LAPORAN PRAKTIKUM FARMAKOLOGI PERCOBAAN HEMOSTATIK PADA MENCIT
Oleh: Kevin Young
021311133001
Aprodita Permata Y.
021311133004
Asarizka Bena
021311133005
Aulia Fitri J.
021311133006
Khamila Gayatri T.
021311133007
Viona Media T.
021311133008
Desi Putri B.
021311133009
Essy Rodherika
021311133010
Fevy Syendra L.
021311133014
Putri Mlinda I.
021311133015
Rr. Dwi Listyorini
021311133016
Sigit Indarto
021311133030
DEPARTEMEN BIOLOGI ORAL FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI UNIVERSITAS AIRLANGGA 2015
BAB 1 Pendahuluan 1.1 Latar Belakang Darah, the liquid of life, merupakan suatu cairan transportasi yang terdapat di dalam suatu pembuluh dan dipompa oleh jantung menuju ke seluruh tubuh dan kembali menuju jantung lagi. Fungsi utama dari darah adalah mengangkut oksigen yang diperlukan oleh berbagai jaringan pada seluruh tubuh manusia. Darah terdiri dari 2 bagian, yaitu plasma darah dan sel-sel darah. Secara normal, darah memiliki kemampuan untuk menutup luka (koagulasi / hemostasis). Ketika bersirkulasi, pembuluh darah memproduksi semacam antikoagulan untuk mencegah darah menggumpal. Adanya gangguan pada sifat hemostasis pada darah ini dapat mengganggu sistem transportasi dalam tubuh makhluk hidup. Untuk menangani gangguan tersebut, maka dibuatlah berbagai macam obat-obatan yang mempengaruhi sifat koagulasi dari darah (Rogers, 2011). Pada praktikum yang akan dilakukan, obat koagulan yang digunakan dalah Asam Traneksamat dan obat antikoagulan yang digunakan adalah Aspirin 1.2 Tujuan 1. Mengamati dan menghitung waktu perdarahan dengan cara memotong ekor mencit 2. Mengamati pengaruh obat koagulan dan antikoagulan terhadap waktu perdarahan 3. Membandingkan waktu perdarahan yang terjadi antara kelompok obat koagulan, obat antikoagulan dan kontrol 4. Menjelaskan mekanisme kerja obat-obat koagulan dan antikoagulan 1.3 Manfaat Mahasiswa dapat memehami pengaruh obat-obatan koagulan dan antikoagulan terhadap tubuh makhluk hidup dan memahami mekanisme kerja dari obat-obatan tersebut
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA
Koagulasi (coagulation, clotting)
adalah
suatu
proses
yang
rumit
di
dalam sistem koloid darah yang memicu partikel koloidal terdispersi untuk memulai proses pembekuan (agglomerate) dan membentuk trombus. Koagulasi adalah bagian penting dari hemostasis, yaitu saat penambalan dinding pembuluh darah yang rusak oleh keping
darah dan faktor
koagulasi (yang
mengandung fibrin)
untuk
menghentikan pendarahan (hemorrhage) dan memulai proses perbaikan. Kelainan koagulasi dapat meningkatkan risiko pendarahan atau trombosis (David L at al 2009). Proses koagulasi terjadi segera setelah terjadinya luka pada pembuluh darah dengan rusaknya endotelium (endothelium). Langkah awal koagulasi adalah dengan
pelepasan
komponen fosfolipid (phospholipid)
yang
disebut
faktor
jaringan (entissue factor) dan fibrinogen sebagai inisiasi sebuah reaksi berantai. Segera setelah itu keping darah bereaksi membentuk penyumbat pada permukaan luka, reaksi ini disebut hemostasis awal (primary). Hemostasis lanjutan (secondary) terjadi
hampir
bersamaan:protein dalam plasma
