI.
Keringkan pada udara.
VII.
Lihat bawah mikroskop.
VIII.
Hasil keputusan akhir diambil dan direkodkan.
Interpretasi ujian : Julat Normal
Dewasa
: 0.2-2 %
Bayi
: 2.5-6 %
Tajuk Ujian : Ujian Penyediaan Filem Darah Nipis (PBF). Filem darah nipis biasanya dilakukan untuk menilai populasi sel darah apabila FBC mempunyai perbezaan yang dilakukan dengan pembilang sel darah secara automatic,menunjukkan kehadiran sel-sel abnormal atau belum matang. Ia juga boleh dilakukan apabila pesakit disyaki terdapat gangguan atau penyakit yang menjejaskan pengeluaran sel darah seperti anemia 1,berkurangan atau pengeluaran abnormal sel di dalam sumsum tulang serta pemusnahan sel peningkatan.
47
Bahan dan radas : I.
Slaid
II.
Sisip kaca
III.
Mikropipet
IV.
Mikroskop
Sampel : I.
Darah
Reagen : I.
Alkohol
Prinsip : PBF (Peripheral Blood Film) atau film daran nipis yang diwarnakan dengan pewarna tertentu dan diperiksan dibawah mikroskop. SDM normal digambarkan sebagai normochromic (warna yang normal) dan norocytic (saiz yang normal). Nilai MCV seolah – olah memberi pertunjuk kepada saiz SDM. Nilai MCV yang rendah selalu berhubungkait dengan saiz SDM yang lebih kecil daripada normal (microcytosis) sebaliknya nilai MCV yang tinggi berhubungkait dengan saiz SDM yang lebih besar (macrocytosis). SDP (Sel Darah Putuh) digamberkan sebagai „morphologically normal‟ pada individu yang sihat. Kehadiran sel – sel atypical lymphocytes, atypical mononuclear dan toxic granulation selalunya berhubungkait dengan infeksi. Impression yang diberikan adalah berdasarkan smear darah dan keputusan ujian darah yang lain.
Kaedah : I.
Sampel yang diterima mestilah bersesuaian dengan pemohonan ujian.
II.
Sampel mestilah mempunyai label dan maklumat pesakit yang lengkap pada borang dan tiub sampel.
III.
Borang dan sampel yang tidak lengkap akan ditolak dan pemberitahuan akan dilakukan kepada wad atau klinik berkenaan.
IV.
Sampel yang mengandungi label dan borang yang lengkap akan diambil dan pendaftaran dan pemohonan ujian pesakit akan dilakukan.
48
V.
Bagi ujian Filem Darah Nipis, tiub yang digunakan adalah tiub EDTA bewarna ungu.
Prosedur : I.
Sampel yang mengandungi label dan borang yang di isi dengan lengkap akan di ambil.
II.
Slaid dan sisip kaca di ambil dan sampel darah pesakit di ambil.
III.
Dengan menggunakan mikropipet, sampel darah di ambil dan dititiskan ke atas slaid.
IV.
Sisip kaca digunakan untuk membuat filem darah nipis.
V.
Filem darah nipis yang baik menggandungi kepala, badan dan ekor.
VI.
Smear di keringkan pada udara dan di fiksasi menggunakan alkohol.
VII.
Biarkan smear kering pada udara sebelum dilihat dibawah mikroskop.
VIII.
Keputusan yang dilihat akan diambil dan direkodkan ke dalam keputusan pesakit.
Interpretasi ujian : Julat normal
Peripheral Blood Film : 7.5 µm.
Tajuk Ujian : Ujian Glucose- 6 – phosphate – Dehydrogenase (G6PD). Ujian G6PD adalah yang dijalankan terhadap kanak-kanak yang mengalami jaundis berterusan sebagai bayi yang baru lahir yang tidak boleh dijelaskan oleh sebab lain. Ia juga boleh dilakukan terhadap pesakit yang telah mempunyai lebih dari satu kes yang tidak dapat dipastikan anemia hemolitik. Pengulangan ujian G6PD adalah dilakukan mungkin sekali sekala bagi mengesahkan penemuan awal atau jika keputsan adalah normal dalam sebuah kes hemolisis. Bahan dan Alat Radas : I.
Tabung uji
II.
Penebuk kertas
III.
Kertas G6PD
IV.
Mikropipet 49
V.
Maker
VI.
Jam
Reagen : I.
Glucose – 6 – Phosphate Dehydrogenase (G6PD)
Sampel : I.
Darah
Prinsip : Haemolysate dieramkan bersama dengan glucose – 6 – phosphate sebagai substrate dan triphosphopyridine nuclestide (TPN) sebagai co – enzyme bersama-sama dengan Brilliant Cresyle Blue Dye. Pengurangan hydrogen daripada glucose – 6 – phosphate dari hasil adanya G6PD di dalam campuran tindakbalas dan melibatkan pengurangan TPN kepada TPNH. Dye yang dicampurkan di kurangkan kepada sebatian yang tidak berwarna yang sama anggaran banyaknya dengan TPNH yang didapati. Ketiadaan atau kekurangan enzyme akan melibatkan timbulnya warna itu.
Kaedah Ujian : I.
Sampel yang diterima mengandungi label dan borang yang di isi dengan lengkap.
II.
Pemohonan ujian yang diminta mestilah bersesuaian dengan sampel yang diterima.
III.
Bagi ujian G6PD, biasanya sampel diterima pada kertas kecil yang mempunyai darah pesakit dan di kelipkan sekali dengan borang pesakit.
IV.
Pendaftaran dan pemohonan ujian akan dilakukan bagi sampel dan borang yang lengkap.
V.
Manakala bagi sampel atau borang yang tidak lengkap akan ditolak dan pemberitahuan akan dilakukan pada wad atau klinik yang berkenaan.
Prosedur : I.
1 Tabung uji di ambil dan di labelkan bersesuaian dengan nama pesakit atau nombor bagi sampel yang banyak. 50
II.
Kertas yang mengandungi sampel darah pesakit di ambil dan ditebuk dan diletakkan di dalam tabung uji tadi.
III.
Reagen G6PD akan diletakkan kedalam tabung uji tadi sebanyak 50ml menggunakan mikropipet.
IV.
Jam akan digunakan untuk menetapkan masa selama 15 minit.
V.
Kertas G6PD diambil dan sampel tadi diletakkan ke atas kertas itu dan di keringkan.
VI.
Masukkan kertas itu kedalam kotak khas untuk ujian G6PD „sinaran UV‟ dan tekan suiz „ON‟ serta lihat keputusannya.
VII.
Hasil akhir keputusan akan di rekodkan.
Interpretasi ujian :
I.
G6PD NORMAL
II.
G6PD DEFICIENT
III.
G6PD INTERMEDIATE
LEISHMAN Pewarnaan Leishman Prinsip: Pewarnaan Leisman merupakan campuran Methylene Blue dan Eosin. Larutan pewarna Leishman mewarnakan filem darah dengan kandungan alkohol metilnya. Sebagai pewarna neutral dalam medium beralkohol, pewarna Leishman hanya menunjukkan tindak balas pewarnaan setelah ditambah larutan penimbal. Tujuan: Untuk menghasilkan tindak balas warna pada sel-sel darah yang terbahagi kepada tiga komponen utama : nukleus, sitoplasma dan granul. Prosedur:
51
1.
Letakkan filem darah nipis di atas rak, banjirkan slaid dengan pewarna Leishman dan biarkan selama 30 saat hingga 1 minit.
2.
Tambahkan 2 ml larutan penimbal pH 6.8 dan biarka selama 10 minit.
3.
Bersihkan slaid filem darah dengan air mengalir untuk membersihkan sisa metalik pada filem darah.
4.
Biarkan filem darah nipis kering.
Keputusan: Komponen sel
Warna
Nukleus
Ungu-merah jambu
Sitoplasma limfosit
Biru ke kelabu kebiruan
Granul neutrofil
Merah jambu keunguan
Granul eosinofil
Oren kemerahan
Granul basofil
Ungu gelap
Platelet
Keunguan
Eritrosit
Kemerahan
52
MAKMAL SEROLOGI
53
MAKMAL SEROLOGI PENGENALAN Di dalam makmal serologi di Hospital Nukleus Labuan, ujian yang dilakukan adalah seperti ujian saringan HIV, HCV, denggi dan beberapa ujian lagi. Makmal serologi ini berkait rapat dengan makmal blood bank kerana di makma inilah ujian lanjutan bagi beg pendermaan darah dilakukan iaitu ujian penyaringan. Darah yang diterima daripada kempen derma darah akan disaring mengikut ujian seperti Ujian HIV, HCV dan bermacam lagi.
54
CARTA ORGANISASI MAKMAL SEROLOGI
MAKMAL SEROLOGI
Siti Noor Aisyah Bt. Md. Hussin PSMP C41
Ivy Emily John Jinal JTMP U29
55
Tajuk Ujian : Ujian Saringan Anti-HIV Ujian saringan Anti-HIV adalah kit enzim imunoasai untuk mengesan antigen p24 HIV dan antibodi HIV-1(kumpulan M dan O) serta serum atau plasma pesakit dalam HIV-2. Kit ini boleh digunakan untuk kedua-dua saringan antigen HIV dan HIV antibodi. Bahan & Radas : Penyediaan reagen. NOTA : Sebelum guna, biarkan keadaan reagen berada pada suhu bilik (18-30°c). 1.
Penyediaaan reagen untuk digunakan.
Reagen 1 (R1) : Mikroplat Dalam beg foil yang tertutup, setiap plat mengandungi 12 petak kolum yang dibalut. Gunting atau potong beg tersebut dengan menggunakan pisau berukuran 0.5 hingga 1 cm di atas pengedap. Buka beg dan keluarkan rangka. Letakkan petak kolum plat yang tidak digunakan semula ke dalam beg. Tutup beg dengan berhati-hati serta letakkan semula penyimpanan pada +2-8°c. Reagen 3 (R3) : Kawalan negatif Reagen 4 (R4) : Kawalan positif Ab HIV Reagen 5 (R5) : Kawalan positif Ag HIV Reagen 6 (R6) : Konjugat 1 Reagen 10 (R10) : Larutan terakhir
56
2.
Menyusun semula reagen
Membasuh larutan (20X perhatian) : Reagen 2 (R2) Cairkan 1:20 dalam air suling untuk mendapatkannya dan sediakan sebelum digunakan untuk membasuh larutan. Sediakan 800 ml untuk 1 plat bagi 12 petak kolum. Larutan kerja konjugat 2 : Reagen 7a (R7a) + Reagen 7b (R7b) Goncangkan botol konjugat lyophilised konjugat 2 (R7a) secara perlahan-perlahan bagi mengelakkan terdapat kehadiran bahan asing yang ada pada penutup getah. Berhati-hati memindahkan penutup bagi kandungan botol pencair konjugat (R7b) kepada pencair Konjugat Lyophilised (R7a). Gantikan penutup dan biarkan selama 10 minit,goncangkan perlahan-lahan serta songsangkan semasa ke semasa untuk memudahkan penyelenggaraan. Larutan perkembangan enzim : Reagen 8 (R8) + Reagen (R9) Cairkan 1:11 kromogen (R9) dalam substrat penampan (R8) (Bekas : 1 ml reagen R9 + 10 ml reagen R8). Kestabilan adalah selama 6 jam dalam keadaan gelap serta sekali sahaja disediakan. Prinsip : Ujian saringan HIV Ag-Ab adalah enzim imunoasai berasaskan prinsip jenis „sandwich‟ untuk mengesan antigen HIV dan untuk pelbagai antibodi berkaitan dengan virus HIV-1 serta HIV-2 dalam serum atau plasma pesakit. Fasa pepejal dilapis dengan: 1.
Monoklonal terhadap antibodi p24 antigen HIV-1.
2.
Antigen dtulenkan: gp160 protein rekombinan, peptida sintetik menyerupai sepenuhnya (seperti dikodkan oleh virus yang tidak sedia ada).
1.
HIV-1 kumpulan O-spesifik epitop dan peptida yang menyerupai immunodominan kandungan HIV 2.
57
Konjugat berdasarkan penggunaan: Biotinilated antibodi poliklonal Ag HIV (Konjugat 1) Streptavidin dan antigen HIV- Konjugat peroksidase (gp41 dan gp36 peptides menyerupai kandungan glikoprotein epitop immunodominan HIV- 1 dan HIV. 1.
Kandungan glikoprotein dan peptida sintetik yang menyerupai kumpulan O- spesifik HIV
2.
epitop digunakan untuk fasa pepejal) (Konjugat 2)
Langkah-langkah prosedur tindak balas termasuklah: 3.
Konjugat 1 (biotinilat antibodi poliklonal p24 Ag HIV- 1) ditambah ke dalam petak kolum mikroplat.
4.
Sampel serum dan kontrol asai akan dipipet ke dalam petak kolum. 1. Jika hadir,antigen HIV akan mengikat dengan antibodi monoklonal yang terikat pada fasa pepejal dan konjugat 1. 2. Jika ada antibodi HIV- 1 atau HIV- 2 mengikat pada antigen dan berubah kepada fasa pepejal konjugat 1. 3. Pemendapan konjugat 1 dan sampel akan berubah warna daripada kuning hijau kepada biru.
4.
Selepas pengeraman pada suhu 37°c dan dibasuh, ditambahkan dengan konjugat 2: 1. Streptividin bertindak balas bersama biotinilated Ab-Ag-Ab kompleks. 2. Peroksidase dilabel,antigen HIV- 1 dan HIV-2 ditulenkan mengikat dalam bentuk antibodi IgG,IgM atau IgA untuk pada fasa pepejal.
5.
Selepas pengeraman pada suhu 18-30°c,pecahan konjugat 2 diasingkan dengan teknik membasuh. Selepas pengeraman dalam kehadiran substrat pada suhu bilik (1813°c),kehadiran kompleks konjugat akan menunjukkan perubahan warna.
6.
Tindak balas akan berhenti dan serapan akan dibaca oleh spektrofotometer pada 450/620-700 nm.Penyerapan diukur pada sampel untuk menentukan kehadiran samada ada atau tidak Ag HIV atau HIV- 1 dan antibodi HIV- 2.
58
Kaedah Ujian : 1. Terima sampel daripada kaunter 2. Pastikan nama pada tiub dan borang pesanan adalah sama. Jika tidak sama, hantar kembali ke kaunter 3. Daftarkan maklumat pesakit dan permohonan ujian di LabNet. 4. Emparkan sampel pada kelajuan 3500 rpm selama 5 minit 5. Keluarkan kit ujian dan biarkan pada suhu bilik. 6. Pastikan tarikh luput dan strip ujian berada dalam keadaan yang baik dalam kit ujian. 7. Bahagikan 'microplate' kepada 3 bahagian dengan 4 'wells' setiap bahagian dengan menggunakan 'marker'. 8. Labelkan 'wells' mengikut spesimen yang hendak diuji. 9. Titiskan 3 titik (75 µl) 'serum diluent' ke 'well' yang pertama, 1 titik (25 µl) ke 'well' yang kedua, 1 titik (25 µl) ke 'well' yang ketiga dan 1 titik (25 µl) ke 'well' yang keempat dengan menggunakan penitik. 10. Pipetkan 25 µl serum pesakit ke 'well' yang pertamadi langkah 9.
1.
Lakukan pencairan bersiri dan pipet keluar 25 µl daripada 'well' yang keempat.
2.
Titiskan 1 titik (25 µl) 'unsensitized particles' ke 'well' yang kedua, 1 titik (25 µl) 'HIV-1 sensitized particles' ke 'well' yang ketiga dan 1 titik (25 µl) 'HIV-2 sensitized particles' ke 'well' yang keempat.
3.
Sebatikan campuran dengan diletakkan pada 'mixer' pada 1000 rpm selama 5 saat.
4.
Eramkan pada suhu bilik selama 2 jam.
5.
Semak keputusan. (rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika keputusan meragukan, ulangi ujian.
59
6.
Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi , borang ujian Anti HIV 1/2 dan borang Per. Pat 301.
7.
Sahkan keputusan.
8.
Hantar keputusan bersama borang Per. Pat. 301 ke kaunter.
Interpretasi Ujian : Sampel dengan kehadiran nilai kurang daripada nilai yang ditolak pada mulanya dianggap negatif oleh ujian saringan Ag-Ab ULTRA HIV. Keputusan
hanya
nilai
dibawah
C.O).Walaubagaimanapun,perlu
yang
ditafsirkan
ditolak dengan
(C.O
–
berhati-hati
10% (ini
< adalah
OD
<
untuk
pengulanganujian dalam 2 salinan sampel yang sepadan jika sistem dan prosedur makmal dapat melakukannya). Sampel dengan kehadiran nilai sama dengan atau lebih besar daripada nilai yang ditolak dianggap positif oleh ujian saringan Ag-Ab ULTRA HIV. Ia perlu diuji dalam 2 salinan sebelum interpretasi keputusan akhir. Jika selepas sampel diuji, kehadiran nilai 2 salinan kurang daripada nilai yang ditolak,keputusan awal adalah tidak berulang dan sampel disahkan negatif oleh ujian saringan Ag-Ab ULTRA HIV. Tindak balas yang tidak diulang sering disebabkan oleh: 1.
Mikroplat tidak dibasuh dengan baik.
2.
Terkontaminasi oleh sampel serum atau plasma negatif dengan antibodi titre tinggi.
3.
Terkontaminasi larutan subsrat oleh agen pengoksidaan ( peluntur,ion logam dan lainlain).
4.
Terkontaminasi pemberhentian larutan.
Jika selepas pengulang ujian,kehadiran 1 salinan sama dengan atau lebih besar daripada nilai yang ditolak,keputusan yang pertama diulang dan sampel disahkan positif oleh ujian saringan Ag-Ab ULTRA HIV,tertakluk kepada had prosedur.
60
Tajuk ujian : Ujian Saringan HBs Ag ULTRA Ujian saringan Ag HBs ULTRA merupakan satu enzim imunoasai dengan menggunakan teknik jenis „sandwich‟ untuk mengesan kehadiran antigen Hepatittis virus B (Ag HBs) dalam serum atau plasma. Bahan & Radas : Penyediaan reagen. NOTA : Sebelum guna, biarkan keadaan reagen berada pada suhu bilik (18-30°c). 1.
Penyediaan reagen untuk digunakan. Reagen 1 (R1) : Mikroplat Dalam beg foil yang tertutup, setiap plat mengandungi 12 petak kolum yang dibalut. Gunting atau potong beg tersebut dengan menggunakan pisau berukuran 0.5 hingga 1 cm di atas pengedap. Buka beg dan keluarkan rangka. Letakkan petak kolum plat yang tidak digunakan semula ke dalam beg. Tutup beg dengan berhati-hati serta letakkan semula penyimpanan pada +2-8°c. Reagen 3 (R3) : Kawalan negatif Reagen 4 (R4) : Kawalan positif Reagen 10 (R10) : Larutan terakhir
2.
Menyusun semula reagen Membasuh larutan (20X perhatian) : Reagen 2 (R2) Cairkan 1:20 dalam air suling untuk mendapatkannya dan sediakan sebelum digunakan untuk membasuh larutan. Sediakan 800 ml untuk 1 plat bagi 12 petak kolum.
Larutan kerja konjugat (R6 + R7)
61
Goncangkan botol konjugat lyophilised konjugat (R7) secara perlahan-perlahan bagi mengelakkan terdapat kehadiran bahan asing yang ada pada penutup getah. Berhati-hati memindahkan penutup bagi kandungan botol pencair konjugat (R6) kepada pencair Konjugat Lyophilised (R7). Gantikan penutup dan biarkan selama 10 minit,goncangkan perlahan-lahan
serta
songsangkan
semasa
ke
semasa
untuk
memudahkan
penyelenggaraan. Larutan perkembangan enzim : Reagen 8 (R8) + Reagen (R9) Cairkan 1:11 kromogen (R9) dalam substrat penampan (R8) (Bekas : 1 ml reagen R9 + 10 ml reagen R8). Kestabilan adalah selama 6 jam dalam keadaan gelap serta sekali sahaja disediakan. Prinsip : Ujian saringan HBs Ag adalah enzim imunoasai berdasarkan prinsip jenis „sandwich‟ iaitu menggunakan antibodi monoklonal dan antibodi poliklonal yang dipilih untuk kebolehan mereka mengikat kepada subjenis pelbagai HBs Ag. Diiktiraf oleh Pertubuhan Kesihtan Sedunia (WHO) dan perkara yang paling HBV strain yang variasi. HBs Ag fasa pepejal dilapisi dengan antibodi monoklonal. Konjugat HBs Ag berdasarkan antibodi monoklonal yang digunakan daripada tikus dan antibodi poliklonal daripada kambing terhadap HBs Ag. Antibodi ini terikat untuk peroksidase. Kaedah : 1.
Penerimaan sampel daripada Unit Tabung Darah (UTD)
2. Pastikan nombor beg darah pada tiub dan borang rekod mobile adalah sama. Jika tidak sama, hantar kembali ke UTD. 3. Isikan borang saringan ujian. 4. Emparkan sampel pada kelajuan 3500 rpm selama 5 minit 5. Keluarkan kit ujian dan biarkan pada suhu bilik. 6. Pastikan tarikh luput dan strip ujian berada dalam keadaan yang baik dalam kit ujian. 7. Pipetkan 100 µl 'control' atau 'sample' ke strip ujian. 62
8. Seterusnya, tambahkan 50 µl 'conjugate (R6 + R7)' ke strip ujian di langkah 7. 9. Eramkan selama 1 jam 30 minit pada suhu 37 °C di dalam 'incubator'. 10. Selepas pengeraman, cuci strip ujian (rujuk prosedur penggunaan washer PW40). 11. Selepas cucian, tambahkan 100 µl 'TMB substrate(10 ml R8 + 1 ml R9)'. 12. Eramkan selama 30 minit pada suhu bilik (18°C-30°C) di tempat gelap. 13. Selepas pengeraman, tambahkan 100 µl 'stopping solution'. 14. Baca keputusan ujian pada panjang gelombang 450/620-700 nm (rujuk prosedur penggunaan mesin PR3100). 15. Sahkan keputusan 16. Simpan keputusan ujian saringan dalam fail ujian saringan penderma darah. Langkah-langkah prosedur tindak balas termasuklah: 1.
Pengagihan kawalan sera dan sampel dilakukan ke dalam petak kolum mikroplat. Pengagihan ini boleh mnejadi kawalan visual: Pewarnaan ini adalah lebih jelas berbanding petak kolum yang kosong antara petak kolum yang ada sampel. Pengagihan ini juga boleh menjadi kawalan automatik untuk membaca pada 490/620700 nm (pilihan).
2.
Pengagihan konjugat berwarna merah ke dalam petak kolum. Pengagihan ini boleh mnejadi kawalan visual: Selepas penambahan larutan konjugat,warna pada petak kolum akan berwarna merah. Kawalan secara automatik ini mungkin untuk bacaan spektrofotometer pada 490/620-700 nm (pilihan). Pemendapan sampel ini juga boleh menjadi kawalan pada langkah ini untuk memanipulasikan bacaan automatik pada 490/620-700 nm.
3.
Selepas pengeraman pada 37°c semasa satu jam dan separuh konjugat dipindah secara membasuh.
4.
Pengagihan larutan substrat bewarna. Pengagihan ini boleh mnejadi kawalan visual: Pewarnaan ini adalah lebih jelas berbanding petak kolum yang kosong dan petak kolum larutan substart merah jambu. Pengagihan ini juga boleh menjadi kawalan automatik untuk bacaan pada 490 nm (pilihan). 63
5.
Selepas 30 minit pengeraman dalam kehadiran substrat yang gelap dan suhu bilik (1830°c),kehadiran kompleks konjugat menunjukkan perubahan warna.
