ODREDJIVANJE UKUPNIH FENOLA

ODREĐIVANJE UKUPNIH FENOLA Poznato je preko 8 000 biljnih fenolnih spojeva koji se razlikuju po svojoj kemijskoj strukturi (od jednostavnih fenola do vrlo složenih molekula) i po svojim kemijskim svojstvima Ovisno o strukturi fenolni spojevi se dijele na: - monofenole  (fenolne kiseline) - polifenole  (flavonoidi, stilbenoidi) kupni fenoli odre!uju se metodom po "olin-#io$alteu% &etoda je spektrofotometrijska i temelji se na oksida$iji fenolnih 'rupa dodatkom "olin-#io$alteu rea'ensa i nastajanju nastaj anju obojeno' produkta% "enolne 'rupe oksidiraju se do kinona dodatkom smjese molibdofosfatnih i volframfosfatnih aniona koji se redu$iraju i daju plavo obojenje%  eredu$irani "olin-#io$alteu rea'ens je žute boje dok redu$irani ima stabilnu plavu boju% ntenzitet obojenja mjeri se odre!ivanjem apsorban$ije kod *+ nm u odnosu na slijepu  probu%

REAGENSI: - "olin "olin #io$al #io$alteu teu rea'en rea'enss ("olin-# ("olin-#io$ io$alt alteu eu rea'ens rea'ens je kuplje kupljen n kao 'otov 'otovaa ve  pripravljena kemikalija) -.0 / -tna otopina natrijeva karbonata - Otopiti .00 ' bezvodno' natrijeva karbonata u  litri vode kuhanjem% Ohladiti na sobnoj temperaturi uz dodatak nekoliko kristalia natrijeva karbonata i filtrirati nakon .1 sata% - Priprema matine otopine !tan"ar"a #a o"re$i%an&e fenola :  tikvi$i od 00 m2 otopljeno je 0,00 ' prethodno osu3ene 'alne kise line 4ikvi$a je nadopunjena s vodom do oznake% I#ra"a !tan"ar"ne 'ri%(l&e 5a izradu standardne krivulje potrebno je pripravit otopine 'alne kiseline razli6itih kon$entra$ija% Pipetirati 0-, -, .-, 7-, - i 0-m2 mati6ne otopine fenola u tikvi$e od 00 m2 i nadopuniti do oznaka s vodom% "enolne kon$entra$ije ovako pripravljenih radnih otopina standarda su 0, 0, 00, 0, .0 i 00 m'2% z svake tikvi$e odpipetirati po  m2 otopine i  prenijeti u zasebnu odmjernu tikvi$u od 00 00 m2%  svaku tikvi$u dodati dodati po +0 m2 destilirane vode i dobro promukati9 potom dodati po  m2 "olin-#io$alteu rea'ensa i ponovo dobro  promukati, a zatim nakon  minute minute dodati po  m2 .0 /-tne otopine natrijeva karbonata, dobro promukati i nadopuniti nadopuniti do oznake s vodom% vodom% 4ikvi$e ostaviti stajati . sata na sobnoj temperaturi, nakon 6e'a izmjeriti apsorban$iju svake otopine kod *+ nm prema vodi u kivetama 3irine  $m% tandardnu krivulju napraviti s poda$ima: kon$entra$ija prema apsorban$iji%

   5 0.6    6    7    ( 0.5   a    j    i 0.4   c   n   a 0.3    b   r   o 0.2   s   p 0.1    A 0.0 0

100

200

300

400

500

600

mg galne kiseline/L

tandardna krivulja za odre!ivanje ukupnih fenola% ;ao standard kori3tene su otopine s razli6itim kon$entra$ijama 'alne kiseline%

 Slika 1)

POS*UPAK:  odmjerenu tikvi$u od 0 m2 odpipetirati 0, m2 uzorka (sok razr ije!en u omjeru :0 s vodom), dodati 70 m2 destilirane vode i ., m2 rea'ensa "olin < #io$alteu% Otopinu dobro  promukati i nakon  minute dodati *, m2 .0 /-tne otopine natrijeva karbonata (a .#O7), te nadopuniti do oznake% Ostaviti stajati . sata na sobnoj temperaturi, a nakon to'a u kiveti od 0 mm o6itati apsorban$iju na spektrofotometru na valnoj dužini od *+ nm% =ezultati su u ekvivalentima 'alne kiseline (>?@) po3to je standardiza$ija izvr3ena s 'alnom kiselinom%

% in'leton A% 2% B =O C% ?%9 #olorimetrD of total phenoli$s Eith phosphomolDbdi$-phosphotun'sti$ a$id rea'ents9 ?m C @nol Aiti$ +, F+%9 11-8% .% ?merine &% ?%, Ou'h #% %9 ðods for analDsis of musts and Eines9 Pub C GileD B ons, F80%9 8-.00%