Skripsi full text Rahmah Chairunnisa 0911012035.pdf

ISOLASI SENYAWA UTAMA DARI FRAKSI ETIL ASETAT ASETAT AKAR ASAM KANDIS (Garcinia cowa Roxb.)

SKRIPSI SARJANA FARMASI

Oleh

 RAHMAH  RAHMAH CHAIRUNN CHAIRUNNISA ISA

0911012035

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS ANDALAS PADANG 2016

i

i

i

ii

KATA PENGANTAR

Bismillaahirrahmaanirrahiim,

Alhamdulillah, puji syukur penulis ucapkan kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan ilmu, hidayah, serta rahmat dan karunia-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi ini yang berjudul “ISOLASI SENYAWA UTAMA DARI FRAKSI ETIL ASETAT AKAR ASAM KANDIS (Garcinia

cowa  

Roxb.)“. Roxb.)“. Skripsi ini diajukan untuk melengkapi tugas akhir dan

merupakan salah satu syarat untuk menyelesaikan program pendidikan Strata Satu  pada Fakultas Farmasi, Universitas Universitas Andalas, Padang. Rasa hormat dan ucapan terima kasih yang mendalam penulis sampaikan kepada kedua orangtua dan saudara-saudara tercinta atas seluruh perhatian, kasih sayang, ketulusan, pengorbanan dan pengertiannya kepada penulis selama ini. Ucapan terima kasih yang tulus juga penulis sampaikan kepada: 1. Ibu Dr. Elidahanum Husni, M.Si, Apt selaku pembimbing I dan Ibu Dr. Fatma Sri Wahyuni, S.Si, Apt selaku pembimbing II yang telah memberikan bantuan, meluangkan waktu dan pikiran untuk memberikan petunjuk, nasehat, pengarahan, dan bimbingan selama penelitian dan penyusunan skripsi ini. 2. Orang tua tercinta, Adrias Abubakar dan Daswinta serta abang Sapta dan adikadikku Nuri, Nurul, dan Adek tersayang yang selalu mendukung dan telah memberikan dukungan moral dalam masa perkuliahan hingga penyelesaian  penulisan skripsi ini. ini.

i

3. Ibu Prof. Dian Handayani, rer.nat, Apt. selaku Penasehat Akademik yang telah  banyak membantu dalam kelancaran studi penulis, 4. Bapak/Ibu dosen staf pengajar Fakultas Farmasi yang telah mendidik dan memberikan ilmu yang berharga dan bermanfaat kepada penulis selama mengikuti  perkuliahan di Universitas Universitas Andalas. 5. Bapak/Ibu karyawan Fakultas Farmasi yang telah membantu kelancaran studi  penulis. 6. Sahabat-sahabatku, teman-teman seperjuangan angkatan 2009 (CONFEITO) khususnya Mira Indarwita, Hefi Kurnia Sari, Akni Fitria, Wilyan Bayora, Rahmawati SS, Winda Rizal dan M. Rifqi Efendi yang tak pernah bosan memberi semangat, bantuan dan doa untuk penulis dalam menyelesaikan skripsi ini, serta rekan-rekan mahasiswa Farmasi yang telah menemani hari-hari perkuliahan, membantu dan mendukung penulis dalam menyelesaikan skripsi ini. 7. Semua orang terkasih luar biasa yang tidak bisa disebutkan satu per satu. Semoga Allah SWT memberikan balasan yang set impal atas segala  pengorbanan serta budi baik yang telah diberikan dan memberikan rahmat-Nya dalam setiap langkah kehidupan kita. Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan. O leh karena itu, kritikan kritikan dan saran yang membangun sangat diharapkan. Akhirnya penulis  berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bermanfaat bagi perkembangan dan kemajuan ilmu  pengetahuan serta kepentingan masyarakat.

ii

Terima kasih atas semua bantuan yang telah diberikan semoga menjadi amal shaleh bagi kita. Semoga skripsi ini bermanfaat untuk perkembangan ilmu  pengetahuan pada masa mendatang. Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna dan tidak terlepas dari kekurangan baik dari isi maupun penulisannya. Maka dengan segala kerendahan hati, penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun untuk kesempurnaan skripsi ini. Padang,

Juli 2016

Wassalam

Penulis

iii

ABSTRAK

Telah dilakukan isolasi senyawa utama dari fraksi etil asetat akar asam kandis (Garcinia cowa Roxb). Dari pemeriksaan pendahuluan menunjukkan adanya kandungan steroid, fenolik dan flavonoid. Isolasi dilakukan dengan metoda kromatografi kolom dan didapat senyawa berupa senyawa berupa kristal jarum berwarna putih dengan  jarak leleh 128-130°C. Analisis yang dilakukan terhadap senyawa hasil isolasi dilakukan dengan menggunakan spektrofotometer UV dan spektrovotometer  Infra red . Hasilnya pada spektrum UV didapat serapan pada λ max max nm (Abs) MeOH: 285,20 (0,227). Sedangkan pada spektrum IR menunjukkan adanya serapan pada bilangan -1 -1 -1 -1 gelombang 3307,65 cm   - 3430,82 cm , pada 2940,33 cm , pada 1649 cm , pada 1368,08 cm-1  - 1452,05 cm-1, dan pada bilangan bilangan gelombang 965,69 cm-1.

iv

ABSTRACT

Isolated of the major compounds from ethyl acetat fraction of asam kandis’s roots (Garcinia (Garcinia cowa Roxb.) has been done. Phytochemical screening of Garcinia cowa’s cowa’s roots gives positive result on the compound groups of steroid, phenolic, flavonoid. Methods used in this isolation is column chromatography and and got a compound as white needle crystal with melting point 128-130°C. Analysis of the isolated compounds is done by using spectrophotometer spectrophotometer UV and spectrophotometer spectrophotometer Infra Red. The result obtained in the UV spectrum absorbance at λ max max  nm (Abs) MeOH: 285,20 (0,227). While in the IR spectrum showed absorption at wave 3307,65 -1 -1 -1 -1 -1 -1 cm   - 3430,82 cm ; 2940,33 cm ; 1649 cm ; 1368,08 cm - 1452,05 cm ; and 965,69 cm-1.

v

DAFTAR ISI

HALAMAN KATA PENGANTAR PENGANTAR .................................................................................

i

ABSTRAK ABSTRAK ..................................................................................................

iv

ABSTRACT ABSTRACT ................................................................................................

v

DAFTAR DAFTAR ISI ...............................................................................................

vi

DAFTAR DAFTAR LAMPIRAN LAMPIRAN .................................................................................

ix

DAFTAR DAFTAR GAMBAR GAMBAR ...................................................................................

x

DAFTAR DAFTAR TABEL ........................................................................................

xi

I.

PENDAHULUAN PENDAHULUAN .................................................................................

1

II. TINJAUAN TINJAUAN PUSTAKA PUSTAKA .......................................................................

4

2.1 Tinjauan Botani Garcinia cowa Roxb..............................................

4

2.1.1

Klasifikasi Garcinia cowa Roxb ..........................................

4

2.1.2

Morfologi Tumbuhan Famili Guttiferae ............. ...... ............. ............ ............ ......

4

2.1.3

Morfologi Tumbuhan Genus Garcinia ................................

5

2.1.4

Morfologi Garcinia cowa Roxb. Roxb. .........................................

6

2.2 Kegunaan Tumbuhan Garcinia cowa Roxb. .................................

7

2.3 Kandungan Kimia dan Aktivitas Biologi dari bagian- bagian tumbuhan Garcinia cowa Roxb. .....................................................

7

2.4 Ekologi .........................................................................................

20

2.5 Steroida Steroida .........................................................................................

20

2.6 Ektraksi Ektraksi dan Fraksinasi Fraksinasi ................................................................. .................................................................

23

vi

III.

2.6.1

Ekstraksi Ekstraksi .............................................................................

23

2.6.2

Fraksinasi Fraksinasi ...........................................................................

25

2.7 Isolasi Isolasi ...........................................................................................

25

2.7.1

Kromatograf Kromatografii ......................................................................

26

2.7.2

Rekristal Rekristalisas isasii .......................................................................

29

2.7.3

Analisis Analisis Kemurnian Kemurnian ............................................................

29

2.8 Identifi Identifikasi kasi Senyawa .....................................................................

30

2.8.1

Spektroskopi Spektroskopi infra infra merah merah ....................................................

31

2.8.2

Spektroskopi UV-Vis .........................................................

32

PELAKSANAA PELAKSANAAN N PENELITIAN PENELITIAN .......................................................

35

3.1 Waktu dan Tempat Penelitian ........................................................

35

3.2 Alat dan Bahan Penelitian Penelitian .............................................................

35

3.2.1

Alat Alat .....................................................................................

35

3.2.2

Bahan .................................................................................

35

3.3 Prosedur Prosedur Peneliti Penelitian an .......................................................................

36

3.3.1

Perlakuan Perlakuan Awal Sampel ......................................................

36

3.3.2

Pemeriksaan Pendahuluan Kandungan Kimia Kimia Akar Asam Kandis Kandis ....................................................

36

3.3.3

Ekstraksi Akar Asam Kandis ............. ....... ............ ............ ............ ........... ........... ........... .....

38

3.3.4

Fraksinasi Ekstrak Etanol Akar Asam Kandis ............ ...... ............ ......... ...

38

3.3.5

Isolasi Senyawa Utama dari Fraksi Etil Asetat Akar Asam Kandis Kandis ................................................................................

39

Karakteri Karakterisasi sasi Senyawa ........................................................

42

HASIL HASIL DAN PEMBAHASAN PEMBAHASAN ..........................................................

44

4.1 Hasil ............................................................................................

44

4.2 Pembahasan Pembahasan .................................................................................

45

3.3.6 IV.

vii

V.

KESIMPULAN KESIMPULAN DAN SARAN ..........................................................

49

5.1 Kesimpulan Kesimpulan ..................................................................................

49

5.2 Saran ............................................................................................

49

DAFTAR DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................

50

LAMPIRAN LAMPIRAN ................................................................................................

53

viii

DAFTAR LAMPIRAN

HALAMAN Lampiran 1. Identifikasi Asam Kandis (Garcinia (Garcinia cowa Roxb.) ....................

53

Lampiran Lampiran 2. Tumbuhan Tumbuhan Asam Kandis Kandis ..........................................................

54

Lampiran 3. Pemeriksaan Pendahuluan Kandungan Kimia dari Akar Asam Kandis (Garcinia (Garcinia cowa Roxb.) ................................................

56

Lampiran 4. Skema Ekstraksi dan Fraksinasi Akar Asam Kandis (Garcinia cowa Roxb.) ............................................................

57

Lampiran 5. Isolasi Senyawa dan Pemurnian Pe murnian Senyawa dari Akar Asam Kandis (Garcinia cowa Roxb.) ............................................................. 58 Lampiran 6. Karakterisasi dan Pemeriksaan Sifat Fisika Senyawa Hasil Isolasi Isolasi ......................................................................................

59

Lampiran 7. Hasil Kromatografi Lapis Tipis Senyawa Hasil Isolasi ............ ...... ......

60

Lampiran Lampiran 8. Senyawa Senyawa FH-d2-b FH-d2-b ....................................................................

61

Lampiran 9. Spektrum UV senyawa FH-d2-b ............. ....... ............ ............ ............ ........... ........... ........... .....

62

Lampiran 10. Spektrum IR dan Data Spektrum IR Senyawa FH-d2-b ........... ...... .....

63

Lampiran 11. Pola KLT Senyawa FH-d2- b,  b, Senyawa Pembanding β-sitosterol β-sitosterol dan Stigmasterol Stigmasterol ....................................................................... 64

ix

DAFTAR GAMBAR

HALAMAN Gambar 1. Struktur Dasar Steroida dan Penomorannya ........ .. ............. ............. ............ ........... .....

21

Gambar 2. Struktur Beberapa Senyawa Fitosterol .............. ........ ............ ............ ............ ............ ........ ..

22

Gambar 3. Surat Identifikasi Asam Kandis (Garcinia (Garcinia cowa Roxb.) dari Herbarium Biologi Universitas Andalas .......................................... ............... 53 Gambar 4. Tumbuhan Asam Kandis (Garcinia (Garcinia cowa Roxb.) Roxb.) ........................

54

Gambar 5. Akar Tumbuhan Asam Kandis (Garcinia (Garcinia cowa Roxb.) ................