6.
Pengagihan larutan terakhir. Pengagihan ini boleh mnejadi kawalan visual: Larutan substrat pada mulanya bewarna merah jambu akan berubah kepada jernih untuk petak kolum sampel yang tidak reaktif dan berubah dari biru kepada kuning untuk petak kolum sampel yang posoitif.
7.
Bacaan untuk ketumpatan optikal pada 490/620-700 nm dan interpretasi keputusan.
Interpretasi Ujian : HBs Ag ULTRA. Keputusan dibawah hanya ditolak nilai (nisbah sampel antara 0.9 hingga 1). Walaubagaimanapun, interpretasi keputusan hendaklah dilakukan dengan berhati-hati. Pengulangan ujian dalam 2 salinan sampel yang sepadan adalah lebih baik jika sistem dan prosedur makmal dapat melakukannya. Selepas sampel diulang semula,nilai nisbah 2 salinan sampel kurang daripada 1,keputusan yang pertama tidak akan diulang dan sampel disahkan negatif oleh ujian saringan HBs Ag ULTRA. Untuk reaktif awal atau sampel meragukan (0.9 < nisbah <1),jika selepas pengulangan nilai nisbah sekurang-kurangnya satu daripada 2 salinan adalah sama atau lebih besar daripada 1,keputusan yang pertama tidak akan diulang dan sampel disahkan positif oleh ujian saringan HBs Ag ULTRA,tertakluk kepada had prosedur.
Tajuk ujian : Ujian Saringan HCV Ag-Ab ULTRA Ujian saringan HCV ag-Ab ULTRA adalah enzim imunoasai untuk mengesan infeksi HCV berdasarkan pengesanan kapsid antigen dan antibodi yang berkaitan dengan infeksi oleh virus Hepatitis C di dalam serum atau plasma pesakit. Bahan dan Radas :
64
Sebelum menggunakan reagen kit ujian saringan HCV Ag-Ab ULTRA,pastikan reagen dalam kedaan baik pada suhu bilik selama 30 minit. 1.
Penyediaan reagen untuk diguna.
Mikroplat (R1) Dalam beg foil yang tertutup, setiap plat mengandungi 12 petak kolum yang dibalut. Gunting atau potong beg tersebut dengan menggunakan pisau berukuran 0.5 hingga 1 cm di atas pengedap. Buka beg dan keluarkan rangka. Letakkan petak kolum plat yang tidak digunakan semula ke dalam beg. Tutup beg dengan berhati-hati serta letakkan semula penyimpanan pada +2-8°c. Konjugat 1 : Sediakan untuk digunakan (R6) Songsangkan untuk mensebatikan sebelum diguna. Konjugat 2 : sediakan untuk digunakan (R7) 2.
Reagen yang digunakan semula
Konsentrasi larutan pembasuh untuk mencairkan R2 1:20 dalam air suling. Sediakan 800 ml untuk 1 plat 12 petak kolum. Larutan substrat untuk dicairkan (R8 + R9) Reagen (R9) dicairkan menggunakan reagen R8 (contoh : 1 ml reagen R9 dalam 10 ml reagen 8ml). 10 ml mesti cukup untuk 1 hingga 12 petak kolum bagi mensebatikan.
Kawalan positif antigen (R5a + Rb) Tuangkan kandungan R5 yang dicairkan ke dalam botol Ag R5 liopilised. Senaraikan botol dan biarkan 10 minit dan goncang perlahan-lahan secara songsang dari semasa ke semasa untuk memudahkan sebatian. Prinsip :
65
Mikroplat fasa pepejal ujian saringan HCV Ag-Ab berlapis dengan : 1.
Antibodi monoklonal terhadap kapsid protein virus Hepatitis C.
2.
2 produk protein rekombinan oleh E.coli daripada bahagian NS3 : genotip 1 dan 3a.
3.
1 antigen rekombinan daripada bukan struktural bahagian NS4.
4.
Peptida bermutasi daripada bahagian strukutral kapsid genom virus hepatitis C. Konjugat digunakan untuk :
1.
Konjugat 1 (R6) : Antibodi monoklonal biotinilet tikus terhadap kapsid Hepatitis C. Monoklonal ini tidak ada reaksi terhadap peptida bermutasi hepatitis C yang berlapis pada mikroplat.
2.
Konjugat 2 (R7) : Antibodi berlabel peroksidase tikus kepada IgG manusia dan peroksidase berlabel streptividin.
3.
Prestasi ujian termasuk langkah-langkah reaksi berikut :
4.
Konjugat 1 dan sampel ditambahkan dengan kawalan sera untuk di uji pada petak kolum. Jika antibodi HCV hadir,mereka akan terikat sebagai antigen tetap pada fasa pepejal dan jika antigen kapsid hepatitis C hadir,antigen ini akan terikat oleh antibodi monoklonal berlapis pada mikroplat oleh antibodi monoklonal biotinilet terhadap antigen kapsid hepatitis C (konjugat 1).
5.
Selepas
pengeraman
pada
suhu
37°c
selama
90
minit
dan
kaedah
pembasuhan,antibodi peroksidase berlabel IgG manusia dan peroksidase streptividin (konjugat
2)
ditambahkan.
Konjugat
streptividin
peroksidase
dengan
antibodi
monoklonal biotinilet bertindak balas terhadap antigen hepatits C jika hadir. Konjugat Anti-IgG manusia bertindak balas kepada peroksidase dan antibodi anti HCV jika hadir. 6.
Selepas 30 minit pengeraman pada 37°c,enzim konjugat diasingkan melalui kaedah pembasuhan dan menunjukkan kompleks antigen-antibodi oleh penambahan substrat.
7.
Selepas 30 minit tindak balas akan berhenti,nilai serapannya dibaca dengan menggunakan spektrofotometer pada 450/620-700nm. Serapan sampel diukur untuk membolehkan mengesan kehadiran atau tidak hadir antibodi dan kapsid antigen HCV.
66
Warna intensiti berkadar pada kuantitti antibodi atau antigen HCV yang terikat pada fasa pepejal. Kaedah : 1.
Penerimaan sampel daripada Unit Tabung Darah (UTD)
2.
Pastikan nombor beg darah pada tiub dan borang rekod mobile adalah sama. Jika tidak sama, hantar kembali ke UTD.
3.
Isikan borang saringan ujian.
4.
Emparkan sampel pada kelajuan 3500 rpm selama 5 minit
5.
Keluarkan kit ujian dan biarkan pada suhu bilik.
6.
Pastikan tarikh luput dan strip ujian berada dalam keadaan yang baik dalam kit ujian.
7.
Pipetkan 100 µl 'conjugate 1 (R6)' ke strip ujian.
8.
Seterusnya, tambahkan 50 µl 'control' atau 'sample' ke strip ujian di langkah 7.
9.
Eramkan selama 90 minit pada suhu 37 °C di dalam 'incubator'.
10.
Selepas pengeraman, cuci strip ujian (rujuk prosedur penggunaan washer PW40).
11.
Selepas cucian, tambahkan 100 µl 'conjugate 2 (R7)'.
12.
Eramkan selama 30 minit pada suhu 37 °C.
13.
Selepas pengeraman, cuci strip ujian (rujuk prosedur penggunaan washer PW40).
14.
Selepas cucian, tambahkan 80 µl 'TMB substrate(10 ml R8 + 1 ml R9)'.
15.
Eramkan selama 30 minit pada suhu bilik (18°C-30°C) di tempat gelap.
16.
Selepas pengeraman, tambahkan 100 µl 'stopping solution'.
17.
Baca keputusan ujian pada panjang gelombang 450/620-700 nm (rujuk prosedur penggunaan mesin PR3100).
18.
Sahkan keputusan.
19.
Simpan keputusan ujian saringan dalam fail ujian saringan penderma darah.
Interpretasi keputusan : Sampel dengan ketumpatan optik kurang daripada nilai yang ditolak dianggap negatif oleh ujian anti-HCV Ag-Ab. Keputusan nilai yang ditolak dibawah hanya (C.O -10% < OD < C.O) walaubagaimanapun,interpretasi dilakukan dengan berhati-hati (ini kerana adalah lebih baik 67
untuk pengulangan ujian dalam dua salinan sampel yang sepadan apabila sistem serta prosedur makmal membenarkan. Manakala sampel dengan ketumpatan optik tinggi daripada,atau sama dengan nilai yang ditolak dianggap pada mulanya positif dan diuji dalam dua salinan sebelum tafsiran terakhir. Selepas diuji semula,sampel dianggap positif oleh ujian anti-HCV Ag-Ab jika pengukuran kedua atau ketiga adalah positif. Tinggi daripada,atau sama dengan nilai yang ditolak,sampel dianggap negatif jika nilai kedua-dua kurang daripada nilai yang ditolak.
Tajuk ujian : Ujian SD denggi IgG / IgM (BIOLINE) Ujian cepat SD Bioline Denggi IgG/IgM bentuk pepejal imunokromatografik asai untuk cepat,kualitatif dan pembezaan mengesan antibodi IgG/IgM kepada virus denggi dalam serum manusia,plasma atau darah penuh. Ujian ini bertujuan untuk membantu secara profesional dalam diagnosis andaian antara infeksi denggi primer atau sekunder. Ujian ini hanya memberikan keputusan pada awal ujian. Oleh itu,penyelesaian untuk virus,antigen dikesan dalam tissu tetap,RT-PCR dan ujian serologi seperti ujian hemagglutinasi-perencatan,kaedah diagnosis lebih spesifik hanya digunakan dalam mengesahkan bagi infeksi virus denggi. Bahan dan radas : 1.
Pemungutan sampel.
2.
Serum,plasma atau sampel darah penuh mesti digunakan dengan ujian ini. Darah penuh. (Pengambilan melalui salur vena).
1.
Ambil darah penuh dan simpan dalam tiub (mengandungi tiub berantikoagulan seperti heparin,EDTA dan sodium sitrat) melalui salur vena.
2.
Jika spesimen darah tidak diuji segera,spesimen disimpan di dalam peti sejuk pada suhu 2-8°C.
68
3.
Apabila disimpan pada suhu 2-8°C,spesimen darah penuh boleh digunakan dalam masa 3 hari.
4.
Untuk masa penyimpanan lebih daripada 3 hari,pembekuan adalah digalakkan. Spesimen dibiarkan pada suhu bilik sebelum hendak digunakan.
5.
Penggunaan spesimen darah menyimpan dalam jangka masa panjang lebih daripada 3 hari boleh menyebabkan reaksi tidak spesifik.
(Pemungutan menggunakan jarum lanset). 1.
Bersihkan kawasan yang hendak ditusuk dengan lanset dengan swab kapas beralkohol.
2.
Picit pada hujung jari dan tusukkan dengan lanset steril yang disediakan.
3.
Ambil 10µl pipet kapilari yang disediakan,celupkan pada hujungdalm setitik darah kemudian tekan darah pada pipet kapilari kepada garisan hitam.
serum atau plasma. (Serum) pengambilan darah penuh dimasukkan ke dalam tiub (TIDAK mengandungi antikoagulan seperti heparin,EDTA dan sodium sitrat) melalui salur vena,biarkan selama 30 minit untuk koagulasi darah kemudian emparkan darah untuk mendapatkan spesimen supernatan serum. (Plasma) pengambilan darah penuh dimasukkan ke dalam tiub (mengandungi tiub berantikoagulan seperti heparin,EDTA dan sodium sitrat) melalui salur vena kemudian empar darah untuk mendapatkan spesimen plasma. 1.
Jika spesimen serum atau plasma tidak diuji segera,spesimen boleh diletakkan dalam peti sejuk pada suhu 2-8°C. Untuk penyimpanan jangka masa panjang lebih daripada 2 minggu,pembekuan digalakkan.
Spesimen dibiarkan pada suhu bilik
sebelum
digunakan.
69
2.
Spesimen serum atau plasma mengandungi mendakan mungkin boleh tidak konsisten pada hasil ujian.
Prinsip : Ujian cepat SD Denggi IgG/IgM adalah direka secara serentak mengesan dan membezakan antibodi IgG dan IgM pada virus denggi dalam serum manusia,plasma atau darah penuh. Ujian ini juga boleh mengesan semua 4 jenis denggi dengan menggunakan rekombinan protein denggi. Ujian SD BIOLINE Denggi IgG/IgM terdiri daripada 3 anti garisan,”G” (garisan Ujian denggi IgG),”M” (garisan Ujian denggi IgM),dan “C”(garisan kawalan) pada atas permukaan membran. Keputusan boleh dilihat melalui semua ketiga-tiga garisan sebelum memohon manaman sampel. “Garisan kawalan” ini digunakan untuk kaedah kontrol. Garisan kawalan selalunya muncul jika kaedah prosedur ini dilakuan betul dan reagen ujian garisan kawalan berfungsi. “G” berwarna ungu dan garisan “M” akan dapat dilihat keputusannya jika antibodi IgG dan IgM dalam sampel cukup untuk virus denggi. Jika antibodi IgG dan IgM tidak hadir di dalam sampel untuk virus denggi,tidak ada perubahan warna yang akan berlaku dalam “G” atau “M”. Apabila spesimen ditambahkan ke dalam kolum sampel,anti-denggi IgG dan IgM dalam spesimen akan bertindak balas dengan rekombinan koloid-protein konjugat emas virus denggi dan bentuk kompleks antigen-antibodi. Kompleks bertukar panjang dan peranti ujian oleh tindakan capilari. Anti IgG atau anti IgM manusia akan menjadi relevan dalam dua garisan ujian serta menghasilkan garisan berwarna. Kaedah : 1.
Terima sampel daripada kaunter
2.
Pastikan nama pada tiub dan borang pesanan adalah sama. Jika tidak sama, hantar kembali ke kaunter
3.
Daftarkan maklumat pesakit dan permohonan ujian di LabNet.
4.
Emparkan sampel pada kelajuan 3500 rpm selama 5 minit
5.
Keluarkan kit ujian dan biarkan pada suhu bilik.
6.
Pastikan tarikh luput dan strip ujian berada dalam keadaan yang baik dalam kit ujian.
7.
Tambahkan 10 µl serum/plasma ke ruang sampel bertanda "S" di kit ujian.
8.
Titiskan 3-4 titik 'diluent' ke ruang bulat di kit ujian.
9.
Tafsirkan keputusan ujian dalam 15-20 minit
10.
Semak keputusan (rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika keputusan meragukan, ulangi ujian 70
11.
Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi dan borang Per. Pat 301.
12.
Sahkan keputusan.
13.
Hantarkan keputusan bersama borang Per. Pat. 301 ke kaunter.
Interpretasi ujian : Negatif (Tidak ada infeksi denggi). Satu garisan merah jambu “C”. Positif 1.
IgM positif (Infeksi denggi primer). Dua garisan merah jambu “C” dan “M”. Jika positif walaupun pada “M” ia adalah lemah.
2.
IgG positif (Infeksi denggi sekunder).
Dua garisan merah jambu “C” dan “G”. Jika positif walaupun pada “G” ia adalah lemah. 3.
IgG dan IgM positif (Infeksi denggi primer akhir atau sekunder awal).
Tiga garisan “C”,”M” dan “G”. Tidak sah. 1.
Tidak ada garisan “C” untuk keputsan.
2.
Sampel digalakkan untuk diulang dan diuji semula.
71
Tajuk ujian : Ujian RPR Kit. Antigen karbon RPR digunakan dalam ujian bukan treponemal untuk kualitatif dan separuh kualitatif mengesan siphilis menggunakan serum (dipanaskan atau tidak dipanaskan) dan plasma. Bahan dan radas : Komposisi kit. Kandungan piawai kit mungkin berbeza-beza bergantung dengan format yang dibekalkan. Antigen (2 ml untuk 100 ujian kit,10 ml untuk 500 ujian kit) Reagen ini sedia untuk digunakan dan dibekalkan dalam 2 ml/10 ml botol yang dihadkan. Masa hanya dibenarkan untuk antigen mencecah suhu bilik sebelum ujian dan perlu digoncang untuk memastikan kehomogenan. Positif/negatif kawalan sera. Kawalan yang dibekalkan boleh disemak secara berkala untuk kesahihan. Kawalan yang dibekalkan sedia untuk digunakan. Penbahagian botol (3ml) dan jarum. Rekaan kompenen untuk pembahagian ujian antigen RPR. Untuk kegunaan,kepilkan jarum pada hujung botol dan lakarkan serta GONCANGKAN antigen ke dalam botol. Keluarkan setitis atau dua titis antigen bagi menyingkirkan kebarangkalian yang tidak mencukupi dalam sampel kerana kehadiran udara dalam jarum. Ia adalah sangat penting untuk mengekalkan botol dan jarum dalam kedudukan menegak apabila pendispensan antigen. Pada akhir ujian,jarum yang telah digunakan mestilah dibuang,dibilas dengan air suling dan dbiarkan kering. Jarum pendispensan tidak perlu dihapuskan kerana ia boleh mengeluarkan lapisan silikon yang menyebabkan terdapat sestengah antigen mengikut jarum yang boleh mengakibatkan pada antigen yang dihantar tidak mencukupi.
72
Kad ujian Kad ujian ini digunakan dengan suspensi antigen RPR terutamanya penyediaan kad berlapis plastik. Bulatan kad ujian ini mestilah tidak pernah tersentuh dengan jari,kerana ini mungkin boleh menyebabkan keputusan ujian tidak sah. Ujian ini hanya boleh digunakan sekali sahaja dan kad ujian mestilah dibuang. Pipet stirrers (100 atau 500) Titis demi titisan serum atau plasma dipindahkan pada permukaan kad ujian dan satu titis bersamaan kira-kira 50µl. Dalam kualitatif ujian,titisan baru mesti digunakan untuk spesimen ujian. Prinsip : Sifilis adalah penyakit kelamin yang disebabkan oleh mikorganisma spiroket Treponema pallidum. Organisma ini tidak boleh dikultur pada media tiruan,diagnosis sifilis bergantung pada kolerasi data klinikal dengan mengesan antibodi spesifik oleh ujian serologi. Ujian VDRL antigen “Bukan Treponemal” dimana bermaksud antibodi mengesan bukan spesifik T. Pallidum,walaupun kehadiran kuat menunjukkan infeksi oleh organisma. Langkah-langkah antibodi (IgG dan IgM) dihasilkan dalam respon material lipoidal yang dibebaskan daripada selsel perumah yang rosak serta lipoprotein seperti material yang dilepaskan oleh spiroket. Selepas rawatan berjaya antibodi titre akan cepat jatuh. Ujian penyaringan serologi bagi sifilis menggunakan kardiolipin dan lesitin iaitu antigen merupakan sampel untuk melakukan tetapi untuk menjalankan boleh membawa sebahagian kecil keputusan positif palsu kerana seperti yang dinyatakan di atas,ujian menggunakan “Bukan Treponema” antigen. VD L Antigen Partikel Karbon yang telah ditukarkan VD L Antigen mengandungi mikro-partikular karbon1. Ini adalah rekaan yang digunakan dalam ujian pengelompokan untuk sero-diagnosis sifilis. Patikel karbon membantu bacaan keputusan makrokospik. Keputusan reaktif lemah lebih mudah dan senang dikenal untuk corak bukan reaktif dimana kehadiran makroskopik yang licin dan walaupun antigen ini sesuai untuk keduadua ujian slaid manual serta Ujian Reagen Automasi2.
73
Kaedah : 1.
Terima sampel daripada kaunter
2.
Pastikan nama pada tiub dan borang pesanan adalah sama. Jika tidak sama, hantar kembali ke kaunter
3.
Daftarkan maklumat pesakit dan permohonan ujian di LabNet.
4.
Emparkan sampel pada kelajuan 3500 rpm selama 5 minit
5.
Keluarkan kit ujian dan biarkan pada suhu bilik.
6.
Pastikan tarikh luput dan strip ujian berada dalam keadaan yang baik dalam kit ujian.
7.
Tambahkan 1 titik (gunakan 'dropper') RPR Carbon Antigen pada 50 µl serum/plasma di kad ujian
8.
Putarkan sampel pada kelajuan 100 rpm selama 8 minit
9.
Semak keputusan(rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika keputusan meragukan, ulangi ujian
10.
Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi dan borang Per. Pat 301.
11.
Sahkan keputusan.
12.
Hantarkan keputusan bersama borang Per. Pat 301 ke kaunter.
Interpretasi keputusan : Pada masa 8 minit pusingan terakhir keputusan positif akan menunjukkan ciri-ciri beragglutinasi bermula dari sedikit (reaktif lemah) kepada kuat (reaktif kuat). Keputusan reaktif sangat lemah ciri-cirinya adalah beragglutinasi kecil sekeliiling ujian periferi. Keputusan negatif tidak dapat menunjukkan reaksi
dan menunjukkan kehadiran makroskopik licin. Spesimen positif ujian
mestilah menjadi subjek kepada kajian serologi (seperti TPHA,FTA,dan ABS) setelah prosedur kajian serologi banyak,diagnosis bagi sifilis mestilah tidak menjadi berubah kepada keputusan satu reaktif. Untuk kaedah separuh kuantitatif,bacaan keputusan muktamad ujian akhir adalah positif. Jika larutan ujian meningkat (1:32) ia masih menunjukkan reaktiviti kuat,pelarutan untuk kali kedua hendaklah diteruskan sehinggalah titik akhir titre dapat ditentukan.
74
Tajuk ujian :ujian TPPA Kit. Ujian TPPA digunakan untuk mengesahkan jangkitan sifilis setelah didapati positif bagi bakteria sifilis dengan kaedah lain. Ujian ini mengesan antibodi untuk bakteria yang menyebabkan sifilis dan boleh digunakan untuk mengesan sifilis disemua peringkat,kecuali pada 3 hingga 4 minggu pertama. Bahan dan radas : Sel ujian : Eritrosit burung dilapisi dengan antigen T.pallidum diawet. Sel kawalan : Eritrosit burung yang tidak dilapisi dengan antigen yang diawet. Serum kawaln positif : (Larutkan 1:20). Gunakan secara berhati-hati. Ini akan memberi titre iaitu bersamaan 1/640:/2560 dalam ujian kuantitatif. Serum kawalan bukan reaktif: (Larutkan 1:20). Gunakan secara berhati-hati. Masukkan kit. Semua reagen yang dibekalkan sedia untu digunakan. Prinsip : Ujian treponemal adalah ujian Kromosom Treponema Pallidum zarah (TPPA),(ujian pengesahan) untuk mengesan serologi antibodi kepada pelbagai spesies dan subspesies Treponema patogenik,agen penyebab sifilis,puru,pintal,bejel,sifilis endemik. Ujian ini adalah satu prosedur kromosom pasif yang berasaskan atas menunjukkan pengagglutinasian zarah gel yang peka dengan antigen T.Pallidum oleh antibodi yang ditemui dalam serum pesakit (1-3). Ujian ini dicadangkan sebagai ujian pengesahan untuk menggantikan asai mikroagglutinasi bagi antibodi T.Pallidum (MHA-TP).
75
Kaedah : 1.
Terima sampel daripada kaunter
2.
Pastikan nama pada tiub dan borang permohonan adalah sama. Jika tidak sama, hantar kembali ke kaunter
3.
Daftarkan maklumat pesakit dan permohonan ujian di LabNet.
4.
Emparkan sampel pada kelajuan 3500 rpm selama 5 minit
5.
Keluarkan kit ujian dan biarkan pada suhu bilik.
6.
Pastikan tarikh luput dan strip ujian berada dalam keadaan yang baik dalam kit ujian.
7.
Bahagikan 'microplate' kepada 3 bahagian dengan 4 'wells' setiap bahagian dengan menggunakan 'marker'.
8.
