Penentuan Status Gizi Biokimia

PENENTUAN STATUS GIZI BIOKIMIA

( Disusun  Disusun guna memenuhi memenuhi tugas mata kuliah Penentuan Status Gizi Gizi Kelas A)

Disusun oleh : Andriana Putri Wijaya

142110101163 142110101163

Fathiya Salsabila

142110101166 142110101166

Tria Mei Sinta

142110101174 142110101174

Risma NoviaWidyanti

142110101179 142110101179

Rizqi Muthoharoh

142110101191 142110101191

 Niaputri Nilam Sari

142110101203 142110101203

Alifta Sukmawati

152110101023 152110101023

Yeny Etika Sari

152110101041 152110101041

Wahyu Febriyanto Aji

152110101089 152110101089

Bagus Dwi Atmoko

152110101127 152110101127

Idolla Nikmatul Maghfiroh

152110101184 152110101184

Bella Nadia Rachman

152110101209 152110101209

FAKULTAS KESEHATAN MASYARAKAT UNIVERSITAS JEMBER 2017 i

KATA PENGANTAR

Puji syukur kami panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa karena dengan rahmat,karunia,serta taufik dan hidayah-Nya kami dapat menyelesaikan tugas makalah Penentuan Status Gizi mengenai “Penentuan “ Penentuan Status Gizi Biokimia” Biokimia” dengan baik. Tidak lupa kami sampaikan terima kasih kepada Ninna Rahmawati, S.Gz selaku dosen mata kuliah Penentuan Status Gizi di FKM Universitas Jember, kerja sama teman-teman dan juga pihak lain yang bersangkutan dalam penyelesaian tugas ini. Kritik dan saran sangat kami butuhkan untuk memperbaiki segala kekurangan yang ada. Semoga makalah ini dapat bermanfaat dan dapat menambah wawasan serta pengetahuan bagi para pembaca. Mohon maaf apabila ada kesalahan dan terimakasih.

Jember, 09 April 2017

Penyusun

ii

DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR ............................................. ................................................................... ............................................ ......................... ... ii DAFTAR ISI ........................................................ .............................................................................. ............................................. ............................ ..... iii BAB 1 PENDAHULUAN .............................................. .................................................................... ........................................ .................. 1 1.1.

Latar Belakang .......................................... ................................................................ ............................................ ......................... ... 1

1.2.

Rumusan Masalah ............................................ ................................................................... ........................................ ................. 1

1.3.

Tujuan ............................................ ................................................................... ............................................. .................................... .............. 1

BAB 2 PEMBAHASAN ........................... ................................................. ............................................ ........................................ .................. 2 2.1. Penentuan Status Gizi Secara Secar a Biokimia ......................................... ....................................................... .............. 2 2.2. Tujuan Status Gizi Secara Biokimia ..................................................... ............................................................ ....... 2 2.3. Macam-macam Penentuan Status Gizi Secara Biokimia ............................. ............................. 2 2.3.1. Pemeriksaan Status Statu s Biokimia Tubuh (Cairan dan Jaringan Tubuh) ...... 2 2.3.2. Tes Fungsional ......................... ............................................... ............................................ ...................................... ................ 10 2.4. Pemeriksaan Biokimia Zat Gizi ............................................................ ................................................................. ..... 13 2.4.1. Pengukuran Status Protein ......................... ............................................... .......................................... .................... 13 2.4.2. Penentuan Status Gizi Fe ........................... ................................................. .......................................... .................... 17 2.4.3. Penentuan Status Mineral .................................................... .................................................................... ................ 21 2.4.4. Penentuan Status Gizi Vitamin ............................................ ............................................................ ................ 23 2.4.5. Pemeriksaan Biokimia pada Beberapa Masalah Mas alah Gizi di Indonesia ..... 28 2.5. Pemeriksaan Zat Gizi Spesifik ........................................ .............................................................. ........................... ..... 31 2.5.1. Kurang Energi Protein .............................................. ..................................................................... ........................... .... 31 2.5.2. Kurang Vitamin A (KVA) ............................. ................................................... ...................................... ................ 32 2.5.3. Anemia Gizi Besi (AGB).......................................... ................................................................. ........................... .... 35 2.5.4. GAKI .......................................... ................................................................. ............................................. .................................. ............ 38 iii

2.6. Keunggulan dan Kelemahan Biokimia........................................... ....................................................... ............ 40 2.6.1. Keunggulan ..................................... ........................................................... ............................................ ............................... ......... 40 2.6.2. Kelemahan .......................................... ................................................................ ............................................ ........................... ..... 41 BAB 3 PENUTUP ........................................... ................................................................. ............................................ ............................... ......... 42 3.1. Kesimpulan ..................................... ........................................................... ............................................ ...................................... ................ 42 3.2. Saran ...................................................... ............................................................................ ............................................. ............................... ........ 42 DAFTAR PUSTAKA .......................................... ................................................................ ............................................ ........................... ..... 43

iv

BAB 1 PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Manusia makan pada dasarnya untuk memenuhi 3 fungsi f ungsi makanan itu sendiri, yaitu untuk tenaga, pertumbuhan dan pemeliharaan tubuh. Kurang konsumsi makanan maka akan diambil dari cadangan tubuh dan jika makan berlebih akan disimpan dalam bentuk cadangan tubuh. Makanan berperan penting untuk  pertumbuhan. Sehingga pada hakekatnya menilai status gizi adalah mengevaluasi keseimbangan pemenuhan kebutuhan berupa penampakan/performa tubuh. Metode penilaian status gizi dapat dikelompokkan atas metode langsung dan metode tidak langsung. Penilaian secara langsung terdiri dari metode biokimia,  penilaian klinis, penilaian biofisik, dan penilaian antropometri. Penilaian status gizi secara biokimia disebut juga dengan metode pemeriksaan laboratorium, adalah mengukur kadar zat gizi di dalam tubuh dan atau ekskresi tubuh kemudian dibandingan dengan suatu nilai normatif yang sudah ditetapkan. Penggunaan metode penilaian status gizi secara biokimia digunakan untuk suatu peringatan  bahwa kemungkinan akan terjadi keadaan malnutrisi yang lebih parah lagi. 1.2. Rumusan Masalah Bagaimana cara penilaian gizi secara biokimia? 1.3. Tujuan Untuk mengetahui cara penilaian gizi secara biokimia

1

BAB 2 PEMBAHASAN

2.1. Penentuan Status Gizi Secara Biokimia

Penentuan status gizi secara biokimia/laboratorium terdiri dari pemeriksaan status biokimia dalam tubuh dan tes fungsional/ fisiologis . Pada pemeriksaan status biokimia dalam tubuh diukur kandungan nutrien dalam cairan dan jaringan tubuh . Tes yang dipilih merefleksikan nutrien total dalam tubuh atau ukuran  jaringan dalam tubuh. Tes fungsional / fisiologis bertujuan untuk mengukur fungsi spesifik organ tubuh yang terganggu karena kekurangan nutrien . Tes ini lebih signifikan dibandingkan dengan pemeriksaan status biokimia dalam tubuh . Tes fungsional fisiologis dibagi menjadi tes fungsi biokimia dan tes psikologis. 2.2. Tujuan Status Gizi Secara Biokimia

Mengetahui tingkatan gizi seseorang dengan melakukan pemeriksaan status  biokimia pada jaringan dan cairan tubuh dan tes fungsional. 2.3. Macam-macam Penentuan Status Gizi Secara Biokimia

Pengukuran dalam penentuan status gizi secara biokimia dilakukan dengan  pemeriksaan status biokimia tubuh yaitu cairan dan jaringan tubuh serta tes fungsional .Pemeriksaan status biokimia tubuh pada cairan tubuh yaitu memeriksa konsentrasi nutrien pada sampel darah , ludah , keringan dan air susu ibu . Pemeriksaan pada jaringan tubuh yang diperiksa adalah rambut , kuku , jaringan adiposa , hati dan tulang . Selain itu ada juga tes fungsional yang mengukur konsekuensi fungsional pada organ atau jaringan tubuh karena defisiensi nutrien dalam tubuh. 2.3.1. Pemeriksaan Status Biokimia Tubuh (Cairan dan Jaringan Tubuh) Penentuan Status Gizi secara biokimia atau laboratorium membantu untuk

menjelaskan yang terjadi di dalam tubuh . Kebanyakan tes yang dilakukan  berbasis pada sampel darah atau urin yang banyak mengandung nutrien , enzim dan metabolit yang merefleksikan status gizi . 2

Interpretasi data biokimia membutuhkan keahlian khusus . Tidak ada satu tespun yang menunjukkan status gizi sebenarnya, karena banyak faktor yang mempengaruhi hasil tes. Konsentrasi nutrien dalam darah yang rendah merefleksikan defisiensi nutrien atau defisiensi satu atau beberapa nutrien atau  penyakit . Pengumpulan data bersama dengan menggunakan metode yang lain yang sangat dianjurkan , hasil laboratorium membantu interpretasi lebih jelas dan hati-hati . Hasil laboratorium khususnya berguna untuk membantu mendeteksi malnutrisi subklinis dengan mengcover sign awal dari malnutrisi yang muncul sebelum tanda klinis klasik dari defisiensi nutrien muncul . Tes laboratorium / biokimia yang digunakan untuk mengukur status vitamin dan mineral akan lebih baik ketika dikombinasikan dengan survei konsumsi  pemeriksaan fisik . Tingkat vitamin dan mineral dalam darah dan urinlebih menunjukkan keadaan asupan jangka pendek dibandingkan keadaan asupan  jangka panjang . Hal ini yang menyulitkan untuk untuk mendeteksi defisiensi subklinis , selain itu ada interaksi antar nutrien . Karenanya sejumlah nutrien dalam tubuh  berpengaruh pada hasil laboratorium untuk beberapa nutrien . Ini juga penting untuk diingat , faktor non-nutrien juga mempengaruhi pengukuran biokimia . Pemeriksaan status biokimia dalam tubuh dilakukan pada cairan dan  jaringan tubuh . Dibawah ini dijelaskan pemeriksaan status biokimia dalam tubuh : a. Pemeriksaan Cairan Tubuh 1) Pemeriksaan Darah Sampel darah sangat mudah diperoleh , relatif non-invasive , dan umumnya mudah dianalisa . Pengumpulan sampel darah dan penanganannya harus terkontrol , dan dipastikan analisis hasilnya menggunakan akurasi dan ketepatan yang terstandar . Faktor seperti puasa , fluktuasi hasil karena diurnal variation dan konsumsi makanan , status dehidrasi , pemakaian kontrasepsi oral atau terapi hormon , obat-obatan , infeksi , peradangan dan stress adalah semua faktor yang mengganggu interpretasi hasil (Pitch and Senti , 1984; Senith et al, 1985 dalam Gibson , 2005)