55

Gambar 6. Foto Pola KLT fraksi Etil Asetat (eluen n-heksan : EtoAc (4:1)) dengan UV254nm..................................................................................... 60 Gambar 7. Foto KLT senyawa FH-d2-b dengan UV365 nm fase gerak n-heksan) (1:4) .............................................................................

(etil :

Gambar Gambar 8. Foto Senyawa Senyawa FH-d2-b ...............................................................

61

Gambar 9. Spektrum UV senyawa FH-d2-b dalam pelarut metanol ............ ...... ......... ...

62

Gambar Gambar 10. Spektrum Spektrum IR Senyawa Senyawa FH-d2-b .................................................

63

60

Gambar 11. Pola KLT Senyawa FH-d2- b  b dan Senyawa Pembanding β-sitosterol β-sitosterol dan Stigmasterol Stigmasterol ............................................................................... 64

x

DAFTAR TABEL

HALAMAN Tabel 1. Kandungan, bagian tanaman t anaman dan aktivitas biologi dari Garcinia cowa Roxb. Roxb. ............................................................................................. 8 Tabel 2. Perbandingan komposisi ko mposisi eluen pada proses isolasi dengan menggunakan kolom kromatografi pertama ............ ...... ............. ............. ............ ........... .....

40

Tabel 3. Perbandingan komposisi ko mposisi eluen pada proses isolasi dengan menggunakan kolom kromatografi kedua ............ ...... ............. ............. ............ ........... ........ ...

41

Tabel 4. Hasil pemeriksaan pendahuluan kandungan ka ndungan kimia dari akar asam kandis (Garcinia (Garcinia cowa Roxb.) ................................

56

Tabel 5. Karkterisasi dan Sifat Fisika Senyawa FH-d2-b ............. ...... ............. ............ ............ ......

59

Tabel 6. Data Spektrum UV senyawa FH-d2-b ............. ....... ............ ............ ............ ........... ........... ......... ...

62

Tabel 7. Data Data Spektrum Spektrum IR senyawa senyawa FH-d2-b ...............................................

63

xi

I.

PENDAHULUAN

Indonesia merupakan negara kepulauan yang memiliki keanekaragaman tumbuhan dan sumber daya hayati potensial dari hutan hujan tropis. Keanekaragaman tumbuhan dan sumber daya hayati potensial dimungkinkan terjadi karena geografis kepulauan yang terletak diantara dua benua dan dua samudra, serta memiliki iklim dengan dua keadaan berbeda, yaitu curah hujan dan panas yang tinggi sepanjang tahun. Kondisi ini dapat mendorong tumbuh-tumbuhan melakukan rekayasa  pembentukan senyawa-senyawa metabolit sekunder (Pardede et al., al., 2012). Senyawa-senyawa metabolit sekunder ini merupakan produk khas yang hanya dimiliki oleh tumbuhan tertentu untuk mempertahankan eksistensi dirinya terhadap gangguan ekosistem yang dapat mengancam kelangsungan hidupnya. Senyawasenyawa tersebut mempunyai fungsi sebagai bahan pemikat (attractant  (attractant ), ), bahan  penolak (reppelant ) dan bahan pelindung ( protectant   protectant ). ). Dari berbagai senyawa yang dihasilkan dari tumbuh-tumbuhan, maka hutan tropis dipandang sebagai sumber, gudang penghasil senyawa kimia, sehingga perlu mendapatkan perhatian khusus dan dapat dimanfaatkan untuk kesejahteraan manusia (Chumaidah dan Ersam, 2006). Penelitian mengenai isolasi senyawa metabolit sekunder banyak diminati oleh  para peneliti. Hal ini dilakukan karena senyawa metabolit sekunder dapat memberikan manfaat yang sangat besar bagi kehidupan manusia. Penggunaan bahan  bioaktif dari isolasi bahan alam terus dikembangkan sampai saat ini karena k arena sifatnya yang ”renewable” , mudah terdekomposisi dan dapat dikeluarkan dari dalam tubuh,

1

sedangkan bahan sintetis dapat tertinggal atau menjadi residu yang berbahaya bagi tubuh (Ramanthan, 1992). Adapun alasan pentingnya melakukan isolasi metabolit sekunder (senyawa kimia) dari tumbuhan antara lain pertama, kandungan kimia dari tumbuhan walaupun satu species akan sangat dipengaruhi oleh kondisi geografis, iklim dan ekologi. Akan dijumpai variasi kandungan kimia akibat dari pengaruh kondisi ini. Variasi kandungan kimia juga akan dipengaruhi oleh bagian-bagian dari tumbuhan itu sendiri, sehingga terdapat perbedaan kandungan kimia dari akar dengan daun atau dengan kulit batang. Kedua, banyaknya kandungan kimia yang dimiliki oleh ekstrak tumbuhan tersebut, memungkinkan senyawa-senyawa yang ada saling bersinergi ataupun mengantagonis ataupun berbagai aktivitas yang terjadi sehingga sampai pada kesimpulan bahwa tumbuhan tersebut memberi khasiat obat. Ketiga, kehilangan aktivitas dari suatu ekstrak tumbuhan juga sangat dipengaruhi oleh kondisi  penyimpanan, waktu koleksi sampel, dan da n penyiapan dan bahan mentahnya. Jadi kita k ita tidak dapat memprediksi khasiat dari satu ekstrak dengan ekstrak yang lain bila telah terjadi berbagai perbedaan dalam proses penghasilan ekstrak tersebut. Sehingga dapat disimpulkan bahwa sebuah tumbuhan obat yang dikoleksi dari tempat yang berbeda dapat memberikan khasiat yang berbeda hal ini disebabkan karena adanya variasi dari kandungan kimia yang dimilikinya (Ismiarni, 2008). Tumbuhan dari genus Garcinia  Garcinia  akhir-akhir ini banyak diteliti kandungan dan aktivitasnya. Genus ini dilaporkan mengandung xanthon, benzofenon, triterpen,  biflavonoid, benzoquinon, β-sitosterol, dan stigmasterol (Waterman dan Hussain, 1983; Peres et al., al., 2000; Sadaquat et al., al., 2000; Kenji et al., al., 2003; Rukachaisirikul et 2

al., al., 2008; J. Shen dan J. Yang, 2007). Tumbuhan ini banyak tersebar di Indonesia, yang umumnya dikenal sebagai tumbuhan manggis-manggisan. Garcinia  Garcinia  merupakan tumbuhan daerah tropis, genus ini memiliki beberapa spesies yang menyebar di benua Afrika, Amerika dan Asia (Rai, 2003). Garcinia cowa Roxb. (Guttiferae) secara umum dikenal dengan nama manggis hutan atau kandis di daerah Sumatera Barat dan Cha Muang (Thailand) (Heyne, 1987). Tumbuhan ini digunakan oleh masyarakat sebagai obat untuk berbagai keperluan. Kulit batang digunakan sebagai antipiretik dan agen antimikroba. Getahnya digunakan sebagai agen antifever (Na Pattalung et al., al., 1994). Daun dan  buah digunakan untuk memperlancar peredaran darah, da rah, pengencer dahak (Panthong et al., 2006) dan tonikum (Poomipanorn et al., al., 1997). Penelitian sebelumnya diketahui bahwa fraksi air dan fraksi etil asetat akar asam asam kandis (Garcinia (Garcinia cowa Roxb.) memberikan daya hambat berturut-turut sebesar 81,44 ±  7,99

μg/mL dan 0,52 ± 3,55 μg/mL terhadap sel kanker payudara T47D secara in

vitro (Ilhami, 2013). Selain itu penelitian yang berkaitan dengan isolasi senyawa dari akar asam kandis (Garcinia (Garcinia cowa Roxb.) masih jarang dilakukan sehingga mendorong peneliti untuk mengisolasi senyawa utama yang terkandung dalam fraksi etil asetat akar asam kandis (Garcinia (Garcinia cowa Roxb.).

3

II.

2.1 Tinjauan Botani

2.1.1 Klasifikasi

TINJAUAN PUSTAKA

Garcinia cowa

Garcinia cowa

Roxb.

Roxb.

Tumbuhan Garcinia cowa Roxb. dapat diklasifikasikan sebagai berikut (Tjitrosoepomo, 1993): Kingdom

: Spermatophyta

Division Division

: Angiospermae

Kelas

: Dikotiledonae

Ordo

: Guttiferales

Family

: Guttiferae

Genus

: Garcinia

Spesies

: Garcinia cowa Roxb.

 Nama Daerah

: Asam Kandis (Sumatera Barat), Cha Cha Muang (Thailand).

2.1.2 Morfologi Tumbuhan Famili Guttiferae

Tanaman family Guttiferae kebanyakan berupa pohon, mempunyai saluran resin atau kelenjar-kelejar minyak. Semua spesies di daerah ini memiliki lateks atau getah  berwarna, biasanya lateks kuning atau oranye. Bentuk daun tunggal, berhadapan, koriaseus, tidak tidak ada stipula. stipula. Daun biasanya agak berair. Batang, Batang, daun dan bunga memiliki kelenjar yang menghasilkan minyak esensial, lemak dan resin. Bunga bisa tunggal maupun majemuk. Kelopak dan mahkota mempunyai susunan dan letak yang 4

amat bervariasi. Buah dengan bentuk dan struktur yang bermacam-macam (Whitmore, 1973).

2.1.3 Morfologi Tumbuhan Genus

Garcinia

Garcinia merupakan genus terbesar dari famili Guttiferae. Tumbuhan ini berupa  pohon kecil atau sedang, kadang-kadang berupa belukar dan jarang yang berupa  pohon besar dengan t inggi mencapai 30 m. batangnya ramping dengan de ngan lingkar batang dapat mencapai 120 cm, walaupun batang dengan ukuran ini relatif jarang ditemui. Kulit batang berwarna cokelat gelap atau hitam dengan tekstur halus dan kadangkadang bersisik. Kulit batang bagian dalam terdapat eksudat berupa getah berwarna kuning buram dan putih. Ranting berbentuk persegi dan akan mengerut jika dikeringkan. Kayu dari batang tumbuhan ini agak keras hingga sangat keras,  berwarna merah tua atau kuning. Daunnya tidak memiliki stipula dan posisinya terjepit pada ranting dahan. Dasar daun biasanya tidak simetris, tebal dan kering, pada umumnnya sepasang daun yang terletak paling atas menutupi ujung pucuk. Buah tumbuhan ini memiliki daging buah yang tebal dengan biji pipih yang tertanam dalam daging buah. Bunga jantan dan bunga betina terdapat pada pohon yang berbeda. Masingmasingnya dijumpai terpisah satu sama lain atau tersusun dalam kelompok-kelompok kecil. Bunga jantan umumnya berjumlah lebih banyak, dalam kelompok-kelompok kecil dan memiliki warna yang menyolok. Bunga betina memiliki stigma berukuran  besar dan menyolok dengan denga n sturktur yang tidak k alah beragam. Ovari terdiri dari dar i 4-5

5

 bilik dan didalam setiap bilik terdapat satu ovula. Mahkota bunganya monopodial, tersusun rapat dalam setiap kelompok dan umumnya berbentuk kerucut yang menyempit. Tangkai bunga berkantong, sepal dan petal berjumlah 4-5 dengan tekstur tebal melingkar. Benang sari berjumlah sangat banyak dan susunan yang bervariasi (Whitmore, 1973).

2.1.4 Morfologi

Garcinia cowa  Roxb.

Tumbuhan ini berupa pohon kecil atau sedang, batang ramping, tinggi mencapai 30 meter, keliling batang jarang mencapai 90 cm, kulit batang berwarna kuning lemon dan bergetah. Tangkai daun ramping dengan panjang 1 cm, sedangkan anak tangkai daun berukuran kecil atau sedang. Daun taji-elips (lanceolatus-eliptik)  berukuran 6 x 2 –  2 –  15   15 x 4 cm, kedua ujung melancip dengan lebar bagian ujung 1 cm. Tekstur licin, tulang sekunder sejajar, halus, lemah dan timbul di kedua sisi  permukaan daun dengan permukaan daun bagian bawah lebih halus (Whitmore, 1973). Tumbuhan ini menyukai suasana teduh dan suasana lembab. Masa berbunga  biasanya setelah masa kering yang cukup panjang (minimal tiga bulan) dan bisa  berbunga dua kali setahun. Bunnga kecil kec il mengelompok dibagian pangkal dau n, sepal sepa l dan petal 4, lebar bunga jantan 10-13 mm, panjang tangkai bunga 4-8 mm, petal  berukuran 7 x 5  –   10 x 6 mm, berwarna kuning, merah muda atau merah, stamen  banyak seperti bola, bo la, kepala putik 4 bua h. Buah masak berwarna kuning-jingga kusam ku sam hingga pucat, jika dikeringkan berwarna hitam gelap, memiliki alur membujur yang

6

kesat, bundar, diameter 3 cm, stigma stigma bundar,

panjang tangkai buah bua h 5 mm. Biji

terletak dalam daging buah yang berwarna kuning pucat (Whitmore, 1973).