darah yang
disebut faktor
koagulasi merespon secara berjenjang dan sangat rumit untuk membentuk jaringjaring fibrin yang memperkuat penyumbatan keping darah (Furie B at al 2005). Asam Traneksamat Asam traneksamat merupakan salah satu jenis dari obat hemostatis. Obat hemostatis digunakan untuk menghentikan pendarahan. Obat hemostatis ini diperlukan untuk mengatasi pendarahan yang meliputi daerah yang luas. Asam traneksamat merupakan salah satu obat yang berperan dalam proses hemostatis yakni obat anti fibrinolitik yang menghambat pemutusan benang fibrin. Asam traneksamat merupakan kompetitif inhibitor dari activator plasminogen dan penghambat plasmin. Plasmin sendiri berperan menghancurkan fibrinogen,fobrin, dan faktor pembekuan darah lain. Oleh karena itu, asam traneksamat dapat digunakan untuk membantu mengatasi pendarahan akibat fibrinolisis yang berlebihan (Gunawan,2012). Asam traneksamat merupakan analog asam aminokaproat, mempunyai indikasi dan mekanisme kerja yang sama dengan asam aminokaproat tetapi 10 kali
lebih poten dengan efek samping yang lebih ringan. Asam traneksamat cepat diabsorpsi dari saluran cerna.sampai 40% dari satu dosis oral dan 90% dari satu dosis IV diekskresi melalui urin dalam 24 jam. Dosis yang dianjurkan 0,5-1 g, diberikan 2-3 kali sehari secara IV sekurang kurangnya dalam waktu 5 menit. Cara pemberian lain per oral, dosis 15 mg/kgBB diikuti dengan 30mg/kgBB tiap 6 jam. Pada pasien gagal ginjal dosis dikurangi (Gunawan,2012).
Aspirin (asetosal, asam asetil-salisilat) Aspirin
bekerja
mengasetilasi
enzim
siklooksigenase
dan
menghambat
pembentukan enzim cyclic endoperoxides. Aspirin juga menghambat sintesa tromboksan A-2 (TXA-2) di dalarn trombosit, sehingga akhirnya menghambat agregasi trombosit. Aspirin menginaktivasi enzim-enzim pada trombosit tersebut secara permanen. Pada endotel pembuluh darah, aspirin juga menghambat pembentukan prostasiklin. Hal ini membantu mengurangi agregasi trombosit pada pembuluh darah yang rusak. Sehingga aspirin akan menghentikan pendarahan dalam waktu yang lebih lama untuk menghentikan pendarahan. Tromboxan A2 yang disintesis trombosit menyebabkan agregasi trombosit, vasokontriksi, dan proliferasi otot polos. Sehingga , ketika aspirin dihambat akan mencegah terjadinya agregasi trombosit. Aspirin akan menghambat secara irreversibel enzim siklooksigenase dengan mengasetilasi enzim tersebut. Ketika enzim sikloogenase dihambat maka tromboxan A2 dan protasiklin juga dihambat . Dalam dosis rendah aspirin hanya dapat menghambat tromboxan A2 , namun dalam dosis tinggi aspirin akan menyebabkan toksisitas dan juga akan lebih kurang efektif karena selain menghambat tromboxan A2 tapi juga akan menghambat protasiklin. (Aldy S Rambe, 2004) Farmakokinetik : Mula kerja : 20 menit -2 jam. Kadar puncak dalam plasma: kadar salisilat dalarn plasma tidak berbanding lurus dengan besarnya dosis. Waktu paruh : asam asetil salisilat 15-20 rnenit ; asarn salisilat 2-20 jam tergantung besar dosis yang diberikan. Bioavailabilitas : tergantung pada dosis, bentuk, waktu pengosongan lambung, pH lambung, obat antasida dan ukuran partikelnya.