3

Plasma dan serum darah membawa hasil penyerapan zat gizi dalam tubuh dan mengedarkannya ke jaringan sehingga plasma dan serum darah merefleksikan asupan makanan . Karenanya , plasma dan serum menyediakan data terkini dibandingkan status biomarker nutrien . Pengaruh asupan konsumsi pada  plasma dan serum dapat dilihat dengan mengambil sampel darah puasa . Konsentrasi nutrien pada plasma dan serum mendekati nilia normal meskipun ada bukti yang menunjukkan kerusakan fungsi pada beberapa nutrien seperti zinc dan kalsium sangat kuat . Karenanya untuk mengatasi hal ini pemeriksaan  biomarker dibutuhkan . Risiko selama pengambilan sampel , penyimpanan , persiapan dan analisis adalah masalah yang sering terjadi pada analisa trace element dalam darah . Serum lebih dipilih jika ingin mengukur kandungan trace element dalam tubuh karena tidak seperti plasma , risiko kontaminasi dari antikoagulan dapat dicegah. 2) Eritrosit  Nutrien dalam eritrosit merefleksikan status kronis karena masa hidup sel ini lama (120 hari) . Selain itu keuntungan dari konsentrasi nutrien dalam eritrosit tidak terpengaruh variasi transient seperti halnya plasma Antikoagulan yang dipilih pada pengambilan sampel eritrosit harus dipilih dengan cermat , jangan sampai mengakibatkan terjadinya ikatan dengan ion sel darah merah . Pilihan yang baik adalah heparin (Vitouxet all , 1999 dalam Gibson , 2005) Pemisahan , pencucian dan analisa eritrosit adalah teknik yang sulit dan harus dilakukan dengan hati-hati . Setelah pemisahan , eritrosit dicuci tiga kali dengan garam isotonik untuk menghilangkan plasma yang terperangkap dan kemudian di homogenisasikan . Tahap terakhir ini yang paling kritis karena kekeruhan eritrosit terstratifikasi , sel yang muda dibagian atas dan sel lebih tua dibagian bawah. Tidak ada metode standar untuk mengekspresikan nutrien dalam eritrosit , karena setiap metode mempunyai keterbatasan masing-masing . Bisa dengan nutrien per paket sel , per jumlah sel , per g dari Hb , atau per g dari materi kering (Vitouxet ali ,1999 dalam Gibson ,2005) 4

Eritrosit juga bisa digunakan untuk menghitung variasi sistem enzim . Pada  beberapa kasus , konsentrasi total dari kofaktor vitamin , atau enzim dengan melihat coenzim vitamin . Tes ini sensitif untuk melihat status defisiensi dan akurat merefleksikan cadangan vitamin dalam tubuh . 3) Leukosit Leukosit atau beberapa tipe spesifik dari sel darah seperti limfosit , monosit, dan neutrofil bisa digunakan untuk memonitoring perubahan jangka waktu lama atau sedang dari status nutrien karena mereka mempunyai waktu hidup yang lebih pendek dibandingkan eritrosit . Karenanya konsentrasi nutrien pada sel ini merfleksikan terjadinya defisiensi nutrien lebih cepat dibandingkan eritrosit. Teknik terbaru untuk memisahkan dan mengklasifikasikan tipe sel yaitu dengan chromatography (Shibusawa ,1999 dalam Gibson , 2005) , Counterflow centrifugal elutriation dan flowcytometri (Ito dan Shinomiya , 2001 dalam Gibson , 2005 ). Teknik ini bisa menyebabkan leukosit atau sel spesifik lainnya diisolasi tanpa kontaminasi dari reagen atau bentuk residu yang lain atau dari eritrosit. Sama dengan eritrosit , tidak ada metode standart untuk mengekspresikan nutrien dalam leukosit . Metode yang digunakan adalah nutien per unit massa  protein , konsentrasi nutrien per sel , konsentrasi nutrien per berat kering sel dan nutrien per unit DNA (Ellin (Elli n , 1987 dalam Gibson , 2005) 4) Air Susu Ibu Konsentrasi yang tersekresi dalam Air Susu Ibu (ASI) antara lain vitamin A , B6 , B12 seperti tiamin , riboflavin , yodium dan selenium dapat merefleksikan tingkatan diet ibu hamil dan cadangan daam tubuh . Studi menunjukkan di  beberapa daerah defisiensi vitamin A . Selenium dan yodium bersifat bersif at endemik sehingga kandungannya dalam air susu ibu rendh(Underwood , 1994; Funk et all., 1990; Delange , 1985 dalam Gibson 2005) Dinilai lebih memungkinkan untuk mengumpulkan sampel ASI dibandingkan sampel darah . Meskipun demikian , pemilihan sampel , penanganan  pengumpulan sampel , dan penyimpanan sampel ASI harus hati-hati untuk 5

menjaga keakuratan informasi nutrien yang terkandung dalam ASI. Untuk mencegah kesalahan pengambilan sampel kolostrum dan ASI transisi , yang mengandung konsentrasi nutrien yang sangat tinggi dengan ASI yang matang , setidaknya diambil 21 hari setelah melahirkan , ketika konsentrasi dari nutrien yang ada stabil . Idealnya , ASI 24 jam diambil dari kedua payudara karena konsentrasi nutrien seperti retinol bervariasi tergantung makanan . Pada studi komunitas , hal ini sulit dilakukan dan sebagai alternatif lain dipilih protokol  pengambilan sampel ASI yang lain tergantung pada tujuan dan nutrien apa yang akan diteliti . Sekarang , hanya konsentrasi vitamin A pada ASI yang digunakan untuk melihat status vitamin A pada ibu dan makanan bayi (Stolzfus dan Underwood , 1995 dalam Gibson , 2005) . Untuk pengukuran vitamin A dalam ASI pada tingkat individu , praktik yang direkomendasikan adalah mengumpulkan sampel ke dalam gelas botol gelap di atas es . Payudara dari ASI yang digunakan sebagai sampel tidak diberikan/disusukan pada bayi setidaknya 2 hari . Prosedur ini penting karena kandungan lemak dalam ASI dan kandungan vitamin A larut lemak meningkat mulai dari pertama sampai akhir dikonsumsi oleh bayi . Untuk studi berbasis populasi , WHO (1996) menyarankan mengumpulkan sampel ASI secara acak sepanjang hari dengan variasi waktu mulai dari waktu terakhir diberikan kepada bayi untuk memastikan variasi pada lemak ASI merupakan sampel acak . Ketika pengambilan sampel secara acak tidak memungkinkan , nutrien larut lemak harus diekpresikan secara relatif dari konsentrasi lemak . Sebelum dibawa ke laboratorium , sampel ASI setiap subjek dihangatkan dalam suhu ruang dan dihomogenisasikan . Selanjutnya hasil homogenisasi dimasukkan dalam freezer dengan suhu -20 derajat celcius sampai di analisis . Metode analisis untuk sampel ASI harus dipilih dengan hati-hati . Reagen yang digunakan harus bebas dari kontaminan dan tidak berikatan dengan vitamin (folat , pantothenic , vitamin D ) . Dan untuk tes mikrobiologi , tes organisme  perlu dilakukan . Karena faktor nonspesifik yang menghambat ada dalam ASI , diperlukan pemilihan metode yang b 6

5) Saliva (Air Ludah) Beberapa studi menggunakan air ludah sebagai cairan biopsi untuk pengukuran status gizi. Prosedur pengukuran, tidak seperti darah bersifat non invasisve dan invasisve dan mudah diambil di lapngan atau di rumah. Saliva adalah spesimen diagnosis yang lebih aman dibandingkan darah, infeksi dari HIV dan hepatitislebih kecil karena konsentrasi antigenyang rendah di air ludah. Spesimen saliva dapat dikumpulkan dan disimpan pada suhu ruang dan dikirimkan ke laboratorium tanpa refrigator . Pengumpulan air ludah bisa dilakukan langsung pada tabung atau cangkir kecil dengan atau tanpa stimulasi. Terkadang subjek diminta berkumur sebelum  pengambilan sampel. Pada beberapa kasus, bola kapas atau kertas penyerap digunakan untuk mengumpulkan air ludah. Kemudian diberi pengawet untuk menstabilkan spesimen untuk jangka waktu beberapa minggu. Namun kelemahan dari mtode ini adalah adanya pengaruh dari substansi lain ketika mengekstrasikannya, karena tidak cocok untuk beberapa analisaODS (Oral ( Oral  Diffusion Sink ) adalah alat yang digunakan untu mengukur air ludah dan merupakan rujukan dari labolatorium Seattle, Washington (Wade dan Haegle,1991 dalam Gibson, 2005) Steroid  dan  dan hormon non pertide seperti tiroksin, testosteron, testosteron, beberapa obat dan antibodi untuk penyakit viral juga bisa diukur dengan air ludah. Konsentrasi  beberapa mikronutrien seperti zinc seperti  zinc juga  juga bisa diinvestigasi. Bagaimanapun juga interpretasi hasil slit, materi rujukan dan nilai interpretasi untuk kondisi normal  belum tersedia. 6) Keringat Pengumpulan keringat seperti air ludah juga non invasive dan invasive dan bisa dilakukan di lapangan ataupun di rumah. Beberapa metodepengumpulan digunakan,  beberapa diantaranya dirancang untuk mengumpulkan keringat seluruh tubuh dan ada juga yang dikhususkan untuk mengumpulkan keringat pada bagian tertentu dari tubuh. Seringkali menggunakan tas tertutup atau kapsul. Shirref dan Maughan, 1997 dalam Gibson, 2005 mengembangkan metode  pengumpulan keringat seluruh tubuh dengan mengukur subjek yang sedang 7

 berolahraga di dalam dala m plastik tertutup. Metode ini tidak bisa mengukur keringat yang keluar pada kondisi normal, dan kesulitan yang lain disebabkan variasi dari komposisi keringat dari bagian tubuh yang berbeda. Metode ini tidak bisa digunakan pada orang yang sedang berolahraga menggunakan treadmill tapi  bisa pada orang dengan sepeda ergometer . Sebuah metode yang dirancang untuk mengumpulkan keringat dari bagian tubuh yang spesifik menggunakan Osteopatch. Osteopatch  Osteopatch  terdiri dari transaransi, hipoalergenik , membran  permeble gas dengan alas penyerap dari serat selulosa. Alat ini ditempelkan pada punggung selama 5 hari. Keringat akan terserap pada alas penyerap dan bagian yang tidak terserap akan menguap melalui membran semi membran semi permeable. permeable. Volume keringat bisa diukur dengan menghitung potasium menggunakan teknik elecmode ion selectif . Konsentrasi potasium Konsentrasi  potasium selective  selective tidak terpengaruh terhadap rata-rata keringat. Kesalahan bisa terjadi karena kontaminasi,  pengumpulan data yang tidak komplit atau kesalahan pada prosedure.  b. Pemeriksaan Jaringan Tubuh 1) Jaringan Adipose Jaringan Adipose menjadi materi biopsi  biopsi  yang banyak digunakan pada studi  populasi. Jaringan adipose merupakan biomarker yang baik untuk mengukur asupan nutrien larut lemak dalam lama seperti asam lemak, vitamin E dibandingkan melihat konsentrasinya dalam darah (Baynen danKatan, 1985; Parker, 1989; El-Sohemy et al, 2002 dalam Gibson, 2005). Dapat melihat  perubahan secara cepat dan merefleksikan fluktuasi jangka pendek dari asupan (Kohlmeier dan Kohlmeier, 1995; Hunter, 1998 dalam Gibson, 2005). Metode rapid sampling  mengumpulakn subkutan biopsi jaringan adipose, biasanya  bagian upper buttock  upper  buttock  (El-Sohemy   (El-Sohemy et al, 2002, dalam Gibson, 2005). Meskipun  baian lain juga dapat diinvestigasi (Schafer dan Overvad, 1990; Zhang et al, 1997 dalam Gibson, 2005). 2) Hati dan Tulang Besi dan kalsium umumnya tessimpan dalam hati dan tulang. Sebenarnya  penggunaan hati dan tulang sebagai sampel dalam studi populasi terlalu 8

invasive, biasanya ini hanya digunakan untuk penelitian klinis. DXA ( Dual ( Dual  photon obsorptiometry) obsorptiometry ) sekarang digunakan untuk untuk mengukur mengukur kandungan total mineral dalam tulang. 3) Rambut Rambut biasanya di gunakan untuk mengkur defisiensi trace elemen (Zinc, Se)  pada studi ppulasi dan juga melihat keterpaparan terhadap logam berat ( arsenikda Hg). Biasanya pengkuran ini bersifat retrospectif ,pengkuran kronis status trace elemenmulai rambut tumbuh. Keterbatasan sampel rambut utamanya adalah kontaminasi. Material lain yang mengkontaminasi rambut antara lain udara, air, sabun, shampo dan obatobatan. Selenium pada shmpo dapat meningkatkan kadar selenium pada rambut dan selenium tidak dapat dibersihkan dengan prosedur pencucian. Metode

pengambilan

sampel

rambut

yang

drekomendasikan

adalah

menggunkan 1,5-2cm bagian proximal dari rambut , di potong dari subiccipital dari kulit kepala pada bagian ini memimnimalkan kontaminasi dan kerontokan rambut 1) Kuku Kuku digunakanuntuk menganalisis konsentasi konsentasi trace elemen. Seperti Seperti

kuku

mudah dikumpulkan dan simpan , namun kuku tumbuh lebih lambat di  bandingkan rambut. Elemen komposisi kuku dipengaruhi oleh umur, jenis kelamin, letak geografi dan juga adanya penyakit( fibrosis, wilson, alzheimer) Komposisi elemen kuku dapat digunkan untuk mengukur status beberapa elemen untuk menggambarkan nutrien jangka panjang seperti selenium. Konsentasi selenium pada kuku berhubungan dengan letak geografis keterpapparan selenium . pada individu, selenium berhubungna dengan kebiasaan makan. 2) Sel mukosa mulut Sel mukosa mulut digunakan untuk mengukur mengukur status a-tocoferol dan status konsumsi lemak namun kriterian untuk hasil intrepetasi belum ada. Selain itu  juga digunakan seagai indikator status folat.