Labelkan 'wells' mengikut spesimen yang hendak diuji.
9.
Titiskan 4 titik (100 µl) 'serum diluent' ke 'well' yang pertama, 1 titik (25 µl) ke 'well' yang kedua, 1 titik (25 µl) ke 'well' yang ketiga dan 1 titik (25 µl) ke 'well' yang keempat dengan menggunakan penitik.
10.
Pipetkan 25 µl serum pesakit ke 'well' yang pertamadi langkah 9.
11.
Lakukan pencairan bersiri dan pipet keluar 25 µl daripada 'well' yang keempat.
12.
Titiskan 1 titik (25 µl) 'unsensitized particles' ke 'well' yang ketiga dan 1 titik (25 µl) 'sensitized particles' ke 'well' yang keempat.
13.
Sebatikan campuran dengan diletakkan pada 'mixer' pada 1000 rpm selama 5 saat.
14.
Eramkan pada suhu bilik selama 2 jam.
15.
Semak keputusan. (rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika keputusan meragukan, ulangi ujian
16.
Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi , borang ujian TPPA dan borang Per. Pat 301.
17.
Sahkan keputusan.
18.
Hantarkan keputusan bersama borang Per. Pat. 301 ke kaunter.
76
Interpretasi keputusan : Interpretasi kekerapan agglutinasi. Kekerapan partikel
Bacaaan
Interpretasi
_
Tidak reaktif
Partikel konsentrasi dalam bentuk seperti „button‟ pada tengah bekas dengan sekeliling tepi yang lembut atau licin.
Partikel konsentrasi dalam bentuk cecincin padat dengan „lubang‟ dalam sangat kecil pada tengah bekas dengan sekeliling tepi yang lembut atau licin.
_
Tidak reaktif
±
Tiada
Partikel konsentrasi dalam bentuk cecincin padat dengan „lubang‟ pada tengah dan licin disekeliling tepi.
kesimpulan
Partikel cecincin besar dengan bentuk multi kasar diluar tepi dan agglutinasi periperal,dikelilingi oleh bulatan merah kecil.
1+
Reaktif
2+
Reaktif
3+
Reaktif
4+
Reaktif
Partikel agglutinasi merebak keluar menyeluruh menyelaputi bawah bekas,dikelilingi oleh bulatan merah kecil. Partikel yang licin menutupi atau menyelaputi kurang daripada
seluruh
bawah
bekas
dan
mungkin
dikelilingi oleh cecincin warna pucat. Partikel yang licin menyelaputi seluruh bawah bekas.
77
MAKMAL IMUNOKIMIA
78
PENGENALAN Makmal immunoassay di dalam unit patologi ini biasanya digunakan untuk menentukan fungsi tiroid dan ujian-ujian biokimia yang selain daripada yang di lakukan di dalam makmal biokimia. Ianya kerana ujian ini memerlukan mesin yang mampu beroperasi terhadap zarahzarah yang kecil daripada ujian biokimia yang biasa. Oleh itu, mesin yang lebih spesifik digunakan bagi menjalankan ujian ini. Apa yang dimaksudkan ialah ujian pengesanan hormon yang dilakukan untuk menentukan samada pesakit berada dalam keadaan normal atau tidak Oleh kerana ujian ini jarang menerima sampel setiap hari, ianya dilakukan secara berkala iaitu pada hari Isnin, Rabu dan Jumaat sahaja. Antaranya ujian-ujian yang dilakukan dalam makmal ini ialah ujian AFP, CEA, ESTROGEN, FERRITIN, FT4, FSH, BHCG, LH, PRL, PROGESTERONE, TOTAL PSA, dan TSH
79
MAKMAL IMMUNOASSAY
Raja Saidatul Nadia PSKH (Kimia Hayat) C41
Jalpa Lojuin JTMP U32
Hjh. Noriah JTMP U32
Siti Norlia Saihin JTMP U29
Freda Justin JTMP U29
80
TAJUK UJIAN : Ujian pengesan tahap AFP, CEA, ESTROGEN, FERRITIN, FT4, FSH, BHCG, LH, PRL, PROGESTERONE, TOTAL PSA, dan TSH
PROSEDUR MAKMAL 1. Terima dan semak borang permintaan ujian. Pastikan sampel dan borang yang diterima memenuhi kriteria. Tolak permohonan ujian jika sampel tidak memenuhi kriteria. 2. Rekodkan pendaftaran pada sistem LabNet. 3. Empar sampel pada 4000rpm selama 5 minit 4. „Order Sample‟ pada mesin dilakukan seperti tatacara berikut a. Pergi ke „Workplace‟ dan pilih „Test Selection‟ b. Masukkan nombor rak, nombor posisi dan sampel ID c. Sila pilih ujian yang dipohon dan klik „Save‟ d. Masukkan sampel di bahagian „ ack Sampler‟ dan klik perkataan „Start‟ e. Tunggu sehingga bacaan keputusan dipaparkan 5. Periksa keputusan ujian dan jika didapati keputusannya melebihi julat normal, ulang semula ujian dengan pencairan yang ditetapkan(seperti ujian BHCG, TPSA, Ferritin, dan CEA) 6. Cetak keputusan pada borang 7. Rekodkan keputusan pada sistem LabNet dan buku rekod 8. Semak keputusan ujian 9. Pastikan ujain dijalankan dengan bacaan kawalan kualiti terbaik 10. Pastikan keputusan ujian yang dihasilkan dapat menepati diagnosis yang diberikan doktor 11. Rujuk semula doktor yang memohon ujian jika diagnosis yang diberi meragukan dan tidak menyokong keputusan ujian yang diperolehi 12. Ulang semula ujian jika perlu 13. Sahkan keputusan dengan menurunkan tandatangan dan cop rasmi pegawai yang bertanggungjawab.
81
PRINSIP UJIAN UJIAN TSH -
Thyroid-stimulating hormone (juga dikenali sebagai TSH atau thyrotropin) yang merupakan hormon yang menyebabkan kelenjar tiroid untuk merembeskan thyroxine(T4) dan triiodothyronine(T3). Dimana ianya akan menstimulasikan metabolism hampir setiap tisu yang terdapat di dalam badan.
Sumber patolog5
TSH level
Hypothalamus/pituitary Tinggi
Level hormon tiroid
Tinggi
Penyakit yang disebabkan oleh keadaan
Adenoma atau thyroid hormone resistance
Hypothalamus/pituitary Rendah Rendah
Hypopituitarism
Thyroid
Rendah Tinggi
Hyperthyroidism atau Graves' disease
Thyroid
Tinggi
Congenital hypothyroidism (cretinism), hypothyroidism atau Hashimoto's thyroiditis
Rendah
UJIAN AFP -
Alpha-Fetal Protein, merupakan aprotein yang terdapat dalam badan manusia yang dikodkan oleh gen AFP. AFP juga merupakan major plasma protein yang dihasilkan di kantung yolka dan hati ketika pembesaran fetal.
UJIAN CEA -
Carcinoembryonic antigen (CEA) merupakan glikoprotein yang terlibat dalam pelekatan sel. Ianya biasa dihasilkan semasa tumbesaran fetal, akan tetapi penghasilannya akan berhenti sebelum kelahiran bayi.
82
UJIAN IRON FERRITIN -
Ferritin merupakan protein intrasellular yang menyimpan iron dan melepaskannya dalam keadaan terkawal. Jumlah ferritin yang disimpan adalah bersamaan dengan jumlah iron yang disimpan. Protein ini dihasilkan oleh semua organisma hidup.
UJIAN PROLACTIN -
Merupakan sejenis hormon peptida yang berfungsi sebagai sitokin dan memainkan peranan penting dalam tindak balas imun.
UJIAN PROGESTERONE -
Merupakan hormon steroid yang terlibat dalam kitaran haid, pregnansi dan pembentukan embryo bayi manusia dan juga spesies-spesies lain.
UJIAN ESTROGEN -
Merupakan hormon seksual yang terlibat dalam menghasilkan sel-sel gamet di dalam sistem reproduktif. Berikut merupakan tahap estrogen :
Reference ranges for serum estradiol Patient type
Lower limit
Upper limit
Unit
50
200
pmol/L
14
55
pg/mL
Adult male
70 500 95% PI (standard) 95% PI
Adult female (follicular phase, day 5)
pmol/L
110 90% PI (used in diagram)
220 90% PI
19 (95% PI)
140 (95% PI)
30 (90% PI)
60 (90% PI)
400
1500
pmol/L
110
410
pg/mL
70
600
pmol/L
pg/mL
Adult female (preovulatory peak)
Adult female
83
(luteal phase)
19
160
pg/mL
0.5
9
pg/mL
1.7
33
pmol/L
N/A
< 130
pmol/L
N/A
< 35
pg/mL
-
Adult female - free (not protein bound)
I
Post-menopausal female
UJIAN TOTAL PSA -
Merupakan glikoprotein didalam badan manusia yang dikodkan oleh gen kallikrein-3 (KLK3). KLK3 ialah salah satu bahagian kallikrein yang berkait dengan peptidase yang dirembeskan oleh sel epithelial di dalam kelenjar prostat.
ALAT RADAS -
Cobas e 411
84
MAKMAL BIOKIMIA
85
PENGENALAN Dalam makmal biokimia di Hospital Nukleus Labuan terbahagi kepada dua iaitu makmal biokimia dan makmal immunoassay. Kaunter penerimaan spesimen di makmal ini terbahagi kepada dua iaitu kaunter wad dan kaunter untuk pesakit luar terutamanya dari KP1 (Klinik Pakar 1), KP2 (Klinik Pakar 2) dan KP3 (Klinik Pakar 3). Di kaunter wad, spesimen yang diterima adalah dari semua bahagian wad yang terdapat di dalam Hospital Nukleus Labuan dan dari OPD (Out Patent Department) serta beberapa lagi dari Klinik lain. Spesimen yang telah diterma dari kaunter akan diasingkan mengikut bahagian – bahagian tertentu. Dalam makmal biokimia ia menjalankan beberapa jenis ujian seperti ujian Alanine Transferase (ALT), ujian Alkaline Phosphate (ALP), ujian Aspartate Transferase (AST), ujian Amylase, ujian Creatinine Kinase (CK), ujian Lactate Dehydrogenase (LDH), ujian total protein, ujian Albumin, ujian Globulin, ujian Bilirubin, ujian Kalcium, ujian Kolesterol, ujian Elektrolit (Na+, K+, Cl-), ujian Glukosa, ujian Iron, ujian Fosfat, ujian Urea, ujian Urik asid,ujian Lipid Profil, ujian Liver Function Test (LFT), ujian High Density Lipoprotein (HDL), ujian Low Density Lipoprotein (LDL), ujian Serum Trigliserida dan ujian Magnesium. Semua ujian ini dijalankan dalam satu mesin iaitu menggunakan mesin ARCHITECTplus c4000. Ujian HbA1C juga dijalankan dalam makmal ini dan menggunakan mesin yang sama tetapi hanya kaki tangan makmal saja yang melakukan ujian HbA1C kerana ia memerlukan proses kerja yang lama dan berhati – hati. Selain ujian di atas, terdapat juga ujian Baby’s Bilirubin yang dijalankan pada mesin bilirubinometer khas bagi baby yang baru lahir. Terdapat juga ujian Blood Gases (ABG) yang dilakukan dalam makmal biokimia menggunakan mesin Cobas b221 yang dilakukan oleh kaki tangan makmal sahaja.
86
MAKMAL BIOKIMIA KLINIKAL
Raja Saidatul Nadia PSKH (Kimia Hayat) C41
Jalpa Lojuin JTMP U32
Hjh. Noriah JTMP U29
Siti Norlia Saihin JTMP U29
Freda Justin JTMP U29
87
Tajuk Ujian : Ujian Alanine Transferase (ALT). Alanine Transferase merupakan satu ujian yang mengukur jumlah enzim di dalam darah. ALT banyak terdapat terutamanya di dalam hati,dan jumlah kecil juga boleh di dapati dalam buah pinggang,jantung,otot serta pankreas. Sebelum ini,ALT disebut sebagai serum glutamik piruvik transaminase (SGPT). ALT diukur untuk memastikan samada fungsi hati telah rosak atau berpenyakit. Tahap rendah ukuran ALT biasanya diketahui di dalam darah. Tetapi,apabila fungsi hati rosak atau berpenyakit,ia akan membebaskan ALT ke dalam aliran darah yang menjadikan tahap ukuran bagi ALT meningkat. Kebanyakkan penigkatan dalam tahap ALT adalah disebabkan oleh berlakunya kerosakkan pada hati. Ujian ALT yang dilakukan beserta dengan
ujian-ujian
lain
yang
memeriksa
kerosakkan
hati,termasuklah
Aspartat
Aminotransferase (AST),Fosfatase alkali,Laktat dehidrogenase (LDH),dan bilirubin. Tahap kedua-dua ALT dan AST adalah ujian yang boleh dipercayai untuk kerosakn hati.
Bahan dan Radas : I.
Pengempar.
II.
Mikropipet.
III.
Mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Rek.
V.
Cup ARCHITECT.
Reagen : I.
B – NADH.
II.
Laktat Dehidrogenase.
III.
L – Alanin.
IV.
a – Ketoglutarik Asid.
Sampel : I.
Serum .
88
Prinsip : ALT merupakan enzim yang dijumpai terutamanya pada sel hati dan dalam kuantiti yang sedikit dalam buah pinggang, jantung dan otot rangka. Ia selalunya digunakan bersama – sama AST bagi mengukur fungsi hati dan mendiagnos penyakit yang berkaitan dengan hati. Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit di ambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup di masukkan ke dalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y101‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya ALT, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan ke dalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit dikeluarkan.
89
Interpretasi ujian : Julat Normal :
ALT
0 – 55
:
Tajuk Ujian : Alkaline Phosphatase (ALP). Fosfatase alkalin manusia terdiri daripada sekurang-kurangnya 5 kumpulan isoenzim khusus,tisu yang menjadi pemangkin hidrolisis fosfat mono-ester pada pH alkali. Pelbagai proses penyakit boleh menyebabkan pengeluaran kuantiti yang meningkatkan fosfatase alkali ke dalam darah. Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
2 – Amino – 2 – methilpropanal
II.
Magnesium
III.
Zink Sulfat
IV.
HEDTA
V.
4 – Nitrophenil Fosfat
Sampel : I.
Serum
90
Prinsip : Alkalin Fosfatase merupakan enzim yang terdapat dalam hati, salur hempedu dan tulang. Paras ALP yang tinggi ditemui pada kanak – kanak, penyakit hati, penyumbatan hempedu dan kegagalan tulang.
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan besertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit di ambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup dimasukkan ke dalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y102‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya ALP, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
91
Interpretasi ujian : Julat Normal :
ALP
40 – 150 U/L
:
Tajuk ujian : Aspartat Transferase (AST). Aspartat
transferase
(AST)
juga
dikenali
sebagai
aspartat
aminotransferase
(AspAT/asat/Appeals) atau serum glutamik oxaloasetik transaminase (SGOT),fosofat piridoxal (PLP) yang bergantung kepada transaminise enzim. AST menjadi pemangkin pemindahan berbalik kumpulan α-amino antara aspartat dan glutamat serta merupakan enzim penting dalam metabolisme asid amino. AST terdapat di dalam hati,jantung,otak rangka,buah pinggang,otak dan sel-sel darah merah. Biasanya diukur secara klinikal sebagia penanda untuk kesihatan hati.
Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
B – NADH
II.
Malate Dehydrogenase
III.
Lactate Dehydrogenase
IV.
L – Aspartate
V.
a – Ketoglutarate
Sampel : 92
I.
Serum
Prinsip : AST merupakan enzim yang boleh ditemui terutamanya pada hati, jantung dan otot rangka. Enzim ini terhasil apabila sel – sel tercedera dan meningkat mengikut tahap kerosakkan.
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit di ambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup dimasukkan kedalam rek dan nombor rek diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y008‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya AST, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan. 93
Interpretasi ujian : Julat Normal :
AST
:
5 – 40 U/L
Tajuk Ujian : Amilase. Amilase merupakan satu enzim yang membantu dalam pencernaan karbohidrat. Ia dihasilkan di dalam pankreas dan kelenjar yang menghasilkan air liur. Apabila pankreas dijangkiti atau terdapat inflamasi,enzim amilase akan dirembes masuk ke dalam darah. Ujian ini juga boleh dilakukan untuk mengukur tahap enzim di dalam darah serta boleh diukur dengan menggunakan ujian urin.
Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
2 – Chloro – 4 – Nitrophenyl – a – D – Maltotrioside
II.
Sodium Chloride
III.
Calcium Acetate
IV.
Potassium Thiocyanate
Sampel : I.
Serum 94
Prinsip : Amilase merupakan enzim yang dihasilkan terutamanya oleh kelenjar air liur dan pancreas (satu organ yang terletak di belakang perut) yang membantu dalam memecahkan karbohidrat dan kanji yang kita makan kepada gula ringkas. Ini adalah penting kerana gula ringkas akhirnya ditukar kepada glukosa. Ujian amilase bertujuan untuk mengukur amilase dalam darah. Amilase biasanya hadir dalam darah dengan jumlah yang kecil. Walaubagaimanapun jumlah peningkatan boleh dilepaskan ke dalam darah apabila pancreas mengalami kecederaan atau disekat. Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit di ambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup dimasukkan kedalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y109‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya Amy (amylase), setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
95
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpretasi ujian : Julat Normal :
Amilase
:
20 – 160 U/L
Tajuk Ujian : Kreatinin Kinase (CK). Kreatinin Kinase (CK,CPK) adalah satu enzim yang dijumpai terutamanya di dalam hati dan otootot rangka dan sehingga ke tahap yang lebih rendah di dalam otak. Kecederaan yang ketara kepada mana-mana struktur-struktur ini akan membawa kepada peningkatan yang diukur dalam tahap CK.
Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
CK (Creatinine Kinase)
II.
CPK (Creatine Phosphoskinase)
Sampel : I.
Serum 96
Prinsip : Kreatinin merupakan bahan buangan yang dihasilkan di otot rangka dan dikumuhkan melalui ginjal. Ia merupakan ujian yang khusus bagi fungsi ginjal dan selalunya diukur bersama – sama urea untuk menentukan fungsi ginjal. Arasnya akan meningkat apabila terdapat kerosakan pada tisu – tisu ginjal.
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit di ambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup dimasukkan ke dalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y010‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya CK, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
97
Interpretasi ujian : Julat Normal :
Kreatinin Kinase (CK) :
Lelaki
30 – 200 U/L
Perempuan
29 – 168 U/
Tajuk Ujian : Laktat dehidrogenase (LDH). Dehidrogenase laktat juga dipanggil sebagai laktik dehidrogenase,atau LDH. Merupakan enzim yang terdapat dalam hampir semua tisu dalam tubuh. Ia memainkan peranan penting dalam respirasi sel,proses glukosa (gula) daripada makanan yang ditukarkan kepada tenaga digunakan untuk sel-sel kita. Walaupun LDH banyak terdapat dalam sel-sel tisu,tahap enzim darah biasanya adalah rendah. Apabila tisu rosak oleh kecederaan atau penyakit,ia akan mengeluarkan
peningkatan
LDH
dalam
darah
termasuk
penyakit
hati,serangan
jantung,anemia,trauma otot,keretakkan tulang,barah dan jangkitan seperti meningitis,ensefalitis serta HIV. Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
Diethanolamin
II.
L - Litium Laktat
III.
B – NAD
Sampel : I.
Serum 98
Prinsip : Dehidrogenase laktat adalah enzim hidrogen pemindahan yang katales pengoksidaan Llaktat piruvat dengan pengantaraan NAD+ sebagai hidrogen.
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan permohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit diambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup di masukkan ke dalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y106‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya LDH, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpretasi ujian: 99
Julat Normal : LDH
125 – 243 U/L
:
Tajuk Ujian : Protein (Albumin & Globulin). Ujian total protein adalah mengukur jumlah dua jenis protein yang terdapat dalam bahagian cecair darah iaitu albumin dan globulin. Protein adalah bahagian penting dalam semua sel-sel dan tisu. Sebagai contoh,albumin membantu mencegah cecair dari dirembeskan keluar dari saluran darah. Globulin merupakan sebahagian penting dalam sistem imun tubuh. Bahan dan radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
Sodium Potassium Tartrat
II.
Sodium Hidrosida
III.
Potassium Iodid
IV.
Copper Sulfate
V.
Bromcresol Purple
Sampel : I.
Serum
Prinsip : Albumin dan globulin merupakan protein utama dalam darah. Albumin dibentuk di hati dan 50 – 60% secara keseluruhan protin di dalam serum. Kedua – dua albumin dan globulin berguna 100
untuk mengukur status pemakanan seseorang individu. Kedua – duanya juga berguna untuk mendiagnos penyakit hati, gastrointestinal, buah pinggang, ketaknormalan protein, kanser dan kegagalan sel darah. Peningkatan paras globulin boleh disebabkan inflamasi dan infeksi yang kronik. Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plen tiub) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit diambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup di masukkan kedalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin „O DE S‟, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y100‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya pro (protein), Alb (albumin) dan Glo (globulin), setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpretasi ujian : Julat Normal : 101
:
64 – 87 g/L
Albumin dan Globulin :
35 – 50 g/L
Total protein
Tajuk Ujian : Bilirubin (Total bilirubin dan Direct Bilirubin). Pigmen yang dihasilkan oleh hati yang akan dikeluarkan dalam hempedu yang menyebabkan perubahan warna kuning kulit dan mata apabila ia terkumpul di dalam organ-organ. Tahap bilirubin boleh diukur oleh ujian darah dan paling kerap tinggi pada pesakit yang menghidap penyakit hati atau tersumbat aliran hempedu.
Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
Surfaktan
II.
HCI
III.
2, 4 – dikloroanilin
IV.
Sodium Nitrit
Sampel : I.
Serum
102
Prinsip : Bilirubin merupakan pigmen kekuningan dalam hempedu. Ianya dibentuk hasil daripada pemecahan haemoglobin dalam sel darah merah dan diubah secara kimia oleh hati seterusnya dirembes sebagai hempedu. Peningkatan paras bilirubin boleh diakibatkan oleh hati, hempedu atau kegagalan SDM dan secara klinikal mengakibatkan jaundice.
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit di ambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup dimasukkan kedalam rek dan nombor rek diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin „O DE S‟, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y009‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya TBIL (total bilirubin) dan DBIL (direct bilirubin), setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
103
Interpretasi ujian : Julat Normal : 3.4 – 20.5 umol/L
Total Bilirubin
:
Direct Bilirubin :
0 – 8.6 umol/L
Tajuk Ujian : Bilirubin bayi (Baby’s bilirubin). Satu ujian bilirubin mengukur jumlah bilirubin dalam sampel darah. Bilirubin adalah bahan yang berwarna kuning keperangan yang dijumpai dalam hempedu. Ia dihasilkan apabila hati rosak,sel-sel darah merah yang lama. Bilirubin kemudian dikeluarkan daripada badan melalui feses (najis) dan memberikan feses warna coklat yang biasa.
Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin „ EICHE T UNISTAT‟ BILI UBINOMETE ‟
IV.
Kuvet
Reagen : I.
Kontrol mesin „352‟
Sampel : I.
Serum
Prinsip : Bilirubin meter diagnostik dilakukan secara in vitro digunakan untuk menentukan jumlah kepekatan bilirubin pada bayi yang baru lahir dengan ciri – ciri optik.
104
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Buka penutup dan masukkan kontrol mesin „352‟.
II.
Tekan ‘START’
III.
Tunggu sehingga bacaan keluar pada skrin „352‟, sekiranya bacaan yang keluar tidak sama, keluarkan kontrol mesin dan ulang semula sehinggalah bacaan kontrol mesin sama dengan kontrol „352‟ keluar.