Metabolisrne : sebagian dihidrolisa rnenjadi asarn salisilat selarna absorbsi dan didistribusikan ke seluruh jaringan dan cairan tubuh dengan kadar tertinggi pada plasma, hati, korteks ginjal , jantung dan paru-paru. Ekskresi : dieliminasi oleh ginjal dalam bentuk asam salisilat dan oksidasi serta konyugasi metabolitnya. (Aldy S Rambe, 2004) Farmakodinamik. Adanya makanan dalam lambung memperlambat absorbsinya, pemberian bersama antasida dapat mengurangi iritasi lambung tetapi meningkatkan kelarutan dan absorbsinya. Sekitar 70-90 % asam salisilat bentuk aktif terikat pada protein plasma. (Aldy S Rambe, 2004) Indikasi. Menurunkan resiko TIA atau stroke berulang pada penderita yang pernah menderita iskemi otak yang diakibatkan embolus. Menurunkan resiko menderita stroke pada penderita resiko tinggi seperti pada penderita tibrilasi atrium non valvular yang tidak bisa diberikan anti koagulan. (Aldy S Rambe, 2004) Kontra indikasi. Hipersensitif terhadap salisilat, asma bronkial, hay fever, polip hidung, anemi berat, riwayat gangguan pembekuan darah. lnteraksi obat. Obat anti koagulan, heparin, insulin, natrium bikarbonat, alkohol clan, angiotensin -converting enzymes. (Aldy S Rambe, 2004) Efek samping. Nyeri epigastrium, mual, muntah , perdarahan lambung. (Aldy S Rambe, 2004) Hati –hati. Tidak dianjurkan dipakai untuk pengobatan stroke pada anak di bawah usia 12 tahun karena resiko terjadinya sindrom Reye. Pada orang tua harus hati- hati karena lebih sering menimbulkan efek samping kardiovaskular. Obat ini tidak dianjurkan pada trimester terakhir kehamilan karena dapat menyebabkan gangguan pada janin atau menimbulkan komplikasi pada saat partus. Tidak dianjurkan pula pada wanita menyusui karena disekresi melalui air susu. (Aldy S Rambe, 2004) Dosis. FDA merekomendasikan dosis: oral 1300 mg/hari dibagi 2 atau 4 kali pemberian. Sebagai anti trombosit dosis 325 mg/hari cukup efektif dan efek sampingnya lebih sedikit.(Aldy S Rambe, 2004)
BAB 3 METODE PENELITIAN 3.1 Alat
Kertas Saring
Stopwatch
Tabung untuk mencit
3.2 Bahan
Hewan coba
Obat-obatan yang digunakan : Asam traneksamat
: Mencit
Aspirin Larutan PZ 3.3 Prosedur Kerja: 1
Mencil diambil sebanyak tiga ekor.
2
Tiap-tiap ekor diberi perlakuan sebagai kontrol, pemberian asam traneksamat, dan aspirin. Lalu ditunggu selama 30 menit.
3
Setelah itu, ujung ekor mencit dipotong sepanjang ± 1 cm menggunakan gunting tajam.
4
Mencit yang telah dipotong ekornya dimasukkan pada tabung dengan ujung ekor keluar dari tabung.
5
Darah yang keluar dari ekor mencit ditempelkan pada kertas serap setiap 30 detik sampai perdarahan berhenti.
6
Waktu perdarahan dicatat.
BAB 4 HASIL PRAKTIKUM Hasil percobaan waktu pendarahan mencit kontrol:
Hasil percobaan waktu pendarahan pada mencit yang telah diberi Aspirin (garis hitam pada ekor):
Hasil percobaan waktu pendarahan pada mencit yang telah diberi Asam Traneksamat (garis biru pada ekor):
Perhitungan waktu pendarahan (detik) tiap kelompok: KEL. I
KONTROL 900
HITAM 480
BIRU 450
II
540
1050
450
III
960
750
480
IV
480
360
540
V
480
480
270
VI
240
690
210
VII
240
510
180
JML
3840
4320
2580
Keterangan: Hitam = menggunakan aspirin Biru = menggunakan asam traneksamat
Rata-rata: Kontrol = 3840 = 548,57 detik 7 Merah = 4320 = 617,14 detik 7 Hijau = 2580 = 368,6 detik 7