9

Sel mukosa dikumpulkan dengan mudan dan non invasive dengan menggunakan spatula. Sel harus dicuci dicuci dengan garam isotonik untuk dianalisis. Kontaminasi dengan makan adalah maslaah utama. 3) Urin Spesimen urin digunakan untuk pengkuran biokimia beberapa trace element antara lain kromium, yodium dan selenium, protein, vitain B kompleks. Urin tidak bisa digunakn digunakn untuk mengkur vitamin A, D,E,K.

Ekskresi urin

menggambarkan status asupan jangka pendek dan stus akut. Metode pengkuran ini dengan ekskresi urin tergantung pada kerja ginjal dalam mengekskresikan nutrien dalam urin dan memetabolismenya ketika cadangan dalam tubuh  berkurang. Untuk pengukuran nutrien dalam urin, diperlukan pengambilan sampel yang  bersih , mencukupi , lebih baik peride 24jam . untuk nutrien tidak stabil memerlukan penyimpanan yang dingin untuk mencegah kerusakan sampel. 2.3.2. Tes Fungsional Tes fungsional diklasifikasikan menjadi 2 kelompok yaitu secara biokimia

dan psikologis atau perilaku. Tes ini mengkur konsekuensi fungsional dari defisiensi nutrien sehingga dianggap lebih signifikan secara biologi dibandingkan dibandingkan  pemeriksaan status biokimia jaringan dan carian tubuh. Tes fungsional biokimia mengukur hasil metabolisme abnormal pada darah atau urin yang disebabkan defisiensi nutrien yang tergantung pada enzim. Beberapa contoh tes funsional biokimia. 1. Metabolit Abnormal pada Darh atau Urin Banyak vitamin vitamin dan mineral bertindak sebagai koenzim untuk sistem enzim. Selama defisiensi , aktifitas enzim ini menurun, berefek pada hasil metabolit yang abnormal pada darah atau urin. Pengukuran metabolit yang tidak normal  pada darah atau urin memberikan hasil yang sensitif dan spesifik untuk menunjukkkan kekurangan gizi. 2. Perubahan Aktivitas Enzim dan Komponen darah Metode biokimia yang paling sering dipilih karena sangat sensitif dan spesifik. Mengukur perubahan aktivitas enzim tergantung pada jenis nutrien yang akan 10

digunkan dan metabolit apa yang akn diidentifikasi pengaruhnya. Idealnya  pengukuran seharusnya seh arusnya merefleksikan jumlah nutrien yang ada dalam tubuh , dapat merespon dengan cepat perubahan suplai nutrien yang ada dalam tubuh.,  berhubungan denganatologi defisiensi atau kelebihan nutrien. Banyak nutrien yang mempunyai fungsi lebih dari satu, karenanya beberapa enzim akan terpengaruh pada keadaan defisiensi 3. Tes In Viro dan Fungsi In Vivo Jaringan dan sel pada tes ini harus diisolasi dan di maintain dibawah kondisi  physiological.

Tes

ini

berhubungan

dengan

pertahanan

diri

dan

kompetensiimunitas dari host karenanya secar luas banyak digunkan. Sistem imun terdiri dari dua komponen limfoid , Thymus dependent (T) lymfosit dan B-limfosit 4. Load Test And Induced Responses In Vivo ( Tes Beban Dan Respon Induced In Vivo) Tes fungsional ini dilakukan pada subjek in vivo demikian juga beberapa tes well-establishedload and tolerance test . Beberapa tes digunakan pada individu dengan suspect defisiensi gizi sehingga tidak cocok untuk studi survei. Biasanya digunakanuntuk mengukur status vitamin larut air dan mineral seperti test beban triptophan untuk pyridoxine, tes beban histidin untuk asam folat, tes beban vitamin C dan tes beban valin untuk vitamin B12 sedangkan untuk mineral di gunkan pada magnesium , zinc dan selenium Tes beban, dosis nutrien diberikan secara oral, intramuscular atau intravena. Setelah itu sampel urin sewaktu dikumpulkan dan tingkat ekskresi nutrien atau metabolit diukur. Pada keadaan defisiensi, ketika jaringan tidak dipenuhi oleh nutrien, ekskresi nutrienatau metabolit akan rendah karena batas retensi tinggi. Saat mengkalkulasikan presentase ekskresi pada tes bebab, asupan basal nutrien harus di ikuti dengan rata-rata koreksiekskresi urindar nutrien. Tes toleransi biasanya digunakan untuktes plasmayang digunakan untuk mengukur status nutrienseperti zinc dan mangan. Pada tes ini konsentrasi nutrien diukur dengan menghitung nilai plasma puasa dan nilai puasa setelah  pemberian dosis nutrien secara oral. Ada perubahan respon pada kasus 11

defisiensi gizi karena absorpsi nutrien diusus halus diasumsikan akan meningkat pada keadaandefisiensi nutrien. 5. Spontaneous In VivoResponses ( Respon Spontan In Vivo) Tes fungsional pertama yang menggunkan in vivo menggunakan respon spontani in vivo adalah adaptasi gelap gelap dan kerapuhan kapiler. Kemampuan adaptasi gelap yang berakibat pada rabun senja, pertama dihubungkan dengan kekurangan vitaminA dan selanjutnya dihubungkan dengan kekurangan zinc. Tes lain yang menggunakan respon fisikin vivo adalah pengukuran karakteristik kontraksi dan relaksasi dan daya tahan otot. Penurunan cadangan  protein dan katabolisme otot akan terjadi kurang energi protein yang akan mengubah kemampuan kontraksi otot rata-rata relaksasi dan daya tahan otot dan juga dapat dilihat nilai status protein. 6. Respon Pertumbuhan Dan Perkembangan Kategori tes fisiologis untuk mengukur fungsi performa dari individu seperti  pertumbuhan, menyusui, kematangan seksual dan kognitif. Beberapa indeks tidak spesifik untuk bebrapa nutrient dan beberapa lebih dipilih dengan menghubungkannya dengan tes laboratorium. Percepatan pertumbuhan contohnya lebih digunkan sebagi indeks fungsional untuk penetuan status gizi  pada bayi dan anak-anak. Pengukuran fungsi kognitif menggunkan metodologi yang kaku. Hubungan antara defisiensinutrien dengan fungsi kognitif hanya bisa diukur dengan: 1) Doukumentasi perbedaan klinis fugsi kognitif antara subyekyang mengalami defisiensi dengan kontrol 2) Peningkatan yang ditunjukkan pada fungsi kognitif setelah suplementasi, dengan menggunakan sampel yang berpasangan dan design yang digunkan adalah double blind randomized suplemetation trial. Pengukuran fungsi kognitif digunakan untuk mengukur hubungna defisiensi  besi termasuk performa tes IQ pada anak usia sekolah. Tes fungsional yang kedua adalah tes psikologis atau tes perilaku. Kebanyakan tes psikologis atau  perilaku sedikit invasivedan lebih mudah ditunjukkan dan secara langsung lebih bisa dihubungkan dihubungkan dengan penyakit atau status kesehatan dibandingkan dibandingkan 12

tes fungsional. Namun bagaimanapun jugates psikologis atau perilaku tidak spesifik 2.4. Pemeriksaan Biokimia Zat Gizi

Penilaian status gizi secara biokimia adalah pemeriksaan spesimen yang diuji secara laboratoris yang dilakukan pada berbagai macam jaringan tubuh. Jaringan tubuh yang digunakan antara lain : darah, urine, tinja dan juga berbagai jaringan tubuh seperti hati dan otot. Penilaian status gizi secara biokimia merupakan  pemeriksaan status gizi yang paling obyektif dan dapat mengetahui zat  –  zat   zat gizi yang ada dalam tubuh. Penilaian status gizi dengan cara ini merupakan penilaian secara langsung. Hasilnya dapat memberikan indikasi perubahan status gizi seseorang pada tahap awal atau dini. Selain itu dapat memberikan gambaran tentang kadar zat gizi dalam darah, urine dan organ lain, perubahan metabolik tubuh akibat kurangnya konsumsi zat gizi tertentu dalam waktu lama serta cadangan zat gizi dalam tubuh. 2.4.1. Pengukuran Status Protein Protein dalam darah mempunyai peranan fisiologis yang penting bagi tubuh

antara lain: 1. Untuk mengatur tekanan air, dengan adanya tekanan osmose dari plasma  protein. 2. Sebagai cadangan protein tubuh. 3. Untuk mengontrol peredaran darah (terutama dari fibrinogen). 4. Sebagai transport yang penting untuk zat-zat gizi tertentu. 5. Sebagai antibodi dari berbagai penyakit terutama dari gamma globulin. 6. Untuk mengatur aliran darah, dalam membantu bekerjanya jantung.

Di dalam darah ada 3 fraksi protein yaitu: a. Albumin

: kadar normalnya = 3,5 –  3,5 –  5  5 gram/100 ml

 b. Globulin

: kadar normalnya = 1,5 –  1,5 –  3  3 gram/100 ml

c. Fibrinogen

: kadar normalnya = 0,2 –  0,2 –  0,6  0,6 gram/100 ml

13

Pemeriksaan biokimia terhadap status protein dibagi dalam 2 pokok, yaitu  penilaian terhadap somatic protein dan visceral protein. Perbandingan somatic dan visceral dalam tubuh antara 75% dan 25%. Somatic protein terdapat pada otot skeletal, sedangkan visceral protein terdapat di dalam organ/visceral tubuh yaitu hati, ginjal, pankreas, jantung, erytrocyt, granulocyt dan lympocyt. Konsentrasi serum protein dapat digunakan untuk mengukur status protein. Penggunaan pengukuran status protein ini didasarkan pada asumsi bahwa  penurunan serum protein disebabkan oleh penurunan produksi dalam hati. Penentuan serum protein dalam tubuh meliputi: albumin, transferrin, prealbumin (yang dikenal juga dengan trasthyeritin dan thyroxine-binding prealbumin), retin ol binding protein (RBP), insulin-Like growth factor-1 dan fibronectin.