2.2 Kegunaan Tumbuhan

Garcinia cowa

Roxb.

Garcinia cowa Roxb. telah digunakan dalam pengobatan tradisional. Di India,  buah yang telah dikeringkan biasanya digunakan untuk mengobati penyakit disentri (Rao, 1997). Tumbuhan ini juga digunakan sebagai pestisida , pembasmi nyamuk dan larvasida. Di Thailand, air seduhan dari kulit batang Garcinia cowa Roxb. digunakan untuk menurunkan panas (antipiretik), sedangkan dalam kehidupan sehari-hari daun dan

buah

dari

tumbuhan

ini

digunakan

sebagai

sayuran

dan

makanan

(Likhitwitayawuid et al., al., 1997; Murakami et al., al., 1995; Nanasombat et al., 2009). Di Malaysia, air seduhan buah kering juga diminum sebagai tonikum (Ilham et a.l, 1995). Sedangkan di Indonesia, khusunya di Sumatera Barat, buah kering Garcinia cowa Roxb. digunakan untuk bumbu masak.

2.3 Kandungan Kimia dan Aktivitas Biologi dari Bagian-bagian Tumbuhan Garcinia cowa Roxb.

Garcinia cowa merupakan sumber senyawa kimia yang bermacam-macam. Kandungan senyawa kimia dari berbagai bagian tumbuhan ini telah banyak diteliti. Setiap bagian tumbuhan memiliki kandungan dan aktivitas biologi berbeda-beda. Tabel berikut berikut akan menunjukkan kandungan, bagian tanaman dan aktivitas aktivitas biologi biologi dari Garcinia cowa Roxb. (Ritthiwigrom (Ritthiwigrom et al ., ., 2013):

7

Tabel 1. Kandungan, bagian tanaman dan aktivitas aktivitas biologi dariGarcinia dari Garcinia cowa Roxb. Kategori dan Struktur

Nama Senyawa dan Asal Bagian Tumbuhan

Aktivitas Biologi

Depsidone

Cowadepsidone; ranting

Flavonoid

R=H Kaempferol; dahan R = OH Quercetin; batang 2-(3,5-Dihydroxyphenyl)2,3-dihydro-5,7-dihydroxy 3′,5,5′,73′,5,5′,7tetrahydroxyflavanone;  batang 2-(3,5-Dihydroxy-phenyl)2,3-dihy-dro-3,5,7trihydroxy-(2R,3R)3,3′,5,5′,7-pentahydroxy 3,3′,5,5′,7-pentahydroxy flavanone; batang

Garccowaside A; batang

Garccowaside B; batang R = CH3 Garccowaside C; batang GB-2; dahan

8

Sitotoksisitas  NCI-H187 IC50 31.47 µg/mL MFC-7 IC50 36.03 µg/mL

Amentoflavone; buah

Aktivitas Antioksidan Morelloflavone; buah, ranting

Uji DPPH IC50 10.01 μg/mL Uji radikal bebas hydroxyl IC50 3.11x104 μg/mL Uji anion Superoxide  bebas IC50 1.50x10-4 1.50x10-4 μg/mL

R1 = R2 = H Volkensiflavone; ranting

R1 = β-glucoside; β-glucoside; R2 = OH Morelloflavone-7′ Morelloflavone- 7′-O-Oglucoside or fukugiside; ranting

Aktivitas Antioksidan Uji DPPH IC50 12.92 μg/mL Uji radikal bebas Hydroxyl IC50 5.31x104 μg/mL Uji anion Superoxide  bebas IC50 6.39x106.39x104μg/mL

Phloroglucinol

Cambogin; buah, ranting ,  batang

9

Sitotoksisitas melawan HT-29 HCT-116 CCD-18Co

Guttiferone K; buah, batang

Guttiferone K ; ranting

Chamuangone; daun

Garcicowin A; ranting

10

Sitotoksisitas melawan HT-29 IC50 3.25 0.12 μg/mL HCT-116 CCD-18Co

Aktivitas Antibakteri : S. pyogenes MIC pyogenes MIC 7.8 μg/mL S. viridans MIC viridans MIC 15.6 μg/mL  H. pylori MIC pylori MIC 15.6 μg/mL  B. subtilis, Enterococcus Enterococcus  sp.  sp. and S. aureus MIC aureus MIC 31.2μg/mL

Sitotoksitas melawan HT-29 HCT-116 CCD-18Co

Garcicowin B; ranting

R1 = CH3; R2 = OH Oblongifolin B; ranting

Sitotoksisitas melawan HT-29 HCT-116 CCD-18Co Sitotoksisitas melawan HT-29 HCT-116 CCD-18Co

Oblongifolin C; ranting

Sitotoksisitas melawan HT-29 HCT-116 CCD-18Co

Garcicowin C; ranting

Sitotoksisitas melawan HT-29 HCT-116 CCD-18Co

Garcicowin D; ranting

Sitotoksisitas melawan HT-29 HCT-116 CCD-18Co

30-Epicambogin; ranting

Oblongifolin A; ranting

11

Sitotoksisitas melawan HT-29 IC50 3.07 0.06 μg/mL HCT-116 CCD-18Co

Guttiferone B; ranting

Sitotoksisitas melawan HT-29 HCT-116 CCD-18Co

Guttiferone F; ranting

Oblongifolin D; ranting

Terpenoid dan Steroid

Friedelin; dahan

Daucosterol; dahan, buah

β-sitosterol; dahan, buah

12

Sitotoksisitas melawan HT-29 HCT-116 CCD-18Co

stigmasterol; dahan

Xanthone

R1 = OCH3; R2 = H Cowaxanthone A; buah atau cowagarcinone C; getah

Aktivitas Anti-inflamasi

R1 = H; R2 = OCH3 1,6-Dihydroxy-3,7dimethoxy-2(3-methyl-2-butenyl) xanthone; buah

R1 = OH; R2 = H; R3 = R4 = OCH3; R5 = prenyl Cowaxanthone B; buah

aktivitas Anti-bakteri S. aureus MIC 128 μg/mL MRSA MIC 128 μg/mL Aktivitas Anti-inflamasi

R1 = R3 = R4 = OCH3; R2 = H; R5 = prenyl Fuscaxanthone C; buah

R1 = R3= OH; R2 = R5 =  prenyl; R4 = OCH3 7-O-Methylgarcinone E;  batang,  batang, kulit batang, batang, buah

Aktivitas Anti-bakteri S. aureus MIC 128 μg/mL MRSA MIC 64 μg/mL Aktivitas Anti-malaria Plasmodium falciparum IC50 1.5-3.0 1.5-3.0 μg/mL Aktivitas Anti-malaria Plasmodium falciparum IC50 1.5-3.0 1.5-3.0 μg/mL

13

R1 = R3 = OH; R2 = H; R4 = OCH3; R5 = prenyl α-Mangostin; buah, kulit  batang

R1 = R4 = OCH3; R2 = H; R3 = OH; R5 = prenyl β-Mangostin; -Mangostin; buah, ranting

R1 = prenyl; R2 = OH Cowaxanthone C; buah

Aktivitas Anti-bakteri S.aureus MIC 8 μg/mL MRSA MIC 8 μg/mL Aktivitas Anti-inflamasi Aktivitas Anti-malaria Plasmodium falciparum IC50 1.5-3.0 1.5-3.0 μg/mL

Aktivitas Anti-bakteri S. aureus MIC 128 μg/mL MRSA MIC 64 μg/mL Aktivitas Anti-bakteri S. aureus MIC 128 μg/mL MRSA MIC 128 μg/mL Aktivitas Anti-inflamasi

R1 = H; R2 = OH Mangostanin; buah

Aktivitas Anti-bakteri S. aureus MIC 4 μg/mL MRSA MIC 4 μg/mL Aktivitas Anti-inflamasi

R1 = H; R2 = OCH3 6-O-Methylmangostanin; Buah

Cowaxanthone D; buah

14

Aktivitas Anti-inflamasi Anti-infla masi

Aktivitas Anti-malaria Plasmodium falciparum IC50 1.5-3.0 1.5-3.0 μg/mL Cowaxanthone; buah, getah, ranting, kulit batang

Sitotoksisitas  NCI-H187 IC50 3.87 μg/mL KB IC50 15.43 μg/mL MFC-7 IC50 15.45 μg/mL

R1 = R3 = prenyl; R2 = CHO Cowaxanthone E; buah

Aktivitas Anti-bakteri S. aureus MIC >128 μg/mL MRSA MIC >128 μg/mL Cowanol; buah, getah, ranting, kulit batang

Aktivitas Anti-inflamasi Aktivitas Anti-malaria Plasmodium falciparum IC50 1.5-3.0 1.5-3.0 μg/mL Sitotoksisitas  NCI-H187 IC50 37.26 μg/mL KB IC50 32.34 μg/mL MFC-7 IC50 34.62 μg/mL

R1 = prenyl; R2 = H; R3 = geranyl Cowanin; buah, getah, ranting, kulit batang

Aktivitas Anti-bakteri S .aureus MIC >128 μg/mL MRSA MIC >128 μg/mL Aktivitas Anti-inflamasi Aktivitas Anti-malaria Plasmodium falciparum IC50 1.5-3.0 1.5-3.0 μg/mL

15

R1 = prenyl; R2 = OH; R3 = OCH3; R4= H 1,3,6-Trihydroxy-7methoxy-2,5 bis(3-methyl-2 bis(3-methyl-2 butenyl)xanthone;  butenyl)xanthone; getah getah

R1 = H; R2 = R3 = OH; R4 = geranyl  Norcowanin;  Norcowanin; getah, getah, ranting

R1 = CH3; R2 = OH; R3 =  prenyl; R4 = OCH3; R5 = geranyl Cowagarcinone A; getah

R1 = CH3; R2 = R3 = OCH3; R4 = R5 = H Cowagarcinone B; getah

R1 = CH2OAc; R2 = OH; R3 = H; R4 = OCH3; R5 = geranyl Cowagarcinone E; getah

Cowagarcinone D; getah

Mangostinone; getah

16

Sitotoksisitas  NCI-H187 IC50 5.92 μg/mL KB IC50 6.43 μg/mL MFC-7 IC50 18.85 μg/mL

Cowaxanthone F; ranting

1,6-Dihydroxyxanthone; ranting

3,6-Di-O-methyl-γ 3,6-Di-O-methyl-γmangostin; ranting

Sitotoksisitas  NCI-H187 IC50 8.58 μg/mL KB IC50 6.64 μg/mL MFC-7 IC50 10.59 μg/mL

Rubraxanthone; batang

1,5,6-Trihydroxy-3methoxy-4-(3hydroxyl-3methylbutyl)xanthone atau nigrolineaxanthone T;  batang

R1 = H; R2 = prenyl Dulxanthone A; batang

17

Sitotoksisitas HepG2

4-(1,1-Dimethyl-prop-2enyl)1,5,6-trihydroxy-3methoxy-2-(3methylbut-2-enyl)xanthen9-(9H)one; batang

R1 = OCH3; R2 = prenyl 1,5-Dihydroxy-3-methoxy4-(3methylbut-2-enyl)- 6′,6′6′,6′dimethyl2H- pyrano(2′,3′:6,7)  pyrano(2′,3′:6,7) xanthone; batang

R1 = OH; R2 = H 1,3,5-Trihydroxy-6′,6′ 1,3,5-Trihydroxy-6′,6′-dimethyl2H pyrano(2′,3′:6,7)xanthone  pyrano(2′,3′:6,7)xanthone;;  batang R1 = R3 = R4 = OH; R2 = H 1,3,6,7Tetrahydroxyxanthone atau norathyriol; batang R1 = R2 = OH; R3 = OCH3; R4 = H 1,3,5-Trihydroxy-6methoxyxanthone; batang R1 = R4 = OCH3; R2 = R3 = OH 1,5,6-Trihydroxy-3,7dimethoxyxanthone; batang R1 = R2 = R3 = H; R4 = OH 1,7-Dihydroxyxanthone;  batang

18

Senyawa Lain

(2E,6E,10E)-(+)-4β (2E,6E,10E)-(+)-4β-Hydroxy-3methyl-5β methyl-5β-(3,7,11,15-(3,7,11,15tetramethyl-hexadeca2,6,10,14tetraenyl)cyclo-hex-2-en-1one; batang

Asam palmitat; dahan

Asam tetratriacontanoat; dahan

Asam oksalat; buah, daun segar, kulit batang

Asam sitrat; buah, daun segar, kulit batang

4-asam hidrobenzoat; dahan

Asam isovanilat; dahan

 p-asam kumarat; kumarat; buah buah

19

(-)-lakton asam hidrositrat;  buah, daun segar, kulit kulit  batang

Cirsiumaldehid; buah

2.4 Ekologi

Jenis-jenis tanaman Garcinia umumnya dijumpai tumbuh tersebar, dan terdapat di hutan primer dataran rendah. Beberapa spesies seperti G. hombroniana dan G.  parvifolia mungkin didapati melimpah di hutan sekunder. Meskipun biasanya Garcinia didapati di hutan tanah kering, beberapa jenisnya seperti G. bancana, G. maingayi, G. nigrolineata dan G. parvifolia juga parvifolia  juga dijumpai d i daerah rawa-rawa. Ada  pula jenis Garcinia yang tumbuh di tanah berkapur (Ilyas et al., 1994). al., 1994).

