Instituto Politécnico Nacional Escuela Nacional de Ciencias Biológicas Farmacología General y Quimioterapia Nombres: Argüello Zambrano Norma Guadalupe / Calderón Jiménez Alejandra/ Díaz Paredes Alejandra / González Flores Miguel 6FM1 Equipo 5
Práctica 1: Manejo, distribución y marcado de animales Resumen El manejo, distribución y marcado correcto de los animales de laboratorio es de suma importancia en la investigación actual. La práctica tiene como objetivo: “Aprender el manejo y el marcado correcto de los animales así como conocer y comparar dos métodos para llevar a cabo su distribución”. Para lograr este fin se utilizaron ratas y ratones hembra los cuales se distribuyeron de manera aleatoria. Dichos animales fueron pesados, los datos obtenidos se conjuntaron y con ello realizamos el método de la culebra japonesa. Las medias de los pesos de las ratas y ratones en ambos casos no mostraron diferencia significativa en los métodos utilizados para su distribución, pero el método de la culebra japonesa tiene una menor dispersión de los datos obtenidos, aunque este tiene la desventaja de requerir mayor tiempo para realizarlo. Por tanto el método aleatorio resulta más eficiente para experimentos donde se requiere mayor cantidad de animales. Introducción El avance en la investigación en el área de la salud se ha debido en gran medida al uso de modelos animales de experimentación; práctica realizada desde la antigüedad, gracias a ello se ha podido por ejemplo probar la seguridad de los fármacos. Los griegos reportaron investigación acerca de la anatomía y fisiología del ser humano basándose en los animales. Actualmente los animales que se utilizan son ratas, ratones, cobayos, pájaros, conejos, perros, gatos y primates. El tipo de animal depende en gran medida al tipo de investigación a realizar; aunque los animales predilectos son ratas y ratones por ser animales fácilmente adaptables, fácil conservación y tener periodos de reproducción frecuentes2. Tanto en México como en el mundo existen normas que regulan el uso y manejo adecuado de los animales para experimentación. La Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999 se encarga de aplicar el principio de las 3R en el manejo de animales en el laboratorio: Reemplazar (utilización de alternativas que produzcan los mismos resultados, Reducir (utilizar un número mínimo de animales), Refinar (utilizar técnicas adecuadas para evitar al máximo el sufrimiento)5. Los métodos de marcaje generalmente utilizados son Físicos, que consiste en alguna marca ya sea directamente en el animal o en jaulas (indirecto). Químicos que consiste en la aplicación de tatuajes o colorantes de manera temporal y los Biológicos que son características propias del animal, como sexo, edad o características fenotípicas. El marcaje depende del tiempo que durará la investigación; así para investigaciones a largo plazo se utilizan perforaciones o muescas en las orejas y para investigaciones a corto plazo son marcados con tatuajes o colorantes4. La distribución de los animales permite tener una población más homogénea, es decir que entre los individuos de un mismo grupo de investigación no predomine alguna característica y esto pueda afectar el curso de la misma. Existen dos métodos para la distribución de los animales. Uno de ellos es la Distribución Aleatoria en el cual los individuos de la población son asignados al azar para cada tratamiento. Otro método utilizado es el de la Culebra Japonesa, el cual consiste en ordenar de manera decreciente alguna característica de los animales utilizados. Se hace una tabla con el número de lotes necesarios y se acomoda la característica medida de manera horizontal del mayor al menor simulando el movimiento de una culebra6.
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El manejo de los animales se realiza de acuerdo a la especie con la que se va a trabajar3; así los ratones tienen que ser sujetados por la base de la cola y colocarlo sobre una superficie rugosa donde pueda agarrarse, de tal modo que las patas traseras queden suspendidas. Se pinza la piel del cuello con el pulgar y el índice de la otra mano y se levanta al animal4. Para la rata se coloca una mano alrededor del pecho con el pulgar situado bajo el mentón y el índice alrededor del cuello, y se asegura la cabeza con firmeza. Con el resto de la mano, se sujeta toda la piel de alrededor de los hombros4. En el caso del conejo el modo adecuado de sujetarlo es tomándolo con la mano derecha por la piel del dorso, a nivel de la región lumbar y con la izquierda inmovilizando las patas traseras, que en ningún caso, deben quedar libres por la facilidad de poder herir con ellas a las personas que tratan de sujetarlo1.
Hipótesis “Se sabe que el método de la culebra japonesa tiene una mucho mejor homogeneidad en cuanto a su distribución, entonces; si se reparten las ratas y ratones por este método de distribución se obtendría una menor variación en los promedios y error estándar de pesos de animales de experimentación entre los distintos lotes. Este método distribuye los pesos en orden ascendente y se van haciendo lotes de seis en seis de izquierda a derecha y regresa de derecha a izquierda para una distribución equitativa, pero es un método tardado.”
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Diagrama
•Tomar 6 ratas aleatoriamente, marcalas y pesarlas. Registrar los datos obtenidos . •Tomar 10 ratones aleatoriamente, marcarlos y pesarlos. Registrar los datos obtenidos.
•Ordenar los datos de cada uno de los animales tratados en forma decreciente de acuerdo al peso corporal otenido.
•Practicar el manejo adecuado en los animales proporcionados.
•Analizar las diferencias estadísticas con un análisis de varianza unifactorial entre los diferentes lotes de animales.
•Realizar dos gráficas de barras (ratones y ratas) comparando los dos métodos empleados. indicando la media, error estándar y sí se encontró diferencia estadística significativa.