IV.
Ambil sampel serum bayi dan masukkan ke dalam kuvet baru menggunakan mikropipet.
V.
Masukkan kuvet sampel tadi ke dalam mesin.
VI.
Tekan „STA T‟
VII.
Tunggu sehingga bacaan keluar pada skrin mesin.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan di ambil dan direkodkan kedalam ‘LabNet’.
Interpretasi ujian: Julat Normal :
Baby’s bilirubin
:
<256.5 umol/L
105
Tajuk Ujian : Kalsium dan Fosfatase. Kalsium adalah mineral yang paling banyak di dalam badan. Ia adalah penting untuk pemmbangunan dan penyelenggaraan tulang dan gigi yang kuat. Kalsium juga membantu jantung,saraf,otot dan lain-lain system badan berfungsi dengan betul. Ia mungkin lebih dikenali untuk
membantu
mencegah
osteoporosis.
Lasium
diserap
dan
digunakan
dengan
betul,termasuk magnesium,fosforus dan terutamanya vitamin D dan K.
Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
Calcium Phosphatase
Sampel : I.
Serum
Prinsip : Kalsium dan Phosphorus merupakan ujian yang berguna bagi mendiagnos ginjal dan penyakit tulang (skeletal diseases). Arasnya bertentangan antara satu sama lain dan dikawal oleh hormone paratirod.
Kaedah ujian : 106
I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit diambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup dimasukkan ke dalam rek dan nombor rek diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y113‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya Cac (calcium) dan po4 (phosphate), setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpretasi ujian: Julat Normal : Calcium
:
2.10 – 2.55 mmol/L
Phosphate
:
0.74 – 1.52 mmol/L
107
Tajuk Ujian : Kolesterol (Total) Ujian kolestrol juga dikenali sebagai profil lipid iaitu ujian darah yang boleh mengukur jumlah kolesterol dan trigliserida dalam darah. Satu ujian kolesterol boleh membantu menentukan risiko aterosklerosis,penumpukan plak dalam arteri yang boleh membawa kepada arteri yang sempit atau terhalang di dalam seluruh tubuh. Paras kolesterol yang tinggi biasanya tidak menyebabkan tanda-tanda atau gejala tetapi adalah risiko untuk penyakit jantung yang ketara.
Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
4-Aminoantipirin
II.
Sodium kolat
III.
Kolesterol esterase
IV.
Kolesterol osidase
V.
Horseradish peroksidase
VI.
ρ-Hidroxybenzene sulfonate
VII.
Surfaktan
VIII.
Buffer
Sampel : I.
Serum
Prinsip :
108
Kolesterol darah diangkut dalam bentuk protein kompleks terutamanya oleh LDL, VLDL dan HDL –Kolesterol. Aras kolesterol darah menentukan kebarangkalian seseorang itu menghidap ‘cardiovascular diasease’ dan juga berguna untuk menilai fungsi hati dan thyroid. Total kolesterol merupakan komponen penting struktur sel membran, hormon steroid dan garam hempedu. Walaubagaimanapun, peningkatannya boleh mengakibatkan penimbunan pada dinding salur darah arteri yang boleh menyebabkan penyempitan dan penyumbatan pada salur darah (artherosclerosis).
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan besertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plan tiub) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit diambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup di masukkan kedalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y019‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya Chol (kolesterol), setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
109
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpretasi ujian: Julat Normal :
Kolesterol
:
0 – 5.7 mmol/L
Tajuk Ujian : Elektrolit (Na+,K+,CI) Elektrolit adalah bahan yang menjadi ion dalam larutan dan memperoleh keupayaan untuk mengalir elektrik. Elektrolit hadir di dalam tubuh manusia,dan kesimbangan elektrolit di dalam badan kita adalah penting untuk fungsi normal sel-sel dan organ-organ kita. Elektrolit biasanya diukur melalui ujian darah termasuk natrium,kalium,klorida,dan bikarbonat. Fungsi dan nilai julat normal bagi elektrolit-elektrolit ini adalah seperti yang dinyatakan dibawah.
Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
Sodium
II.
Potassium
III.
Klorida
IV.
Buffer
V.
Clearning fluid
VI.
Sodium Azide
VII.
Lyophilized cleaning solution 110
VIII.
Prozymo 10
Sampel : I.
Serum
Prinsip : Aras elektrolit darah mempengaruhi penyerapan dan keseimbangan air dalam tubuh. Berbagaibagai keadaan klinikal yang dapat mempengaruhi arasnya dalam tubuh seperti penyakit buah pinggang, cirit-birit (diarrhoea), kegagalan gastrointestinal, ubat-ubat tertentu contohnya dadah hipertensi, infeksi yang teruk atau kecederaan dan juga sesetengah ketaknormalan horman. Elektrolit merupakan komponen yang penting dalam cecair tubuh dan keseimbangannya membolehkan berbagai sel dan organ berfungsi dengan normal.
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan besertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit
Prosedur : I.
Serum pesakit diambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup dimasukkan ke dalam rek dan nombor rek diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000. 111
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan „PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y111‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya Na (sodium), K (potassium) dan Cl (creatinine), setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam „LabNet‟ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpretasi ujian : Julat Normal :
Sodium
:
138 – 145 mmol/L
Potassium
:
3.5 – 5.1 mmol/L
Kreatinin
:
Lelaki
63.6 – 110.5 mmol/L
Perempuan
50.4 – 98.1 mmol/L
Tajuk Ujian : Glukosa. Glukosa adalah sejenis gula yang mudah (monosakarida 1). Badan mengeluarkan daripada protein,lemak dan karbohidrat dimana ia merupakan sebahagian yang terbesar,glukosa diserap terus ke dalam darah dari usus dan menyebabkan peningkatan yang cepat dalam glukosa darah. Glukosa juga dikenali sebagai dextrose. Glukosa dibawa melalui saluran darah untuk member tenaga kepada semua sel-sel badan. Sel-sel tidak boleh menggunakan glukosa tanpa bantuan insulin.
Bahan dan Radas : I.
Pengempar 112
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
NAD
II.
G – 6 – PDH
III.
Heksokinase
IV.
ATP – 2Na
Sampel : I.
Serum
Prinsip : Aras glukos dalam darah mengesan perubahan dalam metabolisma glukosa. Kebiasaannya digunakan untuk mengdiagnos diabetes mellitus atau bagi menilai tahap pengawalan glukosa. Perubahan arasnya dalam darah bergantung kepada aktiviti individu dan juga jangkamasa selepas makan. Aras glukos (dalam keadaan puasa) digunakan sebagai pengukuran baseline. Aras postprandial (pengukuran selepas 2 jam pengambilan makanan), ujian penyaringan untuk diabetes dan kerapkali digunakan bagi menilai keberkesanan rerapi insulin.
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan besertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan. 113
IV.
Sampel (plen tiub) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit di ambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup dimasukkan ke dalam rek dan nombor rek diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin „ORDERS’, tekan „PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y021‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan „SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan „DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya Gluc (glucose), setelah itu tekan „ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpretasi ujian : Julat Normal :
Fasting (FBS)
:
3.80 – 5.90 mmol/L
Random (RBS)
:
5.0 – 10.0 mmol/L
2HPP
:
6.7 – 8.0 mmol/L
Tajuk Ujian : Urea. Urea jugs dipanggil sebagai karbamida,sebatian kimia organik dan pada dasarnya adalah sisa yang dihasilkan oleh tubuh selepas metabolisme protein. Secara am nya,sebatian yang terhasil apabila hati rosak protein atau asid amino dan ammonia,buah pinggang kemudian akan memindahkan urea daripada darah air kencing. Nitrogen tambahan dibuang dari badan melalui urea dan kerana ia adalah sangat larut maka ia merupakan satu proses yang sangat cepat. 114
Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
NADH
II.
α-Ketoglutaric Acid
III.
urease (jack bean)
IV.
GLD (Beef liver)
V.
Adenosine Diphosphate
Sampel : I.
Serum
Prinsip : Urea merupakan hasil akhir metabolisme protein dan asid amino. Ia mengukur fungsi ginjal dan hidrasi. Walaubagaimanapun, ianya tidak boleh digunakan secara bersendirian bagi penentuan fungsi ginjal (hanya untuk ujian penyaringan sahaja). Peningkatan aras urea boleh berlaku pada individu yang mengambil diet kaya protein.
Kaedah ujian :
115
I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan besertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit diambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup dimasukkan kedalam rek dan nombor rek diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y011‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya urea, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpretasi ujian : Julat Normal :
Urea
:
1.7 – 8.3 mmol/L
116
Tajuk Ujian : Urik Asid. Serum asid uric adalah ukuran berapa banyak asid urik yang hadir dalam darah. Ini biasanya dinilai semasa ‘bloodwork’ rutin,dimana beberapa nilai-nilai untuk pelbagai sebatian dalam darah ditentukan untuk member penerangan tentang keadaan kesihatan pesakit. Sebatian ini dihasilkan sebagai hasil sampingan pemecahan sebatian yang dikenali sebagai purin. Purin didapati dalam produk haiwan seperti daging,makanan laut,hati dan ia adalah sebahagian diet biasa. Asid uric yang dihasilkan oleh metabolisme makanan yang dinyatakan dalam air kencing melalui buah pinggang. Paras yang sangat rendah dikenali sebagai hipouriksemia serta peringkat paras tinggi dikenali sebagai hiperuriksemia.
Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
4 – Aminoantipyrine
II.
TBHB
III.
Urikase
IV.
Perosidase
V.
TRIS Buffer
Sampel : I.
Serum
Prinsip :
117
Urik asid merupakan hasil akhir metabolisma urin pada manusia. Ianya disentisisdi hati dan diangkut melalui darah ke ginjal untuk dituras, sebahagiannya akan diserap, dirembes dan akhirnya di keluarkan melalui urin. Asid urik larut sedikit di dalam air dan kristal urea terbentuk secara semulajadi dalam urin yang mempunyai kepekatan urea yang tinggi bagi membentuk batu karang dalam ginjal (urea kidney stone). Gout merupakan sindrom klinikal bagi pesakit yang menghidap asid urik yang tinggi dalam darah dan mengakibatkan penimbunan kristal urea pada tisu lembut, terutamanya pada sendi mengakibatkan respon inflamasi. Arasnya dalam serum darah juga dipengaruhi oleh jumlah asid urik yang dihasilkan dan kecekapan eksresi ginjal. Pesakit yang mengalami paras asid urik yang tinggi. hendaklah mengambil diet rendah purina. Makanan yang tinggi kandungan purina ialah organ dalaman, ligmen, anchovies, cendawan dan yis.
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit diambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup dimasukkan kedalam rek dan nombor rek diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y015‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’. 118
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya uric, setelah itu tekan „ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpretasi ujian : Julat Normal :
Urik Asid
:
Lelaki
210 – 420 umol/L
Perempuan
150 – 350 umol/L
Tajuk Ujian : High Density Lipid (HDL). HDL atau lipoprotein berketumpatan tinggi,biasanya dikenali sebagai „kolesterol yang baik‟. Tahap HDL di dalam badan sepatutnya menjadi agak tinggi dan diperolehi dengan menjalankan ujian darah yang mudah. HDL membantu kolesterol yang berlebihan masuk semula ke dalam hati untuk perkumuhan melalui sistem gastrousus. HDL dikenali sebagai kolesterol baik kerana ia membantu dalam penyingkiran kolesterol yang boleh menyekat arteri dan mengurangkan aliran darah.
Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen :
119
I.
Kolesterol Oksidase (E.Coli)
II.
Peroksidase (Horseradish)
III.
N,N-bis (4-sulphobutyl)-m-toluidine-sodium (DsBmT)
IV.
Accelerator
V.
Ascorbic oxidase (Curabita Sp.)
Sampel : I.
Serum
Prinsip : HDL kolesterol juga dikenali sebagai kolesterol yang baik yang berfungsi sebagai pengangkut bagi mengeluarkan kolesterol yang berlebihan dari sel. Nilainya boleh meningkat dengan melakukan senaman.
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan besertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plen tiub) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit di ambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup di masukkan kedalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
120
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y114‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya HDL, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpretasi ujian : Julat Normal :
HDL
:
0.9 – 1.7 mmol/L
Tajuk Ujian : Low Density Lipid (LDL). LDL adalah kolesterol lipoprotein berkepadatan rendah biasanya dikenali sebagai kolesterol „jahat‟. Ujian LDL adalah merupakan ujian yang pertama dalam menentukan samaada seorang individu adalah berisiko untuk penyakit jantung atau tidak dan tahap LDL kerap menjadi punca utama dalam diet merendahkan kolesterol serta tahap LDL tinggi juga sering dikaitkan dengan peningkatan dalam risiko penyakit jantung.
Bahan dan Radas : I.
Pengempar 121
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
Diethanolamine
II.
L-Lactate,Lithium salt
III.
Sodium Azide
IV.
β-NAD
Sampel : I.
Serum
Prinsip : LDL kolesterol dikenali sebagai kolesterol yang tidak baik dimana kolesterol yang berlebihan akan diangkut oleh LDL ke dinding arteri dan mengakibatkan (artherosclerosis).
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
122
Prosedur : I.
Serum pesakit diambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup dimasukkan kedalam rek dan nombor rek diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y101‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya LDL, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpretasi ujian : Julat Normal :
LDL
:
<2.9 ***invalid value if Trig >3.80 mmol/L
Tajuk Ujian : Triglyceride (TG). Trigliserida adalah sejenis lemak dalam aliran darah dan tisu lemak. Lemak jenis ini boleh menyumbang kepada pengerasan dan penyempitan arteri dan menyebabkan risiko untuk serangan jantung serta strok adalah sangat tinggi. Penyakit yang boleh menyebabkan trigliserida tinggi juga adalah penyakit seperti kencing manis,obesiti,kegagalan buah pinggang untuk berfungsi dengan baik serta alkohol. Tahap kolesterol juga menjadi tinggi jika trigliserida tinggi. Trigliserida diukur bersama-sama dengan kolesterol sebagau daripada ujian darah.
123
Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
ATP
II.
Mg2+
III.
4-Chlorophenol
IV.
4-Aminoantipyrine
V.
Peroxidase (Horseradish)
VI.
GK (Microbial)
VII.
GPO (Microbial)
VIII.
Lipoprotein Lipase (Microbial)
Sampel : I.
Serum
Prinsip : Trigliserides merupakan fatty asid yang ditemui dalam aliran darah. Aras yang meningkat atau tinggi boleh mengakibatkan kebarangkalian yang tinggi untuk menghidap sakit jantung. Pancreatitis juga boleh meningkatkan aras trigliserides.
Kaedah ujian :
124
I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit diambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup dimasukkan kedalam rek dan nombor rek diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y018‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contphnya Trig (triglycerides), setelah itu tekan „ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpretasi ujian : Julat Normal :
Trigliserida
:
0.5 – 2.3 mmol/L
125
Tajuk Ujian : Magnesium. Ujian magnesium merupakan satu ujian yang digunakan untuk mengukur tahap magnesium dalam darah. Tahap magnesium abnormal yang paling kerap dikesan iaitu dalam penyakit yang menyebabkan proses penyahtinjaan keluar yang tidak baik atau magnesium yang berlebihan oleh buah pinggang atau kerosakkan disebabkan penyerapan dalam usus. Tahap magnesium boleh diukur sebagai sebahagian daripada penilaian keterukan masalah buah pinggang atau diabetes yang tidak terkawal serta boleh membantu dalam diagnosis gangguan gastrousus.
Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
TRIS Buffer
II.
Arsenazo Dye
Sampel : I.
Serum
Prinsip : Magnesium menggunakan kaedah pewarna arsenazo yang mengikat preferentially dengan magnesium. Keserapan arsenazo magnesium kompleks diukur pada 572 nm dan adalah berkadar dengan kepekatan magnesium yang hadir dalam sampel gangguan kalsium yang dihalang oleh agen pengkelat kalsium.
126
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan besertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit diambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup dimasukkan kedalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y106‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya Mg (magnesium), setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpretasi ujian : Julat Normal :
Magnesium
:
0.66 – 1.07 mmol/L
127
Tajuk Ujian : Profil Lipid. Profil lipid merupakan satu ujian yang kerap dilakukan untuk menentukan risiko penyakit jantung koronari. Ini adalah ujian yang telah dilkakukan untuk mengesan samada seseorang itu berkemungkinan telah mengalami serangan jantung atau strok yang disebabkan oleh penyumbatan saluran darah atau pengerasan arteri (atherosclerois).
Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
4-Aminoantipirin
II.
Sodium kolat
III.
Kolesterol esterase
IV.
Kolesterol osidase
V.
Horseradish peroksidase
VI.
ρ-Hidroxybenzene sulfonate
VII.
Surfaktan
VIII.
Buffer
IX.
ATP
X.
Mg2+
XI.
4-Chlorophenol
XII.
4-Aminoantipyrine
XIII.
Peroxidase (Horseradish)
XIV.
GK (Microbial)
XV.
GPO (Microbial)
XVI.
Lipoprotein Lipase (Microbial)
128
Sampel : I.
Serum
Prinsip : Trigliserida adalah sejenis lemak yang tedapat di dalam darah. Lemak adalah yang paling dipengaruhi oleh makanan yang diambil seperti gula, lemak atau alkohol tetapi ia juga boleh menjadi tinggi disebabkan kerana masalah berat badan, mempunyai tiroid atau penyakit hati dan keadaan genetik. Tahap trigliserida yang tinggi berkaitan dengan risiko penyakit jantung dan pembuluh darah yang lebih tinggi. Kolesterol adalah sejenis lemak yang ditemui dalam darah yang dihasilkan oleh badan dan juga datang daripada makanan yang dimakan. Kolesterol yang diperlukan oleh badan untuk mengekalkan kesihatan sel – sel badan. Jika terlalu banyak kolesterol boleh membawa kepada penyakit arteri kornoari. LDL adalah lipoprotein (kombinasi lemak dan protein) yang dijumpai dalam darah. Ia dikenali sebagai kolesterol jahat kerana ia mengambil kolesterol dari darah dan dibawa kepada sel – sel. Tahap LDL yang tinggi boleh menyebabkan risiko penyakit jantung. HDL adalah lipoprotein (kombinasi lemak dan protein) yang ditemui dalam darah. Ia dikenali sebagai kolesterol baik kerana ia menghapuskan kolesterol yang berlebihan dalam darah. Tahap HDL tinggi berkaitan dengan risiko yang rendah kepada penyakit jantung.
Kaedah ujian : I.
Untuk melakukan ujian lipid profile, pesakit hendaklah berpuasa bermula jam 12 tengah malam sehingga hari keesoknya tanpa makan atau minum kecuali air putih sebelum pengambilan darah dilakukan.
II.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan besertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
III.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
129
IV.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
V.
Sampel (plen tiub) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit di ambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Cup di masukkan kedalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y103‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya lipid, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpretasi ujian : Julat Normal :
Trigliserida
:
0.5 – 2.3 mmol/L
Kolesterol
:
0 – 5.7 mmol/L
HDL
:
0.9 – 1.7 mmol/L
LDL
:
<2.9 ***invalid value if Trig >3.80 mmol/L
130
Tajuk Ujian : Fungsi Hati (Liver Function Test). Ujian fungsi hati (LFT) merupakan satu kumpulan ujian darah yang mengesan keradangan dan kerosakan pada hati. Ujian fungsi hati termasuklah ALT,AST,alkalin fosfat ,INR,albumin dan bilirubin.
Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
Sodium Potassium Tartrate
II.
Sodium Hidrosida
III.
Potassium Iodide
IV.
Copper Sulfate
V.
Bromcresol Purple
VI.
Surfaktan
VII.
HCI
VIII.
2, 4 – dichloroaniline
IX.
Sodium Nitrit
X.
Surfaktan
XI.
B – NADH
XII.
Laktate Dehidrogenase
XIII.
L – Alanin
XIV.
a – Ketoglutarik Asid
XV.
2 – Amino – 2 – methilpropanal
XVI.
Magnesium
XVII.
Zink Sulfat
XVIII.
HEDTA 131
XIX.
4 – Nitropenil Fosfat
Sampel : I.
Serum
Prinsip : Ujian fungsi hati (LFT) merupakan satu kumpulan ujian darah yang mengesan keradangan dan kerosakan pada hati. Ujian fungsi hati (LFT) juga termasukklah bilirubin, ALT, ALP, totol protein, albumin dan globulin. Secara amnya LFT merujuk kepada satu kumpulan ujian darah bagi mengukur enzim atau protein tertentu dalam darah manusia. Ujian ini digunakan untuk membantu dalam pengesanan penyakit hati dan beberapa penyakit lain.
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel (plen tiub) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.
Prosedur : I.
Serum pesakit di ambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.
II.
Kuvet di masukkan kedalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang pesakit.
III.
Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin ARCHITECT c4000.
IV.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y119‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟. 132
V.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VI.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya LFT, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
VII.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
VIII.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpretasi ujian : Julat Normal :
Total Bilirubin
:
3.4 – 20.5 umol/L
Direct Bilirubin
:
0 – 8.6 umol/L
ALT
:
0 – 55 U/L
ALP
:
40 – 150 U/L
Total Protein
:
64 – 87 g/L
Albumin dan Globulin :
35 – 50 g/L
Tajuk Ujian : Hemoglobin A1c (HbA1c). Ujian
Hemoglobin
juga
dikenali
sebagai
ujian
HbA1c,haemoglobin
glycated
atau
glycohemoglobin adalah ujian darah yang penting dilakukan untuk menentukan bagaimana diabetes dikawal. Hemoglobin adalah bahan dalam sel darah merah yang membawa oksigen ke seluruh badan. Apabila diabetes tidak terkawal (gula dalam darah terlalu tinggi),gula akan mengikat dalam darah dan bergabung dengan hemoglobin menjadi ‘glycated’. Jumlah purata gula dalam darah boleh dtentukan dengan mengukur tahap hemaglobin A1c. Jika paras glukosa tinggi,ujian hemoglobin A1c akan turut tinggi. Jumlah hemoglobin A1c akan menunjukkan beberapa minggu selepas paras gula darah,biasanya merangkumi tempoh 120 hari. 133
Bahan dan Radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
VI.
Jam randik.
Reagen : I.
HbA1c
II.
THB (Total Hb)
Sampel : I.
Hemoglobin A1c darah penuh (whole blood).
Prinsip : Hemoglobin A1c adalah satu ujian makmal yang digunakan untuk mendiagnosis pesakit dengan diabetes mellitus. Diabetes mellitus adalah suatu keadaan yang dicrikan oleh hiperglisemia akibat daripada ketidakupayaan untuk menggunakan glukosa darah utnuk tenaga badan. Dalam diabetes jenis 1,pankreas tidak menghasilkan dan merembeskna insulin. Oleh yang demikian,glukosa darah tidak dapat memasuki sel-sel. Dalam diabetes jenis 2,samada pancreas tidak membuat insulin yang cukup atau sel-sel tidak dapat menggunakan insulin dengan betul. Komplikasi kencing manis yang melibatkan mata,buah pinggang,saraf dan saluran darah jantung,otak dan hujung kaki,adalah biasa untuk kedua-dua bentuk penyakit. Tahap HbA1c adalah berkadar terus dengan kepekatan glukosa sederhana dan jangka hayat sel darah merah dalam edaran. Oleh itu,ukuran HbA1c telah diterima untuk pengurusan klinikal diabetes melalui pemantauan rutin. A1c akan dikesan menggunakan Bio-Rad 10,yang merupakan penganalisis automatic sepenuhnya yang terdiri daripada modul tunggal yang menyediakan satu kaedah bersepadu untuk penyediaan sampel,perpisahan,dan penentuan peratus relative haemoglobin khusus (contohnya,A2,F,A1c) dalam darah keseluruhan. 134
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel bagi ujian HbA1c ini akan dikumpul sehinggalah hari ke empat pada waktu pejabat dan diletakkan di dalam peti sejuk serta akan „run‟ pada tiap hari khamis sahaja.