2.5 Steroida

Steroida adalah triterpenoida yang kerangka dasarnya adalah cincin siklopentana  perhidrofenantren (Harbourne, 1987). Kerangka dasar dan sistem penomoran pe nomoran steroida (Robinson, 1995) dapat dilihat pada gambar berikut ini.

20

Gambar 1. Struktur dasar steroida dan penomorannya Pada awalnya, senyawa sterol diketahui sebagai subtansi dari binatang baik sebagai hormon sex, asam empedu atau lainnya. Baru belakangan senyawa-senyawa ini terdeteksi pada jaringan tanaman. Tiga macam senyawa yang biasa disebut sebagai

”fitosterol”

yaitu

sitosterol

(lebih

dikenal

sebagai

beta-sitosterol),

stigmasterol dan campesterol terbukti bisa ditemukan pada beberapa jenis tanaman tinggi. Beberapa jenis senyawa sterol tertentu seperti ergosterol, dapat ditemukan  pada tanaman tingkat rendah seperti khamir dan jamur (Harborne, 1998). Beberapa hasil penelitian menunjukkan bahwa fitosterol mampu mengurangi kadar kolesterol total dan LDL kolesterol di dalam darah (National Nutritional Foods Association, 2001). Struktur senyawa fitosterol tersebut dapat dilihat pada ga mbar dibawah ini.

21

Gambar 2. Struktur beberapa senyawa fitosterol

22

2.6 Ekstraksi dan Fraksinasi

2.6.1 Ekstraksi

Ekstraksi merupakan suatu proses penarikan senyawa-senyawa kimia dari turnbuh-tumbuhan, hewan dan lain-lain menggunakan pelarut tertentu. Teknik yang umum untuk ekstraksi senyawa kimia adalah cara maserasi, sokletasi, perkolasi dan  perebusan (Harborne, 1987). Maserasi merupakan proses penyarian sederhana, yaitu dengan merendam sampel dalam pelarut yang sesuai selama 3-5 hari. Pelarut akan menembus kedalam rongga sel yang mengandung zat aktif, zat aktif akan larut karena perbedaan konsentrasi antara larutan diluar dan di dalam sel (Harbone, 1987). Keuntungan dari metoda maserasi yaitu, teknik pengerjaan dan alat yang digunakan untuk mengesktraksi senyawa sederhana dan mudah dan hasilnya cukup baik. Sokletasi merupakan teknik penyarian dengan pelarut organik menggunakan alat soklet. Pada cara ini pelarut dan sampel ditempatkan secara terpisah. Prinsipnya adalah penyarian yang dilakukan berulang-ulang sehingga penyarian lebih sempurna dan pelarut yang digunakan relatif lebih sedikit. Tapi metoda sokletasi ini tidak dapat digunakan untuk mengesktraksi senyawa termolabil (Harborne, 1987). Prinsip kerja sokletasi adalah penyarian secara terus menerus sehingga penyarian lebih sempurna dengan memakai pelarut yang relatif sedikit. Jika penyarian telah selesai maka pelarutnya diuapkan dan sisanya adalah zat yang tersari. Biasanya

23

 pelarut yang digunakan adalah pelarut yang mudah menguap atau mempunyai titik didih yang rendah (Houghton dan Raman, 1998). Cara kerja sokletasi adalah sebagai berikut : Serbuk kering yang akan di ekstraksi  berada di d i dalam da lam kantong ka ntong sampel yang diletakkan pada alat ekstraksi (tabung soklet). Tabung soklet yang berisi kantong sampel diletakkan diantara labu destilasi dan  pendingin, disebelah bawah dipasang pemanas. Setelah pelarut pelarut ditambahkan melalui bagian atas alat soklet dan pemanas dihidupkan, pelarut dalam labu didih menguap dan mencapai pendingin, berkondensasi dan menetes ke atas kantong sampel sampai mencapai tinggi tertentu/maksimal (sama tinggi dengan pipa kapiler). Pelarut beserta zat yang tersari didalamnya akan turun ke labu didih melalui pipa kapiler (Houghton dan Raman, 1998). Perkolasi merupakan teknik penyarian dengan pelarut organik menggunakan alat  perkolator. Pada cara ini pelarut dialirkan melewati sampel sehingga penyarian pe nyarian lebih sempurna. Kekurangan metoda ini membutuhkan pelarut yang lebih banyak (Harborne, 1987). Perebusan merupakan teknik penyarian menggunakan pelarut air. Pada cara ini sampel direndam dengan pelarut kemudian dipanaskan sampai mendidih. Metoda  perebusan merupakan metoda meto da yang paling kuno dan sekarang hanya digunakan d igunakan pada  proses tertentu saja. Proses penyarian sering kurang sempurna dan tidak dapat digunakan untuk mengestraksi senyawa termolabil (Harborne, 1987).

24

Digestasi adalah proses penyarian yang sama seperti maserasi dengan menggunakan suhu 300°C –  300°C  –   400°C. Cara ini dilakukan untuk simplisia yang pada suhu biasa tidak tersari dengan baik.

2.6.2 Fraksinasi

Fraksinasi merupakan teknik pemisahan. Ekstrak hasil maserasi diuapkan  pelarutnya sampai diperoleh ekstrak kental. Kemudian ekstrak ini di fraksinasi dengan berbagai pelarut yang memiliki kepolaran berbeda dan saling tidak bercampur (Harbone, 1987). Proses fraksinasi perlu dilakukan untuk mengelompokkan senyawa berdasarkan tingkat kepolaran yang ada dalam ekstrak kasar. Pemilihan pelarut disesuaikan dengan jenis sampel dan tujuan isolasi. Pelarut yang digunakan dalam fraksinasi, diperkecil volumenya dengan menggunakan penguapan vakum atau dengan alat rotary evaporator.

2.7 Isolasi

Pada dasarnya isolasi senyawa kimia dari bahan alam itu adalah sebuah usaha  bagaimana caranya memisahkan senyawa yang bercampur sehingga kita dapat menghasilkan senayawa tunggal yang murni.

25

2.7.1 Kromatografi

Metoda yang umum digunakan untuk memisahkan komponen-komponen senyawa, yaitu metoda kromatografi (Gritter, Bobbit dan Schwart ing, 1991). Kromatografi adalah teknik pemisahan campuran berdasarkan perbedaan kecepatan perambatan komponen dalam medium tertentu. Pada kromatografi, komponen-komponennya akan dipisahkan antara dua buah fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam akan menahan komponen campuran sedangkan fase gerak akan melarutkan zat komponen campuran. Komponen yang mudah tertahan pada fase diam akan tertinggal. Sedangkan komponen yang mudah larut dalam fase gerak akan  bergerak lebih cepat (Imam Haqiqi dan Sohibul, 2008). Kromatografi Lapis Tipis ialah metode pemisahan fisikokimia yang terdiri atas  bahan berbutir-butir (fase diam), ditempatkan pada penyangga berupa pelat gelas, logam, atau lapisan yang cocok. Campuran yang akan dipisah, berupa larutan, ditotolkan berupa bercak atau pita. Setelah pelat atau lapisan diletakkan di dalam  bejana tertutup rapat yang berisi larutan pengembang yang cocok (fase gerak),  pemisahan terjadi selama perambatan kapiler kap iler (pengembangan). Selanjutnya, senyawa yang tidak berwarna harus ditampakkan (dideteksi) (Stahl, 1985). Kelebihan

penggunaan

kromatografi

lapis

tipis

dibandingkan

dengan

kromatografi kertas ialah karena dihasilkannya pemisahan yang lebih sempurna, kepekaan yang lebih tinggi, dan dapat dilaksanakan dengan lebih cepat. Banyak  pemisahan yang memakan waktu berjam-jam bila dikerjakan dengan kromatografi

26

kertas, tetapi dapat dilaksanakan hanya beberapa menit saja bila dikerjakan dengan TLC (Adnan, 1997). Kromatografi Lapis Tipis digunakan untuk memisahkan senyawa-senyawa yang sifatnya hidrofob seperti lipida-lipida dan hidrokarbon. Sebagai fase diam digunakan senyawa yang tak bereaksi seperti silika gel atau alumina. Silika gel biasa diberi  pengikat yang dimaksudkan untuk memberikan kekuat an pada lapisan dan menambah adesi pada gelas penyokong. Pengikat yang biasa digunakan adalah kalsium sulfat (Sastrohamidjojo, (Sastrohamidjojo, 2002). Metode dalam KLT dapat dihi d ihitung tung nilai Retention nilai Retention factor  (Rf)  (Rf) dengan persamaan:

 =

Jarak yang ditempuh senyawa Jarak yang ditempuh pelarut 

Tetapi pada gugus-gugus yang besar dari senyawa-senyawa yang susunannya mirip, sering sering kali harga Rf berdekatan satu sama lainnya (Sastrohamidjojo, 2002). Kromatografi kolom merupakan teknik kromatografi yang paling awal ditemukan.

Ditinjau

dari

mekanismenya

kromatografi

kolom

merupakan

kromatografi serapan atau adsorpsi. Kromatografi kolom digolongkan ke dalam kromatografi cair-padat (KCP) kolom terbuka (Soebagio et al ., ., 2003). Pada kromatografi kolom fasa diam yang akan digunakan dapat berupa silika gel. Sedangkan fasa geraknya dapat dimulai dari pelarut non polar kemudian kepolaran ditingkatkan secara bertahap ( gradient   gradient ), ), baik dengan pelarut tunggal atau kombinasi dua pelarut yang berbeda kepolarannya dengan perbandingan tertentu sesuai dengan tingkat kepolaran yang dibutuhkan (isokratik). Kromatografi lapis tipis dapat dipakai

27

untuk memilih sistem pelarut yang akan digunakan pada kromatografi kolom (Gritter et al., 1991). Dalam pelaksanaan pemisahan dengan teknik kromatografi kolom, pertama-tama sampel yang akan dipisahkan dilarutkan dalam pelarut yang sesuai. Sampel ini kemudian diletakkan di bagian atas kolom yang sudah berisi fasa diam (adsorben). Fasa gerak kemudian dialirkan pelan-pelan dan dibiarkan mengalir melalui kolom tersebut. Pada saat fasa gerak mengalir sepanjang kolom, fasa gerak akan membawa campuran komponen ke bawah. Kesetimbangan dinamis antara komponen yang teradsorbsi pada fasa diam dengan komponen yang terlarut dalam fasa gerak akan terjadi selama fasa gerak mengalir ke bawah. Tetapan kesetimbangannya disebut koefisien distribusi. Karena setiap komponen dalam campuran mempunyai koefisien distribusi yang berbeda, maka kecepatan migrasinya juga berbeda. Perbedaan kecepatan migrasi inilah yang menyebabkan terjadi pemisahan komponen-komponen dalam campuran. Komponen-komponen yang terpisah nampak sebagai pita-pita dalam fasa diam yang selanjutnya masing-masing pita dapat didorong keluar kolom dengan penambahan fasa gerak, ditampung, dipisahkan, diidentifikasi (Soebagio et al ., ., 2003). Tujuan kromatografi kolom adalah memisahkan komponen cuplikan menjadi pita atau fraksi yang lebih sederhana, ketika cuplikan itu bergerak melalui media (Gritter et al , 1991).