Prosedur penentuan serum protein

Ion kupri (Cu2+) dalam reagen biuret bereaksi dengan peptida (-CONH) dan menghasilkan sen yawa peptida berwarna violet. Intensitas warna secara langsung  proporsional denga jumlah peptida pada pengukuran dengan kisaran yang luas. Senyawa ini dibentuk hanya jika paling sedikit ada dua gabungan peptida (CONH). Akibatnya protein bereaksi dengan reagen beuret, sedangkan asam amino, ammonia, urea dan senyawa lain berisi nitrogen sederhana tidak bereaksi. (Peters dan Biamente, 1982). 1. Berilah label setiap tabung uji, yaitu standar, referensi, pool dan setiap subjek uji. 2. Tambahkan 3,0 ml reagen biuret pada setiap tabung. 3. Pada tabung standar, tambahkan 50 µl larutan standar; pada tabung referensi tambahkan 50 µL serum referensi; pada tabung pool tambahkan 50 µL serum pool; pada masing-masing subjek tambahkan dengan 50 µL serum uji. 4. Campurkan setiap tabung secara merata, dan biarkan dalam lemari gelap  pada posisi berdiri minimal 10 menit.

14

5. Tempatkan spectrophometer pada panjang gelombang 555 nm. Aturlah  pada titik nol dengan menggunakan cuvet reagen biuret sebagai referensi kosong. 6. Pindahkan masing-masing isi tabung pada cuvet. 7. Baca dan catat penyerapan sampel standar, referensi dan pool.

Prosedur Penentuan Serum Albumin

Albumin merupakan komponen utama dari protein serum total dalam individu yang sehat. Serum albumin diuji dalam sebagian besar laborat klinik melalui metode penguat warna (dye-binding methode)yang menggunakan bromocesol green. Serum albumin berikatan secara spesifik dengan brocresol green untuk membentuksenyawa BCG albumin biru yang menyerap secara maksimal pada 600 nm. 1. Berilah tabel setiap tabung uji, yaitu kosong, standart, referensi, pool, dan setiap subjek uji 2. Tambahkan 5,0 ml reagen celup penyangga pada masing- masing tabung. 3. Pada tabung kosong tambahkan 20µ destilasi terionisasi. Pada tabung standart tambahkan 20 µL larutan standar. Pada tabung referensi tambahkan 20 µL serum referensi. Pada tabung pool tambahkan 20 µL serum pool. Untuk masing-masing subjek uji tambahkan 20 µL serum uji. 4. Campurkan masing-masing tabung secara merata, dan biarkanpada posisi  berdiri selama 2 menit. 5. Pindahkan masing-masing isi tabung pada cuvet. 6. Tempatkan spekrofotometer pada panjang gelombang 600 nm. 7. Aturlah pada titik nol dengan menggunakan reagen blank. 8. Baca dan catat penyerapan sampel standar, referensi, dan pool. Warna akhir yang berkembang menjadi stabil selama 1 jam. Sampel yang mempunyai lebih dari 6 g/dL albumin harus didilusikan dengan salin isotonik (isotonic saline) dan diuji lagi. Hasilnya kemudian harus dikoreksi pada dilusi ini.

15

Prosedur Penentuan Serum Transthyretin

Perhatikan bahwa bak penampungan tidak meluap. Pelat harus di letakkan  pada posisi horisontal pada tingkat permukaan dan suhu kamar meliputi seluruh  prosedur ini. 1. Siapkan, seperti yang dijelaskan di bawah, tiga konsentrasi berbeda serum standar(manusia) yang dikenal dengan konsentrasi TTR (yaitu 25 mg/dL); ini digunakan untuk kurva standar. Encerkan satu bagian serum standar tersebut dengan tiga bagian 0,9% NaCl yang membuat konsentrasi menjadi 6,25 mg/dL. Campur dengan vortex mixer. Encerkan satu bagian serum standar tersebut dengan satu bagian 0,9%  NaClang membuat konsentrasi menjadi 12,5 mg/dL. Campur dengan vortex mixer. Gunakan serum standar yang tidak diencerkan diencer kan dengan konsentrasi 25 mg/dL. 2. Isikan bak 1 ke bak 3 dengan 5µL masing-masing dari 3 konsentrasi serum standar dengan menggunakan Hamilton syringe atau Eppendorf micropipet. 3. Isikan bak 4 dengan 5µL serum referensi yang tidak diencerkan. 4. Isikan bak 5 dengan 5µL serum pool yang tidak diencerkan. 5. Isikan bak tambahan masing-masing dengan 5µL. Sampel serum uji. 6. Setelah pengisian, biarkan pelat pada posisi terbuka berdiri selama 10-20 menit, lalu tutup pelat tersebut dengan tutup plastik agar terlindungi dari  pengeringan selama inkubasi 7. Tinggalkan pelat ini tetap berdiri pada posisi horisontal di permukaan level, suhu kamar, selama 48 jam. Periode inkubasi ini menyebabkan difusi untuk mencapai titik akhir (yaitu semua antigen yang tersedia telah bergabung dengan antibodi) 8. Setelah 48 jam ukur diameter dari cincin presipitin (sampau ketelitian 0,1 mm) yang diiluminasikab dengan lampu sorot kecil terhadap latar belakang gelap dengan menggunakan kaca pembesar. Atau dengan cara lain menggunakan alat ukur partigen. Saat digunakan, alat pengukur partigen ditempatkan sehingga cincin presipitin menyentuh kedua 16

sisi kerucut pada diameternya yang terbesar; ambil pengukuran pada titik kontak antara diameter cincin presipitin dan penandaan dari alat ukur pengukur tersebut. Dua pengukuran ortogonal pada masing-masing cincin presipitin harus diambil untuk memperkecil kesalahan akibat bentuk cincin yang tidak tepat berbentuk lingkaran. 2.4.2. Penentuan Status Gizi Fe

Ada beberapa indikator laboratorium untuk menentukan status besi yaitu: 1. Hemoglobin (Hb) 2. Hematokrit (HCT) 3. Besi serum 4.  Ferritin serum (Sf) serum (Sf) 5. Transferrin saturation (TS) saturation (TS) 6.  Free erytrocytes protophophyrin (FEP) protophophyrin (FEP) 7. Unsaturated iron-binding capacity serum

a. Hemoglobin (Hb) Hemoglobin adalah parameter yang digunakan secara luas untuk menetapkan  prevalensi anemia. Garby et al menyatakan bahwa penentuan status anemia yang hanya menggunakan kadar Hb ternyata kurang lengkap, sehingga perlu ditambah dengan pemeriksaan yang lain. Hb merupakan senyawa pembawa oksigen pada sel darah merah. Hemoglobin dapat diukur secara kimia dan jumlah Hb/100 ml darah dapat digunakan sebagai

indeks

hemoglobin

kapasitas

yang

rendah

pembawa dengan

oksigen demikian

pada

darah.

Kandungan

mengindikasikan

anemia.

Bergantung pada metode yang digunakan, nilai hemoglobin menjadi akurat samapai 2-3%. Metode yang lebih dulu dikenal adalah metode Sahil yang menggunakan teknik kimia dengan membandingkan senyawa akhir secara visual terhadap standar gelas warna. Ini memberi 2-3 kali kesalahan rata-rata dari metode yang menggunakan spektrofotometer yang baik.  Nilai normal yang paling sering dinyatakan adalah 14-18 gm/100 ml untuk pria dan 12-16 gm/100 ml untuk wanita (gram/100 ml sering disingkat dengan 17

gm% atau gm/dl). Beberapa literatur lain menunjukan nilai yang lebih rendah, terutama pada wanita, sehingga mungkin pasien tidak dianggap menderita anemia sampai Hb kurang dari 13 gm/100 ml pada pria dan 11 gm/100 ml untuk wanita.  b. Hematokrit (HCT) Hematokrit adalah volume eritrosit yang dipisahkan dari plasma dengan cara memutarnya di dalam tabung khusus yang nilainya dinyatakan dalam persen (%). Setelah sentrifugasi, tinggi kolom sel merah diukur dan dibandingkan dengan tinggi darah penuh yang asli. Persentase massa sel merah pada volume darah

yang

asli

merupakan

hematokrit.

Darah

penuh

antikoagulasi

disentrifugasi dalam tabung khusus. Karena darah penuh dibentuk pada intiselnya oleh sel darah merah (SDM) dan plasma, setelah sentrifugasi  persentase sel-sel merah memberikan estimasi esti masi tidak langsung jumlah SDM/100 ml dari darah penuh (dan dengan demikian pada gilir annya merupakan estimasi tidak langsung jumlah hemoglobin). Hematrokrit dengan demikian bergantung sebagian besar pada jumlah SDM. tapi ada beberapa efek (dalam hal jauh lebih sedikit) dari ukuran rata-rata SDM. nilai normal adalah 40%-54% untuk pria dan 37%-47% untuk wanita. HCT biasanya hampir 3 kali nilai Hb (dengan menganggap tidak terdapat tanda hipokromia). Kesalahan rata-rata pada  prosedur HCT yaitu kira-kira 1-2%. c. Serum Besi Prosedur serum iron. Darah harus dikumpulkan menggunakan tabung terevakuasi bebas elemen tembusan. Hanya air terdeionisasi terdistilasi yang harus digunakan. 1) Berilah label tabung uji dengan blanko, standar, referensi, pool  referensi,  pool , dan subjek test masing-masing 2) Tambahkan 2.5 ml reagen penyangga besi pada masing-masing tabung 3) Pada tabung berblangko tambahkan 0.5 ml standar besi. Pada referensi tambahkan 0.5 ml bahan referensi besi serum. Pada pool tambah dengan 0.5 ml serum pooled. Untuk masing-masing subjek uji, tambahkan 0.5 ml serum pada tabung yang cocok. 18

4) Campurkan masing-masing tabung uji secara merata dengan vortex vortex mixer 5) Pindahkan masing-masing sampel pada sebuah cuvet. 6) Pasang pada panjang gelombang 560 nm. Nolkan spektofotometer pada  penyerapan nol dengan blanko blanko reagen. 7) Baca dan catat penyerapan awal sampel blanko, standar, referensi dan uji. Kembalikan sampel-sampel itu pada tabung yang sesuai setelah dilakukan  pembacaan. Ini merupakan penyerapan awal (Ainitial) yang diukur agar dilakukan pertimbangan mengenai pebedaan-perbedaan dalam turbiditas sampel. 8) Tambahkan 0.05 ml reagen warna besi pada masing-masing tabung. Campur masing-masing tabung dan biarkan beridri selama kira-kira 10 menit dalam air pada 37 0 C 9) Pindahkan isi masing-masing tabung pada cuvet 10) Baca lagi dan catat penyerapan sampel blanko, standar, referensi, pool, dan

uji

menggunakan

blanko

untuk

membuat

nol

penunjukan

spektrofotometer. Ini merupakan penyerapan akhir (A final). Perhitungan hasil Jika standar besi berisi 500 µg/dl, konsentrasi besi serum (µg/dl) dari sampel dihitung dengan menggunakan rumus rumus faktor konversi pada satuan sat uan (µmol/L) = x 0,179. d. Transferrin saturation (TS) Penentuan kadar zat besi dalam serum merupakan satu cara menentukan status  besi. Salah satu indikator lainya adalah Total Iron binding capacity (TIBC) dalam serum. Kadar TIBC ini meningkat pada penderita anemia. Karena kadar  besi di dalam serum menurun dan TIBC meningkat pada keadaan defisiensi  besi maka rasio dari keduanya (transferrin (transferrin saturation) saturation) lebih sensitif. Rumus tersebut adalah apabila TS > 16 %, pembentukan sel-sel darah merah dalam sumsum tulang berkurang dan keadaan ini disebut defisiensi besi untuk eritropoiesis. e. Free erythrocyte protophorphyrin (FEP) 19