IV.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
V.
Sampel (tiub EDTA) darah penuh yang diterima akan diambil untuk ujian ini dilakukan.
Prosedur : I.
Keluarkan sampel (whole blood) dari dalam peti sejuk. Biarkan pada suhu bilik selama 10 hingga 15 minit.
II.
Sediakan sample cup.
III.
Pipet 400µL bahan uji hemoglobin denaturant ke dalam sample cup. Sebatikan (‘mix’) selama 5-10 saat secara perlahan.
IV.
Biarkan whole blood tersebut dalam keadaan ‘hemolyse’ selama 5 minit pada suhu bilik.
V.
Ujian dijalankan.
VI.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y119‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
VII.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VIII.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya HbA1c, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
IX.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
X.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpertasi ujian :
135
Julat Normal :
HbA1c
:
7.5 umol/L
Tajuk Ujian : Total Urin protein 24 jam. Ujian jumlah urin protein dijalankan untuk mengesan protein yang berlebihan dalam urin dan merupakan satu ujian susulan yang sebelumnya adalah positif. Ujian ini membantu dalam menentukan fungsi buah pinggang seseorang individu. Ujian ini dijalankan untuk mengesan sebagai sebahagian pemeriksaan dalaman fizikal atau untuk menentukan jenis penyakit atau keadaan yang menjejaskan buah pinggang. Ujian urin jumlah 24 jam iaitu dimana kuantiti protein diukur sebagai jumlah yang dikumuhkan lebih daripada tempoh 24 jam.
Bahan dan radas : I.
Dipstick urinalisis
II.
Alat penimbang Digital
III.
Botol urin (24 hours)
IV.
Botol urin (yellow container)
V.
Mikropipet
VI.
Mesin ARCHITECT c4000
VII.
Rek
VIII.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
Carbonate buffer
II.
Sodium chloride
III.
Benzethonium chloride
Sampel : I.
Urin protein 24 jam
136
Prinsip : Ujian ini merupakan untuk pemeriksaan metabolisme dan juga ujian susulan selepas urin dilakukan dengan dipstik urinalisis. Biasanya,protein tidak dijumpai dalam urin apabila ujian dengan mencelup stik rutin ini. Sesetengah protein akan muncul di dalam urin jika tahap protein dalam darah menjadi tinggi,walaupun buah pinggang masih berfungsi dengan betul. Protein akan hadir dalam urin apabila tahap protein dalam darah adalah normal. Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel urin akan dipindahkan sedikit pada botol urin berwarna kuning (yellow container). Ini adalah untuk memudahkan kerja mempipet sampel masuk ke dalam sampel Cup.
Prosedur : I.
Botol sampel urin protein 24 jam diletakkan di atas alat penimbang untuk mendapatkan nilai berat keseluruhan sampel tersebut.
II.
Pindahkan sedikit sampel urin protein 24 jam ke dalam botol urin (yellow container).
III.
Ujian dipstick dilakukan terlebih dahulu untuk mendapatkan tahap kepekatan protein yang ada dalam urin.
IV.
Kemudian,sampel dipipet masuk ke dalam (plan tube) sebanyak 400µL untuk diemparkan selama 5 minit.
V.
Sampel dipipet lagi sebanyak 300 µL dan dimasukkan ke dalam sampel cup.
VI.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y119‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
VII.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VIII.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya uPRO, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
IX.
Tunggu sehingga keputusan keluar. 137
X.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpertasi ujian : Julat Normal :
Urin protein 24 jam
:
<30 Mg/ 24 jam
Tajuk Ujian : Urin elektrolit 24 jam. Ujian urin elektrolit adalah untuk mengukur elektrolit urin. Kehadiran elektrolit yang banyak adalah berpunca daripada mineral yang ada di dalam badan. Mineral tersebut adalah seperti kalsium dan natrium dan yang paling banyak adalah magnesium dan kalium.
Bahan dan radas : I.
Urin dipstick
II.
Alat penimbang
III.
Botol urin elektrolit
IV.
Botol urin (yellow container)
V.
Mikropipet
VI.
Mesin ARCHITECT c4000
VII.
Rek
VIII.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
Buffer
II.
Potassium
III.
Sodium 138
IV.
Natrium
V.
chloride
Sampel : I.
Urin elektrolit 24 jam
Prinsip : Ujian urin elektrolit adalah untuk mengukur kadar atau kehadiran bahan kimi tertentu yang dipanggil elektrolit dalam urin. Ia biasanya mengukur tahap kalsium klorida,kalium atau natrium.
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
IV.
Sampel urin akan dipindahkan sedikit pada botol urin berwarna kuning (yellow container). Ini adalah untuk memudahkan kerja mempipet sampel masuk ke dalam sampel Cup.
Prosedur : I.
Botol sampel urin elektrolit diletakkan di atas alat penimbang untuk mendapatkan nilai berat keseluruhan sampel tersebut.
II.
Pindahkan sedikit sampel urin protein 24 jam ke dalam botol urin (yellow container).
III.
Ujian dipstick dilakukan terlebih dahulu untuk mendapatkan tahap kepekatan protein yang ada dalam urin.
IV.
Kemudian,sampel dipipet masuk ke dalam (plan tube) sebanyak 400µL untuk diemparkan selama 5 minit.
V.
Sampel dipipet lagi sebanyak 300µL dan dimasukkan ke dalam sampel cup.
VI.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y119‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟. 139
VII.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
VIII.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya Elec, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
IX.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
X.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpertasi ujian : Julat Normal : Urin elektrolit :
< 30Mg/mmoL
Tajuk Ujian : Total Iron Binding Capacity (TIBC). Jumlah kapasiti besi mengikat (TIBC) adalah ujian darah yang menunjukkan jika terdapat besi terlalu banyak atau terlalu sedikit dalam darah. Besi dibawa dalam darah yang ditukarkan kepada trasnferrin protein. Ujian ini membantu mengukur kemampuan protein yang dinamakan transferrin untuk menjalankan besi dalam darah.
Bahan dan radas : I.
Pengempar
II.
Mikropipet
III.
Mesin ARCHITECT c4000
IV.
Rek
V.
Cup ARCHITECT
Reagen : I.
Ferric chloride
II.
Citric Acid
Sampel : 140
I.
Serum
Prinsip : Ferric chloride saturating solution (reagen 1) akan dicampurkan bersama dengan sampel untuk mengikat apotrasnferin dengan besi. Absorban alumina dalam TIBC akan menyingkirkan lebihan besi daripada serum. Serum tersebut akan dianalisis untuk mengesan jumlah besi dengan menggunakan asai besi.
Kaedah ujian : I.
Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.
II.
Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik berkenaan akan diberitahu.
III.
Sampel bagi ujian TIBC ini akan dikumpul sehinggalah hari ke empat pada waktu pejabat dan diletakkan di dalam peti sejuk serta akan „run‟ pada tiap hari khamis sahaja.
VI.
Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran pesakit akan dilakukan.
VII.
Sampel (TIBC) serum yang diterima akan diambil untuk ujian ini dilakukan.
Prosedur : XI.
Keluarkan sampel (TIBC) dari dalam peti sejuk. Biarkan pada suhu bilik selama 10 hingga 15 minit.
XII.
Sediakan sample cup.
XIII.
Pipet 600µL bahan uji larutan TIBC ke dalam serum (plan tube) yang mengandungi serum pesakit sebanyak 300µL. Sebatikan (‘mix’) selama 5-10 saat secara perlahan.
XIV.
Tuangkan ke dalam cup khas untuk TIBC untuk penurasan dan biarkan selama 8 minit pada suhu bilik.
XV.
Ujian dijalankan.
XVI.
Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek contonnya „Y119‟ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya „1‟.
XVII.
Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama pesakit dan tekan ‘DONE’.
141
XVIII.
Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya TIBC, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.
XIX.
Tunggu sehingga keputusan keluar.
XX.
Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan pesakit di keluarkan.
Interpertasi ujian : Julat Normal : TIBC
:
240-450 Mg /dL
Nota : Peningkatan aras protein, albumin dan globulin serta ALT boleh menyebabkan penyakit hati, buah pinggang, ketaknormalan protein boleh menyebabkan kanser, kegagalan sel darah dan boleh menyebabkan inflamasi dan infeksi yang kronik. Peningkatan paras bilirubin boleh diakibatkan oleh hati, pundi hempedu atau kegagalan SDM dan secara klinikal mengakibatkan jaundis. Peningkatan ALP boleh menyebabkan penyakit hati, penyumbatan hempedu dan kegagalan tulang.
BLOOD GASES Blood Gases dan Bicarbonate Material yang diperuntukkan: Analyser Blood Gases Cobas b 211. Prinsip ujian: Hemoglobin, merupakan iron yang mengandungi protein di dalam seldarah merah, menngangkut oksigen dalam darah. Apabila tekanan partial (PO2) dalam paru-paru adalah tinggi, hemoglobin mengambil oksigen dan membebaskannya apabila PO2 rendah. Setiap gram hemoglobin bergabung dengan 1.34 ml oksigen. PO2 dalam tisu adalah lebih rendah daripada yang terdapat dalam darah. Oleh itu, PO2 dalam darah berkurangan untuk menyeimbangkan dengan PO2 dalam tisu. Hal ini menyebabkan oksigen dilepaskan daripada 142
hemoglobin dan melalui plasma daripada tisu lebih tinggi daripada PCO2 di dalam udara alveolar pada paru-paru. Kaedah: Blood Gases dan bikarbonat digunakan pada Cobas b 221 adalah ujian diagnostik secara in vitro sebagai pembilangan kuantitatif Blood gases dan bikarbonat dalam darah manusia. Prosedur Analiser Blood Gases Cobas b 211 yang menggunakan prinsip ion selective electrode (ISE). Dilakukan secara automatic dan diprogramkan untuk menentukan paras PCO 2, pH, HCO-3 dan PO2 dalam specimen tunggal. Bahan penghalang: Syringe yang mengandungi darah mestilah ditempatkan dalam bekas yang sejuk untuk mengelakkan darah beku dan mengganggu keputusan ujian. Nilai jangkaan: pH:
7.37 – 7.45
PCO2:
34 – 45 mmHg (4.52 – 5.98 kPa) atau 1.02 – 1.35 mmol/L.
Bikarbonat piawai:
22.4 – 25.8 mmol/L
Bikarbonat asal:
24 – 33 mmol/L
PO2:
83 – 108 mmHg.
Modified Oral Glucose Tolerance Test (MOGTT) Material yang diperuntukkan: Serbuk glukosa. Prinsip ujian: Kadar penyerapan glukosa dan respon terhadap insulin adalah untuk menentukan kebolehan glukosa bertolerasi sepertimana yang terlihat melalui paras glukosa darah. Apabila terdapat peningkata gklukosa dalam darah, insulin akan dibebaskan dari pankreas untuk menurunkan paras glukosa. Tindak balas tersebut boleh berkurangan bila insulin tiada atau tidak mencukupi. Peningkatan nilai glukosa selalunya berlaku selepas mengambil makanan yang mengandungi karbohidrat. Oleh sebab itu, tindak balas terhadap paras karbohidrat bergantung pada pengambilan karbohidrat yang sebelumnya dan pada 143
bilangan yang telah diingesi. Kesan terhadap karbohidrat yang tidak diingesi adalah asas terhadap ujian tindak balas glukosa. Ia mengesan keabnormaliti dalam metabolisme karbohidrat dalam kes seperti glukosuria. Kaedah: MOGTT dilakukan untuk mengukur tahap kebolehan badan bertindak balas terhadap glukosa yang telah diukur dos yang diberikan. Keadaan berjaga-jaga: Elakkan kontaminasi pada urin. Prosedur: 1. Pesakit akan berpuasa untuk semalaman. 2. Darah dan urin pesakit akan diambil. Darah tersebut akan dilakukan ujian glukosa darah. Urin, akan memeriksa glukosa menggunakan strip glukosa dan seterusnya direkod. 3. Psakit akan diberikan minum air glukosa; 75g glukosa dilarutkan dalam 250 ml atau 350 ml air dan diminum. 4. Selepas satu jam, ulang prosedur nombor 2. 5. Selepas dua jam, darah dan urin diambil untuk terakhir kali dan prosedur nombor 2. diulang. Bahan penghalang: Masa pengambilan sampel perlulah tepat untuk memberikan keputusan yang jitu. Ellakkan kontaminasi pada kontainer atu pada urin serta gunakan strip yang baik.
Keputusan: Ketidakhadiran glukosa urin:
Warna krim dalam masa 10 saat (negatif).
Kehadiran glukosa urin:
Warna ungu dalam masa 10 saat (+, ++, +++).
UJIAN TROP-T Ujian Trop-T Material yang diperuntukan : 144
i. Mesin Cobas H 232 POC System ii. Pasteur pipet Spesimen : Darah Prinsip : Jalur ujian mengandungi dua antibodi monoklonal khusus untuk jantung troponin T (cTnT) di mana satu adalah label emas. Antibodi membentuk kompleks sandwic dengan cTnT dalam darah. Apabila eritrosit disingkirkan, plasma melalui zon pengesanan kompleks sandwic cTnT berlabel emas dan isyarat positif dipaparkan sebagai garis merah (garis isyarat). Lebihan goldlabelled antibodi berkumpul di sepanjang garisan kawalan, memberi isyarat bahawa ujian adalah sah. Keamatan garis isyarat meningkat berkadaran dengan kepekatan troponin T. Sistem optik instrumen cobas 232 h mengesan dua baris dan mengukur keamatan garis isyarat. Perisian bersepadu menukarkan tafsiran isyarat kepada hasil kuantitatif yang dipaparkan pada skrin.
Prosedure : 1. Ambil spesimen menggunakan pipet sebanyak 150 mikrolit dan titiskan ke atas strip(Jalur). 2. Hidupkan instrument dengan menekan butang on selama 5 saat. 3. Masukkan ID pesakit pada paparan. 4. Masukkan strip (jalur) sebaik sahaja arahan ikon “INSE T” di paparkan. 5. Biarkan mesin selama 5 minit sebelum mengambil bacaan pada skrin.
145
Keputusan :
146
MAKMAL MIKROBIOLOGI/ KAJI KUMAN
147
MAKMAL MIKROBIOLOGI/BAKTEREOLOGI PENGENALAN Makmal mikrobologi/bakteriologi di Hospital Nukleus Labuan menjalankan ujian yang tidak memerlukan keputusan yang segera seperti makmal- makmal lain kerana ujian-ujian yang dilakukan dalam makmal ini memerlukan masa untuk mendapatkan hasil keputusan yang betul. Antara ujian yang dilakukan di dalam makmal ini ialah pengkulturan urin,darah,sampel2 swab, swab genital, dan stool c&s. Bagi makmal mikrobiologi/baktereologi ini juga ada melakukan prosedur pembuatan agar untuk tujuan pengkulturan bakteria-bakteria tertentu. Antara agar atau media yang dilakukan adalah seperti media MH, media MacConkey,media CLED, media agar darah, agar coklat dan agar sitrat.
148
CARTA ORGANISASI MAKMAL MIKROBIOLOGI
FAIZAL YUSOF PEG.SAINS(KAJI KUMAN)C41
Siti Rohaida Md Amen
Masri Suhaimi
JTMP U29
JTMP U29
149
AGAR MacCONKEY Penyediaan Agar MacConkey Bahan yang diperlukan: i)
Gelatin
ii)
Laktosa monohidrat
iii)
Natrium klorida
iv)
Pepton
v)
Garam hempedu
vi)
Neutral red
vii)
Krystal violet
Prinsip Agar MacConkey digunakan isolasi dan identifikasi Enterobacteriaeceae daripada sampel feses, urin, dan sebagainya. Ia juga bertindak sebagai agar pemilih bagi bakteria gram negatif. Gelatin dan pepton member sumber nitrogen, vitamin, mineral dan asid amino untuk pertumbuhan bakteria. Natrium klorida membekalkan elektrolit untuk pengangkutan dan kesimbangan osmotik manakala laktosa pula yang membekalkan karbon dan tenaga. Kristal violet dan hempedu pula merupakan agen pemilih yang bertindak sebagai inhibitor kepada bakteria gram positif. Neutral red bertindak sebagai indikator pH. Prosedur: 1.
Serbuk agar seberat 50 gram disediakan dan dimasukkan ke dalam satu liter air suling.
2.
Kemudiannya dipanaskan dan digaul sehingga sebati.
3.
Agar dididihkan selama satu minit.
4.
Didihan agar kemudiannya dimasukkan ke dalam botol dan disterilkan dalam autoclave pada suhu 121°C selama 15 minit.
5.
Setelah itu, botol disejukkan pada suhu 45 – 50 °C dan disebatikan.
6.
Tuang kedalam piring petri yang steril dan digoncangkan sesekali untuk mengelakkan agar mengeras.
7.
Agar yang sudah siap disimpan pada suhu 8 - 15°C.
Keputusan: 150
Organisma
Warna
Ciri – ciri
Esherichia coli
Merah ke merah jambu
-Tidak mukoid -Bulat
Klebsiella
Merah
-Mukoid -Bersaiz besar
Serratia
Merah ke merah jambu
Mukoid
Proteus
Tidak berwarna dan jernih
„Swarming‟
Salmonella
Tidak berwarna dan jernih
Shigella
Tidak
berwarna dan jernih
atau merah pucat
AGAR HEKTOEN Penyediaan Agar Hektoen Bahan yang digunakan: i) Enzim dari tisu haiwan ii) Ekstrak yis iii) Garam hempedu iv) Laktosa, sukrosa, salicin v) Natrium klorida vi) Natrium thiosulfida vii) Ferrik ammonium sitrat viii) Asid fushin ix) Agar. Prinsip: Agar Hektoen digunakan untuk isolasi dan membezakan Salmonella spp dan Shigella spp yang mana kedua-dua bakteria ini menginfeksi salur gastrousus manusia. Kandungan agar hektoen memberikan fungsi yang berbeza kepada agar. Enzim yang diekstrak dari tisu haiwan membekalkan nitrogen, karbon, dan asid amino untuk pertumbuhan organism. 151
Manakala ekstrak yis bertindak sebagai sumber vitamin dan garam hempedu dan asid fushin pula sebagai inhibitor kepada bakteria gram positif. Laktosa, sukrosa dan salicin adalah karbohidrat fermenter. Natrium klorida mengekalkan kesimbangan osmotik bagi agar tersebut dan ferrik ammonium sitrat menjadi sumber ferum dan membolehkan penghasilan hidrogen sulfide daripada natrium thiosulfida. Prosedur: 1.
Serbuk agar seberat
50 gram disediakan dan masukkan ke dalam 1liter air
suling. 2.
Kemudian dipanaskan dan digaul sehingga sebati.
3.
Agar dididihkan selama satu minit.
4.
Kemudian, disejukkan selama 10 minit dan disebatikan
5.
Agar dituang ke dalam piring petri yang steril dansesekali digoncang untuk mengelakkan agar menjadi solid.
6.
Agar yang sudah siap disimpan pada suhu 8 - 15°C.
Keputusan: Koloni berwarna merah ke oren:
Esherichia coli
Koloni berwarna hijau:
Shigella flexneri
THIOSULFATE CITRATE BILE SUCROSE SUGAR (TCBS) Penyediaan Agar Thiosulfate Citrate Bile Sucrose Sugar (TCBS) Bahan yang diperlukan: i)
Ekstrak yis
ii)
Enzim kasein
iii)
Enzim dari tisu haiwan
iv)
Natrium sitrat
v)
Natrium thiosulfat
vi)
Oxbile 152
vii)
Natrium klorida
viii)
Sukrosa
ix)
Ferrik sitrat.
Prinsip: Agar TCBS digunakan sebagai agar pemilih bagi mengisolasi Vibrio cholerae. Ekstrak yis, enzim kasein dan enzim dari tisu haiwan membekalkan nitrogen, vitamin, dan asid amino dalam agar TCBS. Manakala natrium sitrat, natrium thiosulfat dan oxbile bertindak sebagai agen pemilih yang membekalkan pH alkali untuk inhibitor organisma gram positif. Peningkatan pH digunakan untuk menggalakkan pertumbuhan Vibrio cholera kerana bakteria ini sensitif kepada asid. Sukrosa pula sebagai karbohidrat fermenter dan natrium klorida meransang pertumbuhan organisma dan mengekalkan kesimbangan osmotik. Prosedur: 1. Sediakan serbuk agar seberat 50 gram dan masukkan ke dalam 1liter air suling. 2.
Panaskan dan gaulkan sehingga sebati.
3.
Didihkan selama 1minit.
4.
Biarkan selama 10 minit untuk sejukkannya dan sebatikannya.
5.
Tuang kedalam piring petri yang steril.
6.
Simpan agar yang sudah siap pada suhu 8 - 15°C.
Keputusan: Koloni berwarna kuning:
Vibrio alginolyticus.
Koloni berwarna kuning:
Vibrio cholerae.
Koloni berwarna hijau:
Vibrio paarhaemolyticus.
153
AGAR NUTRIENT Penyediaan Agar Nutrient Bahan yang diperlukan: i)
23 g serbuk agar nutrient.
ii) Air suling. iii) Botol universal satu liter. iv) Autoclave. v) Piring petri. Prinsip: Nutrient agar merupakan medium asas bagi kebanyakan mikroorganisma. Ia juga merupakan asas pengkulturan bagi kebanyakan mikroorganisma. Ia juga merupakan asas bagi kebanyakan media seperti agar chocolate, dan media lain yang kompleks. Nutrien agar juga boleh disimpan di dalam tube. Kegunaan nutrient agar adalah untuk subkultur dan kekalkan patogen bukan fastidious. Prosedur: 1. 23 g serbuk agar nutrient dimasukkan dalam bekas steril. 2. Kemudian air suling dimasukkan sehingga mencapai paras satu liter. 3. Campuran tersebut dipanaskan dengan kacauan yang kerap. 4. Sesudah mendidih, agar dibiarkan selama satu minit. 5. Air agar dimasukkan dalam botol universal. 6. Botol tersebut diaotoclave pada suhu 121ºC selama 15 minit. 7. Botol dibiarkan sekejap, dan kemudian dituangkan ke dalam piring petri.
154
AGAR DARAH Penyediaan Agar Darah Bahan yang diperlukan: i)
42.5 g Columbia Base Agar.
ii) Air suling. iii) Botol universal. iv) Autoclave. v) 5% darah. vi) Piring petri. Prinsip: Agar darah merupakan agar diperkaya yang digunakan untuk membesarkan sejumlah besar organisma yang sederhana memilih. Ia juga digunakan untuk mengesan perbezaan hemolisis bakteria. Darah yang digunakan untuk agar daras mestilah bebas lisis dan berantikougulasi dan difibrinasi. Ia boleh jadi darah kuda, kambing biri-biri, atau darah arnab. Citrat darah manusia yang luput turut boleh digunakan. Citrat boleh merencat pertumbuham beta hemolitik streptococci. Sebelum digunakan, sejukkan dalam peti sejuk semalaman. Prosedur: 1. Sediakan 42.5 g Columbia Base Agar. 2. Air suling dicampurkan ke dalam agar sehingga mencecah paras satu liter. 3. Campuran tersebut dipindahkan ke dalam botol universal. 4. Kemudian botol tersebut diautoclave pada suhu 121ºC selama 15 minit. 5. Kemudian, botol tersebut dikeluarkan daripada autoclave dan dibiarkan pada suhu bilik sehingga suhu 45ºC hingga 50ºC. 6. 5% darah yang steril kemudiannya dimasukkan ke dalam botol tersebut dan disebatikan. 7. Serta merta, agar dituangkan ke dalam piring petri sambil digoncang sekali-sekala untuk mengelakkan agar mengeras. Keputusan:
155
Streptococcus spp:
α-hemolisis; bakteria sedikit pecahkan sel darah merah dan ukuran lisis kecil. β-hemolisis; bakteria sepenuhnya memecahkan sel darah merah. Ukuran lisis yang besar. Ƴ-hemolisis; tiada pemecahan sel darah merah. Tiada ukuran lisis.