28

2.7.2

Rekristalisasi

Rekristalisasi merupakan salah satu cara pemurnian zat padat yang jamak digunakan, dimana zat-zat tersebut atau zat-zat padat tersebut dilarutkan dalam suatu  pelarut kemudian d ikristalkan kembali. Cara ini bergantung pada p ada kelarutan zat dalam dala m  pelarut tertentu di kala suhu diperbesar. Karena konsentrasi total impuriti biasanya lebih kecil dari konsentrasi zat yang dimurnikan, bila dingin, maka konsentrasi impuriti yang rendah tetapi dalam larutan sementara produk yang berkonsentrasi tinggi akan mengendap (Arsyad, 2001).

2.7.3

Analisis Kemurnian

Analisis kemurnian senyawa hasil isolasi dilakukan dengan kromatografi lapis tipis (KLT) dan uji titik leleh. KLT dilakukan dengan mengelusi larutan sampel yang ditotolkan pada lempeng silika gel 60 F254 dengan fase gerak berupa eluen etil asetat-heksana (4 : 6). Bercak yang ada diamati dengan sinar tampak, UV 254 nm dan UV

366 

nm kemurnian senyawa ditetapkan secara semi kuantitatif dengan

densitometer pada λ  maks   maks = 347 nm (Margono dan Zendrato, 2006). Senyawa hasil analisis dikatakan murni apabila memberikan noda tunggal pada KLT dengan  berbagai fase gerak (Setyowati et al ., ., 2007). Sedangkan titik leleh merupakan ciri penting senyawa organik padat. Titik leleh memiliki arti penting dalam identifikasi dan pengukuran kemurnian. Penggunaan untuk identifikasi didasarkan pada fakta bahwa semua senyawa murni mempunyai

29

titik leleh yang tajam ketika berubah sempurna dari padat ke cair. Selain itu,  penggunaan titik leleh untuk identifikasi juga didasarkan pada fakta bahwa senyawa yang tidak murni menunjukkan 2 fenomena yaitu suhu leleh yang lebih rendah dan memiliki jarak leleh yang lebih lebar. Alat yang digunakan untuk menguji titik leleh adalah termopan. Untuk identifikasi kualitatif, titik leleh merupakan tetapan fisika yang penting terutama untuk suatu senyawa hasil sintesis, isolasi, dan kristalisasi. Titik leleh suatu kristal padat adalah suhu ketika padatan mulai berubah menjadi cairan pada tekanan udara 1 atm. Jika suhu dinaikkan, molekul senyawa menyerap energi. Semakin tinggi suhu maka akan semakin banyak energi yang diserap sehingga akan menaikkan gerakkan vibrasi dan rotasi molekul (Hadiprabowo, 2009).

2.8 Identifikasi Senyawa

Pada awalnya identifikasi suatu senyawa dilakukan dengan mengamati reaksireaksi kimia, yaitu dengan cara mendestruksi senyawa yang diidentifikasi, kemudian hasil destruksi digunakan untuk menyimpulkan molekul asal. Disamping itu juga dilakukan reaksi-reaksi kimia pada gugus fungsional yang ada pada molekul itu. Umumnya dicari reaksi-reaksi yang dapat diamati. Cara-cara ini awalnya cukup memadai, namun setelah diketemukan sedemikian banyak senyawa baru, dan struktur molekulnya meningkat menjadi lebih rumit, maka metode konvensional ini menjadi tidak memadai. Untuk identifikasi suatu senyawa digunakan metode spektroskopi. Proses  penentuan struktur senyawa kimia adalah dengan menggunakan pengetahuan

30

spektroskopi. Beberapa ilmu spektroskopi yang diperlukan adalah spektroskopi Ultraviolet-Vis (UV-Vis),  Infra Red   (IR),  Mass Spectroscopy (MS) dan NMR ( Nuclear  Nuclear Magnetic Resonance). Resonance).

2.8.1 Spektroskopi infra merah

Suatu molekul yang menyerap sejumlah energi yang diberikan oleh suatu radiasi elektromagnetik dapat mengalami berbagai jenis eksitasi. Eksitasi ini dapat berupa elektronik rotasi, perubahan orientasi spin inti, deformasi ikatan dan sebagainya. Setiap jenis ikatan ikatan eksitasi memerlukan sejumlah energy tertentu maka maka adsorbsi yang  bersangkutan timbul didalam daerah spektrum elektromagnetik yang berbeda pula. Daerah spektrum spektrum infra infra merah meliputi meliputi panjang gelombang 035-300 gm (Silverstein (Silverstein et al., 1981; Fessenden, 1982). Atom-atom dalam molekul tidak diam melainkan bergetar (vibrasi) dan berotasi  pada sumbu kesetimbangannya. Jika suatu

molekul menyerap sinar infra merah,

maka dalam molekul itu itu akan terjadi perubahan tingkat energi vibrasi vibrasi dan rotasi dari keadaan tingkat energi rendah ke tingkat energi yang lebih tinggi. Supaya suatu molekul dapat menyerap sinar, maka getaran vibrasi dan rotasi molekul tersebut disertai isolasi momen dipol molekul tersebut. Penyerapan energi infra merah merupakan proses kuantisasi, hanya energi tertentu dari radiasi infra merah yang diserap molekul, sesuai dengan kisaran frekuensi vibrasi rentangan ( sterching   sterching ) dan vibrasi bengkokan (bending  (bending ) dan momen dipol.

31

Ada 2 macam vibrasi yang utama dalam molekul (Silverstein et al., 1981; Fessenden, 1982) : 1. Vibrasi ulur ( streching ) Berkaitan dengan jarak antara 2 atom dalam

molekul sepanjang sumbu sumbu

ikatan. 2. Vibrasi tekuk (bending  (bending ) Berkaitan perubahan sudut antara antara 2 ikatan atau gugus terhadap terhadap sisa sisa molekul. molekul. Vibrasi tekuk terdiri dari 4 tipe : a. Guntingan ( scissoring   scissoring )  b. Kibasan (twisting  (twisting ) c. Goyangan (rocking  (rocking ) d. Pelintiran (waging  (waging ) Spektrum infra merah dapat memberikan informasi gugus fungsi yang terdapat dalam suatu senyawa. Bila sinar infra merah dilewatkan melalui cuplikan senyawa organik, maka sejumlah sejumlah frekuensi diserap sedangkan frekuensi frekuensi yang lain diteruskan atau ditransmisikan ditransmisikan tanpa diserap. Transisi yang yang terjadi di dalam serapan infra infra merah  berkaitan dengan perubahan-perubahan vibrasi dalam molekul.

2.8.2 Spektroskopi UV-Vis

Spektrofotometer terdiri atas spektrometer dan fotometer. Spektrofotometer menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang gelombang tertentu dan fotometer adalah alat pengukur intensitas cahaya yang ditranmisikan atau yang diabsorpsi.

32

Spektrofotometer tersusun atas sumber spektrum yang kontinyu, monokromator, sel  pengabsorpsi untuk larutan sampel atau blangko dan suatu alat untuk mengukur  pebedaan absorpsi antara a ntara sampel dan d an blangko ataupun pembanding (Khopkar, 1990: 216). Spektrofotometri UV-Vis merupakan salah satu teknik analisis spektroskopi yang memakai sumber

radiasi eleltromagnetik ultraviolet dekat (190-380) dan sinar

tampak (380 - 780) dengan memakai instrumen spektrofotometer (Mulja dan Suharman, 1995). Spektrofotometri UV-Vis melibatkan energi elektronik yang cukup  besar pada molekul yang dianalisis, d ianalisis, sehingga spektrofotometri UV -Vis lebih banyak dipakai untuk analisis kuantitatif ketimbang kualitatif (Mulja dan Suharman, 1995). Spektrofotometer UV-Vis dapat melakukan penentuan terhadap sampel yang berupa larutan, gas, gas, atau uap. Untuk sampel sampel yang berupa larutan larutan perlu diperhatikan pelarut yang dipakai antara lain: 1.

Pelarut yang dipakai tidak mengandung sistem sistem ikatan rangkap terkonjugasi  pada struktur molekulnya dan tidak berwarna.

2.

Tidak terjadi interaksi dengan molekul senyawa yang dianalisis.

3.

Kemurniannya harus tinggi atau derajat untuk analisis. (Mulja dan Suharman, 1995: 28).

Serapan cahaya oleh molekul dalam daerah spektrum ultraviolet dan visible tergantung pada struktur struktur elektronik elektronik dari molekul. molekul. Serapan ultra violet dan visibel dari senyawa-senyawa organik berkaitan erat dengan transisi-transisi diantara tingkatan-tingkatan tenaga elektronik. Disebabkan karena hal ini, maka serapan

33

radiasi ultraviolet atau terlihat sering dikenal sebagai spektroskopi elektronik. Transisi-transisi tersebut biasanya antara orbital ikatan antara orbital ikatan atau orbital pasangan bebas dan orbital non-ikatan tak jenuh atau orbital anti-ikatan. Panjang gelombang serapan merupakan ukuran dari pemisahan tingkatan-tingkatan tenaga dari orbital yang bersangkutan. Spektrum ultra violet adalah gambar antara  panjang gelombang atau frekuensi serapan lawan intensitas intensitas serapan (transmitasi atau absorbansi). absorbansi). Sering juga data ditunjukkan ditunjukkan sebagai gambar grafik grafik atau tabel yang menyatakan panjang gelombang gelombang lawan serapan molar molar atau log dari serapan molar, molar, Emax atau log Emax (Sastrohamidjojo, 2001). Sumber tenaga radiasi terdiri dari benda yang tereksitasi menuju ke tingkat yang lebih tinggi oleh sumber listrik bertegangan tinggi atau oleh pemanasan listrik. Monokromator adalah suatu piranti optis untuk memencilkan radiasi radiasi dari sumber  berkesinambungan. Digunakan D igunakan untuk memperoleh sumber sinar monokromatis. Alat dapat berupa prisma atau grating (Khopkar, 1990). Pengukuran pada daerah UV harus menggunakan sel kuarsa karena gelas tidak tembus cahaya pada daerah ini. Sel yang biasa digunakan berbentuk persegi maupun  berbentuk silinder dengan ketebalan 10 mm. Sel tersebut adalah sel pengabsorpsi, pengabso rpsi, merupakan sel untuk meletakkan cairan ke dalam berkas cahaya spektrofotometer. Sel haruslah meneruskan meneruskan

energi cahaya dalam daerah spektral spektral yang diminati.

Sebelum sel dipakai dibersihkan dengan air atau dapat dicuci dengan larutan detergen atau asam nitrat panas apabila dikehendaki (Sastrohamidjojo, 2001).

34

III.

3.1

PELAKSANAAN PENELITIAN

Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian dilaksanakan pada bulan bulan November 2013 sampai Februari 2016 2016 di Laboratorium Biota Sumatera dan Laboratorium Sentral, Universitas Andalas, Padang.

3.2 Alat dan Bahan Penelitian

3.2.1 Alat

Alat-alat yang digunakan berupa erlenmeyer berbagai ukuran, gelas ukur, corong, spatel, pipet tetes, botol coklat, botol 100 ml, vial, corong pisah, rotary evaporator , seperangkat alat destilasi, peralatan peralatan rotary evaporator, Erlenmeyer Erlenmeyer dengan berbagai ukuran, gelas ukur, plat tetes, penangas air, lampu UV λ254 nm dan λ365 nm (Betrachter Lamag ®), kromatografi kolom, kertas saring, pipet kapiler, spektrofotometer UV dan IR.

3.2.2 Bahan

Bahan yang digunakan untuk sampel adalah akar asam kandis ( Garcinia cowa Roxb.) yang berasal dari daerah Bayang, Pesisir Selatan, Sumatera Barat. Bahan yang digunakan untuk pemeriksaan pendahuluan adalah pereaksi Liebermann-Burchard, pereaksi meyer, logam Mg, HCl, NaOH dan FeCl 3. Bahan yang digunakan untuk maserasi serbuk akar asam kandis ( Garcinia cowa Roxb.) adalah etanol 70%. Bahan yang digunakan untuk fraksinasi berupa ekstrak etanol

35

akar asam kandis, n-heksan, etil asetat, dan aquadest. Bahan-bahan yang digunakan untuk pengerjaan isolasi adalah fraksi etil asetat akar asam kandis (Garcinia cowa Roxb.), metanol, n-heksana, etil asetat, etanol, silika gel 60 PF254 (Merck ®).

