César Paz-y-Miño Ligia Ligia Ocampo •
•
María Eugenia Sánchez
MANUAL DE PRÁCTICAS DE GENÉTICA MOLECULAR Y CITOGENÉTICA HUMANA
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOMÉDICAS
UNIVERSIDAD DE LAS AMÉRICAS LAUREATE LAUREATE INTERNATIONAL INTERNATIONAL UNIVERSITIES UNIV ERSITIES
QUITO, 2012
INDICE Reglas básicas de bioseg!idad """"""""""""""""""" """""""""""""""""""""""""" """""""
#
Práctica Práctica 1$ De!%a&ogli'os"""""""""""""""""""""""""""""(
)
Práctica Práctica 2$ Ge Ge*ealog+a""""""""""""""""""""""""""""""((
,-
Práctica Práctica 3$ C!o%a&i*a Se.al"""""""""""""""""""""""""""((
/,
Práctica Práctica 4$ Ca!io&i0o H%a*o"""""""""""""""""""""""""""(
/)
Práctica Práctica 5$ Cl&i1o 2 0!e0a!aci3* de Li*'oci&os 0a!a a*álisis c!o%os3%ico"""""""((((((((
#/
Práctica Práctica 6 $ Obse!1aci3* de c!o%oso%as 4%a*os"""""""""""""""""""
#)
Práctica Práctica 7 $ No No%e*cla&!a c!o%os3%ica"""""""""""""""""""""""
5-
Práctica Práctica 8$ Si&ios 6!ágiles c!o%os3%icos""""""""""""""""""""""(((
)7
Práctica Práctica 9$ Ge Ge*o&3.icos 2 %&ag8*icos"""""""""""""""""""""""(
)5
Práctica Práctica 10$ Ne1as T8c*icas de Ci&oge*8&ica Molecla!((((( Molecla!(((((((((((((((((((((((( ((((((((((((((((((((((((((((((((((((( ((((((((((((((((((((((((((((((((((((( ((((((((((((((((((((((((( ((((((
9-
Práctica Práctica 11$ 6ISH :Hib!idaci3* :Hib!idaci 3* I* Si& co* 6lo!esce*cia; 6lo!esce*ci a; """""""""""""""
9#
Práctica Práctica 12: E.&!acci3* de ADN 2 !eacci3* e* cade*a de la Poli%e!asa :PCR;""""""" :PCR;"""""""
97
Práctica Práctica 13$ Poli%o!'is%o e* la co*'o!%aci3* de la cade*a se*cilla :SSCP;""""""""(( :SSCP;""""""""((
<)
Práctica Práctica 14: Colecci3* Colecci 3* de %es&!as de !es&os 4%a*os"""""""""""""""" 4%a*os"""""""""""""""""( "(
=/
Práctica Práctica 15$ Mal'o!%acio*es Mal'o!%ac io*es co*g8*i&as""""""""""""""""""""" co*g8*i&a s""""""""""""""""""""""" ""
==
Práctica Práctica 16 $ Co*sl&a ge*8&ica 2 elabo!aci3* de la 4is&o!ia ge*8&ica"""""""""""" ge*8&ica""""""""""""
7<
Práctica Práctica 17 17 $ Se0a!aci3* de 0!o&e+*as""""""""""""""""""""""""" 0!o&e+*as"""""" """""""""""""""""""
,--
Práctica Práctica 18: 18: Acci3* de las Ho!%o*as"""""""""""" Ho!%o*as""""""""""""""""""""""""( """"""""""""(
,-#
Práctica Práctica 19: 19: A0o0&osis cella!"""""""""""""""""""""""" cella! """"""""""""""""""""""""""" """
,-9
Práctica Práctica 20 20$ Es&!c&!a 2 de&e!%i*a*&es ge*8&icos del o>o ((""""""""""""""" (("""""""""""""""
,-=
Práctica Práctica 21 21$ Poli%o!'is%os Poli%o!'i s%os gs&a&i1os"""""""""""""""""""""""" gs&a&i1os """"""""""""""""""""""""
,,-
/
INDICE Reglas básicas de bioseg!idad """"""""""""""""""" """""""""""""""""""""""""" """""""
#
Práctica Práctica 1$ De!%a&ogli'os"""""""""""""""""""""""""""""(
)
Práctica Práctica 2$ Ge Ge*ealog+a""""""""""""""""""""""""""""""((
,-
Práctica Práctica 3$ C!o%a&i*a Se.al"""""""""""""""""""""""""""((
/,
Práctica Práctica 4$ Ca!io&i0o H%a*o"""""""""""""""""""""""""""(
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Práctica Práctica 5$ Cl&i1o 2 0!e0a!aci3* de Li*'oci&os 0a!a a*álisis c!o%os3%ico"""""""((((((((
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Práctica Práctica 6 $ Obse!1aci3* de c!o%oso%as 4%a*os"""""""""""""""""""
#)
Práctica Práctica 7 $ No No%e*cla&!a c!o%os3%ica"""""""""""""""""""""""
5-
Práctica Práctica 8$ Si&ios 6!ágiles c!o%os3%icos""""""""""""""""""""""(((
)7
Práctica Práctica 9$ Ge Ge*o&3.icos 2 %&ag8*icos"""""""""""""""""""""""(
)5
Práctica Práctica 10$ Ne1as T8c*icas de Ci&oge*8&ica Molecla!((((( Molecla!(((((((((((((((((((((((( ((((((((((((((((((((((((((((((((((((( ((((((((((((((((((((((((((((((((((((( ((((((((((((((((((((((((( ((((((
9-
Práctica Práctica 11$ 6ISH :Hib!idaci3* :Hib!idaci 3* I* Si& co* 6lo!esce*cia; 6lo!esce*ci a; """""""""""""""
9#
Práctica Práctica 12: E.&!acci3* de ADN 2 !eacci3* e* cade*a de la Poli%e!asa :PCR;""""""" :PCR;"""""""
97
Práctica Práctica 13$ Poli%o!'is%o e* la co*'o!%aci3* de la cade*a se*cilla :SSCP;""""""""(( :SSCP;""""""""((
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Práctica Práctica 14: Colecci3* Colecci 3* de %es&!as de !es&os 4%a*os"""""""""""""""" 4%a*os"""""""""""""""""( "(
=/
Práctica Práctica 15$ Mal'o!%acio*es Mal'o!%ac io*es co*g8*i&as""""""""""""""""""""" co*g8*i&a s""""""""""""""""""""""" ""
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Práctica Práctica 16 $ Co*sl&a ge*8&ica 2 elabo!aci3* de la 4is&o!ia ge*8&ica"""""""""""" ge*8&ica""""""""""""
7<
Práctica Práctica 17 17 $ Se0a!aci3* de 0!o&e+*as""""""""""""""""""""""""" 0!o&e+*as"""""" """""""""""""""""""
,--
Práctica Práctica 18: 18: Acci3* de las Ho!%o*as"""""""""""" Ho!%o*as""""""""""""""""""""""""( """"""""""""(
,-#
Práctica Práctica 19: 19: A0o0&osis cella!"""""""""""""""""""""""" cella! """"""""""""""""""""""""""" """
,-9
Práctica Práctica 20 20$ Es&!c&!a 2 de&e!%i*a*&es ge*8&icos del o>o ((""""""""""""""" (("""""""""""""""
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Práctica Práctica 21 21$ Poli%o!'is%os Poli%o!'i s%os gs&a&i1os"""""""""""""""""""""""" gs&a&i1os """"""""""""""""""""""""
,,-
/
REGLAS ?ÁSICAS DE ?IOSEGURIDAD PARA PARA EL LA?ORATORIO LA?ORATORIO DE GENÉTICA HUMANA HUMA NA No!%as ad%i*is&!a&i1as básicas 1. Colocar Colocar seales seales !e a!"er#e$ a!"er#e$c%a c%a e$ &reas &reas !e co$#a'%$a co$#a'%$ac%($ c%($ )o#e$c% )o#e$c%al. al. 2. Ela*orar Ela*orar +$ ora$%ra ora$%ra'a 'a !el )erso$al )erso$al !e la*ora#or% la*ora#or%o, o, %$cl+-e$!o %$cl+-e$!o +$ o%c%al o%c%al !e se+r%!a!, se+r%!a!, res)o$sa*le !e la coor!%$ac%($ e$ c+al/+%er caso !e acc%!e$#e. . Ca)ac%#ar Ca)ac%#ar a!ec+a! a!ec+a!a'e a'e$#e $#e a #o!o el )erso$al )erso$al co$ res)ec res)ec#o #o a las $or'as $or'as !e se+r%!a! se+r%!a! - el +$c%o$a'%e$#o !e#alla!o !el la*ora#or%o - s+s e/+%)os. . To!o To!o acc%!e$#e, acc%!e$#e, s%$ %')or#ar s+ #%)o o 'a$%#+!, !e*e !e*e ser %$or'a!o al o%c%al !e se+r%!a! o a la )erso$a res)o$sa*le !el 'a$eo !e es#os casos. 3. Los )roce!%'% )roce!%'%e$#o e$#oss !e se+r%!a! se+r%!a! - los 'a#er%ales 'a#er%ales !e la*ora#or%o la*ora#or%o !e*e$ !e*e$ ser re"%sa!os re"%sa!os )er%(!%ca'e$#e )ara )ara ase+rar s+ e%cac%a e$ caso !e acc%!e$#e acc%!e$#e -4o co$#a'%$ac%($. co$#a'%$ac%($.
P!o&ecci3* P!o&ecci3* del 0e!so*al 1. To!a To!a )erso$a )erso$a !e*e +sar ro)a a!ec+a!a )ara s+ &rea !e #ra*ao 5'a$!%l, 5'a$!%l, +a$#es, +a$#es, 'ascar%lla, 'ascar%lla, orra6. 2. Se !e*e e"%#ar e"%#ar la c%rc+lac%($ c%rc+lac%($ )or "ar%os "ar%os rec%$#os rec%$#os !es!e !es!e 7o$as )o#e$c% )o#e$c%al'e al'e$#e $#e co$#a'%$a co$#a'%$a$#es. $#es. . Es reco'e$!a*le reco'e$!a*le +$a ac#+al%7ac%($ ac#+al%7ac%($ )er%(!%ca !e !e las %c8as '9!%cas '9!%cas !el !el )erso$al, )erso$al, )o$%e$!o )o$%e$!o 9$as%s e$ los r%esos /+e se corre$ e$ el l+ar !e #ra*ao. . Se !e*e e"%#ar e"%#ar el %$reso %$reso !e )erso$a )erso$ass e$er'as e$er'as o 8er%!as 8er%!as a las &reas !e la*ora la*ora#or%o #or%os. s. 3. Se !e*e e"%#ar e"%#ar /+e )erso$ )erso$as as e'*ara7a e'*ara7a!as !as %$rese$ %$rese$ a los la*ora#o la*ora#or%os r%os s% 8a- al+$a al+$a )os%*%l%!a! !e r%eso r%eso )ara el $%o o la 'a!re.
P!o4ibicio*es e.0!esas 1. No +'ar, +'ar, $o co'er co'er,, $o #o'ar #o'ar - $o +sar +sar cos'9#%cos cos'9#%cos !e$#ro !e$#ro !el !el la*ora#or%o la*ora#or%o.. 2. No +sar +sar el la*ora#or% la*ora#or%oo )ara o#ras o#ras ac#%"%!a ac#%"%!a!es !es /+e $o $o sea$ las las es)ec:% es)ec:%cas cas.. . N%$;$ N%$;$ e<#rao e<#rao )+e!e )+e!e e$#rar e$#rar e$ &reas &reas !e !e la*ora#o la*ora#or%os. r%os.
No!%as 0a!a el %a*e>o de %es&!as 1. To!a To!a '+es#ra '+es#ra - reac#%"o reac#%"o !e*e #e$er *%e$ es)ec%%ca!a s+ $a#+rale7a, $a#+rale7a, e$ rec%)%e$#es se+ros se+ros co$ e#%/+e#as !+ra!eras. 2. M+es#ras M+es#ras rec%9$ rec%9$ #o'a!as #o'a!as o rec%*%!as rec%*%!as !e*e$ !e*e$ ser +ar!a! +ar!a!as as lo '&s )ro$#o )ro$#o )os%*le )os%*le e$ co$!%c%o$es a!ec+a!as a!ec+a!as - *ao co$#rol. . De*e e"%#arse e"%#arse el co$#ac#o co$#ac#o :s%co :s%co co$ las '+es# '+es#ras. ras.
#
. De*e #ra*aarse, e$ lo )os%*le, co$ +$a sola '+es#ra al '%s'o #%e')o. 3. M+es#ras %$ser"%*les !e*e$ ser es#er%l%7a!as a!ec+a!a'e$#e a$#es !e ser !esec8a!as.
No!%as de li%0ie@a 1. El la*ora#or%o !e*e co$#ar co$ ca*%$as !e l+o la'%$ar -4o !e*e #e$er ac%l%!a!es e/+%"ale$#es. 2. Se !e*e +sar !es%$ec#a$#es a)ro)%a!os )ara el #%)o !e #ra*ao /+e se 8a-a real%7a!o 5=e$ol 1>3?, @%)oclor%#o 1?, Gl+#aral!e8:!o 2?6. . To!o 'a#er%al !e*e ser es#er%l%7a!o !es)+9s !e s+ +so - a$#es !e !esec8arlo. . To!o 'a#er%al co$#a'%$a!o %rre'e!%a*le'e$#e !e*e ser %$c%$era!o. 3. To!a )re$!a )ro#ec#ora +sa!a )or el )erso$al !e*e ser la"a!a !e$#ro !e la '%s'a %$s#%#+c%($. . El )erso$al !e*e la"arse las 'a$os rec+e$#e'e$#e, e$ es)ec%al a$#es - !es)+9s !e 'a$ear las '+es#ras. . To!o 'a#er%al co$#a'%$a$#e !e*e ser es#er%l%7a!o a$#es !e la"arlo.
5
Práctica 1
DERMATOGLI6OS INTRODUCCIN Los !er'a#ol%os so$ las co$%+rac%o$es or'a!as )or las e'%$e$c%as - s+rcos !e la )%el /+e c+*re$ las )al'as !e las 'a$os - las )la$#as !e los )%es o #a'*%9$ se !e%$e$ co'o los #%)os !e !%s#r%*+c%($ !e las l:$eas !er'o)a)%lares /+e se 8alla$ #a$#o e$ las )al'as !e las 'a$os co'o e$ las )la$#as !e los )%es - e$ #o!os los )+l)eos !e los !e!os. Los carac#eres !e#er'%$a$#es !e los !er'a#ol%os se #ra$s'%#e$ )or 8ere$c%a, as: el $;'ero !e )l%e+es !e las 8+ellas !%%#ales co$s#%#+-e +$ *+e$ ee')lo !e 8ere$c%a )ol%9$%ca. Da!a s+ #ra$s'%s%($ 8ere!%#ar%a, so$ )a#ro$es ;$%cos )ara ca!a %$!%"%!+o 'os#ra$!o +$a ra$ !%"ers%!a! #a$#o )or s+s !e#alles co'o )or las co'*%$ac%o$es /+e )rese$#a$ e$ +$a )erso$a !e#er'%$a!a a!e'&s, e<%s#e$ "ar%ac%o$es co$s%!era*les e$ las rec+e$c%as !e las !%ere$#es co$%+rac%o$es !er'a#ol:%cas #a$#o e$ los !os se
)
CLASI6ICACIN DE LOS DERMATOGLI6OS( Pa&!o*es digi&alesK e$ los )+l)eos !e los !e!os )o!e'os e$co$#rar #res !%ere$#es !%s)os%c%o$es 5=%. 16K Figura 1. T%)os *&s%cos !e 8+ellas !ac#%laresK a6 #or*ell%$o, *6 )res%lla - c6 arco. a6
*6
c6
5To'a!o !e o$es, 16
a6 TORBELLINOS 56K es)%ral.
los s+rcos !escr%*e$ co$#or$os c%rc+lares e$ or'a !e S, el:)#%co o
*6 FRESILLAS 5L6K los s+rcos !escr%*e$ +$a se'%c%rc+$ere$c%a /+e )ar#%e$!o !e +$ la!o !el !e!o "a 8ac%a el ce$#ro !el )+l)eo - reresa al *or!e !el /+e )ar#%(. Se;$ la or%e$#ac%($ !e la a*er#+ra !e la %$c+r"ac%($ se lla'a$ ra!%ales 5R6 - +l$ares o c+*%#ales 5U6. c6 ARCOS 5A6K los s+rcos !9r'%cos !escr%*e$ l:$eas #ra$s"ersales !e la!o a la!o !el )+l)eo. Los s+rcos e$ los !e!os )+e!e$ co$l+%r 8ac%a +$ '%s'o )+$#o or'a$!o el lla'a!o #r%rra!%o 5)+$#o !e co$l+e$c%a !e #res ca')os !e l:$eas6. Los #%e$e$ !os #r%rra!%os, las L +$o, - los A $%$+$o.
Pa&!o*es 0al%a!es K se 8alla$ !e%$%!os )r%$c%)al'e$#e )or c%$co #r%rra!%os, c+a#ro #r%rra!%os !%%#ales e$ la )ar#e !%s#al !e la 'a$o 5*ase !e los !e!os6 /+e se !e$o'%$a$K a )ara el !e!o :$!%ce, * )ara el 'e!%o, c )ara el a$+lar - ! )ara el 'e%/+e, - el /+%$#o, +$ #r%rra!%o a<%al # 5*ase !e la 'a$o o '+eca6 5=%. 26. De$#ro !e los )l%e+es )al'ares e<%s#e$ #res )l%e+es !e le<%($ )al'arK 16 Fl%e+e )al'ar #ra$s"erso !%s#al, s+rco !e los #res !e!os el c+al %$al%7a e$ el se+$!o es)ac%o %$#er!%%#al, 26 Fl%e+e )al'ar #ra$s"erso )ro<%'al, s+rco !e los c%$co !e!os /+e "a !es!e el )r%'er es)ac%o %$#er!%%#al 8ac%a la )al'a !e la 'a$o, - 6 Fl%e+e )al'ar ra!%al lo$%#+!%$al, s+rco !el )+lar /+e se !%r%e !es!e el )r%'er es)ac%o %$#er!%%#al 8as#a el car)o.
9
Figura . Patrones !ermatog"í#icos pa"mares$
5To'a!o !e Le"%$e, 16
O?ETIOS 1. Reco$ocer - a$al%7ar los !%ere$#es #%)os !e !er'a#ol%os !e los !e!os - )al'as !e las 'a$os, )ara )o!er e"al+ar s+ !%s)os%c%($ $or'al, %$+s+al o a$or'al. 2. Real%7ar e$ or'a )r&c#%ca las #9c$%cas !e o*#e$c%($ !e )a#ro$es !er'a#ol:%cos )ara s+ )os#er%or es#+!%o.
MATERIALES > 8oa !e car#+l%$a A > )a)el )l&s#%co a!8es%"o, )a)el Co$#ac# o c%$#a a!8es%"a. > 8oa !e ae%#ar > car*o$c%llo, ra%#o o #%$#a > l&)%7 !e color roo > ra!+a!or > rela
PROCEDIMIENTO 1. E$ la )ar#e s+)er%or !erec8a, %!e$#%%/+e ca!a car#+l%$a co$ s+ $o'*re, e!a!, se
<
. Froce!a a )%$#arse los )+l)eos !e los !e!os co$ el )ol"%llo !e car*($ s(lo +$a 'a$o a la "e7. Fe+e la c%$#a a!8es%"a so*re ca!a !e!o )%$#a!o %')r%'%e$!o clara'e$#e las 8+ellas !ac#%lares e$ s+ #o#al%!a!. Recor#e el )e!a7o - )9+elo e$ la car#+l%$a. 3. I')re$e la )al'a !e la 'a$o 5+$a a la "e76 !es!e la '+eca 8ac%a a!ela$#e, c+%!a$!o !e /+e se !es#a/+e$ los #r%rra!%os a, # - !. Fe+e el )a)el )l&s#%co a!8es%"o so*re la )al'a %')r%'%e$!o las 8+ellas )al'ares. Recor#e - )e+e e$ la car#+l%$a. . L%')%e el car*o$c%llo !e s+s 'a$os. . Es#+!%o !e los !er'a#ol%osK a6 I!e$#%%/+e los )a#ro$es !ac#%lares !e ca!a 'a$o - )o$a so*re ca!a 8+ella o*#e$%!a la le#ra corres)o$!%e$#e 5, R, U, A6. Escr%*a la '3!%la cali&a&i1a dac&ilo0al%a! /+e se co$s#r+-e co$ las a*re"%a#+ras !e las %+ras !e los !%e7 !e!os, e')e7a$!o e$ el )+lar !erec8o - #er'%$a$!o e$ el 'e%/+e %7/+%er!o. *6 Calc+le el *B%e!o dac&ila! &o&al o '3!%la ca*&i&a&i1a dac&ilo0al%a! )ara lo c+al +se rela - l&)%7. Trace +$a l:$ea !es!e el ce$#ro !e la %+ra !ac#%lar 8as#a el #r%rra!%o !ac#%lar. Rec+er!e /+e los #%e$e$ !os #r%rra!%os - )or #a$#o !e*er& #ra7ar !os l:$eas, e$ las L 5R o U6 solo +$a )or e<%s#%r +$ solo #r%rra!%o - e$ los A $%$+$a, )+es carece$ !e #r%rra!%o. C+e$#e - a$o#e el $;'ero #o#al !e cres#as /+e a#ra"%esa$ la l:$ea #ra7a!a. Fara la $o'e$cla#+ra se +sa +$a racc%($ co$ !os "alores, el $+'era!or re)rese$#a los "alores 8ac%a el la!o ra!%al - el !e$o'%$a!or 8ac%a el la!o c+*%#al, ee')loK P 3412 53 cres#as 8ac%a el la!o ra!%al412 cres#as 8ac%a el la!o c+*%#al6, RP04H, UP 40, AP040. Ca!a 8+ella !%%#al !e*er& #e$er s+ )ro)%a $o'e$cla#+ra. El $;'ero !ac#%lar #o#al es la s+'a !e #o!os los "alores 'a-ores !e las racc%o$es !e las !os 'a$os. E$ 8o'*res la c%ra $or'al es !e 13 1,H - e$ la '+er 121,H. E$ es#+!%os real%7a!os e$ el Ec+a!or se o*#+"o +$ )ro'e!%o !e 10, e$ 8o'*res - 12, e$ '+eres, co$ res)ec#o al &$+lo !e Fe$rose el )ro'e!%o +e !e e$ 8o'*res - , e$ '+eres. A$o#e e$ la car#+l%$a el "alor o*#e$%!o. c6 Calc+le el á*glo a & dF o !e Fe$rose )ara lo c+al se #ra7a +$a l:$ea /+e +$e los ce$#ros !e los #r%rra!%os )al'ares a, #, !. L+eo '%!a el &$+lo co$ +$ ra!+a!or #o'a$!o co'o "9r#%ce el &$+lo !el #r%rra!%o #. El "alor a # ! '&s rec+e$#e'e$#e 8alla!o es 3 ra!os o 'e$os. Calc+le - a$o#e es#e "alor )ara ca!a 'a$o. !6 O*ser"e, ro#+le - a$al%ce la !%s)os%c%($ !e los 0lieges 0al%a!es de 'le.i3* , !es#aca$!o las )os%*les "ar%ac%o$es.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. Real%ce +$ c+a!ro s%$()#%co !e los )a#ro$es c+#&$eos 5carac#er:s#%cos !e los !er'a#ol%os6 e$co$#ra!os e$ +$ %$!%"%!+o co$ S:$!ro'e !e DoJ$, S:$!ro'e !e T+r$er - S:$!ro'e !e l%$eel#er, - co')&relos co$ los )a#ro$es !e +$a )erso$a $or'al. 2. @a*le so*re la e'*r%olo:a !e los !er'a#ol%os 5'&<%'o 3 l:$eas6.
=
?I?LIOGRA6A C+''%$s M.R. 13 @ere$c%a @+'a$a. E!%#or%al I$#era'er%ca$a>McGraJ>@%ll, Ma!r%!. Eo7c+e . 11 T9c$%cas e$ C%#oe$9#%ca. E!%#or%al Es)a
->M%o C., Ar9"alo M., F9re7 C.., Ca-($ =., Gra$a F., S&$c8e7 D., S&$c8e7 M.E., Leo$e F.E. 2000 =rec+e$c%as al9l%cas !e carac#er:s#%cas 'e$!el%a$as e$ )o*lac%($ +$%"ers%#ar%a !e la c%+!a! !e Q+%#o. Re". =ac. Cs. Me!. Q+%#o. 23K2>2. N+ss*a+' R.L., Ro!er%c R.McI., @+$#%$#o$ =.. 2001 T8o')so$ T8o')so$ Ge$e#%cs %$ Me!%c%$e, .B. Sa+$!ers Co')a$-, F8%la!el)8%a. T8o')so$ .S., T8o')so$ M.. 1 Ge$9#%ca e$ Me!%c%$a , Masso$, S.A., Barcelo$a.