AGAR CHOCOLATE Penyediaan Agar Chocolate Bahan yang diperlukan: i)
42.5 g Columbia Base Agar.
ii) Air suling. iii) Botol universal steril. iv) Autoclave. v) 5% sel darah merah. vi) Piring petri. Prinsip: Agar chocolate merupakan agar bukan pemilih, diperkaya media tumbesaran. Ia mengandungi sel darah merah yang telah dilisiskan dengan memanaskan secara perlahan sehingga 56ºC. agar ini digunakan untuk tumbesaran bakteria fastidious bakteria respirasi seperti Haemophilus influenza. Bakteria ini memerluka faktor tumbesaran seperti nicotinamide adenosine dinucleotide (NAD) dan hematin yang terdapat pada sel darah merah. Oleh itu cara yang baik untuk prtumbuhan adalah menggunakan sel darah merah yang lisis. Prosedur: 1. Sediakan 42.5 g Columbia Base Agar. 156
2. Air suling dicampurkan ke dalam agar sehingga mencecah paras satu liter. 3. Campuran tersebut dipindahkan ke dalam botol universal. 4. Kemudian botol tersebut diautoclave pada suhu 121ºC selama 15 minit. 5. Kemudian, botol tersebut dikeluarkan daripada autoclave dan dibiarkan pada suhu bilik seketika. 6. Setelah suhu botol mencecah 56ºC, 5% darah yang steril kemudiannya dimasukkan ke dalam botol tersebut dan disebatikan. Ini untuk melisiskan sel darah merah. 7. Serta merta, agar dituangkan ke dalam piring petri sambil digoncang sekali-sekala untuk mengelakkan agar mengeras. Keputusan: Media gelap dan bersih:
Staphylococcus
epidermidis,
Staphylococcus
aureus,
Staphylococcus simulans, dan Streptococcus faecalis. Media kekuningan:
alpha-hemolytic spesis Streptococcus.
AGAR CYSTEINE-LACTOSE-ELECTROLYTE-DEFICIENT (CLED) Penyediaan Agar CLED Bahan yang diperlukan: i)
36 g serbuk CLED.
ii) Botol universal steril. iii) Air suling. iv) Autoclave. v) Piring petri. Prinsip: Agar CLED ialah medium pembeza yang bukan selektif untuk tumbesaran dan enumerasi mikroorganisma salur urinari. Kehadiran sodium klorida merencat perebakan Proteus dan memberikan tumbesaran pada mikroorganisma salur urinari dan ia digunakan untuk membeza dan mengenalpasti mereka. Kehadiran pengkontaminaan bakteria seperti Diphtheroids, 157
Lactobacilli dan mikroorganisma lain sebagai pengukur darjah penjagaan yang diambil dalam melaksanakan spesimen urin. Ekstrak dagine lembu dan pepton kasein membekalkan nitrogen, vitamin, mineral dan asid amino untuk tumbesarah lebihan. Laktosa merupakan bahan fermentasi karbohidrat memberikan karbon dan tenaga. L-Cystine ditambah sebaigai pembesaran tambahan untuk cystine pembentukan coliform secara sendiri. Membezakan fermentasi laktosa dan bukan fermentasi laktosa diperolehi dengan menggunakan Bromothymol biru sebagai indikasi pH. Organisma yang menapaikan laktosa akan menurunkan pH dan mengubah warna medium daripada hijau ke kuning. Mikroorganisma yang sebabkan infeksi dalam salur urinari secara umumnya diabaikan dan hanya satu spesis. E. coli ialah mikroorganisma yang paling kerap di isolasi. Pembilangan 100.000 (105)/ml atau banyak merupakan indikasi signifikan infeksi salur urinari. Prosdur: 1. 26 g serbuk agar CLED dimasukkan dalam bekas steril. 2. Kemudian air suling dimasukkan sehingga mencapai paras satu liter. 3. Campuran tersebut dipanaskan dengan kacauan yang kerap. 4. Sesudah mendidih, agar dibiarkan selama satu minit. 5. Air agar dimasukkan dalam botol universal. 6. Botol tersebut diaotoclave pada suhu 121ºC selama 15 minit. 7. Botol dibiarkan sekejap, dan kemudian dituangkan ke dalam piring petri. Keputusan: Fermentasi atau Mikroorganisma
Pembesaran
Warna medium
bukan fermentasi laktosa
Enterobacter
Baik
Kuning cerah - biru
Bukan fermentasi
Escherichia coli
Baik
Merah jambu
Fermentasi
Proteus vulgaris
Baik (tiada swarming)
Biru – biru hijau
Bukan fermentasi
Staphylacoccus
Baik
Kuning cerah
Bukan fermentasi
aerogenes
aureus
158
Enterococcus faecalis
Baik
Kunig cerah
Bukan fermentasi
Klebseila pneumonia
Baik
Merah jambu
Fermentasi
Kleibseila spp
Baik
Merah jambu
Fermentasi
Citrobacter freundii
Baik
Merah jambu
Fermentasi
AGAR TRIPLE SUGAR IRON (TSI) Penyediaan Agar TSI Bahan yang diperlukan: i)
65 g serbuk TSI.
ii) Air suling. iii) Botol universal. iv) Autoclave. v) Tabung uji. Prinsip: Pencernaan enzimatik kasein, pencernaan enzimatik tisu haiwan dan kulat diperkaya pepton memberikan nitrogen, karbon, dan vitamin yang diperlukan untuk pembesaran organisma. TSI mengandungi tiga karbohidrat, dekstros, laktosa, dan sukrosa. Apabila karbohidrat telah ditapaikan, penghasilan asid akan dikesan oleh fenol merah indikasi pH. Sodium tiosulfat dikurangkan kepada hidrogen sulfida, dan hidrogen sulfida bertindak balas dengan garam iron membentuk iron sulfida hitam yang serupa. Ferik amonia sitrat adalah hidrogen sulfida (H 2S) indikasi. Sodium klorida berfungsi mengekalkan keseimbangan osmotik pada medium. Agar ialah agen solidifikasi. Prosedur: 1. 65 g serbuk agar TSI dimasukkan dalam bekas steril. 2. Kemudian air suling dimasukkan sehingga mencapai paras satu liter. 3. Campuran tersebut dipanaskan dengan kacauan yang kerap. 4. Sesudah mendidih, agar dibiarkan selama satu minit untuk larutan lengkap. 159
5. Air agar dimasukkan dalam botol universal. 6. Botol tersebut diaotoclave pada suhu 121ºC selama 15 minit. 7. Botol dibiarkan sekejap, dan kemudian dituangkan ke dalam tabung uji secara condong. Keputusan: Approx. Mikroorganisma
Anggaran Keputusan
Inoculum (CFU)
Baikpulih
Slant
Butt
Gas
H2S
Escherichia coli
Berat
Tumbuh
A
A
+
-
Proteus mirabilis
Berat
Tumbuh
K
A
-
+
Pseudomonas aeruginosa
Berat
Tumbuh
K
K
-
-
Salmonella typhimurium
Berat
Tumbuh
K
A
+/-
-
Shigella flexneri
Berat
Tumbuh
K
A
-
-
Kata kunci:
A, asid. K, alkali. -, negatif. +, positif. +/-, pertumbuhan positif dan negatif.
Slant alkali - butt asid (merah/kuning):
Fermentasi dekstros sahaja.
Slant asid - butt asid (kuning/kuning):
Fermentasi dekstros, laktosa, dan atau sukrosa.
Slant alkali-butt alkali (merah/merah):
Dekstros dan laktosa tidak difermentasi.
Mediaum mekahan, pisahan atau buih:
Penghasilan gas.
Butt warna kehitaman:
Penghasilan hidrogen sulfida (H2S).
160
AGAR MORTILITY-INDOL-ORNITHIN (MIO) Penyediaan agar MIO Bahan yang diperlukan: i)
31 g serbuk agar MIO.
ii) Air suling. iii) Botol universal steril. iv) Autoclave. v) Tabung uji. Prinsip: Mortiliti adalah untuk memerhatikan kekeruhan dalam medium. Pada organisma yang tidak motil, pertumbuhan boleh dilihat melalui rekahan dalam medium disebabkan oleh penghasilan gas, tetapi akan terdapat poket yang bersih tanpa pertumbuhan. Dikarboksilasi ornitin adalah untuk memerhati di bahagian bawah 3/4 iaitu kawasan anaerobik pada medium untuk perubahan dalam warna pada indikasi pH; pertumbuhan mesti hadir pada bahagian tiub ini untuk analisa keputusan yang betul; warna kelabu, biru atau ungu merupakan reaksi positif untuk ornitin dikarboksilasi iaitu pembentukan produk alkali yang sangat tinggi, peneutralan asid yan melampau dihasilkan daripada penapaian glukosa. Warna kuning merupakan reaksi negatif. Merupakan default penghasilan asid daripada penapaian glukosa. Penghasilan indol berlaku apabila titisan reagen Kovacs ditambah pada medium. Gegelang merah akan terhasil pada indol daripada pemecahan trytophan. Prosedur: 1. 31 g serbuk agar MIO dimasukkan dalam bekas steril. 2. Kemudian air suling dimasukkan sehingga mencapai paras satu liter. 3. Campuran tersebut dipanaskan dengan kacauan yang kerap. 4. Sesudah mendidih, agar dibiarkan selama satu minit untuk larutan lengkap. 5. Air agar dimasukkan dalam botol universal. 6. Botol tersebut diaotoclave pada suhu 121ºC selama 15 minit. 7. Botol dibiarkan sekejap, dan kemudian dituangkan ke dalam tabung uji.
161
Keputusan:
No. tabung uji (sebelah kanan setiap tabung uji telah ditambah dengan reagen Kovaks)
1
2
3
Kehadiran asid amino (aerobik alkali)
+
+
+
Mortiliti (kekeruhan)
-
+
+
Dikarboksilasi ornitin (anaerobik alkali)
-
+
+
Penghasilan indol (gegelung merah selepas tambah
+
-
+
+
+
+
kovaks) Penapaian glukosa (asid) Contoh jenis mikroorganisma
Klebseila oxytoca
Enterobecter Escherichia aerogenes
coli
MUELLER HINTON AGAR/BROTH Penyediaan Mueller Hinton Agar/Broth Bahan yang diperlukan : I. II.
Mueller hinton Air suling.
III.
Botol universal steril.
IV.
Autoclave. 162
V.
Botol kaca.
Prinsip : Muller Hinton broth digunakan bersama Muller-Hinton agar dalam ujian sensitiviti antibiotik. Muller-Hinton agar adalah satu medium pertumbuhan mikrobiologi yang biasanya digunakan untuk ujian kerentanan antibiotik. Ia juga digunakan untuk mengasingkan dan mengekalkan spesies Neisseria dan Moraxella.
Prosedur: Muller-Hinton Agar 1. 38 g serbuk agar Mueller hinton dimasukkan dalam bekas steril. 2. Kemudian air suling dimasukkan sehingga mencapai paras satu liter. 3. Campuran tersebut dipanaskan dengan kacauan yang kerap. 4. Sesudah mendidih, agar dibiarkan selama satu minit untuk larutan lengkap. 5. Air agar dimasukkan dalam botol universal. 6. Botol tersebut diaotoclave pada suhu 121ºC selama 15 minit. 7. Botol dibiarkan sekejap, dan kemudian dituangkan ke dalam piring petri. Muller-Hinton Broth 1. 21 g serbuk agar Mueller hinton dimasukkan dalam bekas steril. 2. Kemudian air suling dimasukkan sehingga mencapai paras satu liter. 3. Campuran tersebut dipanaskan dengan kacauan yang kerap. 4. Sesudah mendidih, agar dibiarkan selama satu minit untuk larutan lengkap. 5. Air agar dimasukkan dalam botol universal. 6. Botol tersebut diaotoclave pada suhu 121ºC selama 15 minit. 7. Botol dibiarkan sekejap, dan kemudian dituangkan ke dalam botol.
163
Keputusan :
PENGKULTURAN BAKTERIA SAMPEL URIN Pemprosesan Sampel Urin Bahan dan alat radas: i)
Agar darah
ii)
Agar C.L.E.D ( Cystine Lactose Electrolyte Defision)
iii)
Inkubator (37°C)
iv)
Dawai loop
Prinsip: Kebanyakkan infeksi saluran urin adalah disebabkan oleh bakteria tunggal. Tetapi bagi pesakit yang menghidapi kronik UTI atau membuat pembedahan pada saluran urin,dua organisma mungkin hadir. Sampel „midstream urin‟ diproses dan dikultur dalam media agar untuk mengesan kehadiran bakteria dan mengenalpasti bakteria yang hadir. Prosedur: i)
Sampel urin yang diterima dilabel dan pastikan maklumat pada sampel adalah sama pada borang permintaan.
ii)
Sampel dikulturkan pada agar darah dan agar MacConkey.
iii)
Selepas itu media agar diinkubasi secara aerobik pada suhu 37°C selama 18 – 24 jam. 164
iv)
Agar media tersebut didiagnos dan ujian biokimia dilakukan untuk pengenalpastian bakteria.
v)
Ujian sensitiviti dilakukan.
Keputusan: Tiada pertumbuhan bakteria:
Dilaporkan sebagai tiada pertumbuhan.
Pertumbuhan signifikant:
>100,000/ml, ujian identifikasi dan sensitiviti dijalankan.
Pertumbuhan tidak signifikant:
<100,000/ml, dilaporkan sebagai tiada patogen.
SAMPEL SPUTUM Pemprosesan Sampel Sputum Bahan dan alat radas: i)
Agar darah
ii)
Agar MacConkey
iii)
Agar coklat
iv)
Slaid
v)
Mikroskop
vi)
Dawai loop
vii)
Inkubator 37°C
Prinsip: Batuk merupakan salah satu tanda atau simptom kepada jangkitan dalam sistem respiratori. Batuk selalunya akan memyebabkan sputum terhasil dalam alveoli dan saluran udara. Pemeriksaan sampel sputum adalah untuk mengenalpasti bakteria yang menginfeksi saluran respiratori. Sampel sputum diambil dan dikultur dalam media agar dan pengenalpastian bakteria. Prosedur: 1.
Sampel yang diterima dilabel dan pastikan sampel adalah sesuai untuk diproses. 165
2.
Selepas itu, pemeriksaan makroskopik dilakukan.
3.
Smear dan pemeriksaan mikroskopik dilakukan selepas itu.
4.
Sampel kemudiaannya dikulturkan di atas agar darah, agar coklat dan agar Mac Conkey.
5.
Agar darah dan agar Mac Conkey dieram dalam incubator pada suhu 37° semalaman manakala agar coklat pula dieram dalam balang karbon dioksida selama 48 jam.
6.
Plat agar didiagnos dan ujian biokimia dilakukan pengenalpastian bakteria.
7.
Ujian sensitiviti dijalankan.
Keputusan Patogen diisolasi:
Streptococcus pyogens, Streptococcus pneumonia. -
Ujian pengenalpastian.
-
Ujian sensitiviti.
Tiada patogen diisolasi:
Inkubat semula. -
Dilaporkan sebagai tiada patogen diisolasi.
SAMPEL FESES Pemprosesan Sampel Feses Bahan dan alat radas: i)
Dawai loop
ii)
Agar Hektoen
iii)
Broth Selenite
iv)
Inkubator 37°C.
Prinsip: Feses cair merupakan salah satu simptom bagi infeksi pada gasterusus. Infeksi ini berlaku apabila patogen memasuki salur gasterusus dan membiak. Mikroorganisma boleh menembusi
166
mukosa intestinal dan membiak diusus ataupun merebak ke organ sistemik yang lain. Sampel feses akan dikultur pada media agar, dikenalpasti dan ujian sensitivity dilakukan Prosedur: 1.
Sampel feses diterima dan dilabel.
2.
Sampel dikultur pada agar Hektoen dan broth Selenite untuk pengkulturan primary dan dibiarkan semalaman.
3.
Subkultur dari broth Selenite dilakukan pada agar Hektoen untuk pengkulturan sekunder dan dieram pada suhu 37°C dan dibiarkan 24jam.
4.
Plat agar didiagnos dan ujian biokimia dilakukan untuk pengenalpastian bakteria.
5.
Ujian sensitiviti dijalankan.
Keputusan: Patogen diisolasi:
Salmonella dan Shigella -
Ujian pengenalpastian.
-
Ujian sensitiviti.
Tiada patogen diisolasi:
Dilaporkan sebagai tidak patogenik.
Tiada pertumbuhan:
Dilaporkan sebagai tiada pertumbuhan
SAMPEL GENITAL, RESPIRATORY SPESIMEN DAN SPESIMEN STERIL Pemprosesan Sampel Genital, respiratory spesimen dan Spesimen Steril Bahan dan alat radas: i)
Agar darah
ii)
Agar Mac Conkey
iii)
Agar Coklat
iv)
Dawai loop
v)
Biggy Agar 167
vi)
Inkubator 37 °C.
Prinsip: Pemeriksaan bakteriologi bagi spesimen genital dari wanita adalah sukar kerana spesimen terdedah pada normal flora pada vagina. Sampel diambil pada High Vaginal Swab (HVS) atau swab endoservikal dan akan diperhatikan dibawah mikroskop setelah pewarnaan Gram dilakukan. Setelah itu, pengkulturan pada media agar dilakukan untuk isolasi dan mengenalpasti patogen yang hadir. Prosedur: 1.
Sampel diterima dan dilabel.
2.
Sampel kemudiaannya dikultur pada agar darah, agar MacConkey dan agar coklat serta biggy agar. Agar darah dan MacConkey serta biggy agar dieram pada inkubator 37° semalaman dan agar coklat dieram secara anaerobik selama 48 jam.
3.
Sekiranya tiada pertumbuhan bakteria yang diperhatikan selepas dieram semalaman agar dieram semula selama 24jam.
4.
Plat agar didiagnos dan ujian biokimia dilakukan pengenalpastian bakteria.
5.
Ujian sensitiviti dilakukan.
Keputusan: Patogen diisolasi:
N. Gonorrhoeae, Candida Albican -
Ujian pengenalpastian.
-
Ujian sensitiviti.
Tiada patogen diisolasi:
Dilaporkan sebagai tidak patogenik.
Tiada pertumbuhan:
Dilaporkan sebagai tiada pertumbuhan.
168
SAMPEL PUS / NANAH Pemprosesan Sampel Pus Bahan dan alat radas: i)
Agar darah
ii)
Agar Mac Conkey
iii)
Dawai loop
iv)
Inkubator 37 °C.
Prinsip: Kecederaan kecil yang terjadi pada kulit boleh memusnahan intergritinya dan membolehkan mikroorganisma yang terdapat pada permukaan kulit masuk ke dalam lapisan kulit. Kecederaan yang dialami dapat dikelaskan sebagai kecederaan daripada pembedahan, trauma dan kecederaan fisiologi. Jka kecederaan tidak dirawat dengan segera, mikroorganisma akan menginfeksi kawasan luka tersebut dan terjadilah nanah. Nanah yang terhasil adalah diakibatkan oleh infeksi bakteria pada kulit dan kecederaan yang dialami. Sampel pus diambil daripada kawasan terinfeksi untuk menentukan jenis organisma dan membuat pengkulturan pada media agar untuk mengisolasi dan mengenalpasti patogen. Prosedur: 1.
Sampel diterima dan dilabel.
2.
Sampel kemudiaannya dikultur pada agar darah dan agar MacConkey.. Agar darah dan MacConkey dieram pada inkubator 37° semalaman. Sekiranya tiada pertumbuhan bakteria yang diperhatikan selepas dieram semalaman agar dieram semula selama 24jam.
3.
Plat agar didiagnos dan ujian biokimia dilakukan pengenalpastian bakteria.
4.
Ujian sensitiviti dilakukan.
Keputusan: Patogen diisolasi:
S.aureus,acinetobacter -
Ujian pengenalpastian. 169
-
Ujian sensitiviti.
Tiada patogen diisolasi:
Dilaporkan sebagai tidak patogenik.
Tiada pertumbuhan:
Dilaporkan sebagai tiada pertumbuhan.
SAMPEL DARAH Pemprosesan Sampel Darah Bahan dan alat radas: i)
Agar darah
ii)
Agar MacConkey
iii)
Agar coklat
iv)
Dawai loop
v)
Inkubator khas.
Prosedur: 1.
Spesimen yang diterima dalam media komersial.
2.
Spesimen discan pada komputer dan dimasukkan kedalam inkubator khas.
3.
Spesimen akan dieram selama 5hari bagi dan bagi spesimen fungus ia dieram selama 2minggu.
4.
Spesimen yang positif akan dikeluarkan dan perwarnaan gram dilakukan untuk memerhatikan morfologi bakteria yang hadir.
5.
Vial aerobik akan dikultur dalam agar darah, agar MacConkey dan agar coklat.ia akan dieram dalam inkubator 37° selama 24jam
6.
Vial anaerobik pula akan dieram dalam agar darah dan dieram secara anaerobic selama 24jam.
7.
Bagi spesimen negatif, ia akan terus dieram selama 5hari dan akan dikeluarkan selepas itu.
Patogen diisolasi:
S.aureus,Brucella sp 170
o
Ujian pengenalpastian.
o
Ujian sensitiviti.
Tiada patogen diisolasi:
Dilaporkan sebagai tidak patogenik.
Tiada pertumbuhan:
Dilaporkan sebagai tiada pertumbuhan.
UJIAN SENSITIVITI
Ujian Sensitiviti Bahan dan alat radas: i)
Swab kapas
ii) Dawai loop iii) Agar Muller Hinton iv) bakteria dalam broth. Prinsip: Menentukan aktiviti perencatan agen antimikrobial terhadap strain tertentu bakteria. Inokulum yang standard diswabkan pada permukaan agar dan disk yang mengandungi antibiotik diletakkan atas agar. Plat agar tersebut kemudiannya dieramkan dalam inkubator semalaman. Antibiotik tersebut kemudiannya akan menyerap masuk ke dalam agar bergantung kepada ciri – ciri fizikal dan kimia. Zon perencatan organism diperhatikan dan diameter zon ini akan ditentukan berdasarkan kebolehan organism berkembang, kadar pertumbuhan dan penyerapan antibiotik. Diameter tersebut diukur dan ditukar kepada sensitive, intermediate & resistant berdasarkan jadual. Prosedur: 1. Broth bakteria dieram selama 2 jam. 2. Swab kapas dicelup ke dalam broth dan pastikan cecair yang diserap oleh swab kapas tidak berlebihan. 3. Kemudian diswabkan di atas agar menutupi semua kawasan, plat agar diputar 60° dan diswab dan kemudiaan plat agar diputar 60° lagi dan diswab. 171
4. Disk antibiotik diletakkan diatas agar dan tidak melebihi 6 disk dalam 1 plat agar. 5. Plat agar dieramkan agar selama 16-18 jam pada suhu 35oC. 6. Selepas 24 jam, zone perencatan diperhatikan dan diukur dalam unit mm. Keputusan: Optochin:
Resistan ( streptococcus viridians). Sensitif ( streptococcus pneumonia).
