Penerapan suatu metode HPLC Dioptimalkan untuk Deteksi Berbagai fenolik Senyawa Penerapan di Apples dari Kultivar Lithuania Mindaugas Liaudanskas, 1 Prana Viškelis, 2 Valdas Jakštas, 1 Raimondas Raudonis, 1Darius Kviklys, 2 Arvydas Mil ašius, 1 dan Valdimaras Janulis Jurnal yang meneliti tentang distribusi senyawa fenolik dalam apel dari kultivar Lithuania populer Apel. Kultivar apel berikut dimasukkan dalam penelitian ini: “Aldas,” “Auksis,” “Ligol,” dan “ Sampion “ Sampion””. Apel dipanen pada tahun 2011. Sampel yaitu 20 buah apel matang dari masing-masing kultivar. Sampel kemudian diekstraksi, deng an cara s ejumlah 2,5 g serbuk apel liofilisasi ditimbang, ditambahkan ke 30 mL etanol (70%, v / v), dan diekstraksi dalam Sonorex Digital 10 P mandi ultrasonik (Bandelin Electronic GmbH & Co KG , Berlin, APK banyak) selama 20 menit pada 40o C.
Identifikasi puncak kromatografi dicapai dengan membandingkan waktu retensi dan karakteristik spektral ( λ = = 200 - 600 nm) dari puncak eluting. Untuk analisis kuantitatif, kurva kalibrasi diperoleh dengan suntikan konsentrasi senyawa standar yang berbeda. Konsentrasi senyawa fenolik yang diidentifikasi dalam ekstrak apel berada dalam batas-batas kurva kalibrasi. Dihydrochalcones dan flavan-3-ols yang diukur pada 280 nm, asam fenolik pada 320 nm, dan flavonol pada 360 nm. ekstraktan paling umum digunakan untuk penyarian glikosida flavonoid, aglikon yang lebih polar dari itu, dan asam fenolik kutub aremethanol, adalah et anol, aseton, dan berbagai campuran pelarut tersebut dari berbagai konsentrasi. Untuk mengevaluasi efek dari ekstraktan pada ekstraksi flavonoid, sampel apel lyophilized yang dimaserasi selama 4 jam dalam gelap, dan kandungan total flavonoid ditentukan dengan menggunakan spektrofotometri. Ekstraktan yang dipilih untuk penelitian ini adalah metanol, etanol, dan aseton, digunakan pada berbagai konsentrasi. Hasil peneliti an menunjukkan bahwa etanol 70% (v / v) mengekstraksi flavonoid dengan kandungan tertinggi (2,7 ± 0,1 mg RE / g) ( Gambar 1). 1). Ekstraktan ini dipilih untuk analisa lebih lanjut. Jumlah kandungan flavanoid terbanyak dengan waktu maserasi 24 jam.
Gambar 1: Isi total flavonoid dalam sampel apel, menggunakan ekstraktan pada berbagai konsentrasi.
Gambar 2: Total diekstrak kandungan flavonoid ketika maserasi sampel apel pada interval waktu yang berbeda.
Gambar 3: total diekstraksi kandungan flavonoid ketika penggalian sampel apel dalam bath USG pada interval waktu yang berbeda pada suhu 20-40 o C. Output ekstraksi terbesar ( 4.1 ± 0,2 mg RE / g) diamati setelah ekstraksi sampel apel untuk 20 menit pada suhu 40 C ( Gambar 3 ). Hasil analisis menunjukkan bahwa jumlah terbesar dari flavonoid ( 4.1 ± 0,2 mg RE / g) dari sampel apel lyophilized diekstraksi dengan etanol 70% (v / v) dalam bath USG setelah 20 menit dari ekstraksi pada suhu 40 C. Kondisi ini dipilih untuk analisa lebih lanjut. ∘
∘
Tabel 1: Karakteristik evaluasi kuantitatif senyawa fenolik HPLC dan spektrofotometri UV-Vis
serapan adalah metode yang paling banyak digunakan Tabel 3: Isi dari senyawa fenolik dalam ekstrak etanol yang diperoleh dari apel kultivar ditanam di Lithuania (dinyatakan untuk mutlak berat lyophilizate kering). Dalam penelitian ini, metode HPLC dikembangkan, dioptimalkan, dan divalidasi diterapkan untuk menyelidiki ekstrak etanol sampel apel lyophilized. Isi komponen fenolik dalam apel kultivar “Aldas,” “Auksis,” “Ligol,” dan “Sampion” adalah dianalisis secara kualitatif dan kuantitatif. Sebuah contoh dari kromatogram ekstrak etanol sampel buah apel ditunjukkan pada Gambar 5 , dan tabel 3 merangkum karakteristik isi kuantitatif.
Gambar 5 Senyawa-senyawa berikut kelompok fenolik yang berbeda diidentifikasi dalam ekstrak etanol diselidiki: procyanidin B1, (+) - katekin, asam klorogenat, procyanidin B2, ( -) - epicatechin, rutin, hyperoside, isoquercitrin, avicularin, quercitrin, dan phloridzin. Asam Neochlorogenic, asam galat, furfural 5-hidroksimetil, asam sinapic, isorhamnetin-3- HAIglukosida, asam rosmarinic, asam transcinnamic, eupatorin-5- metil eter, sinensetin, dan asam protocatechuic dalam apel atau produk mereka terdeteksi oleh penulis la in [ 17 . 28 - 30 ], Tapi mereka tidak ditemukan dalam ekstrak dianalisis. asam klorogenat adalah komponen utama dalam apel dari kultivar “Aldas,” “Auksis,” dan “Ligol” asam ini memiliki sifat penting bagi kesehatan manusia. aktivitas antioksidan, aktivitas Anti-inflamasi, Pengurangan risiko diabetes tipe 2, Peningkatan fungsi kardiovaskular, Dan penghambatan proses karsinogenik genesis. Apel dari cv tersebut. “Aldas” yang terdapat konsentrasi tertinggi asam klorogenat, dan itu 6.5- kali lipat
lebih besar dari yang di apel dari cv tersebut. “Sampion” (Tabel 3 ). Hasil mengkonfirmasi temuan dari penelitian lain yang menunjukkan bahwa asam klorogenat dalam apel adalah salah satu dari senyawa fenolik yang paling umum` Prosedur analitis berbasis HPLC untuk penentuan senyawa fenolik dalam sampel apel dari 4 populasi kultivar dioptimalkan dan divalidasi. Kekhususan, presisi, dan pengujian range mengkonfirmasi kesesuaian metode ini. Pemeriksaan sampel apel mengungkapkan pembagian 11 kelompok yang berbeda dari senyawa fenolik penting bagi kesehatan manusia. Asam klorogenat adalah komponen utama dalam kultivar “Aldas,” “Auksis,” dan “Ligol” dan pr ocyanidin B2 di cv. “Sampion.” Hyperoside dan avicularin adalah senyawa yang dominan di antara semua derivatif quercetin yang diidentifikasi dalam apel dari kultivar “Aldas” dan “Auksis;” hyperoside di cv tersebut. “ Sampion;”dan quercitrin di cv. “Ligol.”