7
Práctica
GENEALOGA INTRODUCCIN La e$ealo:a co$oc%!a #a'*%9$ co'o )a#r($ !e )e!%r:, l%$ae e$eal(%co o &r*ol e$9#%co, es +$a l%s#a !e a$#e)asa!os o +$ re%s#ro e$eal(%co. Grac%as a los #ra*aos real%7a!os e$ co$eos, a$a!o "ac+$o - o#ros, se 8a )o!%!o e$eral%7ar las le-es !e la 8ere$c%a a la es)ec%e 8+'a$a, e$ /+e los es#+!%os se !%%c+l#a$ )or el re!+c%!o $;'ero !e 8%os, )or el laro )er:o!o !e es#ac%($ - el #%e')o $ecesar%o )ara llear a ser ec+$!a*les. For lo #a$#o, los e$e#%s#as 8+'a$os +#%l%7a$ las 8%s#or%as a'%l%ares - el l%$ae, )ara lorar es#a*lecer co$ cer#e7a, /+e '+c8os carac#eres se 8ere!a$ !e )a!res a 8%os s%+%e$!o las le-es !e Me$!el. Las carac#er:s#%cas e$o#:)%cas !e +$ %$!%"%!+o )roce!e$ !e la 8ere$c%a !e s+s e$o#%)os a;$ c+a$!o al+$as "eces la %$l+e$c%a !el a'*%e$#e 8ace "ar%ar el e$o#%)o es)era!o. Al+$os rasos 8+'a$os so$ !e#er'%$a!os )or e$es !o'%$a$#es, e$es reces%"os, e$es l%a!os al se
,-
Figura '. Sím(o"os uti"iza!os en "os estu!ios !e genea"ogías humanas. @o'*re
Ma#r%'o$%o, o U$%($ L%*re
M+er
D%"orc%o
Se
N;'ero !e 8%os co$ el se
For#a!or o*l%a!o, $o 'a$%es#ar& la e$er'e!a! Fro*a$!o
Ge'elos !e c%os%!a! !esco$oc%!a
1
I II
1
2
2
Fe!%r: co$ e$erac%o$es e %$!%"%!+os $+'era!os
I$!%"%!+o '+er#o A*or#o es)o$#&$eo Nac%!o '+er#o S%$ !esce$!e$c%a A!o)#a!o, %$#raa'%l%ar
A!o)#a!o, e<#raa'%l%ar
M;l#%)les +$%o$es
5To'a!o !e T8o')so$ - T8o')so$, 200H6
,,
%erencia autos&mica recesi)a Los rasos #:)%cos !el car&c#er s(lo se 'a$%%es#a$ e$ los 8er'a$os, )ero $o e$ s+s )a!res, )roe$%e + o#ros a'%l%ares. La rec+rre$c%a es !el 23? )ara los 8er'a$os !el %$!%"%!+o aec#o. Los )a!res !el aec#o rec+e$#e'e$#e so$ co$sa$+:$eos o e$!o&'%cos. Los 8o'*res - las '+eres #%e$e$ las '%s'as )ro*a*%l%!a!es !e ser aec#os. %erencia "iga!a a" se*o Des(r!e$es reces%"os l%a!os al .> E$ la 8ere$c%a reces%"a l%a!a al sola'e$#e los "aro$es so$ aec#os, )ero el !esor!e$ )+e!e ser #ra$s'%#%!o a #ra"9s !e '+eres sa$as /+e so$ )or#a!oras. El car&c#er es #ra$s'%#%!o )or +$ 8o'*re aec#a!o, a #o!as s+s 8%as '+eres - $+$ca a s+s 8%os "aro$es. Las '+eres )or#a!oras #ra$s'%#e$ el car&c#er al 30? !e s+s 8%as '+eres, las /+e ser&$ )or#a!oras, - al 30? !e s+s 8%os "aro$es los /+e ser&$ e$er'os, '%e$#ras /+e los 30? res#a$#es ser&$ sa$os. Las '+eres )or#a!oras so$ +s+al'e$#e $o aec#as, )ero al+$as )+e!e$ e<)resar la co$!%c%($ co$ se"er%!a! "ar%a*le. Al+$os !es(r!e$es reces%"os l%a!os al so$ se"eros o le#ales !+ra$#e e#a)as #e')ra$as !el !esarrollo. Des(r!e$es !o'%$a$#es l%a!os al .> U$ e$ !o'%$a$#e l%a!o al !ar& l+ar a +$ !esor!e$ #a$#o e$ "aro$es 8e'%c%o#os co'o e$ '+eres 8e#eroc%o#as. El e$ es #ra$s'%#%!o e$ las a'%l%as !e la '%s'a 'a$era /+e los e$es reces%"os l%a!os al , !a$!o l+ar a +$ e
!e$o'%$a 8ere$c%a 'a#er$a. La 8ere$c%a 'a#er$a )+e!e )re!ec%rse s+)o$%e$!o /+e el ("+lo 8a a)or#a!o #o!as las '%#oco$!r%as, !e*%!o a /+e s: *%e$ las '%#oco$!r%as !el es)er'a#o7o%!e %$resa$ e$ el ("+lo es#as so$ !era!a!as )or al;$ 'eca$%s'o a;$ $o *%e$ e$#e$!%!o, )or #a$#o, los e$es '%#oco$!r%ales !er%"a$ e
!%%ere$ e$#re los !os cro'oso'as ser&$ e<)resa!os e$ or'a !e 'osa%co. El 'osa%c%s'o cro'os('%co $o es %$rec+e$#e, - se )ro!+ce )or errores )os#c%(#%cos !+ra$#e la '%#os%s. @a s%!o !oc+'e$#a!o e$ al+$as a$o'al:as cro'os('%cas $+'9r%cas - es#r+c#+rales /+e 8+*%era$ s%!o le#ales s% $o es#+"%era$ e$ or'a !e 'osa%co. %erencia Po"igénica o mu"ti#actoria" Es#e #%)o !e 8ere$c%a es res)o$sa*le !e +$ ra$ $;'ero !e carac#er:s#%cas e$o#:)%cas !el ser 8+'a$o 5color !e la )%el, 8+ellas !%%#ales, e#c.6 - !e !es(r!e$es !el !esarrollo /+e !a$ co'o res+l#a!o c%er#as 'alor'ac%o$es co$9$%#as 5%s+ra la*%al co$ o s%$ %s+ra !el )ala!ar6 - '+c8os !es(r!e$es !e la "%!a a!+l#a 5al+$as or'as !e c&$cer - e$er'e!a!es !e las ar#er%as coro$ar%as6. Al )arecer las carac#er:s#%cas - !eec#os )ol%9$%cos $o so$ res+l#a!o !e +$ s%')le error e$ la %$or'ac%($ e$9#%ca s%$o +$a co'*%$ac%($ !e )e/+eas "ar%ac%o$es e$9#%cas. =ac#ores 'e!%o> a'*%e$#ales )o!r:a$ es#ar %$"ol+cra!os e$ es#e #%)o !e 8ere$c%a. Des(r!e$es '+l#%ac#or%ales #%e$!e$ a oc+rr%r e$ a'%l%as )ero $o '+es#ra$ los )a#ro$es e$eal(%cos !e la 8ere$c%a 'o$o9$%ca. La )re!o'%$a$c%a lo*al se +*%ca e$#re 30 - 230 )or 1000. La o*ser"ac%($ !e las e$ealo:as es +$o !e los '9#o!os )r%$c%)ales !el es#+!%o e$9#%co e$ el 8o'*re, )+es#o /+e e$ los seres 8+'a$os $o es )os%*le real%7ar a)area'%e$#os !%sea!os. Ta'*%9$ es +#%l%7a!a )ara !e!+c%r el 'o!o !e #ra$s'%s%($ !e +$a e$er'e!a! co$s%!era!a 8ere!%#ar%a o )ara real%7ar !%a$(s#%cos !%ere$c%ales a$#e aecc%o$es 8+'a$as )arec%!as. C+a$!o se real%7a$ e$ealo:as 8+'a$as, co$ el %$ !e !e#er'%$ar el or%e$ 8ere!%#ar%o !e +$a aecc%($ o car&c#er, se !e*e co$s%!erar al 'e$os c%$co )re+$#asK 16 El e$o#%)o a a$al%7ar es +$o solo, se reco$oce +$a ca+sa o "ar%as. 26 El e$o#%)o )+e!e ser res+l#a!o !e ca+sas $o 8ere!%#ar%as. 6 E$ los )ar%e$#es /+e $o )rese$#a$ el e$o#%)o )ro*le'a, es#& #o#al'e$#e !e'os#ra!o /+e $o lo )osee$. 6 Se co$oce s+ +*%cac%($ e$ el car%o#%)o 8+'a$o !el e$ ca+sa$#e, -a sea e$ a+#oso'as o o$oso'as. 36 De #ra#arse eec#%"a'e$#e !e +$ )ro*le'a e$9#%co, s+ co')or#a'%e$#o es !o'%$a$#e, reces%"o, l%a!o al see%'*er es a)l%ca*le a '+c8as !e las carac#er:s#%casK 5)/62 P )2 2)/ /2 P 1 Do$!eK F2 P re)rese$#a el e$o#%)o 8o'oc%o#o !o'%$a$#e 2)/ P re)rese$#a el e$o#%)o 8e#eroc%o#o /2 P re)rese$#a el e$o#%)o 8o'oc%o#o reces%"o Es#a (r'+la se )+e!e a)l%car a c+al/+%er )ar !e alelos, s%e')re - c+a$!o sea )os%*le !e#er'%$ar la rec+e$c%a e$ la )o*lac%($ !e +$o !e los alelos.
,5
O?ETIOS 1. Es#+!%ar al+$as carac#er:s#%cas 8+'a$as co$oc%!as /+e s%r"e$ )ara %l+s#rar los )r%$c%)%os *&s%cos !e la 8ere$c%a. 2. Co$ocer los #%)os !e 8ere$c%a.
MATERIALES > )a)el > l&)%7 > rela
PROCEDIMIENTO 1. A$al%7ar los carac#eres 8ere!%#ar%os - !e#er'%$ar s+s )os%*les e$o#%)os )ara ca!a car&c#er, !e ac+er!o a lo %$!%ca!o e$ la Ta*la 1 - la +:a. Re%s#rar los res+l#a!os e$ +$a #a*la. 2. Escoer !e las Ta*las 1 - 2, c%$co carac#eres - real%7ar +$ &r*ol e$eal(%co )ara ca!a +$o !e ellos, 'e!%a$#e la o*ser"ac%($ o a$&l%s%s !e los '%s'os e$ s+s )ar%e$#es. . De#er'%$ar s% el car&c#er seala!o e$ las =%+ras , 3 - #%e$e +$ )a#r($ !e 8ere$c%a !o'%$a$#e, reces%"o, o l%a!o al se
,)
. M%re s% s+ !e!o :$!%ce es '&s cor#o /+e el a$+lar. Es#e es +$ raso %$l+%!o )or el se
@o'*res
M+eres
DD D! !!
cor#o cor#o laro
laro laro cor#o
. M%re la )rese$c%a o a+se$c%a !e cal"%c%eK Ge$o#%)o
@o'*res
M+eres
CC Cc cc
cal"o cal"o $o cal"o
$o cal"a $o cal"a cal"a
3. El r+)o !e sa$re !e +$a )erso$a )+e!e ser A, B, AB o O. S+s e$o#%)os ser&$ AA, Ao, BB, Bo, AB - oo.
/ipos !e genea"ogías Figura 0$
,9
Figura $
Figura 2$
,<
Tabla ,( Alg*os ca!ac&e!es 4e!edi&a!ios %e*delia*os WWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWW Carácter 3ominante 4ecesi)o WWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWW L:$ea !el )elo
F%co !e "%+!a 5V6
Rec#a 5"6
=or'a !e $ar%7
Co$"e
Rec#a 5$6
@o-+elos>'e%lla
Frese$c%a 5@6
A+se$c%a 586
Fecas
Frese$c%a 5F6
A+se$c%a 5)6
L(*+los>orea
L%*res 5L6
A!8er%!os 5l6
Fes#aas 51c'6
Laras 5G6
Cor#as 56
Le$+a e$rolla!a
=or'a U 5E6
A+se$c%a 5e6
Le$+a !o*la!a
Frese$c%a 5U6
A+se$c%a 5+6
Uso 'a$+al
D%es#ro 5X6
X+r!o 576
=or'a !e ala$es
C+r"a 5=6
Rec#a 56
Se)arac%($>)+lar
Y$+lo 3 5I6
Esc+a!ra 5%6
F+lar !e )o$ero
A+se$c%a 5A6
Y$+lo Z 3 [ 5a6
Me%/+e #orc%!o
Frese$c%a 5\6
A+se$c%a 56
=or'a !e +as
C+r"as 5C6
Rec#as 5c6
Vello e$ ala$es
Frese$c%a 5B6
A+se$c%a 5*6
F+lar so*re)+es#o
I7/+%er!o 56
Derec8o 56
Or%%c%os $asales
A$c8os 5O6
La*%o s+)er%or
Rec#o 5M6
@e$!%!o 5'6
Oreas
Gra$!es 5Q6
Fe/+eas 5/6
Ca$as
Fre'a#+ras 5T6
No ca$oso 5#6
De!os
Cor#os 56
Laros 5<6
F%es
Arco $or'al 56
Fla$o 56
Gr+)o sa$+:$eo
R8 56
R8> 5J6
Es#rec8os 5o6
WWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWW
,=
Tabla /( Alg*as a'eccio*es 4%a*as de o!ige* %e*delia*o WWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWW DESORDEN LOCALIXACI]N TIFO DE @ERENCIA WWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWW > Aa''alo*+l%$a
/21.
L%a!a al se
> Al*%$%s'o oc+lo>c+#&$eo
13/11.2>/12
AR
> Al78e%'er, !e %$%c%o #ar!:o
1ce$>/1.2
AD
> D%a*e#es 'ell%#+s
)21. c8r 11, c8r 1
AD AR
> D%s#ro%a '+sc+lar !e D+c8e$$e
)21.2
L%a!o al se
> D%s#ro%a '+sc+lar !e Becer
)21.2
L%a!o al se
> E$er'e!a! !e @+$#%$#o$
)1.
AD
> E$er'e!a! 'a$:aco>!e)res%"a
)2H
L%a!o al se
> Ce+era a los colores > =%*ros%s /+:s#%ca > =%s+ra )ala#%$a
/2H
L%a!o al se
/22>/#er
AD
/1.2
AR
/214 /1
L%a!o al se
> @%)ercoles#erole'%a a'%l%ar
1)1.2
AD
> S:$!ro'e !e Bloo'
13/2.1
AR
> Ne+ro%*ro'a#os%s, #%)o II
22/12. 2
AD
> C&$cer !e 'a'a, %$%c%o )reco7
1/21.2
AD 53?6
> C&$cer !e o"ar%o
1/21
A+#os('%co !o'%$a$#e56
> Carc%$o'a colorec#al
12)12.1
AD
> Le+ce'%a a+!a 5M6
13/2241/11.2
A+#os('%co !o'%$a$#e56
> Re#%$o*las#o'a 1/1.1 AD WWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWW
,7
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. Descr%*a ee')los !e 8ere$c%a a+#os('%ca !o'%$a$#e, reces%"a - l%a!a al se
?I?LIOGRA6A C+''%$s M.R. 13 @ere$c%a @+'a$a. I$#era'er%ca$a>McGraJ>@%ll, Ma!r%!. Eo7c+e ., A$#%c8 ., Balles#a =., Go-a$es V., I7/+%er!o L., Ta')ar%llas M., Ta"ares A. 1H Ge$9#%ca M9!%ca. E!%#or%al Es)a2. o8$ %le- So$s, I$c NeJ _or. T8o')so$ .S., T8o')so$ M. 1 Ge$9#%ca e$ Me!%c%$a , Masso$, S.A., Barcelo$a. Ver'a R.S, Ba*+ A. 1 @+'a$ C8ro'oso'es. McGraJ>@%ll, NeJ _or.
/-
Práctica '
CROMATINA SEUAL INTRODUCCIN El ser 8+'a$o #%e$e +$a co$s#%#+c%($ cro'os('%ca !%)lo%!e !e cro'oso'asK 22 )ares !e a+#oso'as - +$ )ar !e cro'oso'as se<+ales. Las '+eres re)rese$#a$ el se)os%#%"os c+a$!o es#a es#r+c#+ra se e$c+e$#ra )rese$#e - cro'a#%$a>$ea#%"os c+a$!o al#a. M&s #ar!e, la cro'a#%$a se<+al +e 8alla!a e %!e$#%%ca!a e$ c9l+las !e 8e'*ras !e la 'a-or:a !e es)ec%es !e 'a':ero %$cl+-e$!o al 8o'*re. For '+c8os aos los %$"es#%a!ores se )re+$#aro$, ^c('o era )os%*le /+e las '+eres al #e$er !os cro'oso'as or'e$ %+al ca$#%!a! !e )ro!+c#o 9$%co /+e los "aro$es co$ +$ s(lo cro'oso'a Al )arecer !e*:a e<%s#%r +$ 'eca$%s'o !e `co')e$sac%($ !e !os%s`. E$ 11 MarL-o$, a la )ar !e '+c8os o#ros c%e$#:%cos /+e es#+!%a*a$ es#e #e'a or'+l( +$a 8%)(#es%s co$oc%!a co'o la `@%)(#es%s !e L-o$`, *asa!a e$ +$a ser%e !e e<)er%'e$#os lle"a!os a ca*o e$ ra#o$es. Es#a #eor:a es#a*lece /+eK 1. E$ las c9l+las so'&#%cas !e las 8e'*ras !e 'a':eros s(lo +$ cro'oso'a es ac#%"o - el se+$!o cro'oso'a es#& co$!e$sa!o o %$ac#%"a!o - a)arece e$ %$#erase co'o cro'a#%$a se<+al. 2. La %$ac#%"ac%($ se %$%c%a a co'%e$7os !e la "%!a e'*r%o$ar%a 5*las#oc%s#o6. . El cro'oso'a %$ac#%"a!o )+e!e ser %$!%s#%$#a'e$#e +$ !e or%e$ )a#er$o o +$ !e or%e$ 'a#er$o, e$ !%ere$#es c9l+las !el '%s'o %$!%"%!+o, )ero #o!os los !esce$!%e$#es clo$ales !e !%c8a c9l+la #e$!r&$ %$ac#%"a!o el '%s'o cro'oso'a . For ello se !%ce /+e la %$ac#%"ac%($ !el es al a7ar )ero %a. Es#e )roceso e<)l%ca el 8ec8o !e /+e el )ro!+c#o 9$%co !e los e$es l%a!os al es %+al e$ a'*os se2.000 c9l+las !+ra$#e la "%!a e'*r%o$ar%a, lo /+e !ar:a o)or#+$%!a! a los e$es e<#ras )ara e<)resarse !+ra$#e al;$ #%e')o - )o!r:a %$l+%r e$ el e$o#%)o. A+$/+e o#ros a+#ores %$or'a$ /+e es#a %$ac#%"ac%($ oc+rre e$ el es#a!:o !e alre!e!or !e 2 a c9l+las. Se 8a o*ser"a!o /+e el cro'oso'a /+e or'a la cro'a#%$a !e Barr es +$ cro'oso'a e$ or'a !e la7o e$ el c+al los !os #el('eros se +$#a$ - se s%#;a$ e$ la 'e'*ra$a $+clear, es
/,
8e#ero)%c$(#%co - es aloc:cl%co, )+es co')le#a s+ re)l%cac%($ #ar!:a'e$#e e$ la ase S !el c%clo cel+lar. Se #ra#a e$ !e%$%#%"a !e 8e#erocro'a#%$a ac+l#a#%"a co$ ca)ac%!a! !e %$ac#%"arse reac#%"arse se;$ las !%ere$#es e#a)as !el !esarrollo !el %$!%"%!+o. As: se 8a 8a*la!o !e +$ e"e$#o !e reac#%"ac%($ !el , /+e se cree se 8alla al#a'e$#e 'e#%la!o, a caro !e e$7%'as !e'e#%la$#es, !+ra$#e las e#a)as )re"%as a la oo9$es%s. Los "alores $or'ales !e)e$!e$ !e ca!a la*ora#or%o. For rela e$eral los "alores !e alre!e!or !el 20>30? e$ c9l+las *+cales se co$s%!era$ co'o )os%#%"os, e$ 0>H0? !e %*ro*las#os, - e$ '&s !el 0? !e c9l+las !e 'e'*ra$as a'$%(#%cas. Los "alores %$er%ores !e*er&$ 8acer )e$sar e$ la )os%*le e<%s#e$c%a !e +$ 'osa%c%s'o. Se sa*e /+e e$ casos !e al#erac%o$es es#r+c#+rales - $+'9r%cas !el cro'oso'a , so$ los al#era!os o s+)er$+'erar%os los /+e se %$ac#%"a$ !a$!o l+ar a cor);sc+los !e Barr !e or'a, $;'ero - #a'ao a$or'ales. E<%s#e +$a rela /+e %$!%ca /+e el $;'ero !e c+er)os !e Barr es %+al al $;'ero !e cro'oso'as 5>16. @as#a el ao 0 se +sa*a$ los es#+!%os !e cro'a#%$a se<+al )ara la !e#er'%$ac%($ !el se)os%#%"os 5S. !e l%$eel#er6 - '+eres cro'a#%$a>$ea#%"as 5S. !e T+r$er6 se )re%ere +$ es#+!%o !el car%o#%)o )ara la !e#er'%$ac%($ !el se
O?ETIOS 1. I')le'e$#ar la #9c$%ca $ecesar%a )ara la o*ser"ac%($ !e la cro'a#%$a se<+al e$ c9l+las !e e)%#el%o *+cal - *+l*o )%loso. 2. Relac%o$ar los 8alla7os c%#ol(%cos co$ los !a#os #e(r%cos.
MATERIALES > )lacas )or#ao*e#os > )a)el %l#ro > c+*reo*e#os > colora$#e Orce:$a Ac9#%ca 52?6 > *aale$+as > es'al#e )ara +as #ra$s)are$#e > o#eros > ace%#e !e %$'ers%($ > '%crosco)%o ()#%co
> )%$7a > #%eras > es#%le#es > &c%!o ac9#%co al 30? > es#+a a 0 ° > es#ereosco)%o
PROCEDIMIENTO C9l+las !e E)%#el%o *+calK 1. E"%#a$!o cerrar la *oca !+ra$#e el )roceso, ras)e co$ el *aale$+as la cara %$#er%or !e s+ 'e%lla 8as#a !escar#ar el !e)(s%#o '+co%!e. 2. Co$ la a-+!a !e +$ *aale$+as ras)e es#a re%($ co$ %r'e7a - e<#%e$!a las c9l+las o*#e$%!as e$ +$ )or#ao*e#os l%')%o - seco. . S%$ !ear secar, colo/+e o#as !el colora$#e orce:$a ac9#%ca so*re la '+es#ra - #a)e co$ +$ c+*reo*e#os l%')%o - seco.
//
. Co$ +$a #%ra !e )a)el %l#ro a*sor*a el e
c'. !e s+ *ase. WWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWW 2. =%ac%($K colocar el )elo e$ +$ )or#ao*e#os l%')%o, aa!%r +$a o#a !e orce:$a ac9#%ca cale$#ar a 0 ° )or 0 se+$!os - #ra$ser%r el )elo a o#ro )or#ao*e#os /+e co$#e$a +$a o#a !e &c%!o ac9#%co al 30?. . D%secc%($ e$ Es#ereosco)%oK Co$ a-+!a !e +$ es#%le#e, se)arar las c9l+las !el *+l*o )%loso, el
res#o !e )elo !e*e ser el%'%$a!o !el )or#ao*e#os, - se !e*e el%'%$ar el e
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. ^E$ /+9 re%($ se e$c+e$#ra el ce$#ro !e %$ac#%"ac%($ !el cro'oso'a 2. ^E$ los s%+%e$#es casos e$c%erre e$ +$ c:rc+lo el cro'oso'a /+e se %$ac#%"ar:a. _ e<)l%/+e )or /+9 16 a. $or'al 26 a. $or'al 6 a. $or'al
*. e$ a$%llo *. Tra$slocac%($ >a+#oso'a *. co$ !elec%($ / Ter'%$al
. E$+'ere e$es /+e se e$c+e$#re$ e$ el cro'oso'a - es)ec%%/+e s+ +$c%($. . E<)l%/+e !e /+e #%)o !e cro'a#%$a es#& co')+es#o el cro'oso'a _.
/#
?I?LIOGRA6A Eo7c+e . 11 T9c$%cas e$ C%#oe$9#%ca. E!%#or%al Es)aVerla, NeJ _or, U.S.A. N+ss*a+' R.L., Ro!er%c R.McI., @+$#%$#o$ =.. 2001 T8o')so$ T8o')so$ Ge$e#%cs %$ Me!%c%$e, .B. Sa+$!ers Co')a$-, F8%la!el)8%a. Fa7>->M%o C., Leo$e F., C(r!o"a A., G+#%9rre7 S., Fea8errera M.E., S&$c8e7 M.E. 12 S:$!ro'e !e T+r$erK Correlac%($ e$#re los @alla7os C%#oe$9#%cos - el =e$o#%)o. Me#ro C%e$c%a, 2 516K 1>. T8o')so$ .S., T8o')so$ M. 1 Ge$9#%ca e$ Me!%c%$a , Masso$, S.A., Barcelo$a. T8er'a$ E. 1H @+'a$ C8ro'oso'es. S)r%$er>Verla, NeJ _or, U.S.A. aler C.L., Car%le C.B., =lo- .M., e# al. 11 T8e Barr *o!- %s a loo)e! c8ro'oso'e or'e! *- #elo'ere assoc%a#%o$. Frc Na#l Aca! Sc% USA HHK 11>13.