BAB 5 PEMBAHASAN
Peristiwa penggumpalan darah adalah proses yang normal terjadi pada tubuh makhluk hidup, dan merupakan bagian dari mekanisme homeostasis (pertahanan tubuh supaya tetap dalam kondisi normal). Homeostasis adalah proses untuk menghentikan pendarahan agar terhindar dari kerusakan pembuluh darah. Koagulasi dapat terjadi bila ada luka pada tubuh, yang berarti apabila ada proses koagulasi, maka perdarahan cepat dapat dihentikan. Pada praktikum ini, mencit bertanda hitam diberi asam traneksamat secara intraperitoneal. Asam traneksamat merupakan obat hemostatik yang merupakan penghambat bersaing dari activator plasminogen dan penghambat plasmin. Oleh karena itu dapat membantu mengatasi pendarahan berat akibat fibrinolisis yang berlebihan. Hasil praktikum yang didapatkan pendarahan pada mencit bertanda hitam berhenti pada menit ke 7.30 dimana lebih cepat daripada kontrol yaitu 15 menit. Hasil ini sesuai dengan teori yang ada yaitu pemberian asam traneksamat berfungsi untuk menghentikan pendarahan oleh karena menghambat pembentukan plasmin. Pembentukan plasmin yang terhambat mengakibatkan pembentukan fibrin clot menjadi lebih cepat dan pendarahan berhenti lebih cepat. Pada percobaan yang telah dilakukan, selain mengamati lama koagulasi darah mencit yang diberi asam traneksamat, kami juga mengamati mencit yang diberi perlakuan kontrol (pemberian PZ) dan juga mencit yang diberi perlakuan diberikan aspirin. Hasil yang diperoleh dari mencit kontrol (mencit tanpa tanda, diberi PZ) yaitu mencit mengalami perdarahan hebat, darah yang keluar banyak dan tidak segera berhenti (mengalami koagulasi). Bila diteteskan pada kertas saring, darah mencit kontrol dari ekor yang dipotong diperoleh 29 tetesan darah dan darah berhenti setelah 15 menit. Hasil ini tidak sesuai dengan teori yang seharusnya. Mencit yang diberi PZ seharusnya tidak sampai mengalami perdarahan hebat, karena larutan PZ merupakan larutan yang bersifat isotonik yang mempunyai konsentrasi zat terlarut yang sama (tekanan osmotik yang sama) seperti larutan yang lain, sehingga tidak ada pergerakan air. Larutan isotonik mempunyai osmolalitas yang sama efektifnya dengan cairan tubuh, mempunyai konsentrasi garam yang sama dengan sel-sel tubuh yang normal dan darah. Pada praktikum ini PZ berperan sebagai larutan kontrol yang diberikan pada mencit. Hal ini dimaksudkan agar memberikan perbandingan tentang pengaruh
antikoagulan, antitrombotik, maupun hemostatik yang diintervensikan pada mencit yang lain. Hasil praktikum kami yang tidak sesuai dengan teori ini kemungkinan dapat disebabkan karena faktor kemampuan tiap mencit tidak sama dalam hal regulasi hemostatik. Diameter ekor yang dipotong tidak sama juga dapat mempengaruhi hasil praktikum. Selain itu mungkin juga ketika melakukan penyerapan pada kertas saring, pemegang ekor mencit terlalu menekan ekornya sehingga darah yang keluar menjadi lebih banyak. Mencit berikutnya adalah mencit yang diberi aspirin (mencit yang diberi tanda hitam). Aspirin termasuk dalam golongan obat yang penghambat agregasi platelet golongan inhibitor TXA2 (tromboksan A2). Aspirin bereaksi dengan menghabat pembentukan TXA2 melalui penghambatan enzim siklooksigenase. Pada praktikum yang kami lakukan