5. ¿QUÉ ES UN MARCADOR MARCADOR CELULA CELULAR? R? EXPLICAR EXPLICAR BREVEMEN BREVEMENTE TE LA PROTEÍNA VERDE FLUORESCENTE (GFP). Los marcadores celulares se encuentran en todas las células somáticas, son antígenos (proteínas) de superficie de todas las células, algunas de estas proteínas se encuentran solo en ciertos tipos de células, por ejemplo el CD16 es la proteína que se expresa específicamente en neutrfilos, células !" # macrfagos$
PROTEÍNA VERDE FLUORESCENTE La proteína %erde fluorescente fluores cente (o &', &', por sus siglas en inglés, Green Fluorescent Protein ) es una victoria , que emite ioluminiscencia en la *ona %erde del proteína producida por la medusa Aequorea victoria espectro %isile$ +l gen que codifica esta proteína, que #a a sido clonado, se utili*a aitualmente en iología molecular como marcador$ +l descurimiento # estudio de &' represent un enorme a%ance para los in%estigadores, amplía la capacidad del microscopio ptico, # otorga una nue%a dimensin %isile al ojo umano$ Los descurimientos relacionados a la &' de -samu .imomura, /artin Calfie, # 0oger $ $ 2sien 2sien merecieron el remio !oel de 3uímica 455, otorgado en partes iguales a los tres, 7por el descurimiento # desarrollo de la proteína %erde fluorescente$ 8 pesar que la llamada química 7%erde7 está de moda en la comunidad de químicos, ning9n esfuer*o de los mismos a podido igualar las reacciones que coordina un solo gen de esta medusa$ Las proteínas fluorescentes, fluorescen tes, entre las cuales se encuentra la &', &', son mu# %ersátiles # se utili*an en di%ersos campos como la microiología, ingeniería genética # fisiología$ ermiten %er procesos pre%iamente in%isiles, como el desarrollo de neuronas, cmo se diseminan las células cancerosas, el desarrollo de la enfermedad de 8l*eimer, el crecimiento de acterias patogénicas, la proliferacin del %irus del .:D8, entre otros$ or ejemplo, células cancerosas permite seguir la e%olucin comparati%a de las metástasis en presencia o ausencia de distintos fármacos$ La &' tamién tiene una importancia especial en la iología del desarrollo; si se introduce en un estadio temprano de un emrin, se puede seguir la e%olucin de las primeras células, estructuras # rganos$
6. DESC DESCRIBA RIBA BREVEM BREVEMENTE ENTE LA TÉCNIC TÉCNICA A DE FISH. FISH. FISH o hibridación fluorescente in situ es una técnica citogenética de marcaje de cromosomas mediante la cual estos son hibridados con sondas que emiten fluorescencia y permiten la visualización, distinción y estudio de los cromosomas as como de las anomalas que puedan presentar! "sta técnica permite la r#pida determinación de aneuploidas, microdeleciones, duplicaciones, inversiones, as como la adjudicación de un marcador genético a un cromosoma $cartografa genética%! &a técnica FISH puede realizarse a los cromosomas en metafase o en interface! &os cromosomas que son usualmente analizados por FISH son los '(, '), *', + e , que son los m#s propensos a sufrir anomalas! "st#n relacionados a enfermedades como el sndrome de .atau $'(%, el sndrome de "d/ards $')%, el sndrome de 0o/n $*'%, el sndrome de 1urner 1urner $+% y el sndrome del superhombre $%, entre otros! Sin embargo, cómo son posibles marcados adicionales del cromosoma, otros cromosomas pueden ser visualizados con esta técnica! FISH usa segmentos de una 2nica hebra de 304 que son tintados, o
etiquetados, con una sustancia fluorescente que puede ligarse a un cromosoma especfico5 estos segmentos de 304 son llamados sondas! "n un principio se emplearon sondas de car#cter radiactivo, pero este tipo de marcaje fue reemplazado por los fluoróforos por mayor seguridad, eficacia y facilidad de detección! .rotocolo b#sico- "l primer paso de la técnica consiste en la desnaturalización del 043 para separar la doble hélice! 3 la muestra desnaturalizada se le a6ade entonces la sonda de interés $fragmento de 304 marcado fluorescentemente%! .rimero, las sondas hibridan a las regiones especficas para las que han sido dise6adas! 0espués, se ti6en los n2cleos con un color de contraste inespecfico $generalmente 03.I%! &as sondas de 043 pueden marcarse con moléculas fluorescentes denominados fluoróforos $método directo% o no fluorescentes que se detectan con anticuerpos fluorescentes $método indirecto%! .or 2ltimo se visualiza la muestra preparada bajo un microscopio de fluorescencia! 3plicaciones- "sta técnica ha resultado ser muy 2til en el campo de la medicina reproductiva, con aplicación en el diagnóstico genético preimplantatorio $07.%! 8esulta una forma muy precoz de diagnóstico que, apoy#ndose en las técnicas de reproducción asistida, posibilita el estudio de embriones antes de ser transferidos al 2tero materno y, por consiguiente, antes de que se lleve a cabo la implantación embrionaria! .ara el an#lisis de anomalas cromosómicas embrionarias, tanto numéricas como estructurales, puede utilizarse la técnica 07.9FISH! .ara este fin se requiere una biopsia embrionaria, mediante la cual se e:trae una célula del embrión en cultivo ;in vitro;! Seguidamente, se procesa la muestra de tal manera que quede fijado el n2cleo en interfase y se hibrida con sondas especficas para el estudio cromosómico de la patologa que se sospecha pueda estar presente en el embrión!