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Práctica 0
CARIOTIPO HUMANO INTRODUCCIN El !esc+*r%'%e$#o !el $;'ero cro'os('%co 8+'a$o 5 cro'oso'as6 e$ el ao 13 )or T%o - Le"a$, 'arca el co'%e$7o !e la c%#oe$9#%ca 8+'a$a 'o!er$a. El 'a#er%al 8ere!%#ar%o se e$c+e$#ra or'a!o )or e$es, /+e so$ sec+e$c%as !e ADN /+e #ra$scr%*e$ a +$a ca!e$a )ol%)e)#:!%ca +$c%o$al. El ADN se e$c+e$#ra e$ el $;cleo cel+lar e$ or'a !%s)ersa - +$#o co$ c%er#as )ro#e:$as co$s#%#+-e la cro'a#%$a 52, $'6. D+ra$#e la !%"%s%($ cel+lar el ADN se ora$%7a e$ es#r+c#+ras '&s co')leas 8as#a or'ar los cro'oso'as. El )r%'er $%"el !e ora$%7ac%($ !el ADN co$s%s#e e$ s+*+$%!a!es a 'a$era !e c+e$#as !e +$ collar, lla'a!o Ncleoso%a, e$ el c+al la %*ra !e cro'a#%$a !ar& !os "+el#as alre!e!or !e +$ `$;cleo` or'a!o )or +$ oc#&'ero !e 8%s#o$as e')a/+e#a$!o al ADN e$ +$a )ro)orc%($ !e '&s o 'e$os "eces, co$s#%#+-9$!ose +$a %*ra !e 10 $' !e !%&'e#ro. U$ se+$!o $%"el !e ora$%7ac%($ es el Sole*oide e$ el /+e los $+cleoso'as se ree$rolla$ so*re s% '%s'os, co$!e$sa$!o la lo$%#+! !el ADN e$ 0 "eces '&s. El arrelo %$#er$o !el sole$o%!e co$s%s#e !e +$a %*ra !e cro'a#%$a e$rolla!a e$ or'a !e 89l%ce co$#e$%e$!o $+cleoso'as )or "+el#a, /+e #%e$e 0 $' !e !%&'e#ro. Es#a %*ra )arece ser la +$%!a! +$!a'e$#al )ara /+e la cro'a#%$a se ora$%ce e$ cro'oso'as. La %*ra !e 0 $' !+ra$#e la co$!e$sac%($ !e los cro'oso'as or'a e')a/+e#a'%e$#os e$ or'a !e `loo)s` o la@os +$%!os a +$ `scaol!` o ee ce$#ral, /+e co$s#%#+-e +$a 'a#r%7 !e )ro#e:$as $o 8%s#($%cas, el ADN e$ es#e $%"el se co')ac#a 1.000 "eces al %$al !e la %$#erase 500 $'6 - 10.000 "eces e$ el cro'oso'a 'e#a&s%co 52.000 $'6. Los la7os co$#%e$e$ !e 0 a 100 * ca!a +$o - es#&$ e')aca!os a 'o!o !e 89l%ces s+)er)+es#as s+e#as a +$ ee ce$#ral o a$!a'%o. E$#re las )ro#e:$as $o 8%s#($%cas !el a$!a'%o se !es#aca la Sc% 5To)o%so'erasa II6. La To)o%so'erasa II co$s#%#+-e el 0 ? !el ee ce$#ral or'a$!o los co')leos !e a$clae !e los la7os !e ADN. S+ +$c%($ es la !e e$rollar - !ese$rollar las ca!e$as !e ADN )ara )er'%#%r la se)arac%($ !e las cro'&#%!es 8er'a$as !+ra$#e la a$aase. S+ +*%cac%($ es#ra#9%ca e$ la *ase !e los !o'%$%os )er'%#e /+e !es!e a/+: ac#;e e$ la sereac%($ - co$!e$sac%($ cro'os('%ca 5=%. 6. Se 8a es)ec+la!o /+e los la7os so$, e$ eec#o, +$%!a!es +$c%o$ales !e la re)l%cac%($ #ra$scr%)c%($ !el ADN. Fro*a*le'e$#e los cro'oso'as '%#(#%cos so$ el res+l#a!o !e la co$!e$sac%($ o ar+)a'%e$#o !e los la7os o loo)s !e la cro'a#%$a %$#er&s%ca. Lle&$!ose a )ro!+c%r el $%"el !e co')ac#ac%($ !el cro'oso'a '%#(#%co !e 3 a 10 "eces '&s so*re la cro'a#%$a e$ %$#erase.
/)
Figura 5$ 6i)e"es !e organizaci&n !e" materia" here!itario
5To'a!o !e S#rac8a$ - Rea!, 16
Me!%a$#e la o*ser"ac%($ !e los cro'oso'as '%#(#%cos al '%crosco)%o !e l+7, se )+e!e a)rec%ar /+e es#os a!o)#a$, *ao c%er#as co$!%c%o$es, +$a clara co$or'ac%($ 8el%co%!al, a )esar !e /+e al '%crosco)%o elec#r($%co )rese$#e$ +$a a)ar%e$c%a '&s !esor!e$a!a. A #ra"9s !el )roceso !e co$!e$sac%($ !el 'a#er%al 8ere!%#ar%o, se )asa !e +$a %*ra !e ADN co$ +$a lo$%#+! !e a)ro<%'a!a'e$#e 1 c'., a los cro'oso'as co$ +$a lo$%#+! !e 2 a H '%cras. Los cro'oso'as es#&$ or'a!os )or !os cro'&#%!es +$%!as e$ el ce$#r('ero 5co$s#r%cc%($ )r%'ar%a6, re%o$es #er'%$ales o #elo$eros - e$ ocas%o$es )+e!e$ )rese$#ar sa#9l%#es, se)ara!os !el cro'oso'a )or +$a co$s#r%cc%($ sec+$!ar%a. El ce$#r('ero !%"%!e al cro'oso'a e$ !os *ra7osK +$o cor#o 50; - +$o laro 5 ; 5=%. H6. El co')le'e$#o cro'os('%co !e ca!a c9l+la se !e$o'%$a ca!io&i0o. Es#e #9r'%$o se +#%l%7a )ara !escr%*%r la co$s#%#+c%($ cro'os('%ca !e +$a es)ec%e. La %!e$#%%cac%($ 'orol(%ca !e los cro'oso'as es#& *asa!a e$ los #a'aos rela#%"os !e los '%s'os - !e s+s *ra7os. U$ idiog!a%a es la re)rese$#ac%($ es/+e'&#%ca !e la 'orolo:a cro'os('%ca /+e se +sa co'o !%a$(s#%co )ara la co')arac%($ !e los car%o#%)os !e !%ere$#es es)ec%es - "ar%e!a!es. El %!%ora'a es#& *asa!o e$ las 'e!%!as !e los cro'oso'as e$ "ar%as c9l+las. Los cro'oso'as 8+'a$os !e ac+er!o a la )os%c%($ !el ce$#r('ero se clas%%ca$ e$K %e&ac8*&!icos c+a$!o s+s *ra7os so$ e/+%!%s#a$#es co$ res)ec#o al ce$#r('ero - )or lo #a$#o s+s cro'&#%!es so$ !e la '%s'a lo$%#+!, ac!oc8*&!icos c+a$!o el ce$#r('ero se local%7a e$ la re%($ s+*#er'%$al or'a$!o *ra7os '+- )e/+eos e$eral'e$#e co$ sa#9l%#es, sb%e&ac8*&!icos c+a$!o la local%7ac%($ !el ce$#r('ero #%e$!e 8ac%a +$o !e los e<#re'os, )or lo /+e los *ra7os !e las cro'&#%!es so$ !es%+ales - &eloc8*&!icos c+a$!o el ce$#r('ero se +*%ca e$ la re%($ #er'%$al !el /9
cro'oso'a, )or lo #a$#o $o e<%s#e$ *ra7os ), es#e #%)o !e cro'oso'a $o es#& )rese$#e e$ el car%o#%)o 8+'a$o. Figura 7$ C"asi#icaci&n !e "os cromosomas por "a posici&n !e" centr&mero
5To'a!o !e T8o')so$ - T8o')so$, 1 6 E$ 10, e$ la co$"e$c%($ !e De$"er, se +$%%c( la $o'e$cla#+ra !e los cro'oso'as reco$oc%9$!ose 2 r+)osK A+#oso'as 5cro'oso'as so'&#%cos6 - Go$oso'as 5cro'oso'as se<+ales6. Los a+#oso'as se $+'era$ !el 1 al 22 or!e$a!os )or #a'aos !ecrec%e$#es -, !e$#ro !el '%s'o #a'ao, )or la )os%c%($ !el ce$#r('ero. Los cro'oso'as !e #a'ao se'ea$#e se re;$e$ e$ r+)os /+e se !es%$a$ )or le#ras 5!e la A a la G6. A los cro'oso'as se<+ales e _ se les %$cl+-e e$ los r+)os C - G res)ec#%"a'e$#e. Los cro'oso'as 1, , 1, 1 - 20 so$ #:)%ca'e$#e 'e#ac9$#r%cos el cro'oso'a 2 es#& e$ el l:'%#e e$#re 'e#ac9$#r%co - s+*'e#ac9$#r%co los cro'oso'as B re)rese$#a$ el #%)o s+*'e#ac9$#r%co ra$!e. Los cro'oso'as !e los r+)os C - E 5a e
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Des!e 10 se 8a$ !esarrolla!o $+e"as #9c$%cas /+e )er'%#e$ %!e$#%%car a ca!a )ar !e cro'oso'as )or s+ )a#r($ carac#er:s#%co !e *a$!as #ra$s"ersales, /+e se )o$e$ !e 'a$%%es#o co$ '9#o!os !e #%$c%($ es)ec%ales. Las #9c$%cas !e *a$!eo cro'os('%co co$s%s#e$ e$ e<)o$er a los cro'oso'as a !%ere$#es s+*s#a$c%as - colora$#es )ara !es$a#+ral%7ar )orc%o$es !e )ro#e:$as !el es/+ele#o cro'os('%co 58%s#o$as - $o 8%s#o$as6 o e"%!e$c%ar sec+e$c%as !e ADN co$ 'a-or o 'e$or ca$#%!a! !e e$laces *% o #r%"ale$#es e$#re las *ases $%#roe$a!as co$s#%#+#%"as !e ADN 5a!e$%$a, c%#os%$a, +a$%$a o #%'%$a6.
O?ETIOS 1. A)re$!er a reco$ocer los !%ere$#es r+)os - #%)os !e cro'oso'as /+e co$or'a$ el car%o#%)o 8+'a$o. 2. Clas%%car a los cro'oso'as 8+'a$os !e ac+er!o a las $or'as !el ISCN 200. . D%ere$c%ar +$ car%o#%)o $or'al !e +$o )a#ol(%co co$ al#erac%o$es $+'9r%cas es#r+c#+rales.
MATERIALES > o#ora:as !e 'e#aases 8+'a$as $or'ales - )a#ol(%cas > )la$#%llas )ara ar'ar car%o#%)os > o'a -4o )a)el co$#ac# #ra$s)are$#e > #%eras
PROCEDIMIENTO 1. Es#+!%e la 'e#aase - c+e$#e el $;'ero !e cro'oso'as. 2. Recor#e ca!a +$o !e los cro'oso'as !ea$!o +$ 'are$ e$#re la %+ra - la l:$ea !e cor#e. . E$ *ase a los )a#ro$es !e *a$!eo carac#er:s#%co, a)aree los cro'oso'as 8o'(loos. . Clas%:/+elos )or r+)os !e ac+er!o a la )os%c%($ !el ce$#r('ero - al #a'ao !e ca!a +$o !e los )ares - )9+elos e$ la )la$#%lla corres)o$!%e$#e.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. E<)l%/+e /+9 es :$!%ce ce$#ro'9r%co, c('o se calc+la - c+&l es s+ +#%l%!a!. 2. ^C+&l es la !%ere$c%a e$#re car%o#%)o - 'a)a cro'os('%co . E<)l%/+e c+&l ser:a la !%ere$c%a e$#re el car%o#%)o !e +$a )erso$a co$ S:$!ro'e !e l%$eel#er e$ relac%($ al car%o#%)o $or'al. . Re%9rase *re"e'e$#e acerca !e +$a al#erac%($ cro'os('%ca es#r+c#+ral.
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?I?LIOGRA6A I.S.C.N. 2003 A$ I$#er$a#%o$al S-s#e' or @+'a$ C-#oe$e#%c No'e$cla#+re C-#oe$e#%c a$! Ge$o'e Researc8, S. arer Me!%cal a$! Sc%e$#%%c F+*l%s8er, Basel, SJ%#7erla$!. Laca!e$a .R. 1H1 Ge$9#%ca. A.G.E. S.A., Ma!r%!, Es)aa. LeJ%$ B. 1H Ge$es E!%#or%al Re"er#9, S.A., Barcelo$a, Es)aa. M%ller O.., a$! T8er'a$ E. 2001. @+'a$ C8ro'oso'es, S)r%$er>Verla, NeJ _or, U.S.A. N+ss*a+' R.L., Ro!er%c R.McI., @+$#%$#o$ =.. 2001 T8o')so$ T8o')so$ Ge$e#%cs %$ Me!%c%$e, .B. Sa+$!ers Co')a$-, F8%la!el)8%a. Fa7>->M%o C., F9re7 C8., D&"alos V., S&$c8e7 M.E., Leo$e F.E. 2001 Telo'er%c assoc%a#%o$s %$ c%are##e s'oers e<)o$e! #o loJ le"els o >ra-s. M+#a#%o$ Researc8, 0K>H0. S#rac8a$ T., Rea! A. 1 @+'a$ Molec+lar Ge$e#%cs. B%os Sc%e$#%%c F+*l%s8ers L%'%#e!, U. T8o')so$ .S., T8o')so$ M. 1 Ge$9#%ca e$ Me!%c%$a. Masso$, S.A., Barcelo$a. Ve$#er .C., A!a's M.D., M-ers E.., L% F.., M+ral R.., e# al. 2001 T8e @+'a$ Ge$o'e. T8e Se/+e$ce o #8e @+'a$ Ge$o'e. Sc%e$ce, 2153306K10>131.
?iblio&eca 1i!&al$ 8##)K44JJJ.%$o*%oe$.r4ser"%ces4c8ro'ca$cer4A$o'al%es 8##)K44JJJ.$c*%.$l'.$%8.o" 8##)K44JJJ.*%os#+!%o.co'4case>ree'a$>!$a>se/+e$c%$.8#'l 8##)K44e$o'e.o"4)aes4E!+ca#%o$%#4 8##)K44JJJ.eoc%#%es.co'4ColleeFar4Ca')+s4H348laes2$.8#' 8##)K44)a%$a.!e4e$e#%ca8+'a$a 8##)K44JJJ.*%olo%a.ar%7o$a.e!+48+'a$4ac#4ar-o#-)%$4ar-o#-)%$.8#'l 8##)44*l<.cac8e.el>'+$!o.$e#4es)ec%ales420014024c%e$c%a4e$o'a4e$o'a.sJ
/7
Figura 8$ Cariotipo norma" 029 ::
5To'a!o !eK 8##)K44JJJ.!el#a>s%s#e'%.%#4%'aes4ar%o#-)e.)6
Figura 1;$ Sín!rome !e /urner 53, 6
#-
Figura 11$ Sín!rome !e 3o
Figura 1$ ="teraci&n Estructura" +Cromosoma Fi"a!e"#ia.> ,_, #5226 5//116
5#o'a!o !eKslc.e$e#%cs.+#a8.e!+4...4 #ra$sloca#%o$.c'6
#,
Práctica
CULTIO Y PREPARACIN DE LIN6OCITOS PARA ANÁLISIS CROMOSMICO INTRODUCCIN Co$ e2 5IL>26, co$oc%!a #a'*%9$ co'o +$ ac#or !e crec%'%e$#o l%$oc%#ar%o, la /+e )er)e#;a el )roceso !e '%#os%s a 'a$era !e reacc%($ e$ ca!e$a. Los l%$oc%#os so$ las c9l+las *la$cas '&s )e/+eas, co$ +$a )ro)orc%($ $;cleo>c%#o)las'a al#a. E<%s#e$ !os #%)os )r%$c%)ales !e l%$oc%#os, las c9l+las T 5#%'o !e)e$!%e$#es6 %$"ol+cra!as e$ el )roceso !e %$'+$%!a! cel+lar - las c9l+las B 5'9!+la (sea !e)e$!%e$#es6 %$"ol+cra!as e$ la %$'+$%!a! 8+'oral. Los l%$oc%#os T ser&$ los es#%'+la!os selec#%"a'e$#e e$ s+ )rol%erac%($ e$ los c+l#%"os co$ F@A, se sa*e /+e e$ +$ a!+l#o $or'al, a)ro<%'a!a'e$#e 0? !e 1,3 > ,0 < 10 l%$oc%#os )or l%#ro !e sa$re so$ c9l+las T, los res#a$#es so$ c9l+las B. Fara el c+l#%"o !e l%$oc%#os se +#%l%7a$ 'e!%os s+)le'e$#a!os #ales co'oK Me!%o 1, MEM, =>10, - es)ec%al'e$#e RFMI 10, co$ 10 'l !e s+ero e#al *o"%$o o !e #er$era, 0,3 'l !e L>Gl+#a'%$a 5a'%$o&c%!o6, 1,3 'l !e a$#%*%(#%co>a$#%'%c(#%co 5co$ce$#rac%($ co$ eec#o *ac#er%os#&#%co6, 1,3 'l !e @e)es *+er 5)@ ,26 - 20 'l !e F@A 5es#%'+la!or !e la !%"%s%($6, )or ca!a 100 'l !e 'e!%o !e c+l#%"o. Co$ los re/+er%'%e$#os !e #e')era#+ra - )@ se #ra#a !e %+alar las co$!%c%o$es in )i)o, es#o es !e >H ° C - )@ !e ,0>, res)ec#%"a'e$#e. S% la #e')era#+ra s+)era los ° C )ro"ocar& la '+er#e !e las c9l+las c+l#%"a!as, '%e$#ras /+e s% es %$er%or a los ° C !%s'%$+%r& el :$!%ce !e !%"%s%o$es cel+lares, )er+!%ca$!o la cal%!a! !e la )re)arac%($. E$ la )re)arac%($ cro'os('%ca es $ecesar%o e')lear +$ %$8%*%!or !el 8+so '%#(#%co, es)ec%al'e$#e e$ c+l#%"os $o s%$cro$%7a!os *lo/+ea$!o el )aso e$#re 'e#aase - a$aase. Es#os #%)os !e /+:'%cos %')%!e$ la or'ac%($ !e las %*ras !el 8+so a las c+ales se `a$cla` el ce$#r('ero !e ca!a +$o !e los cro'oso'as 'e#a&s%cos, )ara /+e ca!a cro'&#%!e sea lle"a!a a +$o !e los )olos cel+lares. E$#re es#os /+:'%cos se c+e$#a$ la V%$%*las#%$a, la Colc8%c%$a - s+ a$&loo la Colce'%!a.
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Se !e*e #e$er e$ co$s%!erac%($ /+e el #%e')o !+ra$#e el c+al las c9l+las es#&$ e<)+es#as al i*4ibido! del 4so ac!o%á&ico es )ro)orc%o$al al :$!%ce 'e#a&s%co, )ero +$a e<)os%c%($ )rolo$a!a res+l#a e$ la re!+cc%($ !e la lo$%#+! !e los cro'oso'as, !e a8: /+e se 8a es#%'a!o el #%e')o !e e<)os%c%($ e$ 1,3 a 2 8oras )ara lorar +$ $;'ero a!ec+a!o !e 'e#aases co$ cro'oso'as lo s+%c%e$#e'e$#e elo$a!os /+e ac%l%#e +$a *+e$a resol+c%($ al real%7ar el *a$!eo cro'os('%co. Far#e ese$c%al !e la )re)arac%($ !e cro'oso'as es el #ra#a'%e$#o co$ +$ c4oe 4i0o&3*ico. U$a sol+c%($ 8%)o#($%ca es a/+ella co$ +$a co$ce$#rac%($ sal%$a 'e$or a la !el c%#o)las'a cel+lar, !e #al 'a$era /+e !%c#a!o )or las le-es !el 'o"%'%e$#o os'(#%co 8a*r& +$ %$reso !e @ 2O !es!e la sol+c%($ 8%)o#($%ca 8ac%a el %$#er%or !e la c9l+la. Es#e e$('e$o 8%$c8a las c9l+las, 8e'ol%7a la 'a-or )ar#e !e los er%#roc%#os - co')le'e$#a la acc%($ !el %$8%*%!or !el 8+so '%#(#%co a-+!a$!o a la !%s)ers%($ !e los cro'oso'as. La 'orolo:a cro'os('%ca #a'*%9$ se "er& %$l+e$c%a!a e$or'e'e$#e )or el )roceso !e 'i>aci3*, el %a!or +sa!o co$ '&s rec+e$c%a e$ las )re)arac%o$es cro'os('%cas es +$a 'e7cla !e #res )ar#es !e alco8ol 5e#a$ol a*sol+#o o 'e#a$ol6 - +$a )ar#e !e &c%!o ac9#%co lac%al co$oc%!a co'o %a!or !e Car$o-. El %a!or +ea +$ )a)el '+- %')or#a$#e e$ el a)la$a'%e$#o - se)arac%($ !e los cro'oso'as, - )ro"oca, a!e'&s, la 8e'(l%s%s !e los l(*+los roos re'a$e$#es e$ la '+es#ra. La e<)os%c%($ e
O?ETIOS 1. Fo$er e$ )r&c#%ca la #9c$%ca es#&$!ar )ara el c+l#%"o - la )re)arac%($ cro'os('%ca. 2. O*#e$er cro'oso'as 'e#a&s%cos )ara s+ )os#er%or a$&l%s%s.
MATERIALES > 'l !e sa$re )er%9r%ca > 'l !e 'e!%o !e c+l#%"o s+)le'e$#a!o. > 100 '%crol%#ros !e Colc8%c%$a 5Colce'%!a6 > sol+c%($ 8%)o#($%ca 5CL al 0,3?6 > %a!or !e Car$o- 5'e#a$ol>&c%!o ac9#%co K16 > sol+c%($ !e e<#e$s%($ 5&c%!o ac9#%co al 0?6 > #+*os c($%cos o rascos !e "%!r%o )ara c+l#%"o. > )era !e o'a
> ra!%lla > es#+a > *ao Mar:a > ce$#r:+a > 'ec8ero > )lacas )or#ao*e#os > )%)e#as Fas#e+r
PROCEDIMIENTO 1. To'ar 'l !e sa$re "e$osa e$ +$a er%$a es#9r%l /+e co$#e$a )re"%a'e$#e +$a o#a !e a$#%coa+la$#e 58e)ar%$a6. 2. E$ co$!%c%o$es !e es#er%l%!a!, colocar e$ +$ #+*o c($%co o e$ +$ rasco !e "%!r%o 'l !e 'e!%o !e c+l#%"o s+)le'e$#a!o - o#as !e la '+es#ra !e sa$re 8e)ar%$%7a!a. . Fo$er a c+l#%"ar e$ +$a es#+a a ° C )or 2 8oras. Dos 8oras a$#es !e la cosec8a aa!%r al c+l#%"o 100 '%crol%#ros !e colc8%c%$a 5Colce'%!a6. . Sacar la '+es#ra !e la es#+a - so'e#erla a ce$#r%+ac%($ )or 3 '%$+#os a 2.300 re"ol+c%o$es )or '%$+#o 5r)'6, e<#raer el so*re$a!a$#e co$ +$a )%)e#a Fas#e+r !e*%!a'e$#e ro#+la!a !ea$!o a)ro<%'a!a'e$#e 1 'l )or so*re el )rec%)%#a!o - res+s)e$!er. Es ##
$ecesar%o a)las#ar el c8+)($ !e o'a !e la )%)e#a - el%'%$ar el a%re !e s+ %$#er%or +era !el #+*o co$ el /+e se es#& #ra*aa$!o, )+es caso co$#rar%o #o!o el co$#e$%!o se 'e7clar:a. 3. I$#ro!+c%r la '+es#ra res+s)e$!%!a e$ la )%)e#a Fas#e+r - arear 'l !e sol+c%($ 8%)o#($%ca )recale$#a!a a ° C e$ el #+*o c($%co, !ear res*alar el co$#e$%!o !e la )%)e#a )or las )are!es !el #+*o e %$c+*arlo )or 20 '%$+#os a ° C e$ *ao Mar:a. . Ce$#r%+ar )or 3 '%$+#os 52.300 r)'6, e<#raer el so*re$a!a$#e - res+s)e$!er. . A*sor*er el )rec%)%#a!o e$ la )%)e#a Fas#e+r - aa!%r al #+*o 'l !e %a!or !e Car$o-, arear al #+*o c($%co co$ +er7a el co$#e$%!o !e la )%)e#a - res+s)e$!er la 'e7cla 2 o "eces. Dear re)osar la )re)arac%($ al 'e!%o a'*%e$#e )or 13 '%$+#os. Fasa!o es#e #%e')o so'e#er a ce$#r%+ac%($, el%'%$ar el so*re$a!a$#e - res+s)e$!er. H. Aa!%r )or #res ocas%o$es '&s 'l !e %a!or - re)e#%r el )roce!%'%e$#o. Co$ la %$al%!a! !e 'eorar la )re)arac%($ cro'os('%ca se )+e!e so'e#er la '+es#ra a rer%erac%($ )or 0 '%$+#os !es)+9s !el c+ar#o %a!or, )re"%a a la ce$#r%+ac%($. La ca$#%!a! !e so*re$a!a$#e /+e !e*e ser el%'%$a!a !es)+9s !e la ;l#%'a ce$#r%+ac%($ !e*e ser 'e$or, !ea$!o )or so*re el )rec%)%#a!o cerca !e 2 'l !e l:/+%!o. . Baar la )laca )or#ao*e#os e$ la sol+c%($ !e e<#e$s%($ - o#ear so*re ella 5!e 3 a o#as6 el res%!+o res+s)e$!%!o a +$a al#+ra !e 0>30 c'. so'e#er a calor )or +$ )ar !e se+$!os "ol"er a o#ear +$a ca$#%!a! s%'%lar !e '+es#ra. Secar al a'*%e$#e la )laca )re)ara!a.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. ^C+&les so$ los eec#os !e +$a 'ala %ac%($. 2. ^Q+9 o#ras sol+c%o$es 8%)o#($%cas se )+e!e e')lear e$ ree')la7o !e la sol+c%($ !e Cl al 0,3?. . ^E$ c+l#%"o !e sa$re )er%9r%ca a /+9 se lla'a '%croc+l#%"o - 'acroc+l#%"o. E$ /+9 se !%ere$c%a s+ 'e#o!olo:a.