didapatkan lama waktu perdarahan selama 8 menit dengan 16 tetasan darah pada kertas saring. Hasil ini jauh lebih cepat dibandingkan dengan mecit kontrol yang diberi larutan PZ. Hal ini kemungkinan dapat disebabkan karena saat darah dari pemotongan ekor mencit diatas kertas saring, pemegang ekor mencit terlalu menekan ekor mencit diatas kertas saring sehingga mengganggu proses terbentuknya fibrin pada permukaan ekor mencit yang terluka. Selain itu juga dapat disebabkan karena jarak ekor mencit yang dipotong dari ujung ekor terlalu jauh (pada mencit kontrol dipotong pada jarak 1 cm dari ujung akar, sedangkan sisanya dipotong pada jarak 0,75 cm dari ujung akar). Ketika tubuh terluka dan cedera menyebabkan pendarahan, sangat penting bahwa tubuh mampu untuk membendung aliran darah. Hanya jika pendarahan dihentikan, tubuh akan mampu bertahan dan itulahsebabnya koagulasi adalah proses penting dalam hemostasis, yang tidaklain adalah koagulasi diikuti dengan melarutkan gumpalan darah dankemudian memperbaiki jaringan yang terluka. Setelah dipulihkan dan jaringan diperbaiki, bekuan darah atau trombus harus disingkirkan dari jaringan yang cedera. Hal ini dicapai dengan jalur fibrinolisis.Fibrinolisis adalah mekanisme fisiologis yang bekerja secara konstan dengan sistim pembekuan darah untuk menjamin lancarnyaaliran darah ke organ perifer atau jaringan tubuh. Pada tempat jaringan yang rusak (tissue injury), fibrinolisis dimulai dengan perubahan plasminogen menjadi plasmin. Plasmin mempunyai banyak fungsi seperti
degradasi dari fibrin, inaktifasi faktor V dan faktor VIII dan aktifasi dari metaloproteinase yang berperan penting dalamproses penyembuhan luka dan perbaikan jaringan (Tissue-remodeling). Aktivator-aktivator plasminogen memecah peptide dari plasminogendan membentuk plasmin rantai dua. Aktifasi menjadi plasmin dapat terjadi melalui tiga jalur yaitu : 1. Jalur intrinsik, melibatkan aktifasi dari proaktifator sirkulasi melaluifaktor XIIa dan kalikrein, yang aktivatornya berasal dari plasma(dalam darah). 2. Jalur ekstrinsik, dimana aktivator-aktivator dilepaskan ke aliran darahdari jaringan yang rusak, endotel, sel-sel atau dinding pembuluhdarah ( semua aktifator juga protease). 3. Jalur eksogen, dimana plasminogen diaktifasi dengan aktivator yangberasal dari luar tubuh seperti streptokinase (bakteri) yang dibentukoleh Streptokokkushemoliticus dan urokinase (urin). Inhibitor plasmin disebut juga antiplasmin, yang dapat mengontrol aktivitas plasmin meliputi: E2-plasmin inhibitor (E2-antiplasmin), E1-proteinase inhibitor, E2makroglobulin, antitrombin III(AT-III), C1 inhibitor, dan Plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1). Macam – macam fibrinolisis yaitu : 1. Fibrinolisis sekunder adalah pembentukan fibrin yang diikuti dengan proses penghancuran fibrin oleh plasmin. 2. Fibrinolisis primer adalah proses penghancuran fibrinogen oleh plasmin. Plasmin yang terjadi dalam bekuan akan menghancurkan fibrin secara enzimatik dan menghasilkan fibrin degradation products (FDP). Plasmin bebas yang beredar dalam darah akan dinetralkan oleh antiplasmin, sehingga dalam keadaan normal di dalam darah tidak akan dijumpai plasmin bebas.
Diskusi Pertanyaan 1
Sebutkan obat-obat yang dapat memperpendek waktu pendarahan !