3.3. Prosedur Penelitan

3.3.1. Perlakuan Awal Sampel

Akar segar asam kandis (Garcinia ( Garcinia cowa Roxb.) sebanyak 2 kg dibersihkan, diiris halus dan dikeringkan. Setelah kering, akar tersebut dihaluskan dengan grinder sehingga didapatkan serbuk akar asam ka ndis (Garcinia ( Garcinia cowa Roxb cowa Roxb..).

3.3.2. Pemeriksaan Pendahuluan Pendahuluan Kandungan Kimia Akar Asam Kandis

a. Pemeriksaan Alkaloid Pemeriksaan alkaloid dilakukan dengan metode Culvenor-Fitzgerald, yaitu dengan sebanyak 4 gram akar asam kandis dirajang halus, digerus dalam lumpang dengan bantuan pasir bersih dan 10 ml kloroform (CHCl 3). Tambahkan larutan 10 ml kloroform-amoniak 0.05 N, lalu gerus dan saring ke dalam tabung reaksi, tambahkan 0.5 ml asam sulfat (H 2SO4) 2 N, kocok selama 2 menit dan biarkan sampai terjadi pemisahan. Ambil lapisan asam,  pindahkan ke tabung reaksi lain kemudian tambahkan beberapa tet es pereaksi Mayer. Reaksi positif ditandai dengan adanya kabut putih hingga gumpalan  putih atau endapan put ih yang tidak dapat dituang (Culvenor dan Fitzgerald, 1963).

36

 b. Pemeriksaan Steroid, Terpenoid, Saponin, dan Senyawa Fenolik (Simes et al., al., 1959). Pemeriksaan steroid, terpenoid, saponin, dan senyawa fenolik dilakukan  berdasarkan metoda Simes dkk yang dimodifikasi, yaitu: pemeriksaan dilakukan terhadap 4 gram sampel segar ditambahkan dengan 25 ml etanol dan dipanaskan diatas penangas selama 15 menit, kemudian disaring, lalu filtrat yang diperoleh dikeringkan sampai seluruh etanol menguap. Ekstrak etanol yang diperoleh ditambahkan masing masing 5 ml air suling dan CHCl 3, dikocok kuat dan dibiarkan beberapa saat sampai terbentuk dua lapisan. Lapisan air digunakan untuk pemeriksaan senyawa flavonoid dan saponin. Uji flavonoid dilakukan dengan cara menambahkan beberapa butir logam Mg dan lima tetes HCl pekat pada lapisan air, reaksi positif jika terjadi warna merah muda sampai merah. Uji saponin dilakukan dengan mengocok lapisan air dalam tabung reaksi, terbentuknya busa yang menetap selama 15 menit dan tidak hilang dengan penambahan HCl 2 N berarti positif adanya saponin. Lapisan CHCl3, digunakan untuk uji senyawa steroid, terpenoid, dan fenolik. Pada uji steroid dan terpenoid, lapisan CHCI 3  disaring dengan cara melewatkan larutan kedalam pipet kecil yang berisi norit, hasil yang diperoleh ditampung pada tiga lubang plat tetes. Filtrat dibiarkan mengering  pada plat p lat tetes, setelah kering ditambahkan asa m asetat anhidrat pada lubang  pertama, H2SO4  pekat pada lubang kedua serta asam asetat anhidrat dan H2SO4  pada lubang ketiga. Reaksi positif untuk terpenoid jika terbentuk warna merah, sedangkan positif untuk steroid jika terbentuk warna hijau

37

sampai biru. Uji fenolik dilakukan dengan menambahkan FeCl 3 pada lapisan kloroform dalam plat tetes. Reaksi positif untuk fenolik jika terbentuk warna ungu sampai biru.

3.3.3 Ekstraksi Akar Asam Kandis

Serbuk akar asam kandis (Garcinia ( Garcinia cowa Roxb.) diekstraksi dengan pelarut etanol 70% dengan metoda maserasi. Hasil ekstraksi tersebut diuapkan pelarutnya dengan rotary evaporator sehingga didapatkan ekstrak kental etanol akar asam kandis (Garcinia (Garcinia cowa Roxb.).

3.3.4 Fraksinasi Ekstrak Etanol Akar Asam Kandis

Ekstrak kental etanol akar asam kandis difraksinasi dengan 100 ml n-heksan dan 100 ml air dalam corong pisah, dikocok secukupnya. Setelah itu dibiarkan sampai terbentuk 2 lapisan yaitu lapisan n-heksan dan lapisan air. Perlakuan ini dilakukan beberapa kali pengulangan sampai lapisan n-heksan terlihat jernih sehingga diperoleh fraksi n-heksan dan fraksi air. Fraksi air kemudian di fraksinasi dengan 100 ml etil asetat dan 100 ml air dalam corong pisah, dikocok secukupnya. Setelah itu dibiarkan sampai terbentuk 2 lapisan yaitu lapisan etil asetat dan lapisan air. Perlakuan ini dilakukan beberapa kali pengulangan sampai lapisan etil asetat terlihat jernih sehingga diperoleh fraksi etil asetat. Hasil fraksi etil asetat diuapkan dengan rotary evaporator  sehingga didapatkan ekstrak kental.

38

3.3.5 Isolasi Senyawa Utama dari Fraksi Etil Asetat Akar Asam Kandis

Fraksi etil asetat akar asam kandis yang didapat dimonitor dengan KLT dengan eluen etil asetat : n-heksan 1:4 (Gambar 6 ). Untuk memisahkan komponen-komponen yang terdapat dalam fraksi etil asetat, maka dilakukan kromatografi kolom. Fraksi etil asetat dipreadsorbsi dengan cara melarutkannya dengan sedikit etil asetat kemudian ditambahkan silika gel BDH ukuran 63-200 μm  μm  (perbandingan 1:1) lalu diuapkan dengan menggunakan rotary evaporator sehingga membentuk serbuk. Fasa gerak yang digunakan adalah n-heksana, etil asetat, dan etanol. Untuk membuat bubur silica sebagai fasa diam pada kolom, silika gel disuspensikan dengan pelarut n-heksana. Setelah homogen bubur silika dikemas dalam kolom kromatografi yang pada ujungnya telah dilapisi kapas, hingga memadat. Setelah bubur silika padat, serbuk hasil preadsorbsi ditabur merata di atas permukaan bubur silika di dalam kolom kromatografi. Selanjutnya kolom dielusi dengan fasa gerak yang kepolarannya ditingkatkan secara bertahap. Hasil kromatografi kolom yang didapatkan ditampung dan dipekatkan dengan rotary evaporator . Fraksi ditampung dengan vial. Setelah proses elusi selesai, didapatkan subraksi sebanyak 33 botol (100ml) yang terdiri dari fraksi A (botol 1-3), fraksi B (botol 4-6), fraksi C (botol 7-9), fraksi D (botol 10-11), fraksi E (botol 12-13), fraksi F (vial 14-15), fraksi G (botol 16-17), fraksi H (botol 18-19), fraksi I (botol 20-21), fraksi J (botol 22-23), fraksi K (vial botol 24-25), fraksi L (botol 26-27), fraksi M (botol 28-29), fraksi fraksi N (botol 30-31), fraksi O (botol 32-33), Lalu di cek  pola KLT nya. nya. Vial dengan nilai Rf yang sama di gabung. gabung.

39

Tabel 2. Perbandingan komposisi eluen pada proses isolasi dengan menggunakan menggunakan kolom kromatografi pertama pert ama Heksana

Etil Asetat

Etanol

100%

-

-

9

1

-

4

1

-

1

1

-

1

2

-

1

4

-

1

9

-

100%

-

-

9

1

-

4

1

-

2

1

-

1

1

-

1

2

-

1

4

-

1

9 100%

Hasil Rf yang sama didapat pada fraksi F sampai H ( Fraksi FH ) yang memiliki 1 titik noda, Fraksi F sampai H digabung menjadi Fraksi FH. Fraksi FH yang didapat sebanyak 4 gram.

40

Fraksi FH selanjutnya di kromatografi kolom kolom lagi dengan dengan system elusi SGP. Didapatkan subfraksi FH sebanyak 144 vial yang terdiri dari: fraksi a (vial 1-4), fraksi b (vial 5-12), fraksi c (vial 13-20), fraksi d (vial 21-27), fraksi e (vial 2835), fraksi f (vial 36-43), fraksi g (vial 44-50), fraksi h (vial 51-57), fraksi i (vial 58-74), fraksi j (vial 75-82), fraksi k (vial 83-90), fraksi l (vial 91-98), fraksi m (vial 99-106), fraksi n (vial 107-115), fraksi o (vial 116-125), fraksi p (vial 126135), fraksi q (vial 136-144). Selanjutnya masing-masing fraksi dimonitor pola KLT nya, fraksi yang memiliki pola KLT yang sama digabung. Tabel 3. Perbandingan komposisi eluen pada proses isolasi dengan menggunakan menggunakan kolom ko lom kromatografi kedua Heksan

Etil Asetat

Metanol

100%

-

-

9

1

-

4

1

-

2

1

-

1

1

-

1

2

-

1

4

-

1

9

-

100%

-

-

9

1

-

4

1

-

2

1

-

1

1

41

-

1

2

-

1

4

-

1

9 100%

Hasil Rf yang sama didapat pada subfraksi FH-d pada vial 21-26 (FH-d1) dengan satu noda dengan tailing, namun setelah dilakukan KLT dua arah noda yang didapat menjadi empat noda sehingga masih harus dilakukan kromatografi kolom kembali. Sedangkan pada vial 27 (FH-d2) terdapat dua noda. Subfraksi FH-d2 kemudian dilakukan pemisahan dengan melarutkannya kembali dengan nheksan, heksan : etil dan etil asetat, selanjutnya dipisahkan bagian n-heksan n-heksan (FHd2-a), bagian heksan : etil (FH-d2-b) dan bagian etil asetat (FH-d2-c), kemudian dimonitor kembali dengan KLT dan didapat satu sat u noda FH-d2-b. Subfraksi FH-d2-b direkristalisasi menggunakan pelarut etil asetat dan nheksan didapat kristal jarum berwarna putih dan tidak berbau sebanyak 93 mg.

3.3.6. Karakterisasi Karakterisasi Senyawa Senyawa

Karakterisasi senyawa hasil isolasi meliputi pemeriksaan organoleptis,  pemeriksaan kimia, kelarutan, titik leleh, kromatografi dan kemudian pemeriksaan fisikokimia dengan spektrofotometer infra merah dan spektrofotometer UV-Vis (Fessenden, 1982; Gritter et al ., ., 1991). 1.

Pemeriksaan Organoleptis Penggunaan panca indera mendiskripsikan bentuk, warna, bau, dan rasa (Departemen Kesehatan, 2000).

42

2.

Penentuan jarak leleh Pemeriksaan dilakukan dengan menggunakan alat pengukur titik leleh  Fischer John Melting Apparatus. Beberapa butir zat diletakkan diantara dua kaca objek, kemudian diletakkan dibawah pemanas, dibawah kaca  pembesar dan diatur kenaikan suhunya. Amati perubahan fisik zat dan catat suhu awal meleleh sampai zat tersebut meleleh sempurna.

3.

Pemeriksaan Kromatografi Lapisan Lapisa n Tipis Tipis Pemeriksaan KLT dilakukan untuk menunjukkan kemurnian dan  penentuan Rf dari senyawa hasil isolasi iso lasi dengan beberapa fasa gerak yang sesuai. Sebagai penampak noda digunakan lampu UV 254nm dan UV365nm.  Noda yang terlihat dibawah UV UV diukur Rf nya.

4.

Penentuan Spektrum UV Pemeriksaan spektrum UV dilakukan dengan alat spektrofotometer UVVis Pharsamec 1700. Senyawa hasil isolasi dilarutkan dalam metanol, kemudian diukur serapannya.

5.

Spektrofotometer Inframerah Spektrum IR diukur dengan alat infrared spektrofotometer perkin elmer  spectrum one. one. kira kira 1 mg sampel digerus homogen dengan 100 mg Kalium Bromida. Campuran dikempa dengan kekuatan 10 ton/cm, sehingga terbentuk sebuah pellet yang tipis dan transparan, kemudian diukur serapannya.

43

IV.