?I?LIOGRA6A Gos!e$ C.M., Da"%!so$ C., Ro*er#so$ M. 12 L-')8oc-#e c+l#+re. E$K @+'a$ C-#oe$e#%cs A )rac#%cal a))roac8, 5D.E. Roo$e- - B.@. C7e)+loJs%, e!s.6 Vol. I )). 1>3. Irl Fress, O<or!, NeJ _or. M%ller O.., a$! T8er'a$ Ee"a. 2001. @+'a$ C8ro'oso'es, S)r%$er>Verla, NeJ _or, U.S.A. Moor8ea! F.S., NoJll F.C., Mell'a$ .., Ba##%)s D.M., @+$eror! D.A. 10 C8ro'oso'e )re)ara#%o$s o le+oc-#es c+l#+re! ro' 8+'a$ )er%)8eral *loo!. E<). Cell. Res 20K 1>1. Roo$e- D.E., C7e)+loJs% B.@. 1H T%ss+e C+l#+re Me#8o!s I$ @+'a$ C-#oe$e#%cs. E$K @+'a$ C-#oe$e#%cs A )rac#%cal a))roac8, 5D.E. Roo$e- - B.@. C7e)+loJs%, e!s.6 )). 1>. Irl Fress, O<or!, E$la$!. T8er'a$ E. 1H0 @+'a$ C8ro'oso'es, S)r%$er>Verla, NeJ _or, U.S.A. Ver'a R.S., Ba*+ A. 1H @+'a$ C8ro'oso'es Ma$+al o *as%c #ec8$%/+es. Fera'o$ Fress, NeJ _or, U.S.A. a## .L., S#e)8e$ G.S. 1H L-')8oc-#e C+l#+re or C8ro'oso'e A$al-s%s. E$K @+'a$ C-#oe$e#%cs A )rac#%cal a))roac8, 5D.E. Roo$e- - B.@. C7e)+loJs%, e!s.6 )).>33. Irl Fress, O<or!, E$la$!.
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Práctica 2
O?SERACIN DE CROMOSOMAS HUMANOS INTRODUCCIN E<%s#e$ '+c8as sol+c%o$es /+e )+e!e$ ser e')lea!as solas o co'*%$a!as co$ o#ros colora$#es - )ro!+c#os /+:'%cos, e$ c+al/+%era !e los '9#o!os es)ec%ales !e #%$c%($. For s+ car&c#er /+:'%co se #%e$e$ colora$#es &c%!os, /+e so$ co')+es#os $%#roe$(l%cos o co$ al;$ r+)o car*o<%lo o s+l($%co, - colora$#es *&s%cos, /+e )or la )rese$c%a !e al;$ r+)o a'%$o o al/+%la'%$o se co'*%$a$ co$ los &c%!os )ara or'ar sales. ?=63EO C4OMOS@MCO La %$#ro!+cc%($ !e #9c$%cas !e *a$!eo $o s(lo 8a 8ec8o )os%*le la %!e$#%%cac%($ r%+rosa !e cro'oso'as %$!%"%!+ales s%$o /+e #a'*%9$ 8a orec%!o +$a o)or#+$%!a! !e carac#er%7ar e %!e$#%%car la 'orolo:a s+*cro'os('%ca. Ca!a #9c$%ca )ro!+ce +$ *a$!eo carac#er:s#%co, lo /+e !e)e$!e !e la 'e#o!olo:a /+e se +#%l%ce. Cas)ersso$ - s+s cola*ora!ores 516 +ero$ los )r%'eros e$ %$or'ar +$ '9#o!o !e #%$c%($ !%ere$c%al )ara la o*#e$c%($ !e +$a se'e$#ac%($ lo$%#+!%$al !e los cro'oso'as 'e#a&s%cos. A )ar#%r !e es#e 'o'e$#o se 8a$ !esarrolla!o !%ere$#es #9c$%cas !e *a$!eoK > *a$!eo Q 5*a$!as l+oresce$#es co$ /+%$acr%$a6 > *a$!eo C 5*a$!as ce$#ro'9r%cas6 > *a$!eo G 5*a$!as co$ %e'sa6 > *a$!eo R 5*a$!as e$ re"erso6 > *a$!eo N 5*a$!as !e las re%o$es ora$%7a!oras $+cleolares >NOR>6 Los es#+!%os !e *a$!eo cro'os('%co 8a$ re"ela!o /+e cerca !el 1? al 20? !el co')le'e$#o cro'os('%co 8+'a$o co$s%s#e !e *a$!as>C, o 8e#erocro'a#%$a co$s#%#+#%"a. U$ al#o )orce$#ae !e es#a 8e#erocro'a#%$a es al#a'e$#e )ol%'(r%ca - co$s%s#e !e !%ere$#es a'%l%as !e ADNs ala sa#el%#ales co$ "ar%as es#r+c#+ras re)e#%!as e$ +$ al#o ra!o. Al+$os cro'oso'as #%e$e$ !+)l%cac%o$es co')leas %$#er > e %$#racro'os('%cas, )rese$#es e$ re%o$es )er%ce$#ro'9r%cas. El H0? res#a$#e !el e$o'a, es !ec%r el co')o$e$#e e+cro'&#%co, se )+e!e !%"%!%r e$ *a$!as> G, R T. Se )%e$sa /+e es#as *a$!as c%#oe$9#%cas !%%ere$ e$ s+ co')os%c%($ $+cleo#:!%ca - e$ la !e$s%!a! 9$%ca, a+$/+e e$ el &'*%#o 'olec+lar, $o 8a s%!o )os%*le !e#er'%$ar los l:'%#es )rec%sos !e las *a$!as. Las *a$!as>T e$ s+ 'a-or:a so$ GC - so$ r%cas e$ e$es, '%e$#ras /+e las *a$!as G so$ )o*res e$ GC. Se;$ los ;l#%'os res+l#a!os )+*l%ca!os !e$#ro !el Ge$o'a @+'a$o 520016, la !e$s%!a! !e e$es +e 'a-or e$ re%o$es !e al#o co$#e$%!o !e GC /+e e$ re%o$es !e *ao co$#e$%!o !e GC, co'o se es)era*a. S%$ e'*aro, la correlac%($ e$#re el co$#e$%!o !e GC - la !e$s%!a! 9$%ca $o se e$'arc( !e$#ro !e lo /+e se )re!%o. Se local%7( +$a )ro)orc%($ '&s al#a !e e$es e$ las re%o$es )o*res e$ GC !e lo /+e se 8a*:a es)era!o. Los '9#o!os or%%$ales !e *a$!eo )ro!+c:a$ 8as#a 20 *a$!as e$ 'e#aase e$ +$ se# 8a)lo%!e !e a+#oso'as 8+'a$os, )ero co$ las #9c$%cas ac#+ales !e #%$c%($ se )+e!e$ o*#e$er 8as#a 2.000 *a$!as. La elecc%($ !el *a$!eo cro'os('%co 8a )er'%#%!o !ar +*%cac%($ e$ ;l#%'a %$s#a$c%a a los !%s#%$#os e$es a lo laro !e los cro'oso'as, as: co'o #a'*%9$ a )+$#os )rec%sos !e ro#+ra asoc%a!os a ra%l%!a!, #ra$slocac%o$es, !elec%o$es, %$"ers%o$es, - o#ras al#erac%o$es cro'os('%cas e$co$#ra!as #a$#o e$ #+'ores s(l%!os co'o e$ le+ce'%as. El *a$!eo $o solo 8a )er'%#%!o la %!e$#%%cac%($ !e #o!os los cro'oso'as 8+'a$os s%$o a!e'&s la !e#ecc%($ !e +$ a')l%o es)ec#ro !e
#)
a*errac%o$es cro'os('%cas $+'9r%cas - es#r+c#+rales - es#+!%ar las relac%o$es e"ol+#%"as e$#re cro'oso'as !e "ar%as es)ec%es. La relac%($ e
5To'a!o !eK _+$%s, 1 e$ Ma$e - Ma$e, 16
TECNICAS DE TINCION DI6ERENCIAL BANDEO Q.> T9c$%ca e$ la c+al se +#%l%7a i*ac!i*a, )ro!+c%9$!ose )a#ro$es l+oresce$#es - $o l+oresce$#es e$ los cro'oso'as 'e#a&s%cos /+e al ser o*ser"a!os co$ '%crosco)%o !e l+oresce$c%a, re"ela$ +$ )a#r($ carac#er:s#%co )ara ca!a )ar cro'os('%co. A+$/+e el 'eca$%s'o %$"ol+cra!o e$ es#e *a$!eo $o es a;$ claro, se ace)#a /+e las *a$!as l+oresce$#es se e$c+e$#ra$ e$ re%o$es cro'os('%cas !o$!e el ADN es r%co e$ a!e$%$a - #%'%$a. Rec%e$#es es#+!%os !e'+es#ra$ /+e el ADN r%co e$ AT %$ce$#%"a la l+oresce$c%a !e la /+%$acr%$a, '%e$#ras /+e el ADN r%co e$ GC re)r%'e la l+oresce$c%a. Ta'*%9$ se ase+ra /+e las %$#eracc%o$es ADN> )ro#e:$a so$ %')or#a$#es )ara el *a$!eo Q.
#9
BANDEO G.> Las *a$!as Gie%sa 5*a$!as G6 se o*#%e$e$ )or !%es#%($ !e los cro'oso'as co$ +$a e$7%'a )ro#eol:#%ca, s%e$!o la #r%)s%$a la '&s +sa!a e$ los a$&l%s%s cro'os('%cos. Es#a #9c$%ca es !escr%#a co'o GTG 5*a$!as>G )or #r%)s%$a +sa$!o G%e'sa6. A #ra"9s !e es#a se o*#%e$e +$ )a#r($ carac#er:s#%co )ara ca!a )ar !e cro'oso'as 8o'(loos, s%'%lar al e$co$#ra!o e$ *a$!eo Q. El 'eca$%s'o !el *a$!eo G #o!a":a $o es claro, )ero los )a#ro$es !e *a$!eo )o!r:a$ ser el res+l#a!o !e la %$#eracc%($ e$#re el ADN - las )ro#e:$as cro'os('%cas. Fr+e*as !e la*ora#or%o 8a$ !e'os#ra!o /+e la 'a-or:a !e #9c$%cas !e *a$!eo G e<#rae$ )ro#e:$as cro'os('%cas, las re%o$es e$ !o$!e es#o oc+rre $o reacc%o$ar&$ co$ el colora$#e. BANDEO R.> Es#e #%)o !e *a$!eo se )ro!+ce !es)+9s !el #ra#a'%e$#o !e las )lacas /+e co$#%e$e$ la e<#e$s%($ !e cro'oso'as a al#as #e')era#+ras e$ "ar%os #a')o$es, se+%!o !e la #%$c%($ /+e )+e!e ser #a$#o co$ $ara$a !e acr%!%$a co'o co$ G%e'sa. Es#a #9c$%ca )ro!+ce +$ )a#r($ !e *a$!as o)+es#o al )a#r($ !e *a$!eo G o Q as:, las *a$!as /+e $o so$ *%e$ #e%!as )or el *a$!eo G o Q, so$ %$#e$sa'e$#e #e%!as )or el )roceso !e *a$!eo R. El 'eca$%s'o !el *a$!eo R $o es e$#era'e$#e co$oc%!o el #ra#a'%e$#o co$ calor %$!+ce la !es$a#+ral%7ac%($ !e )ro#e:$as cro'os('%cas, as: co'o !e las sec+e$c%as $+cleo#:!%cas e$r%/+ec%!as co$ AT, !ea$!o el ADN r%co e$ GC !e las *a$!as R co$ +$a co$%+rac%($ $a#+ral. La !es$a#+ral%7ac%($ selec#%"a !el ADN r%co e$ AT )+e!e ser e<)lora!a +#%l%7a$!o $ara$a !e acr%!%$a !es)+9s !el #ra#a'%e$#o co$ calor e$ "ar%os #a')o$es.
TECNICAS DE TINCION SELECTIA BANDEO C.> El *a$!eo C )ro!+ce la #%$c%($ selec#%"a !e la 8e#erocro'a#%$a co$s#%#+#%"a. Es#e 'a#er%al se e$c+e$#ra so*re #o!o e$ !egio*es ce*&!o%8!icas 2 0e!ice*&!o%8!icas , as: co'o e$ los #el('eros - e Las re%o$es cro'os('%cas es)ec:%cas /+e or'a$ - 'a$#%e$e$ el $+cleolo e$ el $;cleo %$#er&s%co so$ lla'a!as !egio*es o!ga*i@ado!as *cleola!es 5NORs6, las c+ales se e$c+e$#ra$ e$ las co$s#r%cc%o$es sec+$!ar%as !e los cro'oso'as sa#el%#a!os - /+e co$s%s#e$ !e ';l#%)les co)%as !e e$es /+e se #ra$scr%*%r&$ a +$ ARN r%*oso'al !e 2Hs - 1Hs. Es#as re%o$es )+e!e$ ser #e%!as !%ere$c%al'e$#e e$ la 'e#aase cro'os('%ca +sa$!o #a$#o G%e'sa 5*a$!eo>N6 o %')re$ac%o$es !e )la#a 5*a$!eo A>NOR6. BANDEO T.> El *a$!eo T )+e!e ser co$s%!era!o co'o +$a 'o!%%cac%($ !el *a$!eo R, el c+al co$s%s#e !e +$ #ra#a'%e$#o '&s ares%"o !el ADN !a$!o co'o res+l#a!o +$ !e*%l%#a'%e$#o !e la #%$c%($ e Es +$a 'o!%%cac%($ !el *a$!eo G, el c+al se real%7a co$ +$ )@ al#o o alcal%$o, es#e '9#o!o #%e selec#%"a'e$#e al+$as !e las re%o$es 8e#erocro'&#%cas !e los cro'oso'as 8+'a$os. Es +#%l%7a!o )r%$c%)al'e$#e )ara !%s#%$+%r )ol%'or%s'os !el cro'oso'a . Fara la o*ser"ac%($ !e cro'oso'as, e$ es#a )r&c#%ca, es $ecesar%o #e%r las )lacas - )ara ello +#%l%7are'os co'o colora$#e, el G%e'sa. El G%e'sa es +$ colora$#e $e+#ro, 8ec8o co$ +$ !er%"a!o
#<
!el a7+l !e 'e#%le$o co'*%$a!o co$ eos%$a `'e7cla 'a!re` 50,23 r6, l%cer%$a 510 'l6 - alco8ol 'e#:l%co 50 'l6. La co')os%c%($ !el G%e'sa es la s%+%e$#eK Alco8ol 'e#:l%co......0 'l Gl%cer%$a..................10 'l Me7cla 'a!re............0,23 r P
a7+r II eos%$a......... a7+r II.....................0,H alco8ol 'e#:l%co..3 'l l%cer%$a..............13 'l
Es#a 'e7cla colora$#e !e*e co$ser"arse e$ rasco osc+ro !es)+9s !e ser !%s+el#a, se !ea re)osar 2 8oras, se %l#ra - se +ar!a e$ rascos l%')%os - e$+aa!os co$ alco8ol. Se +#%l%7a )ara la #%$c%($ !e ro#%s !e sa$re, !o$!e )+e!e$ o*ser"arse las c9l+las sa$+:$eas s%+%e$!o +$a #9c$%ca se$c%lla, !e c+*r%r la )laca co$ el colora$#e - l+eo la"ar co$ a+a. Las reacc%o$es !e #%$c%($ so$ co')leas - $o #o#al'e$#e co')re$!%!as, )ero so$ %')or#a$#es )ara la %!e$#%%cac%($ !e los cro'oso'as - s+s )ar#es.
O?ETIOS 1. O*ser"ar cro'oso'as 8+'a$os e$ )lacas -a )re)ara!as. 2. I!e$#%%car los r+)os !e cro'oso'as )or s+ #a'ao - )os%c%($ ce$#ro'9r%ca. . Co$ocer los #%)os !e *a$!eo cro'os('%co - s+ +#%l%!a!.
MATERIALES > )lacas co$ cro'oso'as )re)ara!as a$#er%or'e$#e > '%crosco)%o ()#%co > ace%#e !e %$'ers%($ > rec%)%e$#e !e "%!r%o )ara )lacas > sol+c%($ !e G%e'sa > <%lol > a+a !es#%la!a > )%$7as
PROCEDIMIENTO 1. Fara la #%$c%($ !e )lacas )re)arara +$a sol+c%($ !e G%e'sa al ? colocar e$ el rec%)%e$#e !e "%!r%o - l+eo %$#ro!+c%r la )laca )or 10 '%$+#os. La"ar co$ a+a. 2. U*%car la )laca e$ el '%crosco)%o co$ la ro#+lac%($ a la !erec8a - o*ser"ar !el e<#re'o %7/+%er!o al e<#re'o !erec8o co$ +$ 'o"%'%e$#o e$ 7%>7a, local%7ar las 'e#aases co$ el le$#e !e 10 - )roce!er a a$o#ar las coor!e$a!as !e +*%cac%($ !e la 'e#aase, +$a "e7 local%7a!a o*ser"ar co$ el le$#e !e 100 +#%l%7a$!o ace%#e !e %$'ers%($.
#=
. Fara el re%s#ro !e !a#os a$o#ar el $;'ero !e )laca, /+e se e$c+e$#ra e$ +$ e<#re'o !e la '%s'a, as: co'o las coor!e$a!as !e +*%cac%($ !e la 'e#aase a a$al%7ar, $;'ero !e cro'oso'as - los !aos /+e )rese$#e$. . O*ser"ar +$ ':$%'o !e !%e7 'e#aases - !%*+ar +$a !e ellas, co$ la %!e$#%%cac%($ !e ca!a cro'oso'a a $%"el !e r+)o cro'os('%co. 3. Al %$al%7ar la o*ser"ac%($, la"ar la )laca e$ <%lol )ara /+%#ar el ace%#e - l+eo co$ a+a.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. E$ los s%+%e$#es car%o#%)os 8%)o#9#%cos !e %$!%"%!+os, a$al%7a!os ;$%ca'e$#e co$ #%$c%($ s%')le, /+9 #%)o !e *a$!eo +#%l%7ar:a )ara %!e$#%%carK ^C+&l es el cro'oso'a al#era!o, /+9 al#erac%($ cro'os('%ca )rese$#a - e$ /+9 s%#%o !el cro'oso'a se +*%ca la al#erac%($ E<)l%/+e *re"e'e$#e ^)or /+9 a6 ,_,>C,>G,E,D *6 , _,r5G6 c6 3, _,>C,>C, !%c 2. E<)l%/+e e$ /+e co$s%s#e$ los s%s#e'as !%%#ales !e a$&l%s%s !e car%o#%)o.
?I?LIOGRA6A Ba*or .A., I*ar7 . 1H Q+:'%ca Ge$eral. E!%#or%al Mar:$ S.A Barcelo$a, Es)aa. I.S.C.N. 13 A$ I$#er$a#%o$al S-s#e' or @+'a$ C-#oe$e#%c No'e$cla#+re. M%#el'a$ =. e!%#or. arer F+*l%s8ers Basel, SJ%#7erla$!. L%l%e R.D. 1 B%olo%cal S#a%$s. a"erl- Fress I$c Bal#%'ore, U.S.A. Ma$e E.., Ma$e A. 1 Bas%c @+'a$ Ge$e#%cs. S%$a+er Assoc%a#es, I$c., Massac8+se##s. M%ller O.., a$! T8er'a$ E. 2001. @+'a$ C8ro'oso'es, S)r%$er>Verla, NeJ _or, U.S.A. Fa7>->M%o C., F9re7 C8., D&"alos V., S&$c8e7 M.E., Leo$e F.E. 2001 Telo'er%c assoc%a#%o$s %$ c%are##e s'oers e<)o$e! #o loJ le"els o >ra-s. M+#a#%o$ Researc8, 0K>H0. Sa97 =.A., Car!oso @. 1H C%#oe$9#%ca B&s%ca - B%olo:a !e los Cro'oso'as. Ora$%7ac%($ !e los Es#a!os A'er%ca$os, as8%$#o$, D.C U.S.A. Ve$#er .C., A!a's M.D., M-ers E.., L% F.., M+ral R.., e# al. 2001 T8e @+'a$ Ge$o'e. T8e Se/+e$ce o #8e @+'a$ Ge$o'e. Sc%e$ce, 2153306K10>131. Ver'a R.S, Ba*+ A. 1H @+'a$ C8ro'oso'e Ma$+al o *as%c #ec8$%/+es. Fera'o$ Fress, NeJ _or, U.S.A
#7
Práctica 5
NOMENCLATURA CROMOSMICA INTRODUCCIN Des!e el ao 1 se 8a$ "e$%!o re+$%e$!o "ar%os r+)os !e %$"es#%a!ores !e*%!o a /+e e<%s#:a +$a co$+s%($ e$ lo reere$#e a la $o'e$cla#+ra cro'os('%ca )os#er%or'e$#e se 8a$ real%7a!o co$resos, co$ere$c%as - e$c+e$#ros /+e )er'%#%ero$ es#a*lecer las *ases !e la No'e$cla#+ra C%#oe$9#%ca I$#er$ac%o$al. E$ 'a-o !e 1H0 e$ Far:s se lle( a +$ co$se$so )ara )+*l%car el S%s#e'a I$#er$ac%o$al !e No'e$cla#+ra C%#oe$9#%ca @+'a$a Ba$!eo !e Al#a Resol+c%($ 51H16 c+-as s%las e$ %$l9s so$ ISCN 51H16. E$ 1H se real%7( +$a re"%s%($ )ara corre%r errores - se )+*l%c( +$a $+e"a "ers%($ e$ 1H3. E$ 11 *ao la !%recc%($ !e =el%< M%#el'a$ se )+*l%c( el ISCN 5116K L%$ea'%e$#os )ara la C%#oe$9#%ca !el C&$cer. Fos#er%or'e$#e se %$cl+-( e$ el ISCN la $o'e$cla#+ra )ara el +so !e las #9c$%cas !e 8%*r%!%7ac%($ %$ s%#+ - se %$cor)or( #o!as las re"%s%o$es - los l%$ea'%e$#os )ara la c%#oe$9#%ca !el c&$cer e$ +$ solo !oc+'e$#o /+e se )+*l%c( e$ 13. E$ !%c%e'*re !el 200 +$ $+e"o co'%#9 re+$%!o e$ Va$co+"er !ec%!%( 'o!%%car el ISCN !e 13 !e ac+er!o a la %$cor)orac%($ !e $+e"as #9c$%cas c%#oe$9#%cas - 'olec+lares /+e se 8a$ %!o !esarrolla$!o, co'o so$ las #9c$%cas !e *a$!eo /+e )ro)orc%o$a$ +$ $%"el !e resol+c%($ !e 00 *a$!as - los ca'*%os !e )os%c%($ e$ el %!%ora'a, la 8%*r%!%7ac%($ e$('%ca co')ara#%"a - o#ros. =%$al'e$#e se reco'e$!( la ac#+al )+*l%cac%($ !el ISCN e$ el ao 2003 - la '&s ac#+al es !el ao 200. De$#ro !e la $o'e$cla#+ra c%#oe$9#%ca la %!e$#%%cac%($ !e los *ra7os, re%o$es, *a$!as s+*>*a$!as cro'os('%cas es %$!%s)e$sa*le )ara +*%car los s%#%os %$"ol+cra!os e$ !%ere$#es al#erac%o$es cro'os('%cas. Fara !es%$ar los *ra7os, las re%o$es - las *a$!as !e +$ cro'oso'a se +sa el s%+%e$#e s%s#e'aK
0 !es%$a el *ra7o cor#o !es%$a el *ra7o laro La $+'erac%($ co'%e$7a !es!e el ce$#r('ero - co$#%$;a 8ac%a +era 8as#a el %$al !e ca!a *ra7o. Los *ra7os se !%"%!e$ co$"e$c%o$al'e$#e e$ +$ $;'ero !e re%o$es )ara reco$ocerlas, - las *a$!as se $+'era$ sec+e$c%al'e$#e ca!a +$a. Las S+*>*a$!as se $o'*ra$ +#%l%7a$!o +$ s%s#e'a !ec%'al, )or ee')lo e$ la =%+ra 1 la *a$!a !o$!e se local%7a la lec8a esK 1).2
5-
Figura 10$ Cromosoma 1
Fara !es%$ar +$a *a$!a )ar#%c+lar se re/+%ere$ c+a#ro )ar&'e#rosK 1. $;'ero !e cro'oso'a 2. *ra7o . re%($ 5&rea !e +$ cro'oso'a co')re$!%!a e$#re !os re%o$es s+ces%"as6 . *a$!a 3. s+*>*a$!a La $o'e$cla#+ra cro'os('%ca !e los car%o#%)os $or'ales esK , car%o#%)o e'e$%$o $or'al ,_ car%o#%)o 'asc+l%$o $or'al E$ el s%+%e$#e c+a!ro se o*ser"a$ las )r%$c%)ales al#erac%o$es cro'os('%cas $+'9r%cas es#r+c#+ralesK
5,
TIPOS DE ALTERACIONES CROMOSMICAS
NUMÉRICAS Mo*oso%+as :/* ,; T!iso%+as :/* K,; T!i0loid+as :/* K *; Te&!a0loid+as :/* K /*;
ESTRUCTURALES Delecio*es :del; D0licacio*es :d0; I*1e!sio*es :i*1; T!a*slocacio*es :&; Isoc!o%oso%as :i; I*se!cio*es :i*s; De!i1adas :de!; A*illos :!;
ALTERACIONES NUMÉRICAS Los s%$os o se coloca$ a$#es !el cro'oso'a, )ara %$!%car el a+'e$#o o )9r!%!a !e +$ cro'oso'a e$ )ar#%c+lar. Es. /9JJK5JK9JK/, Car%o#%)o cerca$o a la 8a)lo%!:a co$ !os co)%as !e los cro'oso'as , - 21 - +$a s%')le co)%a !e los o#ros cro'oso'as.