Apabila penyediaan zat besi tidak cukup banyak untuk pembentukan sel-sel darah merah di sumsum tulang maka sirkulasi FEP di darah meningkat walaupun belum nampak anemia. Dengan menggunakan fluorometric assay, maka penentuan FEP lebih cepat digunakan. Satuan untuk FEP dinyatakan dalam µg/dl darah atau µg/dl darah merah. Dalam keadaan normal kadar FEP  berkisar 35 ± 50 µg/dl µ g/dl RBC tetapi apabila kadar FEP dalam darah lebih besar dari 100 µg/dl RBC menunjukkan individu ini menderita kekurangan besi. Prosedur free erythrocyte protoporphyrin 1) Tekan tombol “ON” pada henatofluorometer dan sisipkan blank glass cover slip ke dalam pemegang sampel. 2) Tekan tombol “MEASURE” dan catat pembacaan pda blank glass cover slip. Gunakan hanya blank cover slip dengan pembacaan dari 000-006. 3) Gunakan pipet pasteur plastik untuk menempatkan setetes darah penuh (kira-kira 20 µL) di atas blank cover slip denga cara menyebarkannya, sehingga berhubungan pada posisi lubang. 4) Tekan tombol “MEASURE” dan catat pembacaan. Jangan subtraksikan  pembacaan pada blank cover slip. 5) Ulangi (4) setelah 10  –  15   15 detik lewat dan kemudian kesampingkan glass cover slip. 6) Untuk kontrol darah, ambil setetes darah (sekitar 35 µL) di atas glass cover slip yang bersih dengan menekan botol. Campurkan tetesan darah dengan ujung botol. Pindahkan tutup botol. 7) Tekan tombol “MEASURE” dan catat pembacaan. Kesampingkan glass cover slip. 8) Periksa kontrol-kontrol darah pada permukaan dan akhir setiap hari, atau setelah 50 pengujiaan yang bisa diterapkan. Nilai kontrol rendah, medium dan tinggi harus ada dalam harga yang dinyatakan. Perhitungan hasil Konsentrasi zink protoporphyrin yang dinyatakan dalam µmol/L RBX’s dapat dihitung menggunakan rumus berikut, yang dalam hal ini hematokrit dinyatakan sebagai fraksi volume dari paket sel darah merah: 20

Konsentrasi zink protoporphyrin juga dapat dinyatakan dalam µg/dL darah  penuh: faktor konversi pada satuan SI (mmol/L) = x 0,0177. f. Serum ferritin (SF) Untuk menilai status besi dalam hati perlu mengukur kadar ferritin. Menurut cook (dalam Mahdin anwar husaini, 1989) banyak ferritin yang dikeluarkan ke dalam darah secara proporsional menggambarkan banyaknya simpanan zat besi di dalam hati. Apabila didapatkan serum ferritin sebesar 30 mg/dl RBC berarti di dalam hati terdapat 30 x 10 mg = 300 mg ferritin. Untuk menentukan kadar ferritin dalam darah dapat dilakukan dengan beberapa metode, yaitu dengan cara immunoradiometric assay (IRMA) atau dengan radio immuno assay (RIA) atau dengan cara enzyme-linked immuno assays (ELISA) yang tidak menggunakan isotop, tetapi enzim. Dalam keadaan normal rata-rata SF untuk laki-laki dewasa adalah 90 µg/l. perbedaan kadar serum ferritin ini menggambarkan perbedaan banyaknya perbedaan zat besi pada tubuh dengan zat besi pada laki-laki tiga kali lebih banyak dari wanita. Apabila seseorang mempunyai kadar SF kurang dari 12 orang yang bersangkutan dinyatakan sebagai kurang besi. Banyak orang yang sebenarnya menderita kurang besi, tetapi tidak dapat terdeteksi dengan cara ferritin karena kadar ferritin yang dikeluarkan dari hati hati menarik dalam darah apabila

yang bersangkutan

menderita penyakit kronis, infeksi dan sakit hati. Namun, apabila penyakit infeksi tidak umum terjadi di masyarakat, penentuan ferritin merupakan pilihan yang tepat. 2.4.3. Penentuan Status Mineral Berdasarkan konsentrasinya di dalam tubuh, maka mineral dibedakan

menjadi Mineral Mayor dan Trace Element.

21

Mineral Mayor

Trace Element

1. Sodium (Na)

1. Iron

2. Potasium (K)

2. Zinc

3. Chloride(Cl)

3. Copper

4. Calcium (Ca)

4. Cobalt

5. Magnesium (Mg)

5. Manganese

6. Phosphorus (Ph)

6. Molybdenum 7. Chromium 8. Selenium 9. Fluoride 10.Nickel

Karakteristik dari Trace Mineral adalah sebagai berikut: 1. Ada dalam jumlah yang sangat sedikit (< 1% total body mass) 2. Peran fisiologis belum jelas: aluminium, arsen, kadmium, gold, lead, dan mercury 3. Heavy metals : arsen, kadmium, lead, dan mercury

Pada saat pengambilan specimen, kita harus memperhatikan hal-hal yang dapat menimbulkan kontaminasi yang akan mempengaruhi hasil pemeriksaan. Trace element kadarnya dalam tubuh dalam mg atau ng per L. nilai ini sebanding dengan kadarnya di lingkungan. Sumber kontaminan bisa berasal dari lingkungan, kontainer dan alat sampling serta lingkungan laboratorium. Hal-hal yang harus diperhatikan antara lain: a. Pengawasan ketat: koleksi spesimen, pemrosesan, dan analisis.  b. Pencucian alat-alat dengan asam c. Cr dan Mn akan meningkat palsu apabila terkontaminasi jarum dari logam d. Se dan Pb akan menurun palsu apabila terjadi adsorb dari tabung gelas e. Al akan meningkat palsu apabila terkontaminasi tutup karet yg terbuat dari aluminium silika. Untuk metode analisis, hal-hal yang harus diperhatikan antara lain: 22

1. Area utk analisis trace metal terpisah dari laboratorium utama 2. Glassware dicuci dg asam kemudian dibilas dengan air suling 3. Sensitivitas analitik sangat penting Atomic absorption spectrophotometry (AAS) merupakan metode yang paling  banyak digunakan untuk pengukuran mineral. mineral. Metode lain bisa menggunakan spektrometri emisi, mass spectrometry , colorimetry. 2.4.4. Penentuan Status Gizi Vitamin Penilaian status vitamin yang terkait dengan penetuan status gizi meliputi

 penentuan kadar vitamin A, vitamin D, vitamin E, vitamin C, tiamin, riboflavin, niasin, vitamin B6, vitamin B12. 1. Vitamin A Deplasi vitamin A dalam tubuh merupakan proses yang berlangsung lama, dimulai dengan habisnya persediaan vitamin A dalam hati, kemudian menurunya kadar vitamin A plasma, dan baru kemudian timbul disfungsi retina, disusul dengan perubahan jaringan epitel. Kadar vitamin A dalam plasma tidak merupakan kekurangan vitamin A yang dini, sebab deplesi terjadi jauh sebelumnya. Apabila sudah terdapat kelainan mata, maka kadar vitamin A serum sudah sangat rendah (kurang dari 5 µg/100 ml), begitu juga kabar RBP-nya (<20 µg/100 ml) konsentrasi vitamin A dalam hati merupakan indikasi yang baik untuk menentukan status vitamin A. Akan tetapi, biopsi hati merupakan tindakan yang mengandung resiko bahaya. Di samping itu, penentuan kadar vitamin A jaringan tidak mudah dilakukan. Pada umumnya konsentrasi vitamin A penderita KEP rendah yaitu <15 µg/gram jaringan hepar (Solihin Pujiadji, 1989).

Tabel 6-1. Batasan dan interpretasi pemeriksaan kadar vitamin A dalam darah Umur (th)

Kurang

Margin

Cukup

Plasma vitamin A (mg)

Semua umur

<10

10-19>20

23

Metode penentuan serum retinol

a. Cara HPLC ( High Performance Liquid Choromatography Choromatography)) 1) Prinsip: Retinol dan standar retinil asetat yang ditambahkan dengan pelarut organik setelah protein serum didenaturasi. Dengan sistem fase berputar (revers phase) kedua protein tersebut dipisahkan dan diukur serapannya  pada panjang gelombang 328 nm dengan HPLC. Konsentrasi retinol dalam serum dapat dihitung dari perbandingan puncak grafik retinol-asetat 2) Prosedur : a) Seratus mikroliter palsma dimasukan ke dalam tabung mikro ditambah 100 mikroliter etanol yang berisi standar retinil acetat (konsentrasi setara dengan 20 µg retinil/dl) dan 200 mikroliter heksan.  b) Kemudian dikocok dengan vortex selama 1 menit. c) Setelah disentifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 5 menit lapisan heksan yang berisi ekstrak vitamin A dipipet s ebanyak 150 µl. d) Ekstrak ini kemudian diuapkan dengan pertolongan gas nitrogen sampai kering. e) Ekstrak yang sudah kering kemudian ditambah 100 mikroliter isoprepanol, kemudian dikocok dan sebanyak 50 mikroliter disuntikan ke HPLC, dengan spesifikasi sebagai berikut. Kolom

: bondapak C18

Buffer (solvent)

: metanol/air, (95/5, perbandingan volume)

Kecepatan aliran

: 2,5 ml/menit

Tekanan

: disesuaikan kecepatan aliran tersebut

Panjang gelombang detektor

: 328 nm

Sensitivitas detektor

: 0,01 AUFS

Suhu

: kamar

Kecepatan rekoder

: 1 cm/menit

Munculnya grafik

: retinol 2,2 menit

Retynil acetat 3,0 menit Perhitungan

: konsentrasi retinol dalam serum

24

Catatan: 1) Semua tabung reaksi yang digunakan harus benar-benar bersih. Untuk mencapai ini semua tabung-tabung harus direndam dalam nitrat atau pun kromat selama 3 hari. 2) Berdasarkan pengalaman, setiap 4-5 kali penyuntikan pada HPLC kolom  perlu dicuci dengan dialiri buffer tanpa sampel selama sekitar 30 menit. 3) Bila ada dugaan kadar vitamin A dalam serum agak tinggi (misalnya serum orang dewasa normal, anak yang baru saja diberi vitamin A dosis tinggi) serum yang digunakan 50 µl saja. Pengalaman di puslitbang gizi bogor selama ini semua kolom yang sudah digunakan untuk penentuan sekitar 250 sampel sudah tidak bisa digunakan lagi. Hal ini mungkin terkait dengan kualitas pereaksi yang ada di Indonesia.  b. Penentuan

kadar

vitamin

A

cara

kolorimeter

dengan

pereaksi

trifluoroasetat/TFA (neeld & pearson) 1) Prinsip: Setelah protein didenaturasi dengan alkohol, vitamin A diextraksi dengan pelarut organik. Extrak dipisahkan dan vitamin A ditentukan dengan direaksikan dengan TFA dan warna biru yang terbentuk diukur serapanya pada panjang 620 nm. Karena karotin juga memberikan reaksi dengan TFA, meskipun juga lebih lemah, perlu ada faktor koreksi karena ada pengaruh dari karotin ini. 2) Cara kerja (semi mikro) a) Lima ratus mikroliter serum dalam tabung reaksi ditambah dengan 500 mikroliter etanol (atau dapat pula 1N KOH dalam 90% etanol).  b) Dikocok dengan tangan sampai rata. Ditambahkan 1000 mikroliter ( = 1 ml) petroleum eter (40-60 ºC) lalu dikocok dengan voltrex selama 1 menit.