4.1

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil Penelitian

1. Pemeriksaan pendahuluan terhadap akar asam kandis (Garcinia ( Garcinia cowa Roxb.) menunjukkan adanya kandungan steroid, fenolik dan flavonoid (Lampiran 3, Tabel 4). 2. Dari hasil pengeringan dan penghalusan sampel segar akar asam kandis (Garcinia cowa Roxb.) 2 kg didapat serbuk ker ing sebanyak 900 gram. 3. Sebanyak 900 gram sampel diekstraksi sehingga didapat ekstrak etanol sebanyak 70,2 gram. Ekstrak etanol yang digunakan untuk fraksinasi sebanyak 50 gram, didapatkan fraksi etil asetat sebanyak sebanyak 33,3 gram. 4. Dari isolasi terhadap 15 gram fraksi etil asetat diperoleh senyawa FH-d2-b, a. Senyawa FH-d2-b berbentuk kristal jarum berwarna putih, tidak memiliki rasa dan bau sebanyak 93 mg,  b. Senyawa FH-d2-b larut dalam n-heksan n-heksan dan etil asetat, c. Senyawa FH-d2-b memiliki titik leleh 128° C - 130° C, d. Pemeriksaan spektrum UV senyawa FH-d2-b memperlihatkan serapan maksimum pada panjang gelombang 285,20 nm (Abs = 0,227) (Lampiran 9, gambar 9, tabel 6), e. Pemeriksaan spektrum inframerah menunjukkan serapan yang kuat pada daerah bilangan gelombang 3307,65 cm -1  – 3430,82  –  3430,82 cm-1; 2940,33 cm -1 ; -1

-1

-1

1368,08 cm  –  1452,05  1452,05 cm ; dan 965,69 cm .

44

4.2

Pembahasan

Penelitian diawali dengan pengambilan sampel segar berupa akar asam kandis. Selanjutnya akar asam kandis tersebut dibersihkan dari pengotor, diiris, dijemur dengan cara dikering anginkan dan dihaluskan sehingga didapat serbuk akar asam kandis. serbuk tersebut ditimbang kembali agar dapat diketahui berat akhir sampel. Pada pemeriksaan pendahuluan kandungan kimia akar asam kandis diketahui  bahwa uji terhadap flavonoid, fenolik, dan steroid adalah positif. Secara umum genus  garcin  garcinia ia   mengandung senyawa-senyawa yang termasuk dalam golongan flavonoid, steroid, fenolik sehingga hasil pemeriksaan pendahuluan tersebut sesuai dan diperkirakan senyawa hasil isolasi ini berada dalam golongan tersebut. Proses ekstraksi yang digunakan terhadap sampel ini yaitu maserasi. Metode maserasi ini digunakan karena akar asam kandis (Garcinia (Garcinia cowa Roxb.) mengandung senyawa yang tidak tahan panas yaitu flavonoid (Gupita, C.N. dan A. Rahayuni, 2012). Maserasi dilakukan selama 5-7 hari karena bahan tanaman yang digunakan adalah akar yang memiliki tekstur keras sehingga dibutuhkan waktu yang lebih lama bagi pelarut untuk menarik senyawa yang terkandung dalam akar asam kandis (Garcinia ( Garcinia cowa Roxb.). Selanjutnya dilakukan remaserasi sebanyak 2 kali lagi selama 4 hari. Pelarut yang digunakan dalam maserasi ini adalah etanol, karena etanol  bersifat polar dan dapat melarutkan alkaloid basa, minyak atsiri, glikosida, kurkumin, kumarin, antrakinon, flavonoid, steroid, dammar dan klorofil. Lemak, malam , tanin dan dan saponin hanya sedikit sedikit larut. Dengan demikian demikian zat pengganggu yang terlarut hanya terbatas.

45

Farmakope Indonesia menetapkan bahwa sebagai cairan penyari adalah air, etanol, etanol-air etanol-air atau eter. eter. Etanol dipertimbangkan sebagai penyari karena lebih selektif, kapang dan kuman kuman sulit tumbuh dalam dalam etanol 20% keatas, tidak beracun, beracun, netral, absorbsinya baik,

etanol dapat dapat bercampur dengan dengan air pada segala

 perbandingan dan panas yang yang diperlukan untuk pemekatan pemekatan lebih sedikit. Maserat yang didapat dari tiga kali maserasi digabungkan dan diuapkan dengan rotary evaporator   dengan suhu tidak lebih dari 50 °C. Sehingga didapat ekstrak kental etanol yang berwarna coklat pekat sebany sebanyak ak 70,2 gram. Sebanyak 50 gram ekstrak kental etanol tersebut dilakukan proses fraksinasi menggunakan corong pisah untuk memisahkan komponen-komponen senyawa  berdasarkan dengan tingkat kepolaran masing-masing. Pada peneli penelitian tian ini fraksi yang akan digunakan adalah fraksi semi polar. Fraksinasi dimulai dari pelarut nonpolar sampai pelarut polar. Penarikan senyawa nonpolar digunakan n-heksan dan penarikan senyawa semipolar digunakan etil asetat, sedangkan senyawa polar tertinggal pada fraksi air. Fraksi yang didapat dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator . Penggunaan rotary evaporator  akan   akan memperluas daerah penguapan dan adanya sumber panas yang membantu penguapan. Setiap fraksi yang didapatkan dimonitor dengan KLT untuk mengetahui komponen yang terdapat pada fraksi tersebut. Fraksi yang akan digunakan adalah fraksi etil asetat akar asam kandis (Garcinia (Garcinia cowa Roxb.). Sebelumnya dilakukan  penentuan jenis eluen yang paling baik pemisahannya dengan mencoba berbagai berbaga i  pelarut dengan berbagai perbandingan dan diperoleh perbandingan per bandingan nn-heksan heksan : etil asetat (4:1) sebagai eluen yang paling baik pemisahannya. Pola KLT diamati

46

dengan lampu UV 254  nm dan UV 365  nm. nm. Fraksi hasil monitor monitor menunjukkan menunjukkan pola KLT yang baik dengan menunjukan adanya 8 noda. Selanjutnya dilanjutkan dengan

proses

pemisahan

terhadap

noda-noda

tersebut

menggunakan

kromatografi kolom. Proses isolasi kandungan kimia fraksi etil asetat dilakukan dengan kromatografi kolom. Sistem elusi yang digunakan adalah sistem kepolaran  bertingkat (SGP/System (SGP/ System Gradient Polarity) Polarity) yang dimulai dengan pelarut nonpolar (n-heksan) untuk membebaskan lemak dan lilin yang masih ada pada sampel hingga pelarut polar metanol (Gritter et al ., ., 1991). Subfraksi yang keluar ditampung dalam vial. Setelah proses elusi selesai, didapatkan subfraksi FH dengan nilai RF yang sama yaitu 0,8269 yang memiliki 1 titik noda sebanyak 4 gram. Fraksi FH selanjutnya di kromatografi kromatografi kolom lagi dengan system elusi SGP. SGP. Didapatkan subfraksi FH-d dengan nilai Rf yang sama. Dari hasil KLT dengan λmax  365nm diketahui pada subfraksi FH-d2-b terdapat satu titik noda. Selanjutnya subfraksi FH-d2-b direkristalisasi menggunakan pelarut etil asetat : n-heksan n-heksan dan didapat kristal berwarna putih dan tidak berbau sebanyak 93 mg. Dari hasil isolasi senyawa kimia dari fraksi etil asetat kulit buah asam kandis (Garcinia cowa  cowa  Roxb.) ini didapatkan senyawa FH-d2-b. Senyawa FH-d2-b memiliki 1 titik noda dibawah UV dengan panjang gelombang 365 nm (eluen heksan : etil (4:1)) (Lampiran 7, Gambar 7). Dari karakterisasi senyawa dengan menggunakan parameter jarak leleh didapat data bahwa senyawa ini meleleh pada suhu 128 °C - 130°C. Berdasarkan data ini diketahui bahwa senyawa ini memiliki jarak leleh yang tajam yaitu

47

 berkisar 1°C - 2°C, ini menunjukkan bahwa senyawa hasil isolasi telah murni. Jarak leleh ini dicatat saat senyawa mulai meleleh sampai semua senyawa habis meleleh. Karakterisasi senyawa dilakukan dengan menggunakan spektrofotometer ultraviolet dan spektrofotometer infrared . Analisis dengan spektrofotometer ultraviolet dilakukan pada panjang gelombang 200  –   400 nm. Informasi yang didapat dari analisis ini adalah spektrum UV senyawa FH-d2-b dalam pelarut metanol menunjukkan adanya serapan maksimum yaitu pada λmax 285,20 nm. Berdasarkan pita serapan yang diperoleh menunjukkan adanya kromofor yang memberikan transisi elektron dari π ke π* sehingga kemungkinan senyawa hasil isolasi mempunyai kromofor dengan ikatan rangkap terkonjugasi, karena sistem terkunjugasi ini menyerap cahaya pada panjang gelombang diatas 200 nm. Pada spektrum IR pita-pita yang terbentuk akan menunjukkan gugus fungsi apa saja yang terdapat didalam senyawa FH-d2-b tersebut. Pita yang muncul pada  bilangan gelombang ge lombang 3307,65 cm -1 - 3430,82 cm -1 diduga berasal dari gugus O  –  H, pada bilangan gelombang 2940,33 cm -1 diduga berasal dari regangan C  –  H -1

 pada alkana, pada bilangan gelombang ge lombang 1649 cm  diduga berasal dari gugus C = C, pada bilangan bilangan gelombang 1368,08 cm -1 - 1452,05 cm-1  diduga berasal dari tekuk C  –   H pada alkana, dan pada bilangan gelombang 965,69 cm -1  diduga  berasal dari lentur C –  C –  H  H pada Alkena. Dari hasil KLT, bentuk kristal, titik leleh, spektrum UV dan spectrum IR senyawa FH-d2-b ini diduga merupakan fitosterol.

48

II.

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil dari KLT dengan senyawa pembanding, bentuk kristal, titik leleh, spektrum UV dan spektrum IR didapat senyawa hasil isolasi yaitu senyawa FHd2-b sebanyak 93 mg berbentuk kristal jarum berwarna putih. Berdasarkan data-data yang diperoleh tersebut dapat disimpulkan bahwa senyawa FH-d2-b merupakan golongan fitosterol.

5.2 Saran

Disarankan kepada peneliti selanjutnya untuk mengisolasi senyawa-senyawa lain yang terdapat dalam fraksi etil asetat akar asam kandis (Garcinia (Garcinia cowa Roxb.).

49

DAFTAR PUSTAKA

Adnan, M. 1997. Teknik Kromatografi Untuk Analisis Bahan Makanan. Yogyakarta: Penerbit Andi. Ampofo, Stephen, A. dan Waterman, P. G. 1986. Xanthones From Three Garcinia Species, Garcinia Species, Phymchmistry  Phymchmistry,, 25,10: 2351-2355 2351-2355 . Arsyad, M. Natsir. 2001.  Kamus Kimia Arti dan Penjelasan Istilah I stilah.. Jakarta: Gramedia. Chumaidah, N.F dan Ersam, T. 2006. Isolasi Senyawa Kumarin dari Fraksi Polar Pada Ekstrak Etil Asetat Garcinia balica Miq. Miq. (Mundu Alas). Alas) . Surabaya: ITS. Depkes RI. 1979. Farmakope 1979.  Farmakope Indonesia Indonesia Edisi Ketiga. Ketiga . Jakarta: Depkes RI Fessenden, R.J dan Fessenden, J.S. 1982. Kimia 1982.  Kimia Organik 1. 1. Jakarta: Erlangga. Gritter, R. J., Bobbit, J. M. and Schwarting, A. E., 1991.  Pengantar  Kromatografi, ed. 2. 2. Bandung: Penerbit ITB. Gupita, C. N. dan A. Rahayu. 2012. Pengaruh Berbagai pH Sari Buah dan Suhu Pasteurisasi Terhadap Aktivitas Antioksidan dan Tingkat Penerimaan Sari Kulit Buah Manggis. Journal Manggis.  Journal of Nutrition College Vol.1(1): Vol.1(1): 67-79. 67-79. Harbone, J. B. 1987.  Metode Fitokimia:  Menganalisis Tumbuhan. Bandung: Bandung: Penerbit ITB.