Novobiochin:
Resistan (staphylococcus saprophyticus). Sensitif( staphylococcus epidermis).
Bacitracin:
Resistan ( streptococcus sp). Sensitif ( streptococcus pyogenes).
Polymycin B:
Resistan( bukholderia , pseudomallei B cepacia). Sensitif (pseudomonas aeruginosa).
PEWARNAAN GRAM Pewarnaan Gram Prinsip: Pewarnaan ini adalah untuk membezakan bakteria gram positif dan bakteria gram negatif. Pembezaan ini berdasarkan tindak balas bakteria terhadap alkohol iaitu agen penyahwarnaan. Bakteria gram positif tidak bertindakbalas dengan alkohol dan akan berwarna ungu gelap manakala bakteria gram negatif akan bertindak balas dengan alkohol. Warna ungu gelap akan pudar dan bakteria akan berwarna merah jambu disebabkan pewarna balas safranin. Prosedur: 1.
Apusan bakteria dilakukan ke atas slaid dan difiksasikan untuk melekatkan bakteria pada slaid.
2.
Slaid kemudiaannya diwarnakan dengan pewarna kristal violet selama satu minit untuk mewarnakan dinding sel bakteria. 172
3.
Bilas dengan air kemudian diwarnakan dengan pewarna iodin Lugol yang bertindak sebagai mordan selama satu minit
4.
Bilas dengan air selama dan kemudian dibilas dengan alkohol aseton selama 10 ke 15 saat.
5.
Slaid dibilas dengan air.
6.
Kemudian slaid diwarnakan dengan pewarna safranin selama satu minit.
7.
Kemudian dibilas dengan air dan slaid dikeringkan.
8.
Pemerhatian dibawah mikroskop dilakukan.
Keputusan: Gram Positif:
Berwarna biru.
Gram Negatif:
Berwarna merah.
Tatacara Pelekapan Basah Bakteria BAHAN 1. Kultur bakteria (dalam botol media broth atau plat kultur) 2. Slaid mikroskop 3. Penutup slaid 4. Botol larutan salin (steril)
TATACARA 1. Sterilkan gelung dawai melalui kaedah pembakaran dan biarkannya sehingga sejuk. 2. Letakkan setitis kecil salin steril di atas sekeping slaid mikroskop bersih. 3. Sentuhkan gelung dawai steril kepada 1 koloni bakteria pada plat kultur. 4. Buatkan suspensi bakteria dari gelung dawai di dalam titisan salin di atas. 5. Letakkan sekeping penutup slaid di atas suspensi bakteria seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3.1. 6. Amati pergerakan bakteria dengan kanta objektif 40X.
173
Sekiranya menggunakan kultur broth tukarkan langkah 4 kepada berikut: 4a. Sterilkan gelung dawai melalui kaedah pembakaran dan biarkannya sehingga sejuk. 4b. Letakkan 1 gelung penuh kultur cecair bakteria (yang agak keruh atau tebal) ke atas slaid mikroskop.
Tatacara Plat Garisan BAHAN 1. Kultur bakteria 2. Piring Petri yang mengandungi media agar 3. Gelung dawai 4. Penunu Bunsen
TATACARA 1. Labelkan plat Petri yang mengandungi media pertumbuhan yang steril (pada bahagian dasar atau bawahnya dan bukan di atas penutupnya). 2. Letakkan plat Petri tersebut dengan bahagian dasarnya di sebelah atas. 3. Sterilkan gelung dawai melalui pembakaran api penunu Bunsen dan setelah sejuk, ambil specimen dengannya. 4. Pegang dan angkat bahagian dasar plat sehingga permukaan media yang terdedah menghadap anda. 5. Letakkan gelung yang mengandungi specimen di atas permukaan media agar kira-kira 1 cm daripada dinding plat Petri tersebut. 6. Sebarkan inokulum seluas 1 cm garis pusat. 7. Bermula daripada sebaran di atas gariskan inokulum dengan menggerakkan gelung bolak-balik supaya garisan meliputi satu kawasan seluas kira-kira sepertiga daripada plat.
174
8. Garisan seterusnya bermula daripada kawasan di sekitar penghujung garisan-garisan pertama. 9. Bakar semula gelung dawai dan biarkan sejuk. Putarkan plat ~90 darjah dan buatkan pula beberapa garisan mengulangi prosedur di atas sehingga garisan meliputi keseluruhan kawasan permukaan media. 10. Pastikan garisan yang terakhir tidak menyentuh sebaran inokulum yang pertama. 11. Piring Petri yang telah diinokulasi dieramkan pada suhu tertentu dalam keadaan terbalik.
NOTA 1. Gunakan penghujung gelung dawai sahaja untuk menyentuh permukaan media supaya mendapatkan garisan yang halus dan tipis. 2. Dalam membuat garisan, yang penting ialah menyentuh gelung pada permukaan media dan menggariskannya; usahakan menggaris perlahan-lahan supaya anda tidak sampai mencungkil atau merobek media sehingga mengakibatkan media menjadi pecah-pecah. 3. Pastikan juga garisan yang dibuat tersebut rapi, berterusan tetapi terpisah serta tidak saling memotong atau bersilang di antara garisan atas dengan yang di bawahnya supaya mendapatkan koloni bakteria yang berasingan. 4. Gelung dawai dibakar semula selepas garisan dibuat pada bahagian pertama piring Petri supaya inokulum (jumlah bakteria) dikurangkan, maka koloni bakteria yang terpisah akan didapati. 5. Jangan bercakap semasa melakukan prosedur ini untuk mengelakkan semburan air liur terjatuh ke atas permukaan media agar. 6. Piring petir yang telah diinokulasi dieramkan secara terbalik supaya sebarang pemulapan yang berlaku pada penutupnya tidak akan menitis ke atas kultur.
UJIAN MAKMAL DALAM PENGENALPASTIAN BAKTERIA Bakteria mempunyai kisaran aktiviti biokimia yang amat luas; yang merangkumi proses kemusnahan dan proses pembinaan (atau sintesis). Aktiviti yang luas ini dikawal oleh factor genetic serta alam sekelilingnya.Daripada segi genetik, sesuatu aktiviti biokimia ditentukan oleh enzim-enzim yang dihasilkan oleh bakteria.Dalam pengenalpastian bakteria, faktor ini dengan spesifisiti sesejenis enzim terhadap substrat tertentu membolehkan bakteria dikenal pasti dalam keadaan sekeliling yang terkawal seperti di makmal.Misalnya, beberapa kumpulan bakteria 175
tertentu menghasilkan bahan pertengahan metabolisme yang spesifik seperti asetil-metilkarbinol berikutan fermentasi glukos yang boleh digunakan untuk membezakan kumpulan bakteria yang menghasilkannya daripada yang tidak. Kehadiran sesejenis enzim dikenal pasti secara tidak langsung melalui tindakannya terhadap sesuatu substrat.Hasilan aktiviti enzim ini boleh berupa gas atau terbitan bukan gas. Gas yang dihasilkan dikesan secara langsung melalui pengamatan penghasilan gelembung gas atau secara tidak langsung melalui penggantian cecair di dalam tiub Durham dengan gas, kehadiran rekahan atau celah-celah di dalam agar atau melalui tindakan kimia yang menghasilkan terbitan yang berwarna dan tidak larut (misalnya H2S). Hasilan bukan gas ditunjukkan oleh perubahan warna indicator pH (sesuatu jenis pewarna) yang bergantung kepada jenis indicator yang digunakan (contoh, Andrade: neutral – kuning pucat, asid – merah, alkalin – tanpa warna; bromthymol blue: neutral – hijau, asid – kuning, alkali – biru). Enzim juga boleh ditunjukkan dalam tindakan serologi yang menghasilkan kompleks enzim (sebagai antigen) – antibody yang muncul sebagai presipitasi.
Ujian Tiga Gula-Besi Media tiga gula-besi atau Triple Sugar Iron (TSI) merupakan sejenis media campuran yang digunakan untuk membezakan spesies bakteria dalam famili Enterobacteriaceae dengan berdasarkan kepada kemampuan spesies-spesies ini untuk memfermentasi gula dekstros, laktos atau sukros atau kombinasi daripada ketiga-tiga tersebut; penghasilan gas dan penghasilan hydrogen sulfid. Media TSI disediakan dalam agar condong. Bahagian permukaan agar (agar condong) (slant) adalah terdedah kepada udara maka wujud daladm keadaan aerobic. Sebaliknya, bahagian punting agar (di bahagian dasar tabung) (butt) dilindungi dari udara dan wujud dalam keadaan anaerobic (walaupun bukan 100%). Gula yang digunakan adalah glukosa (0.1%), laktosa (1.0%) dan sukrosa (1.0%). Indicator pH, sebagai penunjuk fermentasi, adalah fenol merah yang akan menjadi kuning pada pH 6.8 (keadaan asid). Media TSI ditampan pada pH 7.4 iaitu pH alkali maka warna agar kelihatan oren-kemerahan atau merah. Peptida dan asid amino yang berasal dari pepton di dalam media TSI didegradasikan melalui proses dekarboksilasi oksidatif kepada amina, sejenis terbitan alkali. Proses ini dipercepatkan oleh bakteria yang tumbuh di bahagian permukaan agar. Di bahagian puntung, oksigen di 176
dalam udara tidak dapat sampai maka proses dekarboksilasi oksidatif adalah pada tahap minimum. Jika bakteria yang diinokulasi tidak menfermentasi karbohidrat, asid tidak diihasilkan dan warna merah akan kekal di seluruh media. Jika bakteria hanya boleh menfermentasi glukosa, kuantiti asid yang dihasilkan adalah terhad kerana kuantiti glukosa yang digunakan adalah rendah (0.1%). Walau bagaimanapun, kuantiti ini mencukupi untuk bahagian permukaan dan puntung agar menjadi kuning. Tetapi di permukaan agar yang terdedah kepada oksigen udara, amina dihasilkan dan lama kelamaan (18 – 24 jam selepas pengeraman) kuantitinya mencapai aras yang mampu mengatasi kesan kuantiti rendah asid yang dihasilkan, pH asid di bahagian permukaan agar akan berubah semula menjadi alkali (ungu – merah) manakala bahagian puntung agar (bahagian dasar tabung) akan kekal asid (kuning) kerana di situ amina yang dihasilkan tidak mencukupi untuk mengatasi kesan asid.Jika laktosa atau sukrosa, atau keduaduanya difermentasi kuantiti asid yang dihasilkan daripada salah satu di antara kedua gula ini adalah besar kerana konsentrasi kedua-dua gula ini adalah tinggi iaitu masing-masing 1%. Jadi, walaupun amina dihasilkan kuantiti asid yang dihasilkan terlalu besar untuk perubahan pH kembali kepada keadaan alkali maka bahagian condong mahupun bahagian puntung agar akan tetap berkeadaan asid (kuning). Sukrosa dicampurkan untuk menyaringkan spesies Salmonella dan Shigella kerana kedua-dua bakteria ini tidak menfermentasi sukrosa atau laktosa. Penghasilan gas ditunjukkan dengan kehadiran gelembung gas atau bahagian puntung agar akan kelihatan pecah-pecah. Hydrogen sulfid yang dihasilkan akan bertindak balas dengan ferrous sulfat dan suatu presipitasi hitam (ferik sulfid) akan terbentuk di dalam media. Tatacara Ujian Tiga Gula Besi BAHAN 1. Kultur bakteria 2. Cerun agar TSI di dalam tabung uji 3. Dawai inokulasi lurus (dawai lurus) 4. Penunu Bunsen TATACARA 1. Sterilkan keseluruhan dawai lurus melalui pembakaran dan biarkan supaya sejuk. 2. Sentuhkan penghujung dawai kepada koloni bakteria. 177
3. Tusukkan inokulum menembusi cerun agar TSI di dalam tabung sehingga ke dasarnya. 4. Tarik semula dawai dan gariskan organisma di atas permukaan agar yang condong. 5. Eramkan semalaman dan teruskan selama 48 jam (jika perlu). NOTA 1. Tabung TSI harus ditutup secara longgar sahaja selepas diinokulsi supaya udara dapat masuk ke dalam tiub kultur untuk membolehkan berlakunya oksidasi dan perubahan balik condong agar daripada asid (kuning) ke alkali (ungu-kemerahan). 2. Oleh kerana sesetengah spesies Proteus dan beberapa spesies lainnya boleh memberikan reaksi pada TSI yang serupa dengan Salmonella ataupun Shigella, maka untuk membezakan spesies-spesies ini ujian urease dilakukan. (Salmonella dan Shigella adalah urease-negatif, manakala Proteus, urease-positif).
Penggunaan Sitrat Koser mencipta sejenis media broth asas yang mengandungi natrium ammonium fosfat sebagai sumber tunggal nitrogen, dan natrium sitrat sebagai sumber tunggal karbon. Bakteria golongan aerogen boleh menggunakan sitrat sebagai sumber karbon , manakala golongan koliform tidak. Dalam ujian yang menggunakan media Koser, hasilnya ditafsir berdasarkan berlakunya kekeruhan
pada
media
broth
akibat
pertumbuhan
bakteria.
Seterusnya,
Simmons
mengubahsuai media Koser tersebut dengan menambahkan agar dan indicator, bromthymol blue, yang kelihatan hijau pada pH 6.8 dan biru pada pH lebih 7.6. Pengubahsuaian ini membolehkan pertumbuhan bakteria dikesan dengan lebih mudah kerana dalam metabolisme karbon pada sitrat (pertumbuhan positif), suatu tindak balas alkali berlaku dan ini ditunjukkan dengan perubahan pada warna media daripada hijau kepada biru tua. Kadangkala bacaan hasil ujian tidak semata-mata berdasarkan kepada perubahan warna, tetapi sama ada terdapat atau tidaknya pertumbuhan bakteria pada garis inokulasi di atas media. Kehadiran pertumbuhan bererti kemampuan bakteria mengurai sitrat sebagai sumber karbon, dan hasil ujian dinyatakan sebagai positif untuk sitrat.Perubahan warna, dalam hal ini, mempermudahkan lagi pembacaan hasil ujian.
178
Ujian Penggunaan Sitrat BAHAN 1. Kultur bakteria 2. Dawai lurus 3. Cerun agar sitrat Simmons di dalam botol Bijou (Agar sitrat Simmons: Dari sumber komersial) TATACARA 1. Sterilkan keseluruhan dawai lurus dan biarkan sehingga sejuk. 2. Sentuhkan pada koloni bakteria dengan penghujung dawai. 3. Buatkan 1 garisan tipis bakteria pada permukaan agar. 4. Eramkan pada 37®C selama semalaman atau 48 jam, jika perlu. 5. Amatilah perubahan warna pada media. PENGAMATAN DAN PENTAFSIRAN Ujian positif: Pertumbuhan dengan/tanpa media menjadi biru. Ujian negative: Tiada pertumbuhan atau media tetap hijau. Pentafsiran ujian positif: Kemampuan menggunakan sitrat sebagai sumber tunggal karbon.
NOTA 1. Gunakan sedikit sahaja inokulum supaya semasa penginokulasian inokulum ini tidak kelihatan sama sekali pada garis inokulasi dan untuk mengelakkan reaksi positif palsu akibat bakteria yang mati membebaskan karbon dan nitrogen dalam kuantiti yang boleh menampung pertumbuhan. 2. Elakkan daripada mengambil sebarang bahan nutrient daripada media kultur di mana inokulum diambil. 3. Kultur yang menunjukkan pertumbuhan tanpa perubahan pH (perubahan warna) juga dianggap positif kerana pada sesetengah bakteria yang lambat tumbuh keadaan tindak balas alkali tidak dapat dicapai dalam tempoh pengeraman yang ditetapkan.
179
Pengeraman selama 48 jam mungkin diperlukan untuk bakteria yang lambat tumbuh supaya warna biru dapat muncul.
Ujian Oksidase Ujian oksidase menentukan kehadiran sitokrom C, sejenis enzim respiratori.Oleh yang demikian, ujian ini hanya positif untuk bakteria yang memiliki sitokrom C. sitokrom adalah protein yang mengandungi heme dan merupakan enzim oksidatif dalam kitaran respiratori yang terlibat dalam fosforilasi oksidatif.Dalam ujian oksidase tatacara Kovacs, reagen oksidase adalah tetrametil-p-fenilena-diamina dihidroklorida 1%. Enzim oksidase sitokrom tidak bertindak secara langsung dengan reagen oksidase,tetapi menyebabkan oksidase sitokrom C yang kemudian
menyebabkan
oksidase
tetrametil-p-fenilena-diamina
dihidroklorida
sehingga
membentuk sejenis bahan kimia berwarna biru yang disebut biru Wunster. Sitokrom C yang direduksi (ditambah electron) dalam tindakan ini diubah secara tidak langsung kepada bentuk yang teroksidasi oleh oksidase sitokrom yang menerima elektronnya.Enzim oksidase sitokrom kemudian menggantikan electron tersebut kepada oksigen untuk menghasilkan air dengan ion hydrogen. Ujian ini digunakan untuk membezakan streptkokus (oksidase-negatif) daripada Neisseria (oksidase-positifa).
Tatacara Ujian Oksidase BAHAN 1. Kultur bakteria 2. Slaid mikroskop 3. Kepingan kecil kertas turas Whatman no.1 4. Reagen oksidase (tetrametil-p-fenilena-diamina dihidroklorida 1%) 5. Kayu aplikator TATACARA 1. Letakkan sekeping kertas turas kecil di atas slaid mikroskop bersih. 2. Titiskan 2 hingga 3 titis reagen oksidase ke atas kertas turas. 180
3. Ambil koloni bakteria dengan kayu aplikator dan goreskan ke atas kertas turas pada bahagian yang menyerap reagen oksidase. 4. Amati kemunculan warna dalam beberapa saat.
PENGAMATAN DAN PENTAFSIRAN Ujian positif: Kemunculan warna Lavender (ungu pudar) yang cepat (dalam beberapa saat) menjadi biru/ungu. Ujian negative: Tiada perubahan warna atau warna muncul hanya setelah beberapa minit. Pentafsiran hasil positif: Perubahan segera ke warna biru/ungu menunjukkan bakteria memilikim sitokrom C.
NOTA 1. Reagen ini mesti disediakan segar kerana sifatnya yang tidak stabil. Auto-oksidasi oleh oksigen bebas dari udara boleh berlaku dan oleh yang demikian reagen ini dengan sendirinya akan berubah menjadi biru atau ungu jika dibiarkan di udara agak lama. 2.
eagen yang baru disediakan perlu dibiarkan selama 15 minit untuk menjadi “masak” sebelum digunakan.
3. Pastikan dan patuhi tempoh masa yang ditetapkan untuk mentafsir hasil ujian ini kerana pada ujian yang disimpan lama sebelum dibaca hasil positif palsu boleh berlaku kerana warna biru atau ungu boleh muncul akibat auto-oksidasi yang berlaku ke atas reagen. 4. Gunakan kayu aplikator atau dawai platinum untul mengambil koloni. Dawai nikrom juga boleh mempengaruhi hasil ujian dan memberikan hasil positif palsu. 5. Tatacara alternatif ujian oksidase ini adalah dengan membanjiri kultur pada piring petri dengan reagen dan kemudian segera menyingkirkan bahan yang berlebihan ini dengan pipet. Hasilnya ditunjukkan dengan perubahan warna koloni bakteria kepada warna ungu (oksidase-positif) atau tiada perubahan warna (oksidase-negatif).
Ujian Koagulase 181
Ujian untuk menentukan penghasilan enzim koagulase oleh stafilokokus adalah suatu ujian penting dalam mikrobiologi diagnostik.Ia membezakan stafilokokus patogenik kerana berkemampuan untuk menghasilkan enzim ini, daripada yang tidak menghasilkannya atau tidak patogenik. Terdapat dua jenis koagulase; yang satu terikat pada dinding sel bakteria (koagulase terikat) dan tidak bebas, dan yang satu jenis lagi dirembeskan oleh sel ke dalam media atau cairan (koagulase bebas).Ujian slaid di mana penggumpalan atau pengelompokan bakteria dihasilkan dipercayai disebabkan oleh koagulase terikat yang terdapat pada dinding sel. Enzim bentuk ini bertindak secara langsung ke atas fibrinogen haiwan-haiwan tertentu dan menghasilkan
fibrin
yang
memerangkap
bakteria
sehingga
berlakunya
penggumpulan/pengelompokan tersebut.Sebaliknya, koagulase yang dihasilkan secara bebas bertindak dengan protrombin untuk menghasilkan thrombin, yang seterusnya bertindak ke atas fibrinogen untuk menghasilkan fibrin (pembekuan).
Tatacara Ujian Koagulase Slaid BAHAN 1. Kultur bakteria 2. Larutan salin 0.85% 3. Slaid mikroskop 4. Gelung dawai 5. Plasma arnab
TATACARA 1. Letakkan setitis larutan salin steril di atas sebuah slaid mikroskop yang bersih dan kering. 2. Ambil beberapa koloni bakteria dengan gelung dawai steril. 3. Buatkan suspensi bakteria ini di dalam titisan salin. 182
4. Tambahkan setitis plasma arnab kepada suspensi dan campurkan dengan gelung dawai. 5. Goncangkan slaid dan amatilah penggumpalan (clumping) bakteria yang akan kelihatan sebagai kelompok-kelompok putih dalam masa 15 saat. PENGAMATAN DAN PENTAFSIRAN Ujian positif: Pembentukan gumpalan bakteria. Ujian negatif: Tiada penggumpalan dan suspensi bakteria kelihatan homogeny. Pentafsiran hasil positif: Bakteria memiliki enzim koagulase.
NOTA 1. Mana-mana bakteria yang boleh menggunakan sitrat sebagai sumber tenaga boleh membebaskan kalsium yang akan mengakibatkan pembekuan plasma jika plasma tersebut diambil daripada darah yang bercampur sitrat. Oleh yang demikian, adalah amat penting untuk mempastikan bahawa bakteria yang diuji adalah benar-benar kultur murni stafilokokus, dan ujian ini digunakan semata-mata untuk membezakan antara strain yang menghasilkan koagulase daripada yang tidak. 2. Gunakan plasma arnab atau manusia dan bukan spesies mamalia lain kerana kebanyakan plasma daripada spesies lain tidak bertindak dengan koagulase stafilokokus. Perlu juga diperhatikan bahawa kadangkala plasma manusia yang digunakan mengandungi bahan perencat yang akan memberikan hasil negative palsu. 3. Plasma perlulah diuji terlebih dahulu dengan strain kawalan positif dan negative sebelum digunakan. Seterusnya, supaya hasil ujian boleh dipercayai dan diterima tanpa ragu-ragu, ujian haruslah dilakukan juga keatas beberapa jenis bakteria kawalan yang memberikan hasil positif kuat, positif lemah dan kawalan negatif. 4. Pastikan koloni bakteria boleh diemulsifikasi di dalam salin supaya tidak menimbulkan masalah dalam pembacaan hasilnya nanti. 5. Ujian positif palsu boleh berlaku jika penggumpalan yang berlaku lewat diambil kira. 6. Hasil positif yang berlaku lewat atau negative diuji semula dengan ujian koagulase tabung kerana terdapat strain S.aureus yang menghasilkan hanya koagulase bebas yang tidak bertindak dalam ujian koagulase slaid.