Obat-obat yang dapat memperpendek waktu pendarahan disebut juga procoagulant drugs. Prokoagulant drugs ini terdiri dari : a
Prokoagulant sistemik , antara lain : Faktor anti hemofilik Kompleks faktor IX Desmopression Asam aminokaproat Asam traneksamat
b
Prokoagulant topikal, antara lain : Thrombin Absorbable gelatin Microfibrillar collagen hemostat Oxidized cellulose
2
Bagaimana cara kerja asam traneksamat ? Cara kerja asam traneksamat adalah dengan cara memblok ikatan plasminogen dan plasmin terhadap fibrin, inhibisi terhadap plasmin ini sangat terbatas pada tingkat tertentu. Asam traneksamat secara kompetitif menghambat aktivasi plasminogen (melalui mengikat domain kringle), sehingga mengurangi konversi
plasminogen
menjadi
plasmin
(fibrinolisin),
enzim
yang
mendegradasi pembekuan fibrin, fibrinogen, dan protein plasma lainnya, termasuk faktor-faktor prokoagulan V dan VIII. Asam traneksamat juga langsung menghambat aktivitas plasmin, tetapi dosis yang lebih tinggi diperlukan daripada yang dibutuhkan untuk mengurangi pembentukan plasmin. Oleh karena itu dapat membantu mengatasi perdarahan berat akibat fibrinolisis yang berlebihan. 3
Bagaimana cara kerja karbazakrom sodium monophosphat ? Cara kerja karbazakrom sodium monophosphat adalah menghambat tromboksan didalam trombosit dan prokstasiklin pada pembuluh darah dengan menghambat secara irreversibel enzim siklooksigenase. Penghambat enzim siklooksigenase terjadi akibat obat ini mengasetilasi enzim tersebut
4
Sebutkan obat-obat yang dapat memperpanjang waktu perdarahan ! Obat yang memperlama pendarahan adalah aspirin, dipiridamol, tiklopidin, klopidogrel, beta blocker, absiksimab, dan intregilin.
5
Bagaimana cara kerja aspirin untuk mencegah thrombosis vena ? Cara kerja aspirin mencegah trombosis vena dengan cara menghambat secara selektif sintesa PGHS & tromboxan A2.
6
Bagaimana cara kerja adrenalin untuk menghentikan perdarahan ? Adrenaline menyebabkan vasokonstriksi peningkatan aktivitas faktor V sehingga terjadi pembekuan darah (agregasi trombosit) dan luka tertutup.
7
Bagaimana
perbedaan
waktu
perdarahan
kelompok
obat
asam
traneksamat dibanding dengan kontrol ? Perdarahan kelompok obat asam traneksamat lebih cepat berhenti dibanding dengan kontrol, karena asam traneksamat merupakan obat anti pendarahan atau hemostatik (obat yang digunakan untuk menghentikan pendarahan). Cara kerja asam traneksamat adalah dengan mencegah degradasi fibrin, pemecahan trombosit, peningkatan kerapuan faskuler dan pemecahan faktor koagulasi.
BAB 6 PENUTUP
Percobaan hemostatik pada mencit menunjukkan perbedaan lamanya perdarahan karena adanya perbedaan perlakuan terhadap mencit. Perlakuan pertama adalah mencit diberikan aspirin, perlakuan kedua mencit tidak diberikan apa-apa, dan perlakuan ketiga adalah mencit diberikan hemostatika (asam traneksamat). Pada hasil percobaan dengan ketiga perlakuan tersebut menunjukkan lama perdarahan yang paling panjang terjadi pada mencit dengan perlakuan pertama yaitu diberikannya aspirin. Aspirin diketahui dapat memperpanjang waktu perdarahan karena aspirin merupakan anti trombosit yang dapat menghambat proses hemostatik. Sedangkan lama perdarahan paling cepat terjadi pada mencit dengan perlakuan ketiga yaitu diberikannya asam traneksamat. Asam traneksamat merupakan hemostatika sistemik yang bekerja sebagai kompetitif inhibitor dari aktivator plasminogen. Sehingga asam traneksamat menghambat proses fibrinolisis dan mempercepat lama perdarahan.
DAFTAR PUSTAKA
Gunawan,Sulistia Gan.2012. Farmakologi dan Terapi Edisi 5. Jakarta:Badan penerbit FKUI Hal:819
Rogers, K. 2011. Blood. Chicago: Britannica Educational Pub.
Rambe, Aldy S 2004. Obat-obat Penyakit Serebro Askular. Sumatera Utara:Bagian Neurologi Fakultas Kedokteran USU (USU Digital Library). p.2-3.
Furie B, Furie BC. 2005. "Thrombus formation in vivo". J. Clin. Invest. 115 (12): 3355–62.
David Lillicrap; Nigel kunci, Michael Makris; Denise O'Shaughnessy. 2009.Hemostasis dan Trombosis Praktis.Wiley-Blackwell. Hal 1-5. ISBN14051-8460-4.
