Rosella

28

11.

Tabung ditutup dan disentrifus selama 30 menit, 1350 rpm pada suhu kamar sehingga terbentuk empat lapisan berturut-turut dari bawah ke atas adalah eritrosit dan granulosit, cairan Ficoll , limfosit dan cairan plasma.

12.

Cairan plasma, limfosit, dan  Ficoll Hypaque Gradient   dibuang dengan menggunakan pipet mikro.

13.

Lapisan terbawah yang mengandung netrofil diresuspensi dengan 6 cc HBSS

14.

Menyiapkan dextran 6% sebanyak 1 cc dalam tabung falcon lain.

15.

Darah yang sudah diresuspensi dialirkan ke dalam tabung berisi dextran  dan dilakukan pipetting.

16.

Dicampurkan dan kemudian didiamkan selama 90 menit.

17.

Supranatan mengandung netrofil diaspirasi.

18.

Ditambahkan HBSS sebanyak 1-2cc, divortex, dan disentrifugasi 1700 rpm selama 10 menit (dilakukan sebanyak 2 kali).

19.

Lapisan paling atas dibuang dengan menggunakan pipet mikro.

20.

Resuspensi dengan RPMI sampai 500 µl.

21.

Dilakukan pembuatan hapusan dan pewarnaan.

3.6.2

Pelaksanaan Penelitian

a)

Perlakuan Uji Indeks Adhesi

1.

6 coverslip yang telah disterilkan dalam laminar flow  diletakkan dalam 6  petridish kecil.

2.

 Netrofil kemudian ditapiskan pada masing masing coverslip masing-masing 0

50 µl kemudian diinkubasi selama 15 menit, 37 C dan 5% CO2. 3.

Dilakukan pengecekan di bawah mikroskop inverted.

4.

Jika konsentrasi netrofil terlalu padat, dilakukan pencucian kembali dengan RPMI sampai didapatkan konsentrasi yang tidak terlalu padat dan menyebar

5.

Ditambahkan 1000 µl RPMI, kemudian pipetting.

6.

Diinkubasi selama 15 menit.