<,JJK=JK,Car%o#%)o cerca$o a la #r%)lo%!:a co$ c+a#ro cro'oso'as H - 10 - #res co)%as !e los o#ros cro'oso'as. N%"el !e )lo:!%a 5$, 2$, $, e#c.6
<9 ,-/ 5*J J" b$Z Es#e s:'*olo %$!%ca /+e #o!as las a$or'al%!a!es es#&$ e<)resa!as e$ relac%($ al $%"el !e #e#ra)lo%!:a. ~
Al&e!acio*es de los c!o%oso%as se.ales Co*s&i&cio*ales 3, car%o#%)o co$ +$ cro'oso'a 5S:$!ro'e !e T+r$er6 ,_ car%o#%)o co$ !os cro'oso'as - +$ cro'oso'a _ 5S:$!ro'e !e l%$eel#er6 , car%o#%)o co$ #res cro'oso'as ,__ car%o#%)o co$ +$ cro'oso'a - !os cro'oso'as _
5/
H,_ car%o#%)o co$ #res cro'oso'as - +$ cro'oso'a _ 'os ,_10d4,_20d Car%o#%)o e$ 'osa%co !escr%*%e$!o !os l:$eas cel+laresK +$a !e 10 - o#ra !e 20 c9l+las.
Adi!idas :*eo0lasias; ,, car%o#%)o !e +$ #+'or !e +$a '+er co$ +$ cro'oso'a e<#ra 3,,> car%o#%)o !e +$ #+'or !e +$a '+er co$ )9r!%!a !e +$ cro'oso'a 3,,>_ car%o#%)o !e +$ #+'or !e +$ 8o'*re co$ )9r!%!a !e +$ cro'oso'a _ 3,_,> car%o#%)o !e +$ #+'or !e +$ 8o'*re co$ )9r!%!a !e +$ cro'oso'a H,_,,_ car%o#%)o !e +$ #+'or !e +$ 8o'*re co$ +$ cro'oso'a - _ a!%c%o$al H,_c, car%o#%)o !e +$ )ac%e$#e co$ S:$!ro'e !e l%$eel#er co$ +$ e<#ra ,c car%o#%)o !e +$ #+'or co$ +$ cro'oso'a e<#ra La %$#erroac%($ %$!%ca /+e $o es#& claro s% el cro'oso'a e<#ra es co$s#%#+c%o$al o a!/+%r%!o
Al&e!acio*es de los a&oso%as Co*s&i&cio*ales ,,21 car%o#%)o co$ #r%so':a 21 ,,1H car%o#%)o co$ #r%so':a 1H
Adi!idas :*eo0lasias; H,_,21c,21 )ac%e$#e co$ S:$!ro'e !e DoJ$ /+e 8a a!/+%r%!o +$ cro'oso'a 21 e<#ra
ALTERACIONES ESTRUCTURALES Los s%$os o +*%ca!os !es)+9s !el *ra7o cro'os('%co %$!%ca$ a+'e$#o o !%s'%$+c%($ !el #a'ao !el cro'oso'a. E. S:$!ro'e !e Cr%>!+>C8a#K ,,3)>
Deleci3* :del; Se or%%$a )or la )ro!+cc%($ !e +$a rac#+ra e$ +$ *ra7o cro'os('%co, )+e!e ser #er'%$al o %$#ers#%c%al. E$ la %+ra 13 se o*ser"a +$a !elec%($ #er'%$al e$ el cro'oso'a 2. Fara %$!%car /+e *ra7o !el cro'oso'a se 8a !elec%o$a!o !e*e es)ec%%carse la $o'e$cla#+ra co')le#a se;$ el ISCN, !e*%!o a /+e s% sola'e$#e se %$!%ca el )+$#o !e ro#+ra !o$!e se )ro!+o la !elec%($, $o se sa*e /+e *ra7o se 8a )er!%!o.
5#
Figura 1 $ 3e"eci&n cromos&mica termina" )#er
/#er a
*
a6 Cro'oso'a 2 $or'al *6 Cro'oso'a 2 !elec%o$a!oK !el5265/26 !el5265)#er /2K6
Delec%o$es I$#ers#%c%alesK ,,!el5365/1/6 ,,!el5365)#er/1KK//#er6 ,,!el5365/6
I*1e!sio*es :i*1; 1. Pa!ac8*&!icas 5$o %$cl+-e ce$#r('ero6 5=%+ra 16
a
*
a6 cro'oso'a $or'al
55
*6 cro'oso'a co$ %$"ers%($ !%rec#aK ,,%$"565/1.1/2.16 ,,%$"565)#er/1.1KK /2.1/1.1KK/2.1/#er6 2. Pe!ic8*&!icas 5%$cl+-e al ce$#r('ero6
,_,%$"565)1/216 ,_,%$"565)#er)1KK/21)1KK/21/#er6
I*se!cio*es :i*s; 1. D%rec#a El se'e$#o %$ser#a!o 'a$#%e$e la or%e$#ac%($ or%%$al /+e #e$:a co$ relac%($ al ce$#r('ero. 2. I$"er#%!a La or%e$#ac%($ !e las *a$!as !el se'e$#o %$ser#a!o 2/22 se 8a 'o!%%ca!o co$ res)ec#o al ce$#r('ero e$ )os%c%($ !%s#al. ,,%$s5265)1//226 ,,%$s5265)#er)1KK/22/KK)1/22KK//#er6
T!aslocacio*es :&; ,( Rec+0!ocas • E$#re !os cro'oso'asK s+s se'e$#os !%s#ales 8a$ s%!o %$#erca'*%a!as 5=%+ra 16. ,_,#52365/21/16
a
*
c
!
a - *6 Cro'oso'as 2 - 3 $or'ales c - !6 Cro'oso'as #ra$sloca!osK ,_,#52365/22/26 ,_,#523652)#er 2/22KK3/23/#er3)#er3/2KK2/222/#er6
No&a$ C+a$!o la #ra$slocac%($ %$"ol+cra al cro'oso'a se<+al es#e !e*e ser !es%$a!o )r%'eroK 5)
,,#5165/2/126 ,,#5165)#er /2KK1/121/#er1)#er1/12KK/2/#er6
T!a*slocaci3* e*&!e &!es c!o%oso%as E. 1 El se'e$#o !%s#al !el cro'oso'a 2 8a s%!o #ra$sloca!o al cro'oso'a , el se'e$#o !%s#al !el al cro'oso'a 3 - el se'e$#o !%s#al !el 3 al cro'oso'a 2. ,,#52365)21/22/26 ,,#523652/#er2)21KK3/23/#er)#er/22KK2)212)#er3)#er3/2KK/22/# er6 E. 2 C+a$!o la #ra$slocac%($ es e$#re !os cro'oso'as 8o'(loos +$o !e ellos !e*e ser s+*ra-a!o. ,,#526 ,,#52652)#er2/21KK)1)#er)#er/22KK2/212/#er/#er)1KK/22/# er6 E. C+a$!o la #ra$slocac%($ %$"ol+cra ro#+ras e$#re !os cro'oso'as, los se'e$#os %$#erca'*%a!os 5%$#ers#%c%ales6 se +*%ca$ co'o e$ el caso !e las %$serc%o$es. ,_,#5365/1/2/13/26 ,_,#53653)#er3/1KK/13/2KK3/23/#er)#er/13KK3/13/2KK/2 /#er6
T!a*slocaci3* de b!a@os c!o%os3%icos co%0le&os ,_,#5165)10/106 ,_,#51651)#er1)10KK/10/#er)#er/10KK1)101)#er6 ,_,#5165)10)106 E$ la #ra$slocac%($ rec:)roca !e *ra7os cro'os('%cos co')le#os #a$#o !e *ra7os cor#os co'o laros !e los cro'oso'as 1 - !a l+ar a +$a +s%($ a $%"el !e los ce$#r('eros.
/( Robe!&so*ia*as 1. =+s%($ !e los *ra7os laros !e los cro'oso'as acroc9$#r%cos 1>13 - 21>22. E. 3,,!er512165/10/106 3,,ro*512165/10/106 Se +#%l%7a %$!%s#%$#a'e$#e los #9r'%$os !ob o de! )ara !escr%*%r a las #ra$slocac%o$es ro*er#oso$%a$as.
59
T!i0licacio*es :&!0; C+a$!o +$ se'e$#o se re)%#e #res "eces se +#%l%7a el s:'*olo #r), la #r%)l%cac%($ )+e!e ser !%rec#a o %$"er#%!a. E. ,,#r)5165/21/26 ,,#r)5165)#er/2KK/21/2KK/21/#er6 Tr%)l%cac%($ Tr%)l%cac%($ !%rec#a !e +$ se'e$#o e$#re las *a$!as 1/21 - 1/2.
C!o%oso%as e* a*illo :!;
E. ,,r565)22/6 ,,r565KK)22/KK6 E$ es#e ee')lo se 8a )ro!+c%!o +$a ro#+ra - +s%($ e$#re las *a$!as )22 - /. Los se'e$#os !%s#ales se 8a$ !elec%o$a!o. !elec%o$a!o. El s:'*olo KK %$!%ca ro#+ra - +s%($.
O?ETIOS 1. Co$oce Co$ocerr la $o'e$c $o'e$cla# la#+ra +ra cro'o cro'os(' s('%ca %ca +sa!a +sa!a %$#er$ %$#er$ac% ac%o$a o$al'e l'e$#e $#e )ara )ara al#era al#erac%o c%o$es $es $+'9r%cas - es#r+c#+rales. 2. I$#er)re#ar los res+l#a!os c%#oe$9#%cos.
MATERIALES > > > > >
I!%o I!%or ra' a'aa !e cro' cro'os oso' o'as as 8+'a 8+'a$o $oss Fa)el *o$! L&)%7 Rela T%eras
PROCEDIMIENTO 1. Re"%sar Re"%sar la #er'%$olo #er'%$olo:a :a +sa!a +sa!a e$ la $o'e$c $o'e$cla#+r la#+raa cro'os('% cro'os('%ca. ca. 2. Real%7 Real%7ar ar cor#es cor#es e$ los %!%or %!%ora' a'as as e$#re e$#rea!o a!oss !e ac+er! ac+er!oo a las al#erac al#erac%o$ %o$es es es#r+c# es#r+c#+ra +rales les )ro)+es#as. . Ar'ar Ar'ar el cro'oso' cro'oso'aa res+l#a$#e res+l#a$#e se;$ se;$ el #%)o #%)o !e al#erac al#erac%($. %($.
5<
. Escr Escr%* %*%r %r la $o'e $o'e$c $cla la#+ #+ra ra #a$# #a$#oo e$ la or' or'aa cor#a cor#a co'o co'o co') co')le le#a #a e$ ca!a ca!a +$o !e los los eerc%c%os as%$a!os.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. E$ los s%+%e$ s%+%e$#es #es casos casos %$!%/+e %$!%/+e co$ co$ +$a la $o'e$ $o'e$cla#+ cla#+ra ra correc#aK correc#aK 5
6 ,,#516
5
6 ,,#516
5
6 ,_,r5165KK)/2KK6
5
6 ,_,r5165K)/2K6
5
6 3,,21,>22
5
6 ,,21,>22
5
6 3,
5
6 3,O
2. Descr%*a Descr%*a las carac#e carac#er:s#%c r:s#%cas as !el S:$!ro'e S:$!ro'e !e Mar#%$ Mar#%$ Bell Bell - real%ce +$ es/+e'a es/+e'a !el !el cro'oso'a aec#a!o co$ la $o'e$cla#+ra cro'os('%ca res)ec#%"a. . E<)l%/+e E<)l%/+e *re"e'e *re"e'e$#e $#e c+&l es la %')or#a %')or#a$c%a $c%a !e la $o'e$cl $o'e$cla#+ra a#+ra cro'os cro'os('%ca ('%ca e$ la !escr%)c%($ #a$#o !e los casos cl:$%cos co'o e$ las $eo)las%as.
?I?LIOGRA6A I.S.C.N. 1H3 A$ I$#er$a#%o$al I$#er$a#%o$al S-s#e' or @+'a$ C-#oe$e#%c No'e$cla#+re C-#oe$e# C-#oe$e# Cell Ge$e#, S. arer Me!%cal a$! Sc%e$#%%c F+*l%s8er, Basel, SJ%#7erla$!. I.S.C.N. 13 A$ I$#er$a#%o$al S-s#e' S-s#e' or @+'a$ C-#oe$e#%c No'e$cla#+re. No'e$cla#+re. M%#el'a$ =. =. e!%#or. e!%#or. arer arer F+*l%s8ers Basel, SJ%#7erla$!. I.S.C.N. 2003 A$ I$#er$a#%o$al I$#er$a#%o$al S-s#e' or @+'a$ C-#oe$e#%c No'e$cla#+re C-#oe$e#%c C-#oe$e#%c a$! Ge$o'e Researc8, S. arer Me!%cal a$! Sc%e$#%%c F+*l%s8er, Basel, SJ%#7erla$!. I.S.C.N. 200 A$ I$#er$a#%o$al I$#er$a#%o$al S-s#e' or @+'a$ C-#oe$e#%c No'e$cla#+re C-#oe$e#%c C-#oe$e#%c a$! Ge$o'e Researc8, S. Reco Reco'' ''e$ e$!a !a#% #%o$ o$ss o #8e #8e I$#e I$#er$ r$a# a#%o %o$a $all S#a$ S#a$!% !%$ $ Co'' Co''%# %##e #eee o$ @+'a @+'a$$ C-#o C-#oe e$e $e#% #%cc No'e No'e$c $cla la#+ #+re re F+*l%s8e! %$ colla*ora#%o$ J%#8 fC-#oe$e#%c a$! Ge$o'e Researc8f Fl+ Fl+s ol! ol!>o >o+# +#KK fT8e T8e Nor'a or'all @+'a @+'a$$ arar-o# o#--)e G> a$! a$! R>*a R>*a$! $!ssf. E!%# E!%#or or5s 5s6K 6K S8aer, L.G. 5S)oa$e, L.G. 5S)oa$e, as8.6Slo"a, as8.6Slo"a, M.L. 5D+ar#e, M.L. 5D+ar#e, Cal%.6 Ca')*ell, L.. 5=%#7ro-, V%c.6 arer Me!%cal a$! Sc%e$#%%c F+*l%s8er, Basel, SJ%#7erla$!. M%ller O., T8er'a$ E. 2001. @+'a$ C8ro'oso'es. =o+r#8 E!%#%o$. S)r%$er>Verla S)r%$er>Verla,, NeJ _or. Sa$!*er AA. 10. T8e C8ro'oso'es %$ @+'a$ Ca$cer a$! Le+e'%a. Seco$! E!%#%o$, Else"%er Sc%e$ce F+*l%s8%$ Co., I$c., NeJ _or. Ver'a Ver'a R.S, Ba*+ A. 1 @+'a$ C8ro'oso'es. C8ro'oso 'es. McGraJ>@%ll, McGraJ> @%ll, NeJ _or. _or.
5=
Práctica Práctica 7
SITIOS 6RÁGILES CROMOSMICOS INTRODUCCIN E$ 1H3 S+#8erla$! !e%$%( a los s%#%os r&%les co'o )+$#os es)ec:%cos !e los l os cro'oso'as /+e )+e!e$ e<8%*%r es)ac%a'%e$#os 5a)s6 o ro#+ras c+a$!o las c9l+las so$ c+l#%"a!as - a$al%7a!as c%#oe$9#%ca'e$#e. c%#oe$9#%ca'e$#e. E$ e$eral, se 8a a')l%a!o a')l%a!o es#a !e%$%c%($ a c%er#os )+$#os )+$#os !e los cro'oso'as cro'oso'as /+e )rese$#a$ es)ac%a'%e$#os 5a)s6 o ro#+ras $o al a7ar, !e*%!o a la e<)os%c%($ !e las c9l+las a c%er#os /+:'%cos es)ec%ales o a !%ere$#es co$!%c%o$es !e c+l#%"o. Los s%#%os r&%les $o se )+e!e$ !e#ec#ar e$ #o!as las )erso$as $% e$ #o!as las c9l+las !e +$a !e#er'%$a!a )erso$a, )ero +$a "e7 /+e a)arece$ e$ +$ %$!%"%!+o o a'%l%a, se e$c+e$#ra$ s%e')re e$ el '%s'o s%#%o e$ +$ cro'oso'a es)ec:%co, - es #ra$s'%#%!o !e +$a e$erac%($ a o#ra. La ra%l%!a! #a'*%9$ se e"%!e$c%a )or la )rese$c%a !e ra'e$#os ac9$#r%cos, cro'oso'as !elec%o$a!os !elec%o$a!os - %+ras '+l#%ra!%ales. Los s%#%os r&%les se clas%%ca$ e$K 16 S%#%os =r&%les Co'+$es o Co$s#%#+c%o$ales 5c>ra6K se o*ser"a$ co$ '+c8a rec+e$c%a e$ la )o*lac%($ e$eral, a+$/+e, ;$%ca'e$#e e$ +$ )e/+eo )orce$#ae !e c9l+las. E$#re ellos se 8alla$ los s%#%os r&%les /+e )+e!e$ )rese$#arse e$ es#a!o 8o'oc%o#o. 8o'oc%o#o. E$ e$eral se sa*e /+e )+e!e$ ser %$!+c%!os )or co$!%c%o$es co$!%c%o$es !e c+l#%"o c+l#%"o co$ es#r9s !e #%'%!%la#o #%'%!%la#o o )or +$a "ar%e!a! "ar%e!a! !e /+:'%cos. /+:'%cos. Se !e$o'%$a$ #a'*%9$ #a'*%9$ )+$#os cal%e$#es o les%o$es a+#os('%cas. a+#os('%cas. Se 8a$ !escr%#o 8as#a el 'o'e$#o '&s !e 30 s%#%os r&%les !e es#e #%)o. EK )1 1)2 )22. )22. 26 S%#%os =r&%les Raros o @ere!a*les 5r>ra6K se carac#er%7a$ )or 8allarse e$ +$ *ao )orce$#ae e$ la )o*lac%($ e$eral, co$ +$a %$c%!e$c%a /+e "ar:a !es!e 140 a 14"ar%os '%les !e %$!%"%!+os. Se carac#er%7a$ )or/+e s%e')re es#&$ e$ el '%s'o s%#%o e$ #o!as las c9l+las !e +$ '%s'o s+e#o - s+s !esce$!%e$#es !esce$!%e$#es - so*re #o!o )or el 8ec8o !e /+e la )re!%s)os%c%($ a )rese$#arlos se 8ere!a !e 'a$era 'e$!el%a$a co!o'%$a$#e. E. =ra/2.. @as#a el 'o'e$#o se 8a$ %!e$#%%ca!o al 'e$os 1 s%#%os r&%les raros 8ere!a*les e$ los a+#oso'as, )ero $o )arece$ es#ar asoc%a!os co$ re#ar!o 'e$#al o co$ c+al/+%er o#ra a$or'al%!a! co$9$%#a. De ac+er!o a las co$!%c%o$es /+e los %$!+ce$ se clas%%ca$ e$K
SITIOS FRÁGILES FRÁGILES RAROS 16 Se$s%*le Se$s%*less a ola#oK so$ %$!+c%!o %$!+c%!oss )or co$ce$#rac co$ce$#rac%o$es %o$es *aas *aas !e &c%!o &c%!o (l%co - #%'%!%$a #%'%!%$a e$ el 'e!%o !e c+l#%"o o %$8%*%!ores !el 'e#a*ol%s'o !el ola#o co'o el Me#o#re*ro'o>!eso<%+r%!%$a 5Br!U6.
57
SITIOS FRÁGILES CO!"ES 16 I$!+c%!os )or A%!%col%$aK s+ e<)res%($ a+'e$#a e$ co$!%c%o$es !e es#r9s !e ola#o. 26 I$!+c%!os )or 3>a7ac%#%!%$aK se )o#e$c%a$ al aa!%r 3>a7ac%#%!%$a, 3>H 8oras a$#es !e la cosec8a. 6 I$!+c%!os )or Br!UK se )o#e$c%a$ al aa!%r Br!U > 8oras a$#es !e la cosec8a. Se 8a o*ser"a!o /+e #o!os es#os /+:'%cos %$8%*e$ 5*lo/+ea$6 o re#rasa$ la re)l%cac%($ !el ADN - acor#a$ la lo$%#+! !e la ase G2 o !el c%clo cel+lar e$ las sec+e$c%as !e los s%#%os r&%les. S% la G2 es '+- cor#a, la co$!e$sac%($ cro'os('%ca es %$co')le#a e$ las re%o$es !e re)l%cac%($ #ar!:a, !a$!o co'o res+l#a!o +$ GAP. Se 8a*la e$#o$ces !e /+e !%c8a re%($ #+"o +$a G2 '+l%'%#a!a - $o alca$7( a ser 'arca!a co$ +$a seal !e co$!e$sac%($. As: los a)s re)rese$#a$ re%o$es !e co$!e$sac%($ %$co')le#a !e la cro'a#%$a. Se cree e$ ca'*%o, /+e las ROTURAS se )ro!+ce$ c+a$!o se a)l%ca la +er7a a $%"el !e los a)s, )+es e$ ellos 8a- 'a-or +er7a )or +$%!a! !e &rea a $%"el !e las ca!e$as %$!%"%!+ales !e las cro'&#%!es, /+e e$ los s%#%os !e ADN al#a'e$#e co$!e$sa!o. Al+$as !e es#as +er7as )+e!e$ ser e$era!as )or el )roceso !e co$!e$sac%($, so*re #o!o s% los e<#re'os !el cro'oso'a )er'a$ece$ a$cla!os a la 'a#r%7 !e la 'e'*ra$a $+clear. Es#os s%#%os es#&$ la$/+ea!os )or 8or/+%llas !e re)l%cac%($ /+e so$ s+sce)#%*les a s+r%r ro#+ras in )itro - )ro*a*le'e$#e in )i)o 5=%.1H - 16. Se 8a #ra#a!o !e e<)l%car la re)l%cac%($ #ar!:a 'e!%a$#e la e<%s#e$c%a !e '+#ac%o$es /+e aec#a$ la e%c%e$c%a co$ /+e so$ +sa!os los or:e$es - %$ales !e re)l%cac%($, )or ee')lo a #ra"9s !e la %$serc%($ !e sec+e$c%as o ra'e$#os !e ADN - reco'*%$ac%($ !es%+al /+e a')l%ar:a$ la !%s#a$c%a e$#re +$ or%e$ !e re)l%cac%($ - o#ro. Se cree a!e'&s /+e c%er#os )rocesos !e 'e#%lac%($ )+e!e$ lle"ar a re)l%cac%($ #ar!:a !el ADN. Figura 17$ a. La rep"icaci&n !e" =36 se comp"eta muy tar!e para Aue "as seña"es !e con!ensaci&n sean e#ecti)as en esa regi&n9 !an!o "ugar a un gap cromos&mico$ (. La rep"icaci&n tar!ía !eBa a" sitio #rági" !e" =36 cu(ierto por proteínas !e rep"icaci&n tar!ía Aue inter#ieren con "a con!ensaci&n !e "a cromatina$ c. La rep"icaci&n no es comp"eta!a antes !e "a con!ensaci&n y "as cromáti!es hermanas permanecen uni!as$ !. Estas "timas se rompen !urante "a ana#ase pro!ucien!o una rotura en cromáti!e o estructuras trira!ia"es$ e. Estructura !e" =36 roto en e" "ugar !on!e "as cromáti!es hermanas permanecieron uni!as +/oma!o !e Lair! et a"9 1875.$
)-
O?ETIOS 1. A)re$!er a %!e$#%%car, e$ )lacas )re)ara!as co$ cro'oso'as, las !%ere$#es 'a$%es#ac%o$es !e la ra%l%!a! cro'os('%ca. 2. =a'%l%ar%7arse e$ la +#%l%7ac%($ a!ec+a!a !e la $o'e$cla#+ra es#a*lec%!a )ara %!e$#%%car es#os #%)os !e al#erac%o$es cro'os('%cas.