•Concluir el método por el cual se obtuvo una distribución homogénea en los animales.
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Resultados
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Figura 1. Distribución de ratones mediante los métodos Aleatorio y de la Culebra Japonesa. Se muestra media de pesos corporales (g) ± el error estándar. *p<0.05. Método aleatorio (azul), método de la Culebra Japonesa (rojo).n=10 para ambos métodos. De acuerdo al ANOVA realizado, no hay diferencia significativa entre los lotes y entre ambos métodos de distribución realizados, solo se nota una mayor dispersión de los datos en el método Aleatorio y una mayor uniformidad de los datos en el método de la Culebra Japonesa, en cuanto datos es referido a las medias de los pesos corporales (g) ± el error estándar.
Figura 2: Distribución de ratas mediante los métodos Aleatorio y de la Culebra Japonesa. Se muestra media de pesos corporales (g) ± el error estándar. *p<0.05. Método aleatorio (azul), método de la Culebra Japonesa (rojo).n=6 para ambos métodos. De acuerdo al ANOVA realizado, no hay diferencia significativa entre los lotes y entre ambos métodos de distribución realizados, solo se nota una mayor dispersión de los datos en el método Aleatorio y una mayor uniformidad de los datos en el método de la Culebra Japonesa, en cuanto datos es referido a las medias de los pesos corporales (g) ± el error estándar.
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Discusión Los animales de laboratorio son instrumentos de trabajo, siempre útiles, y con frecuencia indispensables, para conseguir resultados efectivos dentro de la investigación científica y biológica. Es por esto que al ser manipulados debemos de evitar el más mínimo error entro de su obtención de datos. Se consideraron 2 diferentes formas para distribuir a los animales, de tal manera que sea homogénea y equitativa, para que los datos a tratar no tengan variaciones altas que no nos determine en verdad lo que se busca. Es necesario determinar las medias de los pesos de las ratas y ratones en ambos casos, los cuales no mostraron diferencia significativa con respecto a los dos métodos utilizados para que los animales fueran distribuidos, pero en ambos casos se nota que el método de la culebra japonesa tiene una menor dispersión de los datos obtenidos, lo cual se ve reflejado en el error estándar, así como las medias marcan una tendencia más uniforme entre los lotes sujetos a este método de distribución, debido a que distribuye los pesos en orden ascendiente y se van haciendo lotes de seis en seis de izquierda a derecha después de derecha a izquierda (movimiento de zigzag), ya que este método, al distribuir descendentemente y distribuye más homogéneamente a los animales sujetos a estudio en comparación con el método de distribución aleatoria, hay una dispersión un poco mas notable en las medias de los pesos corporales ± error estándar, ya que en este método se utiliza una calculadora para hacer la distribución, en la cual los números que aparecen pueden a veces ser repetitivos, causando poca uniformidad en la distribución de los animales de laboratorio, por tanto una dispersión más notable en nuestros resultados (medias de los pesos corporales ± error estándar). Por otro lado el método de la culebra japonesa requiere que todos los animales sean pesados antes de ser distribuidos y acomodados en forma descendente conforme a los pesos obtenidos, lo cual no sería eficiente en lotes de animales de laboratorio de gran numero, debido a que se llevaría mucho tiempo en realizar las mediciones de los pesos de todos animales, sin embargo el método aleatorio aunque las medias y errores estándar varían un poco más que en el método de la culebra japonesa, es un método más rápido ya que no hay necesidad de pesar antes de la distribución a todos los animales, y nuestros resultados no se verían afectados por una mala distribución, ya que la diferencia entre ambos métodos estadísticamente no existe, solo las tendencias de variación en el método aleatorio son un poco más evidentes que las del método de la culebra japonesa. La hipótesis planteada fue cierta con respecto a que si hay rangos menores en la dispersión de datos y a su uniformidad en los promedios, ya que al acomodarlos de manera creciente, siendo 60 datos diferentes, es mucho más difícil ordenarlos de menor a mayor para cada lote, siguiendo la forma de zigzag en la tabla de registro.
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Conclusiones
El método de distribución de la culebra japonesa proporciona medias de los pesos corporales ± error estándar, con menor dispersión entre estos. El método de distribución aleatoria es mas rápido de realizar que el método de distribución de la culebra japonesa
Referencias 1. Fuentes, F., Mendoza R., Rivera R. 2010. Guía de manejo adecuado de animales de laboratorio: Conejo. Ministerio de Salud Lima. Instituto Nacional de Salud. 32-34 2. Falconi E., García L., Marín O., Padrón R., 2010. Manual para el manejo de animales con fines de experimentación y enseñanza. Universidad Juárez Autónoma de Tabasco. 3-6 3. Muñoz J., Zaldívar S., Maldonado C., Muñoz C., Moreno A. 2010. La habilidad para sujetar y manejar animales de laboratorio. Universidad Autónoma de Zacatecas. 2-4 4. Muñoz J., Zaldívar S., Reveles G., Muñoz Y. El uso de animales en el laboratorio de experimentación. REDVET Vol. VII, No. 2. 1-29. 5. Secretaria de Agricultura, Ganadería, Desarrollo rural, Pesca y Alimentación. Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999. Especificaciones técnicas para la producción, cuidado y uso de animales de laboratorio. 6. Álvarez R. 2007. Estadísticas aplicadas a las Ciencias de la Salud. Ediciones Díaz Santos. España. 869-871
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