183
Ujian Katalase Katalase adalah enzim dengan bahagian (moieti) yang mengandungi besi. Tindak balas kimia yang berlaku dalam ujian katalase adalah : 2H2O2 AE 2H2O + O2. Penghasilan gelembung gas (oksigen) adalah tanda bagi ujian yang positif.Ujian katalase digunakan khususnya untuk membezakan antara stafilokokus (katalase positif) dengan streptokokus (katalase negative) dan juga kadangkala digunakan dalam pengenalpastian pelbagai jenis bakteria. Tatacara Ujian Katalase BAHAN 1. Kultur bakteria 2. Slaid mikroskop 3. Kayu aplikator 4. Hydrogen peroksida 3% TATACARA 1. Letakkan setitis larutan hydrogen peroksida dia atas sebuah slaid kaca bersih dan kering. 2. Sentuhkan penghujung kayu aplikator kepada koloni bakteria. 3. Masukkan organisma ke dalam titisan reagen di atas slaid. 4. Amatilah kehadiran gelembung-gelembung gas yang dihasilkan dengan cepat, rancak dan berterusan. PENGAMATAN DAN PENTAFSIRAN Ujian positif : Penghasilan dan pembebasan gas dengan cepat dicirikan dengan gelembunggelembung gas yang dibebaskan dengan rancak. Ujian negative : Tiada sebarang tindak balas. Penghasilan segelintir gelembung kecil selepas 20 – 30 saat tidak dianggap positif. Pentafsiran hasil positif : Bakteria memiliki enzim katalase.
NOTA
184
1. Jangan gunakan dawai gelung kerana positif palsu boleh berlaku. 2. Jangan gunakan kultur yang berusia lebih daripada 24 jam untuk mengelak daripada memperolehi hasil negative palsu kerana enzim ini hanya dapat dikesan pada kultur hidup yang masih segar dan mungkin tiada lagi pada kultur tua. 3. Pada kultur anaerobik, dedahkan kultur kepada udara selama setengah jam sebelum ujian dilakukan untuk membolehkan oksidasi aerobic ke atas katalase yang tereduksi berlaku. 4. Gunakan H2O2 pada kepekatan 3% untuk mendapatkan hasil ujian yang terbaik atau optimum. Larutan H2O2 disimpan di dalam botol gelap di dalam peti beku. 5. Seboleh-bolehnya elakkan daripada mengambil koloni yang tumbuh pada permukaan media agar darah. Ini untuk mengelakkan daripada terambil bersama sel darah dan mendapatkan hasil yang positif palsu seperti di atas. Tetapi, sekiranya hal ini tidak dapat dielakkan, berhati-hatilah dalam pengambilan tersebut untuk mempastikan hasil yang tepat dan betul. 6. Ujian katalase plat : Ujian ini boleh dilakukan ke atas koloni di atas plat kultur dengan menuangkan reagen ke atas koloni berkenaan KECUALI jika media kultur tersebut adalah agar darah kerana ia boleh memberikan hasil positif palsu. Perlu ditekankan di sini bahawa darah juga mengandungi enzim katalase yang dapat bertindak balas dengan reagen. Ujikan juga sebahagian daripada plat agar yang belum diinokulsi dengan bakteria dengan menuangkan sedikit reagen di atasnya sebelum meneruskan dengan ujian katalase plat ini untuk mengelakkan hasil positif palsu. Ini adalah kerana sesetengah media mungkin mengandungi sedikit katalase yang boleh memberikan tindak balas yang lemah dan lambat serta boleh menyulitkan pembacaan hasil.
Ujian Motiliti dengan Menggunakan Agar Separuh Pejal Media pertumbuhan dengan kepekatan agar yang rendah (0.4% atau <) merupakan suatu media separuh pejal yang membolehkan bakteria bergerak dan menyebar ke pelbagai arah di dalamnya. Jika bakteria mempunyai kemampuan untuk bergerak atau bersifat motil ia akan 185
menunjukkan penyebaran yang bermula dari garis inokulasi. Bakteria yang tak motil akan tetap pada garis inokulasi dan sama sekali tidak akan tersebar. Garam tetrazolium digunakan dalam ujian motility ini kerana ia memudahkan pengesanan pertumbuhan serta penyebaran bakteria secara visual di dalam media. Garam tetrazolium adalah tanpa warna dan akan diubah kepada formazan, kompleks tak larut berwarna merah hasil pereduksian oleh bakteria yang tumbuh. Tatacara Ujian Motilit (Pergerakan) pada Agar Separuh Pejal BAHAN 1. Kultur bakteria 2. Agar nutrient (0.4% atau <) yang mengandungi indicator (garam tetrazolium) di dalam tabung uji. 3. Dawai lurus 4. Inkubator TATACARA 1. Sterilkan keseluruhan dawai lurus. 2. Sentuh koloni bakteria dengan penghujung dawai. 3. Tusukkan hujung dawai ke dalam agar separuh pejal sehingga ke dasar tabung. 4. Eramkan semalaman. 5. Amati pola pertumbuhan bakteria. PENGAMATAN DAN PENTAFSIRAN Ujian positif : Pertumbuhan bakteria (merah) tersebar daripada garis tusukan dawai lurus. Ujian negative : Pertumbuhan bakteria terhad kepada garis tusukan. Pentafsiran ujian : Ujian positif – bakteria motif, ujian negatif – bakteria tak motil.
NOTA 1. Beberapa bakteria seperti Pseudomonas adalah aerobik dan akan hanya menunjukkan motility pada bahagian atas media ini. 2. Oleh kerana keseluruhan dawai lurus akan ditusuk ke dalam agar maka pastikan keseluruhan dawai ini dibakar untuk mensterilkannya. 186
3. Pertumbuhan beberapa jenis bakteria tertentu mungkin dihalang oleh garam tetrazolium. 4. Dawai yang ditusuk ke dalam media dikeluarkan seboleh-bolehnya bertepatan dengan garis kemasukannya. Elakkan daripada menggerakkan dawai ke kiri atau ke kanan semasa dikeluarkan (dan juga semasa dawai ditusuk) kerana ini akan menyebabkan pertumbuhan yang kelihatan tersebar dan memberi tafsiran positif palsu mengenai mobiliti.
187
MAKMAL KLINIKAL & TIBI
MAKMAL KLINIKAL DAN TIBI PENGENALAN Makmal klinikal dan tibi di dalam Hospital Nukleus Labuan ini berkesinambungan dengan makmal mikrobiologi kerana sampel yang positif untuk dikulturkan akan dihantarkan ke 188
makmal tersebut. Antara ujian yang dilakukan di makmal ini ialah ujian mikroskopi sputum, ujian urin feme, ujian stool ob,ujian sputum afb dan beberapa ujian lagi. Sampel yang dihantar kebanyakannya adalah dari Klinik Pakar 2(KP2) kerana kebanyakan sampel yang didapati adalah berkaitan dengan wanita. Namun terdapat juga sampel yang dihantar dari wad seperti sputum.
CARTA ORGANISASI MAKMAL MIKROBIOLOGI
FAIZAL YUSOF PEG.SAINS(KAJI KUMAN)C41 189
TAN AH GEK
SALSIAWATI HADIR
JTMP U29
JTMP U29
Tajuk ujian: pemprosesan spesimen dalam makmal klinikal dan tibi 1. Sampel: sputum Bahan dan radas 190
1. Botol sputum(kaca) 2. Slaid kaca 3. Kayu aplikator Kaedah ujian 1. Terima sampel dan borang sputum dalam bekas yang steril. Lakukan penolakan jika borang tidak betul atau tidak lengkap. 2. Daftar pesakit dan buat permohonan ujian dalam Labnet. 3. Sampel sputum akan dilakukan di dalam kebuk wasap. 4. Ambil sputum menggunakan kayu aplikator dan calitkan pada slaid kaca yang bersih. 5. Sebarkan smear sputum dengan rata dengan keluasan kira-kira 3x2 cm. 6. Buang kayu aplikator ke dalam plastik kuning biohazard. 7. Keringkan slaid di udara atau dalam kebuk wasap tersebut. Jangan keringkan menggunakan api. 8. Lakukan pewarnaan Gram setelah smear kering. 9. Perhatikan dan baca keputusan dibawah mikroskop. Keputusan ujian mikroskopi sputum
Cell/Ipf Polymorphonuclear neutrophils Squamous epithelial cells Gram positive cocci Gram positive rods Gram negative cocci Gram positive rods Yeast cells
10 40 50 50 0 0 0
Interpretasi ujian Pengkulturan bakteria tidak akan diterima apabila sel skuamus >10. Terkontaminasi oleh normal flora.
2. Sampel: Swab Genital(HVS) Bahan dan radas 1. Swab Emies(bekas steril) 2. Slaid kaca 191
Kaedah ujian 1. Terima sampel dan borang HVS dalam bekas yang steril. Lakukan penolakan jika borang tidak betul atau tidak lengkap. 2. Daftar pesakit dan buat permohonan ujian dalam Labnet. 3. Sampel ini akan dilakukan di dalam kebuk wasap. 4. Buka bekas pada bahagian atas dan calitkan swab pada slaid kaca yang bersih. 5. Sebarkan swab smear dengan rata. 6. Keringkan slaid di udara atau dalam kebuk wasap tersebut. Jangan keringkan menggunakan api. 7. Lakukan pewarnaan Gram setelah smear kering. 8. Perhatikan dan baca keputusan dibawah mikroskop. Keputusan ujian mikroskopi HVS
Cell/Ipf Polymorphonuclear neutrophils Yeast Cells Squamous epithelial cells Lactobacilli Gram variable rods/coccobacilli Curved gram variable rods Gram negative diplococci
10 0 40 0 20 0 0
Interpretasi ujian
Consistent with vaginitis,culture
N.A
Normal Intermediate Consistent with bacterial vaginosis
0-3 4-6 7-10
3. Sampel: kahak(AFB) Bahan dan radas 1. Slaid kaca 2. Bekas yang steril 192
3. Kayu aplikotar(khas) Kaedah ujian 1. Label id pesakit pada hujung slaid mikroskopi yang baru dan bersih tanpa sebarang calar dengan menggunakan pensil. 2. Guna kayu aplikator untuk memindahkan specimen daripada botol specimen kepada slaid. Patahkan hujung kayu aplikator kira-kira 1 cm dan pastikan bahagian itu tidak tercabut. 3. Pindahkan specimen ke atas slaid dengan memilih specimen purulent dan kental (jika ada). Gunakan kayu aplikator yang lain untuk mengurangkan specimen yang terlalu kental dan banyak. 4. Sebar smear pada slaid dengan rata menggunakan kaedah coiling dengan keluasan kira-kira 3x2cm. 5. Buang kayu aplikator dalam plastik kuning dan guna kayu aplikator yang baru untuk setiap sampel yang berlainan. 6. Keringkan slaid di udara. Jangan keringkan slaid menggunakan api. 7. Lakukan pewarnaan Ziehl‟s Neelsen. Interpretasi ujian Gram negatif rod,latar belakang warna biru.
4. Sampel: Urin FEME Bahan dan radas 1. Bekas urin yang steril 2. Miditron Junior II(mesin) 193
3. Dipstick combo 10 Prinsip(Miditron Junior II) Mesin miditron junior II ini merupakan mesin semi-automatic yang menganalisis urin dengan hanya menggunakan Dipstick Combo 10, ujian menganalisis urin ini sangat mudah dilakukan dengan menggunakan sistem operator yang dipaparkan pada skrin. Kaedah ujian
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
Celupkan strip combur test 10 ke dalam air kecing selama 1 saat. Lapkan lebihan air kencing tersebut. Letakkan strip tersebut di atas tempat sampel Meditron Junior. Tekan butang start Tunggu hingga mesin Meditron Junior selesai memproses catatkan keputusan yang dicetak oleh mesin Meditron Junior ke dalam borang ujian Sekiranya Mesin Meditron Junior tidak berfungsi, bandingkan reaksi warna dalam kawasan ujian di atas strip dengan skala warna di atas label botol Combur Test 10
Interpretasi ujian
Parameter Specific gravity pH Leukocytes Nitrite Protein Glucose Ketone Urobilinogen Bilirubin erythrocytes
5. Sampel: Cecair seminal Bahan dan radas 1. Slaid kaca 194
2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.
Sisip kaca Pipet dan tips Bekas seminal yang steril Silinder penyukat Mikroskop Neuber Chamber Kayu aplikator Air suling
Kaedah ujian 1. Catat masa pengambilan sampel, penerimaan sampel dan masa ujian dijalankan. 2. Sukat isipadu sampel dengan menggunakan kaedah secara tidak langsung iaitu dengan menggunakan bekas yang sama. Ukur isipadu air suling yang telah disukat dengan menggunakan silinder penyukat 10ml. Catat bacaan pada laporan ujian (Normal >2ml) 3. Perhatikan kepekatan sample (viscosity), laporkan samaada slightly diluent, normal ataupun extreme. 4. Pipetkan sedikit sampel ke atas slaid yang bersih dan tutup dengan sisip kaca. 5. Kira peratusan pergerakan sperma di bawah mikroskop cahaya (40X). (Normal >50%) 6. Lakukan percairan spesimen dengan mencampurkan 10 µl sampel dan 190 µl air suling ke dalam tiub. 7. Campurkan dengan sekata dan pipetkan sampel yang telah dicairkan ke atas Neubeur Chamber dan lekapkan sisip kaca. 8. Lihat di bawah mikroskop cahaya (40x) 9. Kira bilangan sperma di dalam kotak E (Erythrocyte) yang berasingan dengan menggunakan formula ini: Bil Sel / ml =( bil sel dalam 5 kotak E ) x 10^6 / ml
(Bil normal per ml ialah >20 million / ml) 10. Kira peratusan morfologi normal & abnormal sperma (Normal >60% morphology normal) 11. Catatkan semua bentuk pemerhatian 12. Rekod semua keputusan ujian di dalam Buku Seminal Analysis dan Labnet
6. Sampel: Stool O.B(Occult Blood) Bahan dan radas
195
1. Bekas feses 2. Botol penutup hijau 3. strip oc-light Prinsip Darah di dalam feses adalah salah satu tanda kanser kolon atau rektum. Jika darah hadir dalam sampel feses, molekul hemoglobin boleh berfungsi secara pseudoenzimatik. Kertas ujian akan bertukar biru dalam masa 5 minit jika terdapat kehadiran lebih daripada 2 hemoglobin mg per gram najis.
kaedah ujian 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.
Buka penutup hijau botol sampel Calitkan specimen najis dan masukkan ke dalam botol sampel. Tutup penutup botol, ketatkan dan goncang sepenuhnya Letakkan botol sampel dengan penutup hijau di bawah Alihkan kon nozzle putih Masukkan strip oc-light ke dalam botol sampel sehingga kedalaman paling bawah Baca keputusan ujian dalam masa 5 minit. Laporkan keputusan sebagai negative jika hanya satu garisan yang berwarna merah jambu-ungu muncul pada kawasan bertanda „C‟. 9. Jika ada 2 garisan yang muncul, laporkan sebagai positif. Interpretasi ujian Terdapat 2 garis – Positif Terdapat 1 garis - Negatif
7. Pewarnaan Gram Reagen 196
1. Kristal violet 2. Safranin 3. Aseton alkohol 4. Lugol‟s Iodine Prinsip ujian Pewarnaan ini adalah untuk membezakan bakteria gram positif dan bakteria gram negatif. Pembezaan ini berdasarkan tindak balas bakteria terhadap alkohol iaitu agen penyahwarnaan. Bakteria gram positif tidak bertindakbalas dengan alkohol dan akan berwarna ungu gelap manakala bakteria gram negatif akan bertindak balas dengan alkohol. Warna ungu gelap akan pudar dan bakteria akan berwarna merah jambu disebabkan pewarna balas safranin.
Kaedah ujian 1. Lakukan palitan pada slaid yang bersih dan lakukan „fixation‟ dengan menggunakan haba. 2. Basahkan slaid dengan menggunakan larutan crystal violet dan biarkan selama 1 minit. 3. Basuh slaid menggunakan air paip yang bersih. 4. Basahkan slaid dengan menggunakan larutan Lugol‟s iodine. Biarkan 1 minit. 5. Basuh slaid menggunakan air paip yang bersih. 6. Basahkan slaid dengan menggunakan acetone dan biarkan selama 1/2 minit. 7. Basuh slaid menggunakan air paip yang bersih. 8. Basahkan slaid dengan menggunakan larutan safranin. Biarkan selama 1 minit. 9. Basuh slaid menggunakan air paip yang bersih. 10. Keringkan slaid tersebut sebelum diperiksa di bawah microskop. 11. Periksa slaid di bawah mikroskop pada kanta berkuasa 100x 12. Perhatikan warna dan morfologi bacteria. Catatkan keputusan. Interpretasi ujian Gram Positif = Warna Biru Gram Negatif = warna Merah
Gram Positif Staphylococci Streptococci Mycobacterium
Gram Negatif Enterobacteriaceae Salmonella Shigella Haemophilus
8. Pewarnaan Ziehl’s Neelsen(AFB)
197
Reagen 1. 2. 3. 4.
Carbolfuschin Asid alkohol Metalina biru Api
Prinsip Perwarnaan Zhiel Neelson adalah untuk mewarnakan bakteria tahan asid seperti Mycobacterium Tuberkulosis. Karbon fuschin yang digunakan adalah untuk mewarnakan bakteria berwarna merah. Tujuan pemanasan karbon fushin adalah untuk memusnahkan struktur keratin sel bakteria tersebut supaya warna dapat diserap dan sekiranya bakteria seperti Mycobacterium Tuberculosis hadir, ia akan berwarna merah. Kaedah ujian 1. Fixkan smear menggunakan api secara berhati-hati dan perlahan-lahan sebanyak 3 hingga 4 kali kira-kira 1 hingga 2 saat pada belakang smear yang telah disediakan. 2. Letak slaid yang telah difix pada jambatan pencelupan di atas singki dengan kedudukan smear menghala ke atas. Pastikan jarak antara slaid adalah lebih kurang 1 hingga 2 cm. 3. Basahkan keseluruhan slaid dengan menggunakan larutan Carbolfuschin. 4. Panaskan slaid yang telah dibasahkan tadi dengan menggunakan api yang perlahan hingga mengeluarkan wap. Jangan biarkan slaid tersebut dipanaskan sehingga kering atau menggelegak. Biarkan selama 5 minit. 5. Basuh slaid dengan menggunakan aliran air paip yang perlahan. 6. Basahkan slaid dengan menggunakan larutan 3% acid alcohol dan biarkan selama 2 hingga 3 minit. 7. Basuh slaid dengan menggunakan aliran air paip yang perlahan. 8. Basahkan slaid dengan menggunakan larutan methylene blue dan biarkan selama 1 minit. 9. Basuh slaid dengan menggunakan aliran air paip yang perlahan. 10. Keringkan slaid tersebut sebelum diperiksa di bawah mikroskop. Interpretasi ujian AFB = Warna merah dan latar belakang biru
9. ujian UPT(WHPM) 198
Bahan dan radas 1. Bekas urin yang steril 2. Kit ujian Prinsip Pada prinsipnya reaksi imunologi terjadi pada kertas kromatografi melalui aksi kapilaritas. Pada sistem ini menggunakan dua jenis antibody-antigen spesifik. Salah satu antibody ditempatkan pada kertas kromatografi (fase diam) dan lainnya dilabel dengan koloid emas (colloidal gold) dan diinfiltrasi ke tempat sampel (sample pad). Ketika cairan sampel diteteskan pada tempat sampel, maka akan terbentuk kompleks imun dengan antibodi yang dilabeli dengan koloid emas. Kompleks tersebut akan bergerak bersama dengan cairan sampel dan akan berinteraksi dengan antibodi yang ada pada kertas kromatografi dan menghasilkan garis berwarna merah ungu.
Kaedah ujian 1. Terima sampel daripada kaunter 2. Pastikan nama pada bekas air kencing dan borang pesanan adalah sama. Jika tidak sama, hantar kembali ke kaunter 3. Daftarkan maklumat pesakit dan permohonan ujian di LabNet. 4. Keluarkan kit ujian dan biarkan pada suhu bilik. 5. Pastikan tarikh luput dan strip ujian berada dalam keadaan yang baik dalam kit ujian. 6. Rendamkan strip ujian ke dalam bekas berisi sampel. 7. Keluarkan strip ujian daripada bekas sampel apabila sampel air kencing kelihatan meresap naik melalui strip ujian. 8. Tafsirkan keputusan ujian dalam 5 minit 9. Semak keputusan (rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika keputusan meragukan, ulangi ujian 10. Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi dan borang Per. Pat 301. 11. Sahkan keputusan Intertpretasi ujian Satu garisan – Negatif 2 garisan – Positif
10. SMEAR DARAH PARASIT MALARIA
199
Apusan Darah Parasit Malaria Peralatan yang diperlukan: i)
Mikroskop
ii)
Slaid
iii)
Pewarna Giemsa
Prinsip: 10% pewarna Giemsa memberikan warna biru kepada sitoplasma manakala kromatin diwarnakan dengan warna merah. Filem darah tebal adalah untuk pembilangan parasit manakala filem darah nipis adalah untuk pengenalpastian spesis parasit malaria. Prosedur: 1.
Spesimen diterima, diperiksa dan dilabel.
2.
Filem darah dikeringkan sebelum fiksasi dilakukan.
3.
Filem darah nipis difiksasi dalam methanol selama 1 minit.
4.
Slaid diwarnakan dengan 10% Giemsa selama 10minit.
5.
Selepas itu, slaid dicuci dan dikeringkan.
6.
Slaid diperhatikan dibawah mikroskop pada kuasa 100x dan diletakkan minyak imersi pada slaid.
7.
Pemerhatian dilaporkan.
Keputusan: 1.
1-10 parasit dalam 10 field filem darah tebal
-+
( Sederhana).
2.
11-100 parasit dalam 10 field filem darah tebal
- ++
( Sederhana teruk).
3.
1-10 parasit dalam 1 field filem darah tebal
- +++ ( Teruk).
4.
1-100 parasit dalam 1 field filem darah tebal - ++++ (Sangat teruk).
11. OVA DAN SISTA FESES (STOOL OVA AND CYST)
200
Ujian Ova Dan Sista Feses Prinsip: Konsentrasi formalin-eter merupakan teknik sediment yang memerhatikan telur helmint, larva dan sista protozoa. Teknik ini sangat cepat dan mempunyai kebaikan dimana lipid dan bahan kolisidal dapat disingkirkan dan memberikan sediment yang jernih. Peralatan yang diperlukan: i)
Mikroskop
ii)
Pengempar
iii)
Slaid
iv)
Sisip kaca
v)
10% formalin
vi)
Eter
vii)
Kayu aplikator
viii)
Tabung uji.
Prosedur: 1.
Spesimen diterima, diperiksa dan dilabel.
2.
Sedikit sampel feses diambil menggunakan kayu aplikator dan dimasukkan ke dalam tabung uji.
3.
Air dimasukkan sehingga 10-12 ml dan digaul.
4.
Suspensi tersebut ditapis dengan kain kasa untuk menyingkirkan benda-benda asing.
5.
Suspensi tersebut kemudiaannya dicuci dua kali dengan mengemparnya pada kelajuan pengempar 2000rpm selama 2 minit.
6.
Selepas itu, supernatan dibuang dan sediment diambil. Sebanyak 10 ml 10% formalin ditambah pada sediment tersebut dan digaulkan sehingga sebati.
7.
5ml eter ditambah dan tabung uji ditutup dan digoncang secara berterusan selama 30 saat.
8.
Tabung uji diempar selama 2 minit pada kelajuan 2000rpm.
9.
Supernatant dibuang dan setitik sediment diambil dan dititiskan pada slaid kaca untuk pemerhatian bawah mikroskop.
10.
Pemerhatian dilaporkan. 201
Keputusan: 1.
Positif – telur, larva dan sista kelihatan.
2.
Negatif – tiada telur, larva dan sista kelihatan
202
LAMPIRAN
Architect Plus C4000 Abbott
one step pregnancy test
Miditron Junior II
roche hitachi cobas c311
cobas h 232 poc system BD Bactec 9050
203