MATERIALES > )lacas )re)ara!as > '%crosco)%o ()#%co > ace%#e !e %$'ers%($
PROCEDIMIENTO 1. Se coloca la )laca e<#e$!%!a - #e%!a e$ el '%crosco)%o co$ la ro#+lac%($ a la !erec8a se o*ser"a !el e<#re'o %7/+%er!o al e<#re'o !erec8o co$ +$ 'o"%'%e$#o e$ 7%>7a se local%7ar& las 'e#aases co$ el le$#e !e 10 - se )roce!er& a a$o#ar las coor!e$a!as !e +*%cac%($ !e la 'e#aase, +$a "e7 local%7a!a se "er& co$ el le$#e !e 100 co$ ace%#e !e %$'ers%($. 2. Fara el re%s#ro !e !a#os se a$o#a el $;'ero !e )laca, /+e se e$c+e$#ra e$ +$ e<#re'o !e la '%s'a, as: co'o las coor!e$a!as !e +*%cac%($ !e la 'e#aase a a$al%7ar, $;'ero !e cro'oso'as - los !aos /+e )rese$#e$. . O*ser"ar +$ ':$%'o !e !%e7 'e#aases - !%*+ar +$a !e ellas, co$ la %!e$#%%cac%($ !e ca!a cro'oso'a a $%"el !e r+)o cro'os('%co. A$o#e las al#erac%o$es cro'os('%cas /+e e$c+e$#ra !e ac+er!o a la $o'e$cla#+ra es#a*lec%!a.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. @a*le *re"e'e$#e so*re el S:$!ro'e !el r&%l. 2. E$+'ere 10 s%#%os r&%les co'+$es. . D9 el co$ce)#o !e a) o es)ac%a'%e$#o, ro#+ra, ra'e$#o ac9$#r%co, clas#(e$o.
),
Figura 18$ /ipos !e =(erraciones cromos&micas$
5To'a!o !eK 'a#er%al o#or&%co !el la*ora#or%o !e Ge$9#%ca Molec+lar - C%#oe$9#%ca @+'a$a6
?I?LIOGRA6A Berer R., Bloo'%el! C.D., S+#8erla$! G.R. 1H3 Re)or# o #8e co''%#ee o$ c8ro'oso'e rearra$e'e$#s %$ $eo)las% a$! o$ ra%le s%#es. H#8 I$#er$a#%o$al ors8o) o$ @+'a$ Ge$e Ma))%$. C-#oe$e# Cell Ge$e#, 0K 0>33. De Braceleer M., S'%#8 B., L%$ C.C. 1H3 =ra%le s%#es a$! s#r+c#+ral rearra$e'e$#s %$ ca$cer. @+'a$ Ge$e#%cs, K 112>11. La%r! C., ae E., ar)e$ G., La'* M., Nelso$ R. 1H =ra%le s%#es %$ 8+'a$ c8ro'oso'es as re%o$s o la#e>re)l%ca#%$ DNA. Tre$!s Ge$e# 5No. 106K2>2H1. La%r! C.D. 1H Fro)ose! Mec8a$%s' o I$8er%#a$ce a$! E<)ress%o$ o #8e @+'a$ =ra%le> S-$!ro'e o Me$#al Re#ar!a#%o$. Ge$e#%cs, 11K 3H>3. Ma$e E.., Ma$e A. 1 Bas%c @+'a$ Ge$e#%cs. S%$a+er Assoc%a#es, I$c., Massac8+se##s. M%c8el%s V.V. 1H3 =ra%le S%#es o$ @+'a$ C8ro'oso'esK Descr%)#%o$ a$! Cl%$%cal S%$%%ca$ce. Ma-o Cl%$%c. Froc., 0K 0>. Fa7>->M%o C. 1HH S:$!ro'e !e =ra%l%!a! !el Cro'oso'a o S:$!ro'e !e Mar#%$ Bell. E!+cac%($ M9!%ca Co$#%$+a!a, 5No. 226 K 2>. Fa7>->M%o C., =%allo B.=., D&"alos V., F9re7 C8., S&$c8e7 M.E., Leo$e F.E. 2000 S:$!ro'es !e =ra%l%!a! Cro'os('%ca e$ el Ec+a!or. Me#ro C%e$c%a 5No. 6K1>22.
)/
S+#8erla$! G.R. 1H3 @er%#a*le =ra%le S%#es o$ @+'a$ C8ro'oso'esK II. Fo)+la#%o$ C-#oe$e#%cs. A$$. @+' Ge$e#., K 13>11.
Práctica 8
GENOTICOS Y MUTAGÉNICOS INTRODUCCIN Ge$o#o<%c%!a! se !e%$e co'o el !ao o al#erac%($ !el ADN. S+ es#+!%o #%e$e el )ro)(s%#o !e %!e$#%%car los ae$#es /+e )+e!a$ aec#ar $ea#%"a'e$#e al 'a#er%al e$9#%co !e las c9l+las. Es#os ae$#es )+e!e$ ser !e $a#+rale7a /+:'%ca, :s%ca o *%ol(%ca - es#&$ !%s#r%*+%!os a')l%a'e$#e e$ el a'*%e$#e. Los e$o#(<%cos /+e #%e$e$ +$ eec#o clas#o9$%co 5)ro!+c#ores !e ro#+ras !el ADN6 e$ los 'a':eros, %$#erac#;a$ co$ el ADN e %$!+ce$ !ao e$9#%co, /+e al $o ser re)ara!o o al ser re)ara!o e$ or'a !eec#+osa, )+e!e$ )ro"ocar e"e$#+al'e$#e rearrelos cro'os('%cos. La )ers%s#e$c%a !e es#os rearrelos a #ra"9s !e "ar%os c%clos cel+lares co'o al#erac%o$es es#a*les, 8a s%!o a')l%a'e$#e !oc+'e$#a!a. La asoc%ac%($ e$#re los rearrelos cro'os('%cos - el c&$cer 8a s%!o aclara!a, !e al+$a 'a$era, co$ la local%7ac%($ !e o$coe$es es)ec:%cos e$ cro'oso'as !e#er'%$a!os. Los es#+!%os !e e$o#o<%c%!a! )+e!e$ ser +sa!os co'o '9#o!o )ara es#%'ar !e 'a$era )re!%c#or%a el )o#e$c%al carc%$o9$%co !e los ae$#es clas#(e$os !a!a s+ )os%*le asoc%ac%($ e$#re el !ao e$9#%co - el or%e$ !el c&$cer. El a$&l%s%s !e las al#erac%o$es cro'os('%cas in )itro es +sa!o co'o +$a #9c$%ca )ara !e#ec#ar el eec#o !e s+s#a$c%as /+:'%cas, :s%cas o *%ol(%cas co$ )o#e$c%al '+#a9$%co, #era#o9$%co o carc%$o9$%co.
Age*&es +%icos$ ,( A6IDICOLINA La a%!%col%$a es +$a '%co#o<%$a /+e )+e!e aec#ar las #asas !e a*errac%o$es !el ADN 'e!%a$#e la )ro!+cc%($ !e +$ !es*ala$ce !el )ool !e los !eso<%$+cle(#%!os #r%osa#o, )os%*le'e$#e %$8%*%e$!o s+ %$cor)orac%($ al ADN -4o aec#a$!o las e$7%'as !e re)arac%($. Es +$ %$8%*%!or es)ec:%co !e la ADN )ol%'erasa α 5ala6 la c+al se e$cara !e la re)l%cac%($ - re)arac%($ !el ADN. La )ol%'erasa ala lle"a a ca*o los !%ere$#es )asos a $%"el !e la 8or/+%lla !e re)l%cac%($ co$ la or'ac%($ !e los %$#er'e!%ar%os !e la re)l%cac%($, los ra'e$#os !e Oa7a%. Al )arecer la a%!%col%$a %$8%*e )reere$c%al'e$#e la acc%($ re)l%ca!ora !e la ADN )ol%'erasa, a+$/+e s+ eec#o es re"ers%*le. Cas% $o #%e$e acc%($ e$ las )ol%'erasas *e#a - a''a. I$!+ce s%#%os r&%les co'+$es 5c>ra6 - c%er#os s%#%os r&%les 8ere!a*les 5r>ra6 %$cl+%!o el >r&%l.
/( CA6EINA TEO6ILINA La cae:$a %$8%*e la re)arac%($ !el ADN e$ c9l+las !e 'a':eros /+e se es#&$ re)l%ca$!o, ac#;a *ao la '%s'a l:$ea !e acc%($ !e la a%!%col%$a. A+'e$#a la e<)res%($ !e los s%#%os r&%les co'+$es 5c>ra6. La #eo%l%$a ac#;a e$ or'a s%'%lar /+e la cae:$a.
)#
#( METOTREATE El 'e#o#rera6. Es#e %$8%*%!or !e la #e#ra8%!roola#o re!+c#asa es #a'*%9$ co$oc%!o co'o %$!+c#or !e +$ !%ere$#e arrelo !e ro#+ras e$ s%#%os es)ec:%cos. I$!+ce el s%#%o r&%l !el cro'oso'a e$ c9l+las so'&#%cas 8:*r%!as.
5( AMINOPTERINA TRIMETROPRIM La a'%$o)#er%$a - el #r%'e#ro)r%' ac#;a$ e$ or'a s%'%lar /+e el 'e#o#re
)( 6UdR :'lo!odeso.i!idi*a; 6CdR :'lo!odeso.ici&idi*a; El =U!R %$cre'e$#a la e<)res%($ !e los s%#%os r&%les co'+$es 5c>ra6 )or/+e es +$ %$8%*%!or !e la #%'%!%la#o s%$#e#asa, lo c+al l%'%#a las 'ol9c+las !e #%'%!%$a 'o$oosa#o !%s)o$%*les )ara la s:$#es%s !e ADN %$!+ce el s%#%o r&%l !el cro'oso'a . Los l%$oc%#os #ra#a!os co$ =U!R l+eo e<)+es#os a cae:$a, %$cre'e$#a$ 10 "eces la e<)res%($ !e los s%#%os r&%les co'+$es 5c>ra6.
9( ) AACITIDINA L e&io*i*a La 3> A7ac%#%!%$a - la L>e#%o$%$a so$ ae$#es !e'e#%la$#es, carc%$o9$%cos - !e)r%'e$ al+$os e$es. I$!+ce$ los s%#%os r&%les co'+$es 5c>ra6. S+)r%'e$ la e<)res%($ !el >r&%l.
<( DISTAMICINA A Los s%#%os r&%les raros %$!+c%*les co$ !%s#a'%c%$a A so$ a 'e$+!o e<)resa!os es)o$#&$ea'e$#e e$ c+l#%"os !e l%$oc%#os, )ero rec+e$#e'e$#e $eces%#a$ !e +$a %$!+cc%($ )or )ar#e !e la '%s'a !%s#a'%c%$a A, lo /+e se lora aa!%9$!ola e$ los c+l#%"os. I$!+ce los s%#%os r&%les raros 5r>ra6. El s%#%o r&%l 1/22 es e<)resa!o %$!e)e$!%e$#e'e$#e !e las co$!%c%o$es !e c+l#%"o - se e<)resa '&s c+a$!o la !%s#a'%c%$a A es#& )rese$#e.
=( NETROPSINA Fro!+ce s%#%os r&%les raros. La $e#ro)s%$a #%e$e +$a al#a a%$%!a! )or +$%rse a los r+)os !e a!e$%$a - #%'%$a e$ la or'a *e#a !el ADN.
7( ?!dU :b!o%odeso.i!idi*a; ?!dC :b!o%odeso.ici&idi*a; A'*os %$!+ce$ c%er#os s%#%os r&%les raros 5r>ra6 co'o el 10/23 el c+al es#& )rese$#e e$ 1 !e ca!a 0 %$!%"%!+os !e la )o*lac%($ a+s#ral%a$a. _ los co'+$es 5c>ra6 so$ %$!+c%*les #a'*%9$ )or el Br!U 'e!%a$#e s+ a!%c%($ e$ c+l#%"os !e l%$oc%#os, a a$#es !e cosec8ar las c9l+las, )ara el es#+!%o cro'os('%co.
,-( MITOMICINA La MMC es +$ ae$#e al/+%la$#e, /+e a *aas !os%s %$!+ce +$ ra$ $;'ero !e e$#recr+7a'%e$#o !e cro'&#%!es 8er'a$as 5SCE6 a !os%s '&s *aas a;$ ca+sa +$ $;'ero s%$%%ca#%"o !e ro#+ras e$ los cro'oso'as. S+ )er:o!o !e acc%($ so*re el ADN es cor#o, "er%%c&$!ose s+ eec#o s(lo 8as#a c%clos cel+lares.
)5
,,( ACRILAMIDA MONOMÉRICA ?LEOMICINA La acr%la'%!a 'o$o'9r%ca - la *leo'%c%$a %$!+ce$ ro#+ras -4o rearrelos cro'os('%cos 5#ra$slocac%o$es, %$"ers%o$es, e#c.6.
,/( E6ECTO CLASTOGÉNICO DE LA DEPRIACIN DEL ÁCIDO 6LICO Los s%#%os r&%les se$s%#%"os a la !%s'%$+c%($ !e ola#o so$ s%#%os /+e 'orol(%ca'e$#e '+es#ra$ +$ a) el c+al +s+al'e$#e %$"ol+cra a'*as cro'&#%!es. Es#os es#&$ s%e')re e$ el '%s'o )+$#o e$ +$ cro'oso'a )ar#%c+lar - so$ 8ere!a!os !e 'a$era 'e$!el%a$a co!o'%$a$#e. So$ %$!+c%!os e$ l%$oc%#os )or *aas co$ce$#rac%o$es !e &c%!o (l%co, /+e se lora$ %$8%*%e$!o el 'e#a*ol%s'o !e es#e &c%!o - !e la #%'%!%$a s%$#e#asa, o #a'*%9$ c+l#%"a$!o c9l+las co$ 'e#o#rel+oro!eso<%+r%!%$a 5=U!R6. La e!a! - el sera se$s%*les a ola#o, co$ *aas co$ce$#rac%o$es !e #%'%!%$a - &c%!o (l%co - s%$ aa!%r s+s#a$c%as /+e %$!+ce$ al+$a ro#+ra. La !e%c%e$c%a !e &c%!o (l%co co$ #ra#a'%e$#o !e =U!R %$!+ce la e<)res%($ !e c%er#os s%#%os r&%les relac%o$a!os co$ la %$8%*%c%($ )arc%al !e la #%'%!%la#o s%$#e#asa /+e res+l#a e$ la !e)r%"ac%($ 5re!+cc%($6 !e la #%'%!%$a - la %$cor)orac%($ err($ea !el +rac%lo e$ l+ar !e la #%'%!%$a. La colocac%($ !el +rac%lo e$ el ADN e$ caso !e !e%c%e$c%a !e ola#o )+e!e ca+sar +$a es#r+c#+ra al#era!a !e la cro'a#%$a, lle"a$!o a la a)ar%c%($ !e s%#%os r&%les a $%"el !e las re%o$es r%cas e$ A>T. Se 8a co')ro*a!o /+e el s%#%o r&%l !el cro'oso'a relac%o$a!o co$ el S:$!ro'e !e Mar#%$ Bell 5>ra6 se e<)resa selec#%"a'e$#e e$ 'e!%os !e%c%e$#es e$ &c%!o (l%co - #%'%!%$a o co')e#%!ores !el &c%!o (l%co.
Age*&es '+sicos$ ,( RADIACIN GAMMA Es#e #%)o !e ra!%ac%($ %($%ca - elec#ro'a$9#%ca )ro!+ce re#raso '%#(#%co e$ c+l#%"os !e l%$oc%#os, !e la '%s'a 'a$era /+e el BU!R *ao c%er#a !os%s, e$ c9l+las o"&r%cas !e 8a's#er c8%$o. As: la co'*%$ac%($ !e es#os !os ae$#es )+e!e re#rasar s%$9r%ca'e$#e o a;$ !e#e$er la !%"%s%($ cel+lar. F+es#o /+e +$ 'a-or !ao cel+lar #%e$e +$a )ro*a*%l%!a! 'e$or !e so*re"%"%r la !%"%s%($ cel+lar, los eec#os co'*%$a!os !e ra!%ac%($ - BU!R )+e!e$ ser s%$9r%ca'e$#e le#ales. Los ra-os a''a )ro"%e$e$ !e c%er#as +e$#es, #ales co'oK ra!%o%s(#o)os !el Ra!%o, Co*al#o>0, Ces%o>, e#c.
/( RAYOS So$ +$ #%)o !e ra!%ac%($ elec#ro'a$9#%ca, )or carecer !e 'asa - cara %$#eracc%o$a co$ c9l+las, #e%!os - (ra$os - el e$#e$!%'%e$#o !e las res)+es#as !e es#os a los ra-os re/+%ere co$ocer la %$#eracc%($ %$%c%al !e la ra!%ac%($ co$ /+%e$ co$#rola #o!as las ac#%"%!a!es cel+lares, el ADN. U$a al#erac%($ !el ADN )+e!e #e$er co$sec+e$c%as '&s ra"es )ara la "%!a !e la c9l+la /+e +$a al#erac%($ !e o#ros co$s#%#+-e$#es cel+lares. Dos%s 'e$ores a 10 ra! 'a$%%es#a$ +$a al#erac%($ e$ los cro'oso'as, e$ +$a o a'*as cro'&#%!es se;$ la ase !el c%clo cel+lar e$ /+e se e$c+e$#re e$ el 'o'e$#o !e la %rra!%ac%($, a )esar !e la !os%s !e 23 ra! $o ca+sa$ $%$;$ ca'*%o 8e'a#ol(%co o cl:$%co !e#ec#a*les. Los ra-os so$ el 'eor ee')lo !e ae$#e /+e ro')e los %la'e$#os !e ADN, a+$/+e ca+sa$ '+- )ocos o $%$;$ %$#erca'*%o !e cro'&#%!es 8er'a$as 5SCE6. Farece$ ser '&s %')or#a$#es las ro#+ras !e los %la'e$#os e$ les%o$es !e ADN /+e %$"ol+cra$ la %$8%*%c%($ !el %$%c%o !el re)l%c($. Es %')or#a$#e co$ocer el s%$%%ca!o *%ol(%co !e las al#erac%o$es cro'os('%cas %$!+c%!as )or los ra-os , )+es se ace)#a el 8ec8o !e /+e la ra!%ac%($ %$!+ce c&$cer, acor#a'%e$#o !e la "%!a - o#ras a$or'al%!a!es.
))
#( RADIACIN ULTRAIOLETA :U; La l+7 UV, ra!%ac%($ $o %o$%7a$#e, %$!+ce la or'ac%($ !e !:'eros !e #%'%$a e$ el ADN, /+e ac#;a$ co'o *lo/+ea!ores #e')orales o )er'a$e$#es !e la )rores%($ !e la 8or/+%lla !e re)l%cac%($ !el ADN, )ero ca+sa )ocas ro#+ras !e los %la'e$#os cro'os('%cos. Co'o co$sec+e$c%a !e la !%'er%7ac%($ se )ro!+ce a$o'al:as e$ la co$or'ac%($ !e la !o*le 89l%ce !%s#ors%o$&$!ose la re)l%cac%($ $or'al !el ADN, co$!+c%e$!o a la '+er#e !e la c9l+la o a la )ro!+cc%($ !e '+#ac%o$es.
O?ETIOS 1. Te$er $oc%o$es !e los eec#os *%ol(%cos a $%"el cro'os('%co !e al+$os ae$#es clas#(e$os /+:'%cos - :s%cos. 2. Co$s#a#ar al#erac%o$es a $%"el cro'os('%co e$ 'e#aases !e '+es#ras e<)+es#as a !%c8os ae$#es.
MATERIALES > 'l !e sa$re )er%9r%ca 8e)ar%$%7a!a > 'l !e 'e!%o !e c+l#%"o s+)le'e$#a!o > A%!%col%$a > 100 '%crol%#ros !e Colc8%c%$a 5Colce'%!a6 > sol+c%($ 8%)o#($%ca 5Cl al 0,3?6 > %a!or !e Car$o- 5Me#a$ol>&c%!o ac9#%co K16 > sol+c%($ !e e<#e$s%($ al 0? 5a+a>&c%!o ac9#%co6 > )lacas )or#ao*e#os > )%)e#as Fas#e+r co$ )era !e o'a
> )lacas )or#ao*e#os > )%)e#as Fas#e+r co$ )era !e o'a > #+*os c($%cos o rascos !e c+l#%"o > ra!%lla > es#+a > *ao Mar:a > ce$#r:+a > 'ec8ero > '%crosco)%o
PROCEDIMIENTO 1. To'ar 'l !e sa$re "e$osa e$ +$a er%$a es#9r%l /+e co$#e$a )re"%a'e$#e +$a o#a !e a$#%coa+la$#e 58e)ar%$a6. 2. E$ co$!%c%o$es !e es#er%l%!a!, colocar e$ +$ #+*o c($%co o e$ +$ rasco !e "%!r%o 'l !e 'e!%o !e c+l#%"o s+)le'e$#a!o, o#as !e la '+es#ra !e sa$re 8e)ar%$%7a!a - A%!%col%$a e$ +$a co$ce$#rac%($ !e 0,2 '%cro'oles4'l. . Fo$er a c+l#%"ar e$ +$a es#+a a ° C )or 2 8oras. Dos 8oras a$#es !e la cosec8a aa!%r al c+l#%"o 100 'l !e Colc8%c%$a. . Sacar la '+es#ra !e la es#+a - so'e#erla a ce$#r%+ac%($ )or 3 '%$+#os a 2.300 r)', e<#raer el so*re$a!a$#e co$ +$a )%)e#a Fas#e+r !e*%!a'e$#e ro#+la!a !ea$!o a)ro<%'a!a'e$#e 1 'l )or so*re el )rec%)%#a!o - res+s)e$!er. 3. I$#ro!+c%r la '+es#ra res+s)e$!%!a e$ la )%)e#a Fas#e+r - arear 'l !e sol+c%($ 8%)o#($%ca )recale$#a!a a ° C e$ el #+*o c($%co, !ear res*alar el co$#e$%!o !e la )%)e#a )or las )are!es !el #+*o e %$c+*arlo )or 20 '%$+#os a °C e$ el *ao Mar:a. . Ce$#r%+ar )or 3 '%$+#os 52.300 r)'6, e<#raer el so*re$a!a$#e - res+s)e$!er.
)9
. Re#%rar el )rec%)%#a!o e$ la )%)e#a Fas#e+r - aa!%r al #+*o 'l !e %a!or !e Car$o-, arear al #+*o c($%co co$ +er7a el co$#e$%!o !e la )%)e#a - res+s)e$!er la 'e7cla 2 o "eces. Dear re)osar la )re)arac%($ al 'e!%o a'*%e$#e )or 20 '%$+#os. Fasa!o es#e #%e')o so'e#er a ce$#r%+ac%($, el%'%$ar el so*re$a!a$#e - res+s)e$!er. H. Aa!%r )or #res ocas%o$es '&s 'l !e %a!or - re)e#%r el )roce!%'%e$#o. Co$ la %$al%!a! !e 'eorar la )re)arac%($ cro'os('%ca se )+e!e so'e#er la '+es#ra a rer%erac%($ )or 0 '%$+#os !es)+9s !el c+ar#o %a!or, )re"%a a la ce$#r%+ac%($. . La ca$#%!a! !e so*re$a!a$#e /+e !e*e ser el%'%$a!a !es)+9s !e la ;l#%'a ce$#r%+ac%($ !e*e ser 'e$or, !ea$!o )or so*re el )rec%)%#a!o cerca !e 2 'l !e l:/+%!o. 10. Baar la )laca )or#ao*e#os e$ la sol+c%($ !e e<#e$s%($ - o#ear so*re ella 5!e 3 a o#as6 el res%!+o res+s)e$!%!o a +$a al#+ra !e 0>30 c' so'e#er a calor )or +$ )ar !e se+$!os - "ol"er a o#ear +$a ca$#%!a! s%'%lar !e '+es#ra. Secar la )laca al a'*%e$#e - #e%r )or 10 '%$+#os co$ G%e'sa. 11. A$al%7ar las al#erac%o$es cro'os('%cas )o$%e$!o es)ec%al 9$as%s e$ la ra%l%!a! - co')arar los res+l#a!os o*#e$%!os co$ a/+ellos !e los c+l#%"os /+e $o +ero$ e<)+es#os a A%!%col%$a.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. ^Q+9 #%)o !e e"al+ac%($ c%#oe$9#%ca real%7ar& a +$ %$!%"%!+o e<)+es#o )or s+ #ra*ao a s+s#a$c%as e$o#(<%cas #a$#o :s%cas co'o /+:'%cas E<)l%/+e e$ /+9 co$s%s#e ca!a e"al+ac%($. 2. S% +$a '+er es#& c+rsa$!o +$ e'*ara7o, ^Q+9 acc%($ #%e$e$ los R< s% se e<)o$e e$ s+s )r%'eros 'eses - /+e acc%($ l+eo !el #ercer 'es
?I?LIOGRA6A A-ala =.., %e r. .A. 1H Ge$9#%ca Mo!er$a. E!%c%o$es O'ea, S.A. Barcelo$a, Es)aa. Berer R., Bloo'%el! C.D., S+#8erla$! G.R. 1H3 Re)or# o #8e co''%##ee o$ c8ro'oso'e rearra$e'e$#s %$ $eo)las%a a$! o$ ra%le s%#es. H#8 I$#er$a#%o$al ors8o) o$ @+'a$ Ge$e Ma))%$. C-#oe$e# Cell Ge$e#, 0K 0> 33. Cas#ro C.E. 1H N+#r%e$# Eec#s o$ DNA a$! C8ro'a#%$ S#r+c#+re. A$$. Re". N+#r 0>21. =+s#er C., M%r( R., Te')la!o C., Barr%os L., Eo7c+e . 1H E<)ress%o$ o ola#e>se$s%#%"e ra%le s%#es %$ l-')8oc-#e c8ro'oso'es. @+' Ge$e#, H1K 2>2. Glo"er T.., Co-le ., Mora$ R. 1H =ra%le S%#es O"er"%eJ Oc+rre$ce %$ Ac+#e No$l-')8oc-#%c Le+e'%a a$! Eec#s o Cae%$e o$ E<)ress%o$. Ca$c Ge$e# C-#oe$e#, 1K11>130. Is8%!a#e r. M., @ar$o%s M.C., So+$% T. 1HH A co')ara#%"e a$al-s%s o !a#a o$ #8e clas#oe$%c%#- o 31 c8e'%cal s+*s#a$ces #es#e! %$ 'a''al%a$ cell c+l#+res. M+#a#%o$ Researc8, 13K 131>21. Is8%8ara T., o8$o S., M%$a'%8%sa'a#s+ M. 10 Ra!%a#%o$ E<)os+re a$! C8ro'oso'e A*$or'al%#%es. Ca$cer Ge$e# C-#oe$e#, 3K13>.