Penuntun Cara Modern

Heyne, K. 1987. Tumbuhan Berguna Indonesia. Indonesia . Jilid III. Jakarta: Yayasan Sarana Wana Jaya. Houghton, P.J. and Raman, A. 1998.  Laboratory Handbook for the  Fractionation of Natural Extracts. Extracts. 1st Ed. New York: Chapman and Hall. Ilham, M., Yaday dan Norhanom, A. W. 1995. Tumor promoting activity of  plants used in Malaysian tradisional medicine, Nat. medicine, Nat. PrioSci, PrioSci, 1:31-42. Ismiarni, 2008. Kenapa Isolasi dan Identifikasi Senyawa Kimia dari Tumbuhan itu Penting. Diakses pada tanggal 21 Juni 2016 dari https://ismiarni.wordpress.com/2008/12/05/. Ito, C., Itoigawa, M., Takakura, T., Ruangrungsi, N., Enjo, F., Tokuda,H.,  Nishino, H., Furukawa, H., 2003. Chemical Constituents of Garcinia fusca: fusca: Structure Elucidation of Eight New Xanthones and their Cancer Chemopreventive Activity. J. Activity. J. Nat. Prod . 66, 200 – 205. 205. J. Shen dan J. Yang. 2007. Chemical constituents of branch of Garcinia cowa Roxb. Zhongcaoyao Roxb. Zhongcaoyao;; 38, 993-994. 993-994 .

50

Jayaprakasha, G.K., Jagan Mohan Rao L., Varadaraj, M.C., 2004. A Process for Isolation of Cambogin from Garcinia cowa. cowa. Indian  Indian Patent . 519/DEL/04 Kenji, M., Yukihiro, A., Emi, K., Tetsuro, I., Kenji, O., Toshiyuki, T., Munekazu, I. and Yoshinori, N. 2003. Cytotoxic Benzophenone Derivates From Garcinia  Garcinia  Species Display a Strong Apoptosis-inducing Effect Against Human Leukimia Cell Lines. Bird Lines. Bird Pharm Ball.26: Ball.26: 569-571. Likhiwitayawuid, K. T., Padungchareon, C. and Krungkai, J. 1988. Antimalaria xanthones from Garciniacowa, Garciniacowa, Plants Med, 64:70-72. Likhiwitayawuid, K. T., Padungchareon, C., Mahidol and Ruchirawat, S. 1997. 7-O-Methylgarcinone E from Garcinia cowa. Phytochemistry,  Phytochemistry,  45:12991301. Mulja, M., Suharman. 1995.  Analisis Instrumental . Surabaya: Airlangga University Press. Murakami, A., Jiwajinda, S., Kohimizu, K. and Ohigasi, H.. 1995. Screening for in vitro Anti-tumor promoting Activities of Edible Plants from Thailand Cancer let. Journal let. Journal of Medicinal Plants Research, Research, 95:137-146.  Nanasombat, S and Teckchuen, N. 2009. Antimicrobial, antioxidant and anticancer activities of Thai local vegetables vegetables.. Journal of Medicinal Plants  Research.,  Research., 3,5: 443-449.  Na Pattalung, P., Thongtheeraparp, W., Wiriyachitra , P. and Taylor, W.C. 1994. Xanthones of Garcinia cowa. cowa. Planta Med , 60: 365-368.  Nilar, L., Harrison, L.J. 2002. Xanthones from the Heartwood of Garcinia mangostana. mangostana. Phytochemistry. 60, 541 – 548. 548. Panthong, K, Pongcharoen, Pongcharoen, W., Phongpaichit, Phongpaichit, W. and Taylor, W.C. W.C. 2006. Tetraoxygenated Xanthones from The Fruit of Garcinia cowa. cowa.  Phytochemistry,  Phytochemistry, 67: 999-1004. Pardede, Antoni., Manjang, Yunazar. dan Efendi, Mai. 2012. Isolasi Kumarin dari Kulit Batang Manggis (Garcinia cymosa). cymosa). Padang: UniversitasAndalas. Peres, V., Nagem, T.J. and Fernando, O. 2000. Tetraoxygenated Naturally Ocucuring Xanthones. Xanthones. Phytochemistry. Phytochemistry. 55: 683-710. Ramanthan, R., Than, C. H., and Das, N. P., 1992. Cytotoxic Effect of Plant Polyphenols and Fat Soluble Vitamins on Malignant Human Cultured Cells. Cancer Letters 62: 217 –  217  –  224  224 Rao, R.R. 1997.  Ethnobotany of Meghalaya medicinal plants used by kashi and garo tribes of Meghalaya. Meghalaya . northes, India. Ritthiwigrom, Thunwadee., Payne, Stephen G., and Laphookhieo, Surat. 2013. Chemical Constiuents and Biological Activities of Garcinia cowa Roxb.  Maejo International Journal of Science and Technology. 7(02): 212-231.

51

Rukachaisirikul, V., Trisuwan, K., Sukpondma, Y. and Phongpaichit, S. 2008. A New Benzoquinone Derivate From The Leaves Garcinia parvifolia. parvifolia. Arch  Pharm Res. Res. 31: 17-20. Sadaquat, A., Renee, G., Subramaniam, Subramaniam, S., Bleaulieu, Bleaulieu, C. and Spino, C. 2000. Benzophenone of Garcinia pseudoguttifera  pseudoguttifera  (Clusiaceae).  Phytochemistry.   Phytochemistry.  53: 281-284. Sastrohamidjojo, H. 2002. Kimia 2002.  Kimia Dasar . Yogyakarta: Gajah Mada University Press. Sen, A.K., Sarkar, K.K., Mazumder, P.C., Benerii, N., Uusvuori, R., and Hase, T.A., 1980. A Xanthones from Garcinia mangostana. mangostana .  Phytochemistry.  Phytochemistry. 19, 2223 – 2225. 2225. Sen, A.K., Sarkar, K.K., Mazumder, P.C., Benerji, N., Uusvuori, R., Hase, T.A., 1982. The Structure of Garcinones A, B and C: Three New Xanthones from Garcinia mangostana. Phytochemistry. Phytochemistry . 21 (7), 1747 – 1750. 1750. Silverstain, R. M., Bassler, G.C., Morril, T.C., 1991. Spectrometric,  Identification of Organic Compounds, Compounds, 5th ed . New York: John Wiley and Sons. Tjitrosoepomo, G. 1993. Taksonomi Yogyakarta: Gajah Mada University Press.

tumbuhan

(Sphermatophyta).

Wahyuni, F. S., Byrne, L. T., Dachriyanus, Dianita, R., Jubahar, J., Lajis, N. H. and Sargent, M. V. 2004. A New Ring-Reduced Tetraprenyl toluquinone and a  prenylated xanthone from Garcinia cowa. cowa. Aust.  Aust. J. Chem., Chem., 57: 223-226. Waterman, PG. and Hussain, RA. 1983. Systematic Significance of Xanthones, Benzophenone and Biflavonoids in Garcinia. Biochem Syst Ecol . 11:21-28. Whitmore, T C. 1973. Tree Flora of Malaysia, A manual for foresters vol. 2. 2. Forest Department Ministry of Primary Industries Malaysia, Longman group Limited, p. 208.

52

Lampiran 1. Identifikasi tumbuhan Asam Kandis

Gambar 3. Surat Identifikasi Asam Kandis (Garcinia ( Garcinia cowa co wa Roxb.) dari Herbarium Biologi Universitas Andalas.

53

Lampiran 2. Tumbuhan Asam Kandis

Gambar 4. Tumbuhan Asam Kandis ( Garcinia cowa Roxb.) Roxb. )

54

Gambar 5. Akar Tumbuhan Asam Kandis ( Garcinia cowa Roxb.)

55

Lampiran 3. Pemeriksaan Pendahuluan Kandungan Kimia dari Akar Asam Kandis (Garcinia cowa Roxb.)

Tabel 4. Hasil pemeriksaan pendahuluan pe ndahuluan kandungan kandungan kimia dari akar asam kandis (Garcinia cowa Roxb.) cowa Roxb.)

No

Kandungan Kimia

Pereaksi

Hasil

1

Alkaloid

Mayer

-

2

Flavonoid

HCl

+

3

Steroid

Asetat anhidrat:H2SO4 Pekat

+

4

Saponin

Air/Busa

-

5

Fenolik

FeCl3

+

Keterangan:

+ : Bereaksi - : Bereaksi

56

Lampiran 4. Skema Ekstraksi dan Fraksinasi Akar Asam Kandis ( Garcinia cowa Roxb.)

Skema Ekstraksi dan Fraksinasi Akar Asam Kandis (Garcinia ( Garcinia cowa Roxb.) 2 kg akar Garcinia cowa -

Bersihkan dari pengotor Kering anginkan selama ± 5 hari Haluskan hingga berbentuk serbuk

900 gram serbuk akar Garcinia cowa Maserasi dengan EtOH 70% (10  bagian simplisia simplisia + 75 bagian bagian cairan  penyari) selama selama 3 hari

ampas

Ektrak EtOH Uapkan dengan rotary evaporator  Ekstrak Kental etanol akar Asam Kandis fraksinasi + air + n-heksan

Fraksi n-Heksan

Fraksi Air fraksinasi + EtoAc

Fraksi Etil Asetat

Fraksi Air Sisa

Uapkan dengan  Rotary evaporator  evaporator 

Ekstrak kental fraksi Etil Asetat Akar asam Kandis (G. Cowa)

57

Lampiran 5. Isolasi dan Pemurnian Senyawa dari Akar Asam Kandis (Garcinia cowa Roxb.)

Skema Isolasi dan Pemurnian Senyawa dari Akar Asam Kandis (Garcinia ( Garcinia cowa co wa Roxb.) Ekstrak kental fraksi Etil Asetat Akar Asam Kandis (G. (G. Cowa) -

Kromatografi Kromatografi Kolom (n-Heksan, Etil Asetat, EtOH)

Fraksi A-O -

KLT Gabung Fraksi dengan Pola KLT sama

Fraksi F-H -

Kromatografi Kromatografi kolom (n-heksan, -heksan, etil asetat, EtOH) KLT

Fraksi FH-a sampai Fraksi FH-q -

KLT Gabung Fraksi dengan Pola KLT sama

Fraksi FH-d

Subfraksi FH-d1

Subfraksi FH-d2

Fraksi FH-d2-b -

Rekristalisasi KLT

Karakterisasi (Titik Leleh, Spektro UV, Spektro IR)

Senyawa FH-d2-b

58

Lampiran 6. Karakterisasi dan Pemeriksaan Sifat Fisika Senyawa Hasil Isolasi

Tabel 5. Karkterisasi dan Sifat Fisika Senyawa FH -d2-b Karakteristik Karakteristik

Senyawa Hasil Isolasi

Bentuk

Kristal Jarum

Warna

Putih

Bau

Tidak Berbau

Jarak Leleh

128°-130° C

Kelarutan

Larut dalam n-heksan Larut dalam etil asetat

59

Lampiran 7. Hasil Kromatografi Lapis Tipis Senyawa Hasil Isolasi

Gambar 6. Foto Pola KLT fraksi Etil Asetat (eluen n-heksan : EtoAc (4:1)) dengan UV254nm

Gambar 7. Foto KLT senyawa FH-d2-b dengan UV365nm fase gerak (etil : nheksan)(1:4)

60

Lampiran 8. Senyawa FH-d2-b

Gambar 8. Foto senyawa FH-d2-b

61

Lampiran 9. Spektrum UV senyawa FH-d2-b

Gambar 9. Spektrum UV senyawa FH-d2-b dalam pelarut metanol

Table 6. Data Spektrum UV senyawa FH-d2-b Kode

λ max max (nm)

Abs

1

327,60

0,144

2

285,20

0,227

62

Lampiran 10. Spektrum IR dan Data Spektro IR Senyawa FH-d2-b

Gambar 10. Spektrum IR Senyawa FH-d2-b

Tabel 7. Data Spektrum IR senyawa FH-d2-b Daerah spektrum, Bilangan gelombang (cm-1)

3307,65 cm

-1

Jenis Ikatan

-1

- 3430,82 cm

gugus O –  O –  H  H

-1

regangan C –  C – H H pada Alkana

2940,33 cm -1

gugus C = C

1649 cm -1

1368,08 cm   - 1452,05 cm

-1

tekuk

965,69 cm-1

C –  C – H H pada Alkana

Lentur C – H  – H pada Alkena

63

Lampiran 11. Pola KLT Senyawa FH-d2-b FH-d2- b dan senyawa pembanding ββSitosterol Sitosterol dan Stigmasterol

Gambar 11. Pola KLT Senyawa FH-d2- b FH-d2- b (tengah), senyawa senyawa pembanding ββsitosterol (kiri) dan stigmasterol (kanan) dengan menggunakan penampak noda vanilin 10% - asam sulfat 2N

Keterangan : Rf dari dar i ketiga senyawa diatas dengan menggunakan menggunakan eluen n-heksan : etil asetat (9 : 1) adalah 0,16

64