25

c) Sentrifugasi pada kecepatan 3000 rpm selama 5-10 menit akan memisahkan extarak vitamin A di bagian atas serta campuran serum alkohol di bagian bawah. d) Extrak dipipet sebanyak 750 mikroliter lalu diukur serapannya pada  panjang gelombang 450 450 nm untuk penentuan karotin. e) Extrak tersebut kemudian diuapkan samapai kering dengan gas nitrogen. Ditambah dengan 1500 mikrolier pereaksi TFA (campuran 1  bagian TFA dan 2 bagian bagian kloroform yang disiapkan segar). f) Warna biru yang terbentuk harus sudah diukur serapannya dalam waktu 30 detik pada panjang gelombang 620 620 nm. Standar vitamin A yang dilarutkan dalam kloroform da berisi 2 mg/ml, 4 mg/ml, dan 8 mg/ml disiapkan. Dipipet 25 ml dari masing-masing konsentrasi tersebut dan diukur serapanya setelah ditambah 1500 mikroliter pereaksi. Standar tersebut setara dengan konsentrasi vitamin A dalam serum 10 µg/dl, 20 µg/dl, 30 µg/dl dan 40 µg/dl. µ g/dl. Faktor koreksi karena pengaruh reaksi antara pereaksi dengan karotin dibuat sebagai berikut: a) Disiapkan standar karotin yang berisi 10 µg/dl, 20 µg/dl, 40 µg/dl dan 80 µg/dl.  b) Dipipet masing-masing sebanyak 750 mikroliter lalu diuapkan sampai kering dengan nitrogen. c) Kemudian direaksikan dengan 155 mikroliter pereaksi dan serapannya diukur pada panjang gelombang 620 nm. Dengan demikian dapat dihitung faktor koreksi karena pengaruh karotin. Pengalaman di puslitbang gizi bogor faktor koreksi pengaruh karotin ini sekitar 15% pembacaan karotin pada panjang gelombang 450 nm. Jika seandainya serapan karotin pada 459 nm adalah 0,100 maka pembacaan vitamin A pada 620 nm perlu dikurangi 15 % dari 0,100 baru kemudian dikurangi blangko. Dengan demikian dalam buku catatan penentuan vitamin A ada 10 kolom seperti terlihat pada tabel 6-2. 26

Dari standar vitamin A dapat dihitung faktor perhitungan vitamin A dan dari standar karotin dapat dihitung faktor perhitungan karotin dengan prinsip :

Catatan: 1) Kecepatan pada pengukuran kecepatan pada panjang gelomabang 620 nm tergantung

pada

pengalaman

petugas

laboratorium.

Kalau

sudah

 berpengalaman waktu yang diperlukan semenjak penambahan pereaksi samapai pengukuran serapan sejumlah 22-23 detik. 2) Waktu melarutkan standar karotin mula-mula ditambah beberapa ml kloroform, baru kemudian ditambah PE sesuai tujuan. Bila langsung ditambah PE, sebagian karotin tidak larut. 3) Pada penentuan vitamin A dengan cara kolorometri ini adalah total vitamin A (retinol dan retinil ester), sedangkan dengan HPLC hanya ditambah PE sebagai karotin tidak larut. 4) Pada penentu vitamin A (retinol dan retinil ester), sedangkan dengan HPLC hanya retinol saja (suharjo, 1990. Penilaian Keadaan Gizi Masyarakat, hlm. 172-175) 2. Vitamin D Kekurangan vitamin ini dapat mengakibatkan penyakit rakhitis dan kadangkadang tetani. Apabila kekurangan terjadi pada masa pertumbuhan akan timbul osteomalasia. Sangat jarang ditemukan rakitis bawaan, insiden tertinggi terdapat pada umur 18 tahun. Kekurangan vitamin D timbul kalsifikasi tulang yang tidak normal disebabkan oleh karena rendahnya saturasi kalsium dan fosfor dalam cairan tubuh. Keadaan resorpsi tulang akan melebihi pembentukannya hingga menyebabkan demineralisasi umum pada rangka yang berakibat menjadi lunaknya tulangtulang serta deformitas torax, tulang punggung, pelvis dan tulang-tulang  panjang. Beberapa zat yang berhubungan dengan aktivitas vitamin D adalah: 27

1) Vitamin D2  (ersokalsiferol) yang dihasilkan oleh radiasi ersoterol (dalam tumbuh-tumbuhan) secara artifisial dengan sinar ultraviolet. 2) Vitamin D3 (kolekalsiferol) yang dihasilkan oleh radiasi pada kulit manusia dengan komponen ultraviolet sinar matahari dan juga terdapat secara alamiah pada sumber makanan hewani. Kolekalsiferol dikonversi di dalam hati dan mungkin usus menjadi 25(OH) kolekalsiferon Pada pemeriksaan biokimia penderita rakhitis ditemukan hasil: 1) Kadar kalsium serum normal atau lebih 2) Kadar fosfor rendah 3) Kadar fosfatase meninggi 4) Kadar 25 (OH) vitamin D dibawah 4 mg/ml 5) Vitamin E Devisit vitamin E jarang sekali ditemukan oleh sebab makanan sehari-hari mengandung cukup vitamin E. namun demikian kita harus tetap waspada adanya kemungkinan keadaan subklinis, misalnya pada bayi berat badan lahir rendah dimana transfer vitamin E melalui plasenta tidak efisien. Gangguan yang dapat dilihat karena kekurangan vitamin E adalah hemolisis dan mengurangnya umur hidup eritrosit. Penelitian pada binatang percobaan didapatkan bahwa defisit vitaminE menyebabkan kemandulan baik pada jantan dan betina. Gangguan lain adalah distrofi otot dan kelainan saraf pusat (ensefalomalasia). Pada pemeriksaan biokimia seorang anak dikatakan memiliki nilai normal vitamin vitamin E bila di dalam serum ≥ 0,7 mg. 2.4.5. Pemeriksaan Biokimia pada Beberapa Masalah Gizi di Indonesia A. Yodium Kadar Iodium dalam Urine

Pada join WHO, UNICEF, ICCIDD Consultation tahun 1992 (Stanbury, 1996 dalam Rinaningsih, 2007), telah disepakati pengambilan sampel urine untuk  pemeriksaan Urinariy Excretion iodine (EUI) cukup menggunakan urine sewaktu dan tidak perlu lagi menggunakan ratio dengan kreatinin. Urine dapat ditampung dalam botol penampung tertutup rapat, tidak perlu dimasukkan dalam lemari es selammasa transportasi dan tidak perlu ditambah pengawet urine. Metode yang 28

direkomendasikan adalah  Ammonium Persulfate Disgestion.  Disgestion.  Pertimbangan  pemilihan metode ini yaitu mudah, sepat dan tidak memerlukan alat yang terlalu t erlalu mahal (Rachmawati B, 1997 dalam Rinaningsih, 2007) Klasifikasi kecukupan yodium berdasarkanMedian UEI (Stanbury, 1996 dalam Rinaningsih, 2007) adalah : 1. Defisiensi Berat, median UEI < 20 µg/L 2. Defisiensi Sedang, median UEI 20-49 µg/L 3. Defisiensi Ringan, median 50-99 µg/L 4. Optimal, median UEI 100-200 µg/L 5. Lebih, median UEI 201-300 µg/L 6. Kelebihan (excess), median EUI > 300 µg/L Berikut ini penentuan kadar yodium dalam urine dengan metode cerium yang cerium yang diuraikan dalam buku karangan Supariasa, 2002 adalah : 1. 10 ml urine didestruksi (pengabuan basah) dengan penambahan 25 ml asam klorat 28% dan 1 ml kalium klorat 0,5%. 2. Panaskan di atas hotplate sehingga volume larutan menjadi kurang dari 0,5 ml. Larutan ini diencerkan dengan air suling sehingga volume larutan menjadi 100 ml. 3. Dari larutan terakhir ini dipipet 3 ml, kemudian ditambahkan 2 ml asam arsenit 0,2 N ; lalu didiamkan selam 15 menit. 4. Ke dalam tiap larutan kemudian ditambahkan 1 ml larutan cerium (4+) ammonium sulfat 0,1 M; dikocok kembali didiamkan selama 30 menit. Absorpsi dilakukan pada panjang gelombang 420 ml. Kurva standart dibuat dengan cara yang sama seperti di atas pada kadar yodium 0,01, 0,02, 0,03, 0,04 dan 0,05 ppm (terlampir). Larutan standart induk yang  berkadar 100 ppm idbuat dengan melarutkan 0,0168 g K103 dalam 100 ml air suling. Karena kadar yodium dalam urine dinyatakan dalam mg 1 per g kreatinin maka diukur pula kadar kreatinin urine dengan cara sebagai berikut : Penentuan Kadar Kreatinin Urine 1. 0,1 ml urine yang telah diencerkan 100 kali ditambahkan 4 ml H 2SO4  N dan 0,5 ml natrium tungstat. tungstat. 29

2. Setealah itu dikocok dan didiamkan selama 15 menit lalu dipusing selama 10 menit. 3. Supernatan dipisahkan lalu ditambahkan 0,5 ml larutan campuran 1 ml asam pikrat 10% dan 0,2 ml NaOH 10%. 4. Setelah didiamkan selam 15 menit, absorpsi larutan dibaca pada panjang gelombang 520 nm. Standart kreatinan dengan konsentrasi 1 mg/100 ml dikerjakan dengan cara yang sama. Perhitungan kadar yodium per g kreatinin: jika diketahui konsentrasi yodium A µg/Iurine dan kadar kreatinin b g/I maka kadar yodium a/b µg/g kreatinin (Suharjo, 1990). Batasan dan klasifikasi pemeriksaan kadar yodium dalam urine adalah jika suatu daerah dianggap endemis berat bial rata-rata ekskresi yodium dalam urine lebih rendah dari 25 µg yodium/gram kreatinin, endemik sedang bila ekskresi yodium dalam urine 25-30 µg yodium/gram kreatinin. Anak sekolah dapat digunakan sebagai target penelitian karena  prevalensi GAKY pada anak sekolah umumnya menggambarkan prevalensi yang ada dalam masyarakat (Supariasa, 2002). Dalam buku karangan Ningtiyas (2010) biomarker yang biasanya digunakan untuk mengukur status yodium adalah ekskresi yodium urine, ini mendekati gambaran asupan yodium. Pengukuran yodium urin 24 jam lebih dipilih meskipun WHO menganjurkan urin casual  (urin  (urin sesaat). Konsentrasi TSH dalam serum, whole blood atau cord blood  biasa   biasa digunakan di negara barat. T3 dan T4  dalam serum mahal, menjadi biomarker yang jarang digunakan. Dimasa yang akan datang sangat dimungkinkan menggunakan tyroglobulin dan darah kering untuk biomarker yodium pada anak-anak. Ekskresi yodium urin merefleksikan konsumsi yodium harian karena hanya sedikit yodium yag dikeluarkan melalui feses. Lebih dari 90% asupan yodium dikeluarkan melalui urin (Nath et al, 1992 dalam Gibson, 2005). Dengan asumsi nilai median dari urin 24 jam adalah 0,0009 L/h/kg dan rata-rata biofaibilitas yodium dalam makanan adalah 92% maka intakae yodium harian dalam µg bisa dihitung dengan Intake yodium harian = (0,0009 x 24/0,92) x BB x IEU = 0,0235 x BB x IEU. 30