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a8o$e$ M. 1HH Fo)+la#%o$ C-#oe$e#%cs o =ola#e>Se$s%#%"e =ra%le S%#es. @+' Ge$e#, H0K >H. Laca!e$a .R. 1H1 Ge$9#%ca. A. G. E. S.A Ma!r%!, Es)aa. M%c8els V.V. 1H3 =ra%le S%#es o$ @+'a$ C8ro'oso'esK Descr%)#%o$ a$! Cl%$%cal S%$%%ca$ce. Ma-o Cl%$. Froc 0K 0>. Mo!a$ B. 12 LoJ>!ose Ra!%a#%o$ Carc%$oe$es%s. E+r Ca$cer 2HA 5No. 46K 1010>1012. Fa7>->M%o C., Cre+s A., Ca*r9 O., Leo$e F.E. 2002 Ge$9#%ca To<%col(%ca - Carc%$o9$es%s. E!%c%o$es AB_A>_ALA =UNDAC_T>FUCE. Fa7>->M%o C. 12 C8ro'oso'e =ra%l%#- %$ L%')8oc-#es o o'e$ J%#8 Cer"%cal U#er%$e Les%o$s Fro!+ce! *@+'a$ Fa)%lo'a"%r+s. Ca$cer Ge$e# C-#oe$e#, 3K 1>1. Fa7>->M%o C., Leo$e F.E., C8&"e7 M., B+s#a'a$#e G., C(r!o"a A., G+#%9rre7 S., Fea8errera M.S., S&$c8e7 M.E. 13. =olloJ +) s#+!- o c8ro'oso'e a*erra#%o$s %$ l-')8oc-#es %$ 8os)%#al Jorers occ+)a#%o$all- e<)o$e! #o loJ le"els o %o$%7%$ ra!%a#%o$. M+#a#%o$ Researc8, 3K23>231. Fa7>->M%o C., B+s#a'a$#e G., S&$c8e7 M.E., Leo$e F.E. 2002 C-#oe$e#%c Mo$%#or%$ %$ a Fo)+la#%o$ Occ+)a#%o$allE<)o$e! #o Fes#%c%!as %$ Ec+a!or. E$"%ro$'e$#al @eal#8 Fers)ec#%"es 51106K 10>10H0. Fa7>->M%o C., S&$c8e7 M.E., Ar9"alo M., M+o7 M.., %##e T., Oleas G., Leo$e F.E. 200 Ge$e#%c A$al-s%s o Ec+a!or%a$ Fo)+la#%o$ E<)ose! #o Gl-)8osa#e. Re"%s#a Ec+a#or%a$a !e Me!%c%$a - C%e$c%as B%ol(%cas 51-26K11>22. Fa7>->M%o C., S&$c8e7 M.E., Ar9"alo M., M+o7 M.., %##e T., Oleas De>la>Carrera G. a$! Leo$e F.E. 200 E"al+a#%o$ o DNA !a'ae rela#e! #o l-)8osa#e e<)os+re %$ ec+a!or%a$ )o)+la#%o$. Ge$e#%cs a$! Molec+lar B%olo-, 0, 2, 3>0. Fer#%co$e F., Co77% R., G+s#a"%$o B. 1H S%s#er c8ro'a#%! e10. Rao F.N., @eere'a N.A., Fal'er C.G. 1HHa =ra%le S%#es %$!+ce! *- =U!R, Cae%$e a$! A)8%!%col%$. @+'a$ Ge$e#%cs HK21>2. Rao F.N., @eere'a N.A., Fal'er C.G. 1HH* E<)ress%o$ o =ra%le S%#es %$ C8%l!8oo! ac+#e L-')8o*las#%c Le+e'%a Fa#%e$#s a$! Nor'al Co$#rols. @+'a$ Ge$e#%cs K 2>. S'ee#s D., Mer< G. 10 Ne%#8er Ae $or Se< I$l+e$ce #8e E<)ress%o$ o =ola#o Se$s%#%"e Co''o$ =ra%le S%#es o$ @+'a$ C8ro'oso'es. @+'a$ Ge$e#%cs HK >H. S#e#a D.G., S)a8$ M.C. 1H SCEs are %$!+ce! *- re)l%ca#%o$ o Br!U>s+*s#%#+#e! DNA #e')la#es, *+# $o# *%$cor)ora#%o$ o BR!U %$ #o $asce$# DNA. M+#a#%o$ Researc8 10K >2. Te!esc8% B., For%r%o B., Ver$ole F., Ca)oros% D., Dalla)%ccola B., N%cole##% B. 1H Co''o$ =ra%le S%#esK T8e%r Fre"ale$ce %$ S+*ec#s J%#8 Co$s#%#+#%o$al a$! Ac/+%re! C8ro'oso'al I$s#a*%l%#-. A' Me! Ge$e# 2K1>H2. _+$%s .., Sore$ A.L. 1H Co$s#%#+#%"e =ra%le S%#es a$! Ca$cer. Sc%e$ce, 22K 11>120.
)=
Práctica 1;
NUEAS TÉCNICAS DE CITOGENÉTICA MOLECULAR INTRODUCCIN E$ los ;l#%'os aos se 8a$ !esarrolla!o #9c$%cas 'olec+lares /+e 8a$ co')le'e$#a!o el a$&l%s%s c%#oe$9#%co es#&$!ar - 8a 8ec8o )os%*le !e#ec#ar al#erac%o$es cro'os('%cas s+*cro'os('%cas. Es#o 8a )er'%#%!o /+e se )+e!a$ !esc+*r%r $+e"os s:$!ro'es - o#ras a$o'al:as lo /+e s%$ !+!a a"orece al !%a$(s#%co, #ra#a'%e$#o - )ro$(s#%co !e los %$!%"%!+os. Al+$as !e es#as #9c$%cas so$ la 8%*r%!%7ac%($ in situ co$ l+oresce$c%a 5=IS@6, M>=IS@ 5';l#%)le<> =IS@6, 8%*r%!ac%($ co')ara#%"a e$('%ca 5CG@6, car%o#%)o es)ec#ral 5S_6 - los '%croarrelos !el ADN 5DNA '%croarra-s6, e$#re o#ras. To!os los e$sa-os !e 8%*r%!ac%($ se *asa$ e$ la 'e7cla !e 8e*ras se$c%llas !e &c%!o $+cle%co '+es#ra o !%a$a, $o 'arca!o, co$ +$a so$!a !e sec+e$c%a co$oc%!a, 'arca!a, *ao co$!%c%o$es e<)er%'e$#ales /+e )er'%#a$ el a)area'%e$#o e$#re *ases co')le'e$#ar%as. E$ el caso !e /+e la so$!a o el ADN !%a$a sea$ !e !o*le 8e*ra, )re"%a'e$#e !e*e$ ser !es$a#+ral%7a!os, +#%l%7a$!o e$eral'e$#e calor o +$ #ra#a'%e$#o alcal%$o. U$a "e7 'e7cla!as, se )er'%#e la !e*a&!ali@aci3* e$ la c+al se )+e!e$ or'ar 8:*r%!os so$!aK!%a$a. =%$al'e$#e se +#%l%7a +$ '9#o!o )ara !e#ec#ar el 8:*r%!o or'a!o, el c+al "%e$e !e#er'%$a!o )or el #%)o !e 'arcae e')lea!o e$ la so$!a. El '9#o!o !e 8%*r%!ac%($ se *asa )or lo #a$#o e$ la ra$ es)ec%%c%!a! !e la %$#eracc%($ e$#re *ases co')le'e$#ar%as. A!e'&s e<%s#e +$a ser%e !e )ar&'e#ros /+e aec#a$ a la re$a#+ral%7ac%($ !e !os 8e*ras se$c%llas relac%o$a!os $o solo co$ la co$ce$#rac%($ !e ADN o ARN !%a$a, s%$o #a'*%9$ co$ la co$ce$#rac%($ - #a'ao !e la so$!a, la #e')era#+ra - #%e')o !e 8%*r%!ac%($, - las carac#er:s#%cas !el 'e!%o !e reacc%($, #ales co'o +er7a %($%ca, )@, co$ce$#rac%($ !e ae$#es !es$a#+ral%7a$#es, a!%c%($ !e c%er#os )ol:'eros, e#c. Las so$!as se )+e!e$ clas%%car se;$ "ar%os cr%#er%osK lo$%#+! o #a'ao !e la sec+e$c%a !%a$a, '9#o!o !e 'arcae - !e#ecc%($, #a'ao !e la so$!a, '9#o!o !e )re)arac%($, e#c.
6ISH :Hib!idaci3* in situ co* 'lo!esce*cia; Es#a #9c$%ca e')lea so$!as 5'arca!as co$ l+oresce$c%a6 !e ADN clo$a!o )ara a$al%7ar los cro'oso'as, las '%s'as /+e so$ es)ec:%cas )ara cro'oso'as %$!%"%!+ales - )ara re%o$es cro'os('%cas. Fer'%#e$ !e#ec#ar al#erac%o$es cro'os('%cas es#r+c#+rales - #a'*%9$ o*#e$er +$ !%a$(s#%co r&)%!o !e la e<%s#e$c%a !e +$ $;'ero a$or'al !e cro'oso'as.
M6ISH :Hib!idaci3* i# $it% co* 'lo!esce*cia %Bl&i0le.; Me!%a$#e es#a #9c$%ca se )+e!e !e#ec#ar los 2 cro'oso'as 8+'a$os e$ !%ere$#es colores )or 'e!%o !e la co'*%$ac%($ !e 2 so$!as 'arca!as. S+ !e#ecc%($ se real%7a 'e!%a$#e el +so !e +$ +eo !e %l#ros so%s#%ca!o - ';l#%)les a!/+%s%c%o$es !e %'ae$.
CGH :Hib!idaci3* Ge*3%ica Co%0a!a&i1a;
)7
E$ es#a #9c$%ca $o se re/+%ere$ )re)arac%o$es cro'os('%cas, la CG@ +#%l%7a ADN e$('%co, %$cl+-e$!o ADN e<#ra:!o !e #+'ores )re"%a'e$#e %a!os e$ *lo/+es !e )ara%$a. La 8%*r%!ac%($ e$('%ca co')ara#%"a !a co'o res+l#a!o +$ 'a)a !e a$a$c%as - )9r!%!as !e 'a#er%al cro'os('%co - co$s#%#+-e +$a 8erra'%e$#a e%c%e$#e )ara corro*orar los res+l#a!os o*#e$%!os 'e!%a$#e o#ros '9#o!os. Fero $o !a %$or'ac%($ so*re la es#r+c#+ra cro'os('%ca.
SQY El Car%o#%)o es)ec#ral 5s)ec#ral ar-o#-)%$ S_6 es +$a #9c$%ca 'olec+lar !esarrolla!a e$ los ;l#%'os aos co$ +$ ra$ )o#e$c%al )ara re"ol+c%o$ar la c%#oe$9#%ca. Es#a #9c$%ca es +$ '9#o!o !e 8%*r%!ac%($ in situ /+e )er'%#e la %!e$#%%cac%($ !e los cro'oso'as e$ 'e#aase al !es)lear ca!a +$o !e ellos e$ +$ color ;$%co. La 8%*r%!ac%($ se la real%7a +sa$!o +$a 'e7cla !e so$!as o*#e$%!a !e +$a l%*rer:a !e ra'e$#os !e so$!as es)ec:%cos )ara ca!a cro'oso'a, ca!a +$o !e los c+ales #%e$e +$a co'*%$ac%($ ;$%ca !e %$!%ca!ores !%rec#os -4o %$!%rec#os. L+eo !e la 8%*r%!ac%($ se real%7a +$ la"a!o - "ar%os )asos )ara la !e#ecc%($, - %$al'e$#e las 'e#aases se #ra$sor'a$ e$ %'&e$es 'e!%a$#e +$ solo )aso !e a!/+%s%c%($ e$ +$ s%s#e'a !e %'ae$ es)ec#ral. La %'ae$ %$al co$s%s#e !el !es)l%e+e !e ca!a cro'oso'a clas%%ca!o )or +$ color ;$%co. For lo #a$#o, los cro'oso'as 'arca!ores )+e!e$ ser clara'e$#e %!e$#%%ca!os, !e*%!o a /+e las !%ere$#es )orc%o$es !e cro'a#%$a co$s#%#+-e$#e so$ clara'e$#e !es)lea!as e$ +$ color carac#er:s#%co. La "e$#aa '&s %')or#a$#e !e S_ es /+e las a$or'al%!a!es cro'os('%cas )+e!e$ ser %!e$#%%ca!as e$ +$ solo )aso !e a!/+%s%c%($ !e %'ae$. Es#a #9c$%ca )+e!e !e#ec#ar al#erac%o$es es#r+c#+rales #ales co'o #ra$slocac%o$es, el or%e$ !e cro'oso'as 'arca!ores, rearrelos cro'os('%cos '+- )e/+eos, !o*le '%$+#es, e#c. La a)l%cac%($ !e S_ e$ #ra$slocac%o$es )re"%a'e$#e carac#er%7a!as s+%ere /+e la resol+c%($ !e es#a #9c$%ca es#& e$#re 300 - 1300 *). S%$ e'*aro es#a #9c$%ca $o )er'%#e la !e#ecc%($ !e !elec%o$es )e/+eas, !+)l%cac%o$es e %$"ers%o$es /+e oc+rre$ !e$#ro !e +$ cro'oso'a !e*%!o a /+e $o 'os#rar:a$ +$ ca'*%o !e color. Se 8a o*ser"a!o /+e e$ el es#+!%o !e o$coe$es - e$es s+)resores !e #+'or e$ c&$cer, las #9c$%cas !e =IS@ co'o CG@ se 8a$ co')le'e$#a!o co$ S_.
Mic!oa!!eglos del ADN :DNA %ic!oa!!a2sJ DNA c4i0s; Los '%croarrelos !el ADN 8a$ )ro)orc%o$a!o +$a ra$ escala!a a los e$sa-os !e 8%*r%!ac%($ !e*%!o a s+ ra$ ca)ac%!a! !e '%$%a#+r%7ac%($ - a+#o'a#%7ac%($. Es#a #9c$%ca +#%l%7a la 8%*r%!ac%($ re"ersa !el &c%!o $+cle%coK las so$!as co$s%s#e$ !e ADN $o 'arca!o %a!o a +$ so)or#e s(l%!o 5los arrelos !e ADN + ol%o$+cle(#%!os. U#%l%7a s+)er%c%es !e "%!r%o - $o 'e'*ra$as )orosas, el "%!r%o )er'%#e la '%$%a#+r%7ac%($ - la !e#ecc%($ *asa!a e$ l+oresce$c%a. Los '%croarra-s se )+e!e$ !%"%!%r e$ !os clases )r%$c%)ales !e ac+er!o a s+ '9#o!o !e co$s#r+cc%($K • M%croarrelos !e clo$es !e ADN, los c+ales 8a$ s%!o )re)ara!os )re"%a'e$#e - l+eo so$ %')resos e$ la s+)er%c%e !e +$ )or#ao*e#os. • M%croarrelos !e ol%o$+cle(#%!os s%$#e#%7a!os in situ. Los )ro#ocolos !esarrolla!os )or el Froesor Fa# BroJ$ - s+s coleas )er'%#e$ el a$&l%s%s ro*o#%7a!o !e cerca !e 10.000 clo$es !e cADN e$ +$ )or#ao*e#os - la 8%*r%!ac%($ co$ +$a so$!a !o*le'e$#e 'arca!a. La se+$!a %$$o"ac%($ +e la s:$#es%s es)ac%al !e al#a !e$s%!a! !e ol%o$+cle(#%!os so)or#es !e "%!r%o +sa$!o las #9c$%cas o#ol%#or&%cas. Es#a #ec$olo:a #%e$e $+'erosas a)l%cac%o$es )ero los !os 'a-ores r+)os so$ el a$&l%s%s e$ ra$ escala !e la e<)res%($ 9$%ca 5a $%"el !el RNA6 - !e la "ar%ac%($ !el ADN.
O?ETIOS 9-
1. E$#e$!er las #9c$%cas !e c%#oe$9#%ca 'olec+lar '&s ac#+ales. 2. Co$ocer las &reas !e a)l%cac%($ !e las #9c$%cas 'olec+lares.
PROCEDIMIENTO A$al%7ar las #9c$%cas 'olec+lares - e"al+ar las #9c$%cas - a)l%cac%o$es, 'e!%a$#e el +so !e !%a)os%#%"as - 'a#er%al !%s)o$%*le.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. ^Q+9 o#ras #9c$%cas 'olec+lares se )+e!e$ a)l%car e$ el !%a$(s#%co '9!%co 2. ^Q+9 #%)os !e #e%!o se )+e!e$ a$al%7ar 'e!%a$#e es#as #9c$%cas 'olec+lares . ^E$ /+9 &reas se )+e!e a)l%car la #9c$%ca !e '%croarrelos !el ADN . E$c%erre e$ +$ c:rc+lo la res)+es#a 5s6 correc#a 5s6K La #9c$%ca !e S_ se )+e!e a)l%car e$ los s%+%e$#es casosK a. *. c. !. e.
#ra$slocac%($ rec:)roca !+)l%cac%($ e$ +$ '%s'o cro'oso'a %$"ers%($ )arac9$#r%ca %$"ers%($ )er%c9$#r%ca !o*le '%$+#es
?I?LIOGRA6A $+#se$ T., Vel!'a$ T., Fa!%lla>Nas8 @., Sc8rgc E., L%-a$ae M., R%e! T. 1 S)ec#ral ar-o#-)%$K C8ro'oso'es %$ Color. A))l%e! C-#oe$e#%cs 2K2>2. $+#se$ T., R%e! T. 2000 S_K A Co')re8e$s%"e D%a$os#%c a$! Researc8 Tool. A Re"%eJ o #8e =%rs# 00 F+*l%s8e! Cases. T8e o+r$al o #8e Assoc%a#%o$ o Ge$e#%c Tec8$olo%s#s 2K>13. L%#c8er F., Cre'er T., Bor!e$ ., Ma$+el%!%s L., ar! D.C. 1HH Del%$ea#%o$ o %$!%"%!+al 8+'a$ c8ro'oso'es %$ 'e#a)8ase a$! %$#er)8ase cells *- %$ s%#+ s+))ress%o$ 8-*r%!%7a#%o$ +s%$ reco'*%$a$# DNA l%*rar%es. @+'a$ Ge$e#%cs H0K22>2. Na+'a$$ S., Re+#7el D., S)e%c8er M., Decer @. 2001 Co')le#e ar-o#-)e c8arac#er%7a#%o$ o #8e 32 cell l%$e *co'*%$e! a))l%ca#%o$ o G>*a$!%$, '+l#%)le<>l+oresce$ce %$ s%#+ 8-*r%!%7a#%o$, l+oresce$ce %$ s%#+ 8-*r%!%7a#%o$, a$! co')ara#%"e e$o'%c 8-*r%!%7a#%o$. Le+e'%a Researc8 23K1>22. Ro#8'a$$ C., Bar>A' I., Mal% X. 1H S)ec#ral %'a%$ or /+a$#%#a#%"e 8%s#olo- a$! c-#oe$e#%cs. @%s#ol @%s#o)a#8ol 1K21>2. Sc8e$a M., @eller R.A., T8er%a+l# T.F., o$ra! ., Lac8e$'e%er E., Da"%s R.. 1H M%croarra-sK *%o#ec8$olo-s !%sco"er- )la#or' or +$c#%o$al e$o'%cs. Tre$!s B%o#ec8$ol 1K01>0. S8+s#er M., Boc'h8l U., Goll%s S.M. 1 Earl- e<)er%e$ces J%#8 S_K A Fr%'er or #8e Frac#%c%$ C-#oe$e#%c Tec8$olo%s#. A))l%e! C-#oe$e#%cs 2K>.
9,
S#rac8a$ T., Rea! A.F. 2001 @+'a$ Molec+lar Ge$e#%cs 2. %le->L%ss, NeJ _or. Ver'a R, Ba*+ A. 13 @+'a$ C8ro'oso'es. Fr%$c%)les a$! Tec8$%/+es. McGraJ>@%ll, F8%la!el)8%a.
9/
Práctica 11 6ISH :HI?RIDACIN IN SITU CON 6LUORESCENCIA; INTRODUCCIN El es#+!%o cro'os('%co es +$a )ar#e '+- %')or#a$#e !el a$&l%s%s #a$#o !e 8e'o)a#:as 'al%$as - #+'ores s(l%!os, $o s(lo co$#r%*+-e al !%a$(s#%co !e las '%s'os, s%$o /+e la %$or'ac%($ /+e a)or#a s+ele co$s#%#+%rse e$ +$ ac#or )ro$(s#%co !e )r%'er $%"el. As:, el a$&l%s%s c%#oe$9#%co co$"e$c%o$al - 'olec+lar !e !%"ersos #+'ores 8a !ea!o "er al#erac%o$es cro'os('%cas clo$ales e$ '&s !e 0.000 $eo)las%as 8+'a$as, lo /+e 8a ac%l%#a!o ac#+al'e$#e 'a$ear %$or'ac%($ so*re !e#er'%$a!os 'arca!ores co$ "alor !%a$(s#%co - )ro$(s#%co , )er'%#%e$!o 8acer +$ se+%'%e$#o, "alorac%($ - e"ol+c%($ !e la e$er'e!a!. Los es#+!%os c%#oe$9#%cos co$"e$c%o$ales )er'%#e$ clas%%car !%ere$#es $eo)las%as relac%o$a!as co$ a$o'al:as cro'os('%cas es)ec:%cas. La o*ser"ac%($ !e s+*clo$es c%#oe$9#%co %!e$#%%ca la )rores%($ !e la $eo)las%a e$ es#+!%o, #ra$sor'a$!o al es#+!%o c%#oe$9#%co e$ +$a 8erra'%e$#a ;#%l )ara !e#er'%$ar la eec#%"%!a! !el #ra#a'%e$#o - 'o$%#orear la re'%s%($ !e la e$er'e!a!. S%$ e'*aro, la @%*r%!ac%($ l+oresce$#e in situ o =IS@, /+e se lle"a a ca*o a #ra"9s !e so$!as !e ADN 'eora e %$#e$s%%ca los res+l#a!os o*#e$%!os a #ra"9s !e los e$sa-os real%7a!os co$ es#as )r+e*as a )ac%e$#es co$ !es(r!e$es !e or%e$ cro'os('%co /+e !ese$ca!e$a$ - #er'%$a$ e$ )rocesos !e 'al%$%!a!. La =IS@ )er'%#e el r&)%!o acceso )ara el a$&l%s%s !e "ar%as c9l+las, #a$#o e$ 'e#aase 5)rol%erac%($6 o c9l+las %$#erase 5$o )rol%era#%"as6, - es a!e'&s ;#%l )ara e$ el es#a*lec%'%e$#o !el )orce$#ae !e c9l+las $eo)l&s%cas a$#es - !es)+9s !el #ra#a'%e$#o. Co$sec+e$#e'e$#e, los es#+!%os c%#oe$9#%cos so$ a')l%a'e$#e +sa!os e$ el !%a$(s#%co - 'a$eo !e )ac%e$#es )or lo /+e, la a)l%cac%($ !e la #9c$%ca !e =IS@ e$ el !%a$(s#%co !%ere$c%al - 'a$eo !e )ac%e$#es se co$s#%#+-e e$ +$a 8erra'%e$#a cla"e. Las c9l+las aec#a!as )+e!e$ ser a$al%7a!as )or car%o#%)o, 'e!%a$#e #9c$%cas co$"e$c%o$ales !e *a$!eo las c+ales )er'%#e$, e$ la 'a-or:a !e los casos, %!e$#%%car las al#erac%o$es )rese$#es, !e 'o!o /+e se )+e!a !e#ec#ar ca'*%os cro'os('%cos asoc%a!os al c&$cer. S%$ e'*aro, e$ s%#+ac%o$es !o$!e $o es )os%*le %!e$#%%car !%c8as al#erac%o$es, es $ecesar%o e')lear #9c$%cas 'olec+lares, s%e$!o La 8%*r%!%7ac%o$ %$ s%#+ )or l+oresce$c%a 5=IS@6, a #ra"9s !el +so !e so$!as !e ADN 'arca!as co$ l+oresce$c%a, la #9c$%ca )er#%$e$#e /+e )er'%#e es#+!%ar las al#erac%o$es cro'os('%cas $+'9r%cas - es#r+c#+rales, e %!e$#%%car los e$es %$"ol+cra!os e$ ellas. So$ "ar%as - !e !%"erso or%e$ las al#erac%o$es cro'os('%cas /+e se e$c+e$#ra$ e$ $eo)las%as, es#as al#erac%o$es cro'os('%cas e$eral'e$#e )+e!e$ clas%%carse e$ !os #%)osK es#r+c#+rales $+'9r%cas las !e #%)o $+'9r%co )+e!e$ s+*clas%%carse a s+ "e7 e$ )ol%)lo%!%as - a$e+)lo%!%as, e$#e$!%e$!o co'o )lo%!%a al co')le'e$#o cro'os('%co e$ ';l#%)los !e 2, - es)ec%%ca$!o a la !%)l%o!:a ( cro'oso'as co'o +$a co$!%c%($ $or'al, a 'e$os /+e o#ra cosa es#9 es)ec%%ca!a. E$ !es(r!e$es $eo)l&s%cos, la 'a-or )ar#e !e los clo$es )ol%)lo%!es es#&$ asoc%a!os co$ es#a!%os a"a$7a!os !e la e$er'e!a! - 9s#os )+!%ero$ or%%$arse -a sea !e la +s%($ !e c9l+las $eo)l&s%cas o )or e$!orre!+)l%cac%($. For o#ro la!o, es#&$ las a$e+)lo%!%as, /+e 8ace$ reere$c%a a co')le'e$#os cro'os('%cos /+e %$"ol+cra$ ';l#%)los %rre+lares !%ere$#es !el $;'ero 8a)lo%!e 2. For ee')lo +$a c9l+la /+e #%e$e +$a #r%so'%a !el cro'oso'a H #e$!r& cro'oso'as, %$cl+-e$!o a los #res cro'oso'as HK )or el co$#rar%o, +$a c9l+la /+e #%e$e +$a 'o$oso':a !el cro'oso'a #e$!r& 3 cro'oso'as - le al#ar& +$ cro'oso'a , es#as a$o'al:as !el #%)o a$e+)lo%!e s+ele$ ser or%%$a!as )or +$ 'al +$c%o$a'%e$#o !e la '%#os%s, co'o )or ee')lo $o !%s-+$c%o$es.