2.5. Pemeriksaan Zat Gizi Spesifik 2.5.1. Kurang Energi Protein Analisis biokimia yang berkaitan dengan KEP yaitu menyangkut nilai

 protein tertentu dalam darah d arah atau ata u hasil metabolit dari protein yang beredar dalam darah dan yang dikeluarkan bersama urin. Jenis protein yang menggambarkan status gizi seseorang antara lain Prealbumin, Serum protein dan serum Albumin. Perubahan jumlah nutrisi protein dalam tubuh dapat dimonitor secara langsung menggunakan pengukuran antropometri, misalnya area otot lengan atas sampai tengah dimana menunjukkan perkiraandan perubahan rangka lengan sebagai tempat jumlah protein yang paling banyak. Massa rangka lengan dapat diperkirakan menggunakan bioelektrik impedance, komputerisasi tomografi,  penggambaran resonansi magnetis dan penyerapan penyerapan dual energi sinar X. Tabel. Nilai Prealbumin dalam kaitannya dengan Status Gizi Status gizi

Nilai prealbumin µg/dl

Baik*)

23.8 +/-0.9

Gizi sedang*)

16.5 +/- 0.8

Gizi kurang*)

12.4 +/- 1.0

Gizi buruk*)

7.6 +/- 0.6



Marasmus**)

3.3 +/- 0.2



Marasmus-Kwashiorkor*)

3.2 +/- 0.4



Kwashiorkor**)

Keterangan : *) Menurut klasifikasi Waterlow **) Menurut klasifikasi Welcome Tabel. Batasan dan Interpretasi Kadar Serum Protein dan Serum Albumin  No 1

Senyawa & satuan Serum ml)

Albumin

Umur (tahun)

Kriteria Kurang

Margin

Cukup

 – 

<2.8

2.5+

1 –  5  5

 – 

<3.0

3.0+

6 –  16  16

 – 

<3.5

3.5+

(gr/100 < 1

31

16+

2

<2.8

2.8-3.4

3.5+

Wanita hamil <3.0

3.0-3.4

3.5+

 – 

<5.0

5.0+

1 –  5  5

 – 

<5.5

5.5+

6 –  16  16

 – 

<6.0

6.0+

16+

6.0

6.0-6.4

6.5+

Wanita hamil 5.5

5.5-5.9

6.0+

Serum Protein (gr/100 ml) < 1

2.5.2. Kurang Vitamin A (KVA)

Indikator yang digunakan Batas Prevalensi Plasma Vitamin A >= 10 µg/dl >=5% Liver Vitammin A >= 5 µg/dl >=5% Analisis vitamin A melalui sampel darah:

1. Serum retinol Kadar serum retinol menggambarkan status vitamin A hanya ketika cadangan vitamin A dalam hati kekurangan dalam tingkat berat (<0,07 µmol/g hati) atau  berlebihan sekali (>1,05 µmol/g µ mol/g hati). Serum retinol merupakan indikator yang sering digunakan untuk penentuan tingkat KVA pada populasi karena banyak laboratorium yang mampu menganalisisnya dan ini merupakan indikator  biokimia status vitamin A terbaik. 2. Serum Retinol Binding Protein (RBP) RBP adalah protein transpor spesifik vitamin A, dinamakan holo RBP ketika  berikatan dengan retinol, sedangkan bila tidak ti dak ada ikatan dinamakan apo-RBP. Bila cadangan hati menurun, yang timbul pada tingkat akhir defisiensi vitamin A. Konsentrasi serum RBP dapat menggambarkan konsentrasi serum retinol dan karena itu mungkin dapat digunakan untuk indikator status vitamin A. Penentuan RBP lebih mudah dibandingkan dengan penentuan serum retinol. a. Pertama karena RBP adalah protein, yang dapat dideteksi dengan  penentuan imunologi, yang lebih sederhana dan lebih murah dibandingkan dengan analisis serum retinol HPLC. Penentuan RBP dapat menggunakan 32

 prosedur radioimmunoassay (RIA) yang spesifik dan sensitive di mana RBP berikatan dengan radioactively labeled antibodies. Alternatif lain, menggunakan tes secara cepat yang baru yaitu Enzyme immunoassay (EIA). Hasil uji menunjukkan RBP EIA berhubungan secara bermakna dengan serum retinol yang dianalisis dengan HPLC.  b. Kedua penanganan serum lebih mudah karena RBP lebih stabil dibandingkan dengan retinol, tidak sensitif terhadap cahaya dan kurang sensitif terhadap temperatur, lebih stabil selama dalam kotak pendingin. c. Ketiga, analisis RBP memerlukan amat sedikit serum 10-20 L darah vena yang dapat diambil dari jari. 3. Serum retinyl ester Pada orang yang sehat, kandungan retinyl ester kurang dari 5 persen dari total vitamin A pada serum orang berpuasa. Pada kondisi kapasitas penyimpanan vitamin A berlebih, misalnya setelah mengasupan vitamin A dalam jumlah  besar (Hypervitaminosis) atau pada penyakit hati, vitamin A dalam sirkulasi darah berupa retinyl ester dan kemudian meningkatkan kadar retinyl ester dari darah yang diperiksa. Batas untuk menggambarkan hypervitaminosis adalah  bila retinyl ester >10 persen dari total vitamin A. Untuk menentukan kadar retinyl ester diperlukan darah saat berpuasa karena konsentrasi retinyl ester naik setelah mendapat asupan vitamin A. Pengukuran konsentrasi retinyl ester dalam serum yang paling baik adalah dengan fase normal dari HPLC, saat di mana kadar rendah serum puasa dapat diukur bersamaan dengan kadar serum retinol. 5. Serum karotenoid Komponen utama dari serum karoten adalah ββ -karoten (β-carotene), (β-carotene), likopen (lycopene) dan beberapa karotenoid. Diketahui beberapa faktor non-gizi  berpengaruh pada konsentrasi serum karoten, faktor tersebut adalah umur, jenis kelamin, asupan alkohol, status fisiologis, indeks massa tubuh dan musim. Merokok juga mungkin mempengaruhi hubungan antara asupan β -karoten dan kadar serum β-karoten. β-karoten. 6. Metode stable isotope isotope dan cadangan total vitamin A 33

Prosedur isotop dilution hanyalah metode yang mengukur secara kuantitatif cadangan vitamin A di dalam hati. Yang dilakukan adalah memberi secara oral tetradeuterated vitamin A. Pemberian isotop memungkinkan untuk seimbang dengan cadangan vitamin A di dalam tubuh, kemudian dilakukan pengambilan darah dan rasio dari komponen deurated dan non-deuterated diukur dengan spektrofotometri. 7. Relative dose response (RDR) Konsentrasi vitamin vitamin A dalam hati merupakan indikator terbaik untuk untuk status vitamin A tubuh. Namun, untuk menentukan vitamin A dengan biopsi langsung  pada orang sehat adalah hal yang tidak mungkin dilakukan. Metode RDR dapat digunakan untuk menduga cadangan vitamin A dalam hati karena itu dapat mengidentifikasi seseorang dengan defisiensi vitamin A marginal. Tes ini didasarkan pada observasi bahwa selama terjadi kekurangan vitamin A, cadangan dalam hati menurun, Relative Dose Response (RDR) test, dikembangkan oleh Underwood et al, telah dibuktikan sebagai indikator yang  baik untuk menentukan status vitamin A. Setelah diberi vitamin A yang dilarutkan dalam minyak, konsentrasi dari retinol plasma (R) meningkat sete lah lima jam pada tingkat yang paling tinggi pada anak yang mempunyai status vitamin A kurang atau marginal dibandingkan dengan mereka yang status vitamin A nya cukup. Prosedur ini telah divalidasi dengan menghitung nilai  persentase RDR pada cadangan vitamin vit amin A dalam hati yang ditentukan dengan  biopsi. Kelemahan utama dari penggunaan prosedur ini dalam penggunaan di lapangan adalah memerlukan pengambilan darah dua kali, dengan interval waktu 5 jam. 8. MRDR (Modified Relative Dose Response) Penentuan MRDR didasarkan pada prinsip yang benar-benar sama dengan RDR. Prinsip MRDR: selama terjadi penurunan vitamin A apo-RBP  berakumulasi dalam hati. Dengan pemberian test dose, 3,4 didehydroretinyl acetate (vitamin A2) akan muncul setelah 4-6 jam dalam serum terikat pada RBP sebagai 3,4 didehydroretinol (DR). (DR). Menurut Tanumihardjo 1999, 1999, MRDR test akan menghasilkan perbedaan yang lebih jelas dibandingkan dengan 34

konsentrasi serum retinol saja dan hasil secara statistik lebih kuat dan lebih  baik dalam menjelaskan penjelasan status vitamin A pada populasi. MRDR tes hanya memerlukan satu pengambilan darah Sebagai ganti dari  pemberian retinyl

acetate,

digunakan pemberian

sejumlah

kecil

3,4-

didehydroretinyl acetate. Setelah tiga hingga delapan jam setelah pemberian 3,4-didehydroretinyl acetate sebagai test dose, rasio dari didehydroretinol (DR) pada Retinol (R) dalam plasma secara proporsional kebalikannya terhadap cadangan vitamin A dalam hati yang berada pada batas kekurangan dan marginal (kurang dari 0.07 micromol/g hati). MRDR rasio memberi gambaran status vitamin lebih baik dibandingkan dengan serum retinol. Hasil tes dari RDR dan MRDR menunjukkan indikasi batas marginal atau penurunan cadangan vitamin A dalam hati sama dengan yang ditunjukkan oleh konsentrasi serum retinol. 2.5.3. Anemia Gizi Besi (AGB)

Anemia gizi adalah suatu keadaan dimana kadar hemoglobin (Hb) dalam darah kurang dari normal, yang berbeda untuk setiap kelompok umur dan jenis kelamin. Anemia gizi besi merupakan masalah gizi utama bagi semua kelompok umur dengan prevalensi anemia paling tinggi pada ibu hamil (70%) dan pekerja  berpenghasilan rendah (40%). Prevalensi pada anak sekolah sekitar 30% dan pada anak balita sekitar 40%. Ada beberapa indikator laboratorium untuk menentukan status besi, yaitu : a. Hemoglobin (Hb) Hemoglobin adalah parameter yang digunakan secara luas untuk menetapkan  prevalensi anemia. Garby et al. Menyatakan bahwa penentuan status anemia yang hanya menggunakan kadar Hb ternyata kurang lengkap, sehingga perlu ditambah dengan pemeriksaan yang lain. Hb merupakan senyawa pembawa oksigen pada sel darah merah. Hemoglobin dapat diukur secara kimia dan  jumlah Hb/100 ml darah dapat digunakan sebagai indeks kapasitas pembawa oksigen pada darah. Kandungan hemoglobin yang rendah dengan demikian mengindikasikan anemia. Bergantung pada metode yang digunakan, nilai hemoglobin menjadi akurat sampai 2-3 %. Metode ini dikenal dengan metode 35

sahli. Metode pemeriksaan Hb adalah Sahli dan cyanmetHb merupakan standar  penelitian. Simpanan besi terdapat di sumsum tulang, pada saat feritin menurun maka serum besi menurun. Tabel. Tabel. Batasan Batasan H emoglobi n D arah ( Sumber : WH O, 1975  1975 

Kelompok 

Batas nilai Hb

Bayi / balita

11 g/dl

Usia sekolah

12 g/dl

Ibu hamil

11 g/dl

Pria dewasa

13 g/dl

Wanita dewasa

/dl

Tabel. Tabel. B atasan atasan A nemia (M enu r ut D epkes pkes) 

Kelompok

Batas Normal

Anak balita

11 gram %

Anak Usia sekolah

12 gram %

Wanita dewasa

12 gram %

Laki-laki dewasa

13 gram %

Ibu hamil

11 gram %

Ibu menyusui > 3 bulan

12 gram %

36

 b. Hematokrit (Hct) Hematokrit adalah volume eritrosit yang dipisahkan dari plasma dengan cara memutarnya didalam tabung khusus yang nilainya dinyatakan dalam persen (%). Setelah sentrifugasi, tinggi kolom sel merah diukur dang dibandingkan dengan tinggi darah penuh yang asli. Persentase massa sel merah pada volume darah yang asli merupakan hematokrit. Nilai normal untuk hematokrit adalah 40%- 50% untuk pria dan 37% - 47% untuk wanita. HCT biasanya hampir 3 kali nilai hemoglobin. Kesalahan rata-rata pada prosedur HCT yaitu kira-kira 1% -2%. Nilai hematokrit yang kuang dari normal terdapat pada anemia. c. Besi Serum (Fe) Defisiensi besi terjadi pada tahap awal, sebelum menurunnya Hb. d. Feritin Serum (Sf) Untuk menilai status besi dalam hati perlu mengukur kadar ferritin Menurut Cook (dalam Mahdin Anwar Husaini, 1989) banyaknya feritin yang dikeluarkan darah secara proporsional menggambarkan banyaknya simpanan zat besi di dalam hati. Apabila didapatkan serum ferritin sebesar 30 mg/dl RBC  berarti didalam hati terdapat 30x10 mg=300 mg ferritin. Untuk menentukan kadar ferritin dalam darah dapat dilakukan dengan beberapa metode yaitu dengan cara Immunoradiometric assay (IRMA), Radio Immuno Assay (RIA) dan Enzyme-Linked Immuno Assays (ELISA). Dalam keadaan normal ratarata SF untuk laki-laki dewasa adalah 90µg/l dan wanita dewasa adalah 30µg/l. Perbedaan kadar serum ferritin ini menggambarkan perbedaan banyaknya zat  besi pada tubuh dengan zat besi pada laki-laki tiga kali lebih banyak dari wanita. Apabila seseorang mempunyai kada SF kurang dari 12, orang yang  bersangkutan dinyatakan sebagai kurang besi. Banyak orang yang sebenarnya menderita kurang besi, tetapi tidak dapat terdeteksi dengan cara ferritin karena kadar ferritin yang dikeluarkan dari hati menaik dalam darah apabila yang  bersangkutan menderita penyakit kronis, infeksi dan gangguan gangguan hati. e. Transferrin Saturation (TS) 37

Penentuan kadar zat besi dalam serum merupakan satu cara menentukkan status besi. Salah satu indikator lainnya adalah Total Iron Binding Capacity (TIBC) dalam serum. Kadar TIBC ini meningkat pada penderita anemia karena kadar besi di dalam serum menurun dan TIBC meningkat pada keadaan defisensi besi maka rasio dari keduanya (transferri saturation) lebih sensitif. Apabila TS > 16 %, pembentukan sel-sel darah merah dalam sumsum tulang  berkurang dan keadaan ini disebut defisiensi besi untuk eritropoesis. eritropoesis. f. Free Erytrocytes Protophophyrin (FEP) Apabila penyediaan zat besi tidak cukup banyak untuk pembentukkan sel-sel darah merah disumsum tulang maka sirkulasi FEP di darah meningkat walau  belum tampak anemia.Dalam keadaan normal FEP berkisar 35±50µ/dl RBC tetapi apabila kadar FEP dalam darah lebih besar dari 100µg/dl RBC menunjukkan individu ini memnderita kekurangan besi. g. Unsaturated Iron binding capacity serum (UIBC) h. Morfologi darah Pemeriksaan morfologi darah ini ini dilakukan untuk mengetahui jenis anemianya. 2.5.4. GAKI Yodium diperlukan untuk pertumbuhan, perkembangan serta fungsi otak.

Meskipun kebutuhan yodium sangat sedikit (0.15 µg) kita memerlukan yodium secara teratur setiap hari. GAKY adalah rangkaian kekurangan yodium pada tumbuh kembang manusia. Spektrum seluruhnya terdiri dari gondok dalam  berbagai stadium, kretin endemik yang ditandai terutama oleh gangguan mental, gangguan pendengaran, gangguan pertumbuhan pada anak dan orang dewasa, sering

dengan

kadar

hormon

rendah, angka

lahir

dan

kematian

bayi

meningkat. Kekurangan yodium akan mengalami gangguan fisik antara lain gondok, badan kerdil, gangguan motorik seperti kesulitan untuk berdiri atau  berjalan normal, bisu,tuli atau mata juling. Sedangkan gangguan mental termasuk  berkurangnya kecerdasan. Untuk mengetahui total goitre rate (pembesaran kelenjar gondok) dimasyarakat bisa dilakukan dengan palpasi atau dengan Disamping itu ada cara lain yaitu dengan melakukan pemeriksaan kadar Tyroid 38

Stimulating Hormone (TSH) dalam darah dan mengukur ekskresi yodium dalam urine. Metode penentuan kadar yodium dalam urin dengan menggunakan metode Cerium. Prosedur penentuan kadar yodium dengan metode Cerium adalah sebagai  berikut : a) 10 ml urin didestruksi (pengabuan basah) dengan penambahan 25 ml asam klorat 28% dan 1 ml kalium kromat 0.5 %.  b) Panaskan diatas hotplate sehingga volume larutan menjadi kurang dari 0.5 ml. Larutan ini diencerkan dengan air suling sehingga volume larutan menjadi 100 ml. c) Dari larutan terakhir ini dipipet 3 ml, kemudian ditambahkan 2 ml asam arsenit 0.2 N; lalu didiamkan selama 15 menit. d) Ke dalam tiap larutan kemudian ditambahhkan 1 ml larutan cerium (4+) ammonium sulfat 0.1 M; dikocok kembali didiamkan selama 30 menit. Absorpsi dilakukan pada panjang gelombang 420 nm. Kurva standar dibuat dengan cara yang sama seperti di atas pada kadar yodium 0.01; 0.02; 0.03; 0.04; dan 0.05 ppm. Larutan standar induk yang  berkadar 100 ppm ddibuat dengan melarutkan 0.0168 g KIO 3 dalam 100 ml air suling. Karena kadar yodium dalam urin dinyatakan dalam mg 1 per g kreatinin, maka diukur pula kadar kreatinin urin dengan cara sebagai berikut : a. 0.1 ml urin yang telah diencerkan 100 kali ditambahkan 4 ml H 2SO4 1/12  N dan 0.5 ml

natrium tungstat.

 b. Setelah itu dikocok dan didiamkan selama 15 menit lalu dipusing selama 10 menit. c. Supernatan dipisahkan lalu ditambahkan 0.5 ml larutan campuran 1 ml asam pikrat 10% dan 0.2 ml NaOH 10%. d. Setelah didiamkan selama 15 menit, absorpsi larutan dibaca pada panjang gelombang 520 nm. Standar kreatinin dengan konsentrasi 1 mg dikerjakan dengan cara yang sama. Perhitungan kadar yodium per g kreatinin : jika diketahui konsentrasi 39

yodium A µg/l urin dan kadar kreatinin B g/l. maka kadar yodium A/B µg/g kreatinin.  Batasan dan klasifikasi pemeriksaan kadar yodium dalam urin :   Suatu daerah dianggap endemis berat bila rata-rata ekskresi yodium dalam urin lebih rendah dari 25 µg yodium/gram kreatinin., endemik sedang bila ekskresi yodium dalam urin 25-50 µg iodium/gram kreatinin. Anak sekolah dapat digunakan sebagai target penelitian karena prevalensi GAKI pada anak sekolah umumnya menggambarkan prevalensi yang ada dalam masyarakat. Defisiensi yodium merupakan penyebab dominan gondok endemik yang diklasifikasikan menurut ekskresi yodium dalam urin (µg/gr kreatinin), antara lain : a. Tahap 1 : gondok endemik dengan rata-rata >50 µg/gram kreatinin dalam urin. Pada keadaan ini suplai hormon tyroid cukup untuk perkembangan fisik dan mental yang normal.  b. Tahap 2 : gondok endemik dengan rata-rata 25-50 µg/gram kreatinin dalam urin. Pada kondisi ini sekresi hormon tyroid boleh jadi tidak cukup, sehingga menanggung resiko hypotyroidisme, tettapi tidak sampai ke kreatinisme. c. Tahap 3 : gondok endemik dengan rata-rata ekskresi yodium dalam urin kurang dari 25 mg/gram kreatinin. Pada kondisi ini populasi memiliki resiko menderita kreatinisme. 2.6. Keunggulan dan Kelemahan Biokimia 2.6.1. Keunggulan Pemeriksaan bikomia bila dibandingkan dengan pemeriksaan lain dalam

 penentuan status gizi memiliki keunggulan-keunggulan keunggulan-keunggulan antara lain : 1. Dapat mendeteksi defisiensi zat gizi lebih dini. 2. Hasil

dari

pemeriksaan

biokimia

lebih

objektif,

hal

ini

karena

menggunakan peralatan yang selalu ditera dan pada pelaksanaannnya dilakukan leh tenaga ahli.

40

3. Dapat menunjang hasil pemeriksaan metode lain dalam penilaian status gizi. 2.6.2. Kelemahan 1. Pemeriksaan biokimia hanya bisa dilakukan setelah timbulnya gangguan

metabolism. 2. Membutuhkan biaya yang cukup mahal. 3. Dalam melakukan pemeriksaan diperlukan tenaga yang ahli. 4. Kurang praktis dilakukan dilapangan, hal ini karena pada umumnya  pemeriksaan laboratorium memerlukan peralatan yang tidak mudah dibawa kemana-mana 5. Pada pemeriksaan tertentu specimen sulit untuk diperoleh, misalnya  penderita tidak bersedia diambil darahnya. 6. Membutuhkan peralatan dan bahan yang lebih banyak dibandingkan dengan pemeriksaan lain. 7. Belum ada keseragaman dalam memilih reference (nilai normal). Pada  beberapa reference nilai normal tidak selalu dikelompokkan menurut kelompok umur yang lebih rinci. 8. Dalam beberapa penentuan pemeriksaan laboratorium memerlukan  peralatan laboratorium yang hanya terdapat dilaboratorium pusat, sehingga didaerah

tidak

dapat

dilakukan

41

BAB 3 PENUTUP

3.1. Kesimpulan

Dalam menentukan Penentuan status gizi secara biokimia/laboratorium terdiri dari pemeriksaan status biokimia dalam tubuh dan tes fungsional/ fisiologis. Banyak sekali macam-macam penentuan status gizi baik secara bikomia mau fungsional. Pada pemeriksaan status gizi secara biokimia lebih akurat dan objektif sehingga dapat menedeteksi masalah gizi sejak dini namun pada pemeriksaan status gizi secara biokimia memerlukan banyak biaya. Dari berbagai macam  penentuan status gizi tersebut mempunyai tujuan yang sama yaitu untuk mengetahui tingkatan gizi seseorang dengan melakukan pemeriksaan status  biokimia pada jaringan dan cairan tubuh dan tes fungsional agar terhindar dari  beberapa masalah status gizi. 3.2. Saran Rutin secara berkala melakukan penentuan status gizi khususnya pada balita

agar terhindar dari masalah gizi seperti KEPP, Anemia, gaky, dan penyakit masalah gizi lainya. Dan tentunta diperikasa kepada pada ahlinya agar terhindar dari kesalahan perhitungan penentuan status gizi.

42

DAFTAR PUSTAKA

 Ningtyas , Farida Wahyu . 2010 . Penentuan Status Gizi Secara Langsung. Jember : Jember University Press Supriasa, I Dewa Nyoman,.2012. Nyoman,.2012. Penilaian  Penilaian Status Gizi.Jakarta:ECG Gizi.Jakarta:ECG https://leilyairwanti.wordpress.com/2015/06/02/penentuan-status-gizi-biokimiayodium/ https://hasanah619.wordpress.com/2009/12/26/penilaian-status-gizi-secara biokimia/

43