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Del '%s'o 'o!o, las al#erac%o$es !el #%)o es#r+c#+ral, /+e se clas%%ca$ e$K #ra$slocac%o$es, %$"ers%o$es, !elec%o$es, !+)l%cac%o$es e %socro'oso'as, #a'*%9$ %$#er"%e$e$ e$ el 'eca$%s'o !e e$erac%($ !e $eo)las%as. Las #ra$slocac%o$es rec:)rocas co$s%s#e$ e$ el %$#erca'*%o !e !os )orc%o$es !e !%ere$#es cro'oso'as - so$ el #%)o !e a$o'al:a '&s co';$ )rese$#e e$ !es(r!e$es 8e'a#ol(%cos. Las !elec%o$es %$"ol+cra$ la )9r!%!a #o#al o )arc%al !e +$ cro'oso'a, '%e$#ras /+e, las %$"ers%o$es /+e )+e!e$ o $o %$cl+%r al ce$#r('ero, or%%$a$ +$ ca'*%o !a$!o +$ se$#%!o e$ re"ersa !e la )orc%($ %$"er#%!a. Las !+)l%cac%o$es e$era$ +$a o '&s co)%as e<#ra !e +$a )orc%($ !e ADN !e +$a 7o$a es)ec:%ca !el cro'oso'a, '%e$#ras /+e los %socro'oso'as so$ )orc%o$es !+)l%ca!as /+e e$era$ +$a %'ae$ !+)l%ca!a e$ es)eo, !e es#a or'a se aec#a$ "ar%os #%)os !e e$es o se or%%$a$ a $+e"os e$es /+e so$ los e$cara!os !e co'e$7ar )rocesos $eo)l&s%cos /+e !ee$era$ e$ !%"ersos #%)os !e c&$cer.
ENTAAS DE LA 6ISH
Fer'%#e a$al%7ar s%'+l#&$ea'e$#e 'orolo:a - la a$o'al:a )+$#+al e$ sos)ec8a No s+re ca'*%os co$ los ar#eac#os !e !%l+c%($ /+e aec#a$ a o#ros '9#o!os )ara %!e$#%%car a')l%%cac%o$es 9$%cas E"al+ac%($ !e $;cleos e$ 'e#aase e %$#erase De#ecc%($ !e a*errac%o$es cro'os('%cas cr:)#%cas Ma#er%al resco, co$ela!o e %$cl+%!o e$ )ara%$a Res+l#a!os r&)%!os De#ecc%($ !e al#erac%o$es $+'9r%cas - es#r+c#+rales De#ecc%($ !e cro'oso'as 'arca!ores Se+%'%e$#o !e +$ #ra$s)la$#eK so$!as ce$#ro'9r%casK e _ C+a$#%%cac%($ !e c9l+las al#era!as A-+!a$ a co')re$!er la )a#o9$%a !e los !%ere$#es #+'ores A-+!a$ a !e%$%r e$er'e!a!es - a !%a$os#%carlas !e or'a )rec%sa T%e$e$ #e$er s%$%%ca!o )ro$(s#%co A-+!a$ e$ la !ec%s%($ !e /+9 re%'e$ #era)9+#%co a)l%car al )ac%e$#e
Li%i&acio*es de 6ISH
T9c$%ca !e scree$%$ Es $ecesar%o co$ocer lo /+e se *+sca Cos#o e$ ocas%o$es ele"a!o No se )+e!e !e#ec#ar '+c8as al#erac%o$es al '%s'o #%e')o
TIPOS DE SONDAS •
•
•
Ce*&!o%8!icas$ > Al#erac%o$es $+'9r%casK 'o$oso':as, #r%so':as - o#ras a$e+)lo:!%as e$ cro'oso'o)a#:as - #+'ores. > Tr%so':a 1, 1H, 21 Pi*&ado c!o%os3%ico$ > Al#erac%o$es es#r+c#+ralesK #ra$slocac%o$es, !elec%o$es, %$"ers%o$es. > LMC #5226 De sece*cia es0ec+'ica de locs$ > Reor!e$a'%e$#os es#r+c#+rales !e e$es o re%o$es cro'os('%cas co$cre#as. > @er>2 $e+, #511H6, e#c.
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O?ETIOS 1. E$#e$!er la #9c$%ca !e =IS@ - s+s a)l%cac%o$es. 2. Co$ocer las !%ere$#es #%)os !e so$!as +#%l%7a!as e$ !%ere$#es &reas !e la *%o'e!%c%$a, *%o#ec$olo:a, o$colo:a - o#ras &reas.
PROCEDIMIENTO U$ )roceso $or'al !e @%*r%!ac%($ in situ se *asa e$ el +so !e +$a o '&s so$!as 'arca!as. Se e')lea$ so$!as - %#s co'erc%ales a"ala!os )or la =DA. E. so$!as )ara @ER2. Se )+e!e +sar co'o 'a#er%al !e es#+!%oK '9!+la (sea, sa$re )er%9r%ca o *lo/+es !e #e%!o e$ )ara%$a, es !ec%r )re)arac%o$es /+e lle"e$ las sec+e$c%as *la$co /+e ser&$ 8%*r%!%7a!as co$ las so$!as. El )re #ra#a'%e$#o !e la )re)arac%($ cro'os('%ca )re"%o a 8%*r%!%7ac%($, se lo 8ace co$ el %$ !e re'o"er RNA, c%#o)las'a - o#ros co$#a'%$a$#es cel+lares, as: co'o )ara 8acer las c9l+las - la cro'a#%$a '&s )er'ea*le a la so$!a, )ara es#o se +sa or'a'%!a. La re %ac%($ !e 'a#er%al ser"%r& )ara 'a$#e$er la 'orolo:a cro'os('%ca e$ el caso !e las 'e#aases, - )re"e$%r la )9r!%!a !e 'a#er%al e$ los )asos s+*s%+%e$#es a #ra"9s !e 2 SSC. Se )re)ara la 'e7cla co$ la so$!a )ara 8%*r%!%7ar, )re"%o a es#o se !e$a#+ra la so$!a )re)arac%($ cro'os('%ca, es#e )roceso oc+rre )or 1>1H 8oras, )ara )er'%#%r /+e la 7o$a !e %$#er9s 8%*r%!e co$ la so$!a )roce!%'%e$#o /+e se lle"a a ca*o e$ +$ *lo/+e #9r'%co. Se real%7a$ la"a!os !e as#r%$e$c%a )ara re'o"er la so$!a /+e $o 8a 8%*r%!a!o o /+e #+"o +$a 8%*r%!ac%($ !9*%l. Se a)l%ca colora$#e !e co$#ra #%$c%($ - se )roce!e a la !e#ecc%($ !e los s%#%os !e 8%*r%!ac%($, )ara es#o se +#%l%7a +$ '%crosco)%o ()#%co )ara l+oresce$c%a co$ %l#ros a!ec+a!os )ara los
9)
l+orocro'os co$ los c+ales "%e$e$ 'arca!as las so$!as, !e #al or'a /+e se )+e!a "alorar la cal%!a! !e la 8%*r%!ac%($ - )roce!er a la %!e$#%%cac%($ !e 'arca!ores c%#oe$9#%co 'olec+lares.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. I$"es#%ar las a)l%cac%o$es !e la #9c$%ca !e =IS@ e$ o#ras &reas !el co$oc%'%e$#o. 2. Co')arar las #9c$%cas !e =IS@ - CIS@ 5"e$#aas - !es"e$#aas6.
?I?LIOGRA6A A'er%ca$ Ca$cer Soc%e#-. 2010. Ca$cer =ac#s =%+res. A'er%ca$ Ca$cer Soc%e#- B+lle#%$. A#la$#a. 2010K 1>H. Bo8la$!er, S. . =+s%o$ e$es %$ le+e'%aK a$ e'er%$ $e#Jor. C-#oe$e# Cell Ge$e#. 2000 1K 32>3. Ber$s#e%$, M. o"ar, @. Fa+l+sse$, M. Ra$!all, R.L. Sc8+c, A. Teo#, L.A. +ere$s, @. 200. EJ%$s Sarco'a =a'%l- o T+'ors C+rre$# Ma$ae'e$#. T8e O$colo%s#. 11K 3031. Bro!e+r, G. Mar%s, . _a'as8%ro, D.. @oar#-, M.D. 8%#e, F.S. 1. B%olo- a$! Ge$e#%cs o @+'a$ Ne+ro*las#o'as. o+r$al o Fe!%a#r%c @e'a#olo- O$colo-. 1526K >101.
99
Ca*rera Morales, C.M. 2003. Es#+!%o co')ara#%"o !e la a')l%%cac%($ !e @ER24$e+ 'e!%a$#e =IS@ FCR c+a$#%#a#%"a e$ #%e')o real e$ #+'ores !e 'a'a. O$colo:a. 2H5106K 2> . Cala7a$s, M.. O!ero, M.D. Mar#%$> S+*ero, I. X+!a8%re, I. La8or#%a, I. Valao$, M. V%7'a$os, .L. No"o, .M. 2000. T9c$%cas !e C%#oe$9#%ca Molec+larK a)l%cac%o$es e$ el !%a$(s#%co e %$"es#%ac%($ !el c&$cer. Re". Es). Fa#. 56K 3 . Carrera, C., Oca')o, L., Es):$ ,M., E+%+re$, ., 2010. Es#+!%o )rel%'%$ar !e 'arca!ores c%#oe$9#%cos e$ c&$cer +#%l%7a$!o la #9c$%ca !e =IS@. E$K CD !e res;'e$es las IV or$a!as Nac%o$ales !e B%olo:a. Esc+ela !e B%olo:a !e la U$%"ers%!a! Ce$#ral !el Ec+a!or, Q+%#o. C8or$, M. 200. Acc+ra#e %!e$#%%ca#%o$ o @ER2>)os%#%"e )a#%e$#s %s esse$#%al or s+)er%or o+#co'es J%#8 #ras#+7+'a* #8era)-. O$col. N+rs. =or+'. 526K 23>22. Des'e!#, C S)er%$!e, . F%e##e, =. @+a$, . %$, . Ta$, _. D+r*ec/, V. Lars%'o$#, D. G%+l%a$%, R. C8a))e-, C. B+-se, M. %$sloJ, . F%ccar#, M. So#%r%o+, C. Fe#ro)o+los, C. Ba#es, M. 200. Q+a$#%#a#%o$ o @ER2 e<)ress%o$ or @ER2K@ER2 !%'ers a$! !%ere$#%al s+r"%"al %$ a co8or# o 'e#as#a#%c *reas# ca$cer )a#%e$#s care+ll- selec#e! or #ras#+7+'a* #rea#'e$# )r%'ar%l- *- =IS@. D%a$. Mol. Fa#8ol. 1H516K 22>2. I.S.C.N. 200. A$ I$#er$a#%o$al S-s#e' or @+'a$ C-#oe$e#%c No'e$cla#+re C-#oe$e#%c a$! Ge$o'e Researc8, S. Reco''e$!a#%o$s o #8e I$#er$a#%o$al S#a$!%$ Co''%##ee o$ @+'a$ C-#oe$e#%c No'e$cla#+re. F+*l%s8e! %$ colla*ora#%o$ J%#8 fC-#oe$e#%c a$! Ge$o'e Researc8f Fl+s ol!>o+#K fT8e Nor'al @+'a$ ar-o#-)e G> a$! R>*a$!sf. E!%#or5s6K S8aer, L.G. 5S)oa$e, as8.6Slo"a, M.L. 5D+ar#e, Cal%.6 Ca')*ell, L.. 5=%#7ro-, V%c.6 arer Me!%cal a$! Sc%e$#%%c F+*l%s8er, Basel, SJ%#7erla$!. IJa'o#o, _+%8%!e. 200. D%a$os%s a$! Trea#'e$# o EJ%$s Sarco'a. I)$. . Cl%$. O$col. 526K > H. e'al, A. S%eel, R. +, . ar!, E. 2010. Ca$cer S#a#%s#%cs, 2010. Ca. Ca$cer . Cl%$. 2010506 K 2>00. e'al, A. ar!, E. T8+$, M.. 200. Rece$# #re$!s %$ *reas# ca$cer %$c%!e$ce ra#es *- ae a$! #+'or c8arac#er%s#%cs a'o$ U.S. Jo'e$. Breas# Ca$cer Researc8. Vol.. No.. Le"ers8a, M.A. @a$, . Asar%, X. Da$%la, D.C. L%$, O. Go$7&le7>Es)%$osa, R. A$a$!, A. L%la, @. @eller, G. =le%s8er, M. Sc8er, @. 200. =l+oresce$ce I$ S%#+ @-*r%!%7a#%o$ A$al-s%s o C%rc+la#%$ T+'or Cells %$ Me#as#a#%c Fros#a#e Ca$cer. Cl%$. Ca$cer. Res. 1356K 201>20. L()e7 Bel#r&$, A. 1. Fa#olo:a 'olec+lar !el c&$cer !e )r(s#a#a - !e s+s les%o$es )rec+rsoras. Fa#olo:a. 2526K 1H>10. M%#el'a$, =. 5e!,6 arer, S. 2003. A$ I$#er$a#%o$al S-s#e' o @+'a$ C-#oe$e#%c No'e$cla#+re. ISCN. Nac8o>Varas, e"%$ Ar#+ro. 200. Le+ce'%as !el a!+l#o. Gac. Me!. M9<. 2516K 10 110. No+era, R. E$c%so, M.. Na"arro, S. Cas#el, V. Cr+7, . F%/+eras, M. R+%7, A. Llo'*ar# Bosc8, A. 2003. Es#+!%o !el Ne+ro*las#o'a !e al#o r%eso co$ 8%*r%!ac%($ e$('%ca co')ara!a. VII Co$reso V%r#+al @%s)a$oa'er%ca$o !e A$a#o':a Fa#ol(%ca. 2003K 1>1. Oca')o, L. A*a!, . E+%+re$, . L+)era, @. Mo$#al"o, V. 1H. A$&l%s%s c%#oe$9#%co e$ )ac%e$#es co$ l%$o'as 'al%$os. Re"%s#a !e la Soc%e!a! Ec+a#or%a$a !e B%olo:a 5Res;'e$es6. 1HK > . Fa7 - M%o, C. D&"alos, V. F9re7, C. &co'e, D. S8%rla, . Ce"allos, =. e%*a+er, =. Ro!r%+e7, T. Oca')o, L. Leo$e, F. 1H. A$&l%s%s C%#oe$9#%co e$ %$!%"%!+os co$ s:$!ro'e M%elo!%s)l&s%co. Re"%s#a Ec+a#or%a$a !e Ca$cerolo:a. 3516.
9<
Fa7 - M%o, C. Ca*rera, A. V&s/+e7, E. L()e7, A. M+(7, M. Cas#ro, B. Oca')o, L. S&$c8e7, M.E. 200. =rec+e$c%as !e los rearrelos cro'os('%cos - e$9#%cos. Re"%s#a Ec+a#or%a$a !e O$colo:a. 1516. Se##%$, A. Al @aar, M. Al Doso-, T. Al Ba7, R. A*!elra7%, N. =o+!a, M. Are, S. Al To$*ar-, _. 200. Fro$os#%c c-#oe$e#%c 'arers %$ c8%l!8oo! ac+#e l-')8o)las#%c le+e'%aK cases ro' Ma$so+ra, E-)#. @e'a#olo-. 11536K 1>. Se##%$, A. Al @aar, M. Al Doso-, T. Al Ba7, R. A*!elra7%, N. =o+!a, M. Are, S. Al To$*ar-, _. 200. Fro$os#%c c-#oe$e#%c 'arers %$ c8%l!8oo! ac+#e l-')8o*las#%c le+e'%a. I$!%a$ . Fe!%a#r. 56K 233>2. _eo8, E.. Ross, M.E. S8+r#le, S.A. %ll%a's, . Fa#el, D. Ma8o+7, R. et al. 2002. Class%%ca#%o$, s+*#-)e !%sco"er- a$! )re!%c#%o$ o o+#co'e %$ )e!%a#r%c ac+#e l-$)8o*las#%c le+e'%a *e$e e<)ress%o$ )ro%l%$. Ca$cer Cell. 1 K 1>1.
9=
Práctica 1
ETRACCIN DE ADN Y REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA :PCR; INTRODUCCIN La FCR es +$a reacc%($ *%o/+:'%ca in )itro ca#al%7a!a )or +$a e$7%'a, e$ la c+al )e/+eas ca$#%!a!es !e +$ se'e$#o es)ec:%co !e ADN, /+e se 8alla$ e$#re !os re%o$es !e ADN !e sec+e$c%a co$oc%!a, so$ a')l%%ca!as o*#e$%9$!ose +$a ra$ ca$#%!a! !e ADN l%$eal !e !o*le ca!e$a. De*%!o a /+e la FCR es#& *asa!a e$ la acc%($ e$7%'&#%ca !e +$a ADN )ol%'erasa 5la '&s co';$'e$#e +#%l%7a!a es la Ta/ ADN )ol I /+e es +$a !e las e$7%'as '&s e<#e$sa'e$#e carac#er%7a!a - a)l%ca!a e$ *%olo:a 'olec+lar6, la #ec$olo:a !e la FCR +e a)l%ca!a %$'e!%a#a'e$#e e$ "ar%as &reas !e %$"es#%ac%($, %$cl+-e$!o la #ec$olo:a !el ADN reco'*%$a$#e, la e<)res%($ 9$%ca, 'e!%c%$a e$eral, 'e!%c%$a ore$se - e"ol+c%($. Ac#+al'e$#e, la #ec$olo:a !e la FCR 8a a!/+%r%!o 'a-or %')or#a$c%a co$ el !esarrollo !e las e$7%'as !e res#r%cc%($, co$ el clo$ae !el ADN - co$ el So+#8er$ *lo##%$ e$ el a"a$ce !e la *%olo:a 'olec+lar. Los )r%'eros e<)er%'e$#os !e a')l%%cac%($ co$ FCR +ero$ real%7a!os )or el Dr. M+ll%s - el Dr. =re! A. =aloo$a, +$ 'a#e'&#%co /+%e$ !esarroll( el )r%'er !%s)os%#%"o a+#o'&#%co re+la!or !e la #e')era#+ra e$ c%clos, co$oc%!o co'o #er'oc%cla!or o '&/+%$a !e FCR 5M+ll%s - =aloo$a, 1H6. La a')l%%cac%($ !el ADN se o*#%e$e )or c%clos re)e#%!os !e FCR, ca!a +$o !e los c+ales co$s#a !e #res es#a!%os !e #e')era#+ra !%s#%$#osK 16 Des$a#+ral%7ac%($ !el #e')la!o o `)la$#%lla` !e ADN 5ADN /+e ser"%r& !e 'o!elo )ara s+ a')l%%cac%($6 a +$a #e')era#+ra !e a ° C. 26 U$%($ o a$$eal%$ !e los )r%'ers 5co$oc%!os #a'*%9$ co'o ce*a!ores6. Los )r%'ers so$ ol%o$+cle(#%!os, or'a!os )or 'ol9c+las !e ca!e$a s%')le !e ADN /+e so$ co')le'e$#ar%os a a'*os e<#re'os !e +$a sec+e$c%a !e#er'%$a!a !e ADN /+e ac#;a co'o #e')la!o o )la$#%lla. S+ +$c%($ es ser"%r al #e')la!o !e ADN co'o )+$#o !e )ar#%!a )ara la )ol%'er%7ac%($. Es#e )aso re/+%ere +$a #e')era#+ra /+e "ar:a e$#re los 2 a 0 ° C 6 E<#e$s%($ !el )r%'er )or ADN )ol%'erasaK Los )r%'ers so$ e<#e$!%!os e$ +$a ca!e$a #e')la!o !e ADN !e ca!e$a s%')le 5)re"%a'e$#e !es$a#+ral%7a!o6 rac%as a la e$7%'a ADN )ol%'erasa e$ )rese$c%a !e !eso<%rr%*o$+cle(#%!os #r%osa#o 5!NTFs6 *ao co$!%c%o$es a!ec+a!as !e reacc%($, es#o !a co'o res+l#a!o la s:$#es%s !e $+e"as ca!e$as !e ADN co')le'e$#ar%o a las ca!e$as #e')la!o. Fara es#e )aso se re/+%ere$ #e')era#+ras e$#re los 0 a 2 ° C. L+eo !e la e<#e$s%($ se o*#%e$e$ 'ol9c+las !e ADN !e !o*le ca!e$a, s%$ e'*aro, la s:$#es%s !e $+e"as ca!e$as !e ADN )+e!e ser re)e#%!a "ol"%e$!o a !es$a#+ral%7ar el ADN )or calor 5!es$a#+ral%7ac%($6, se+%!a'e$#e )ro'o"%e$!o el a$$eal%$ o +$%($ !e los )r%'ers 'e!%a$#e el e$r%a'%e$#o !e la 'e7cla )ara %$al'e$#e co$!+c%r a la e<#e$s%($ !e los )r%'ers rac%as a la ADN )ol%'erasa a la #e')era#+ra a!ec+a!a )ara ca!a reacc%($. Ca!a re)e#%c%($ !e es#a s:$#es%s !e $+e"as ca!e$as co$s#%#+-e +$ ciclo de a%0li'icaci3* 5=%.206. La reacc%($ !e a')l%%cac%($ co$#%e$e !os )r%'ers !%s)+es#os !e #al 'a$era /+e )+e!a$ 8%*r%!%7ar co$ las ca!e$as o)+es#as !e la sec+e$c%a `*la$co` o sec+e$c%a a a')l%%carse. De*%!o a
97
/+e el )ro!+c#o e<#e$!%!o %$cl+-e la sec+e$c%a co')le'e$#ar%a a la !el o#ro )r%'er, el )ro!+c#o !e ca!a reacc%($ s%r"e co'o #e')la!o e$ el $+e"o c%clo !e FCR "er%%c&$!ose as: +$a reacc%($ *%o/+:'%ca e$ ca!e$a. El %')ac#o !e es#a #ec$olo:a 5FCR6 8a s%!o )ar#%c+lar'e$#e %')or#a$#e e$ al+$os ca')os relac%o$a!os al a$&l%s%s !el e$o'a 8+'a$o, es)ec%al'e$#e e$ el 'a)eo e$9#%co - :s%co !e los cro'oso'as - a$&l%s%s !e la e<)res%($ 9$%ca. Figura ;$ =mp"i#icaci&n !e =36 me!iante cic"os repeti!os !e PC4$ ADN )
#
#
)
)
#
ADN doble cade*a
Des$a#+ral%7ac%($ #
)
#
#
)
) #
)
# ) )
03 CICLOS #
) # #
# )
# # )
3 °C
A$%lla'%e$#o 33 °C
E<#e$s%($ B2 °C
CE?ADOR
O?ETIOS 1. A)re$!er la #9c$%ca !e e<#racc%($ !e ADN 8+'a$o a )ar#%r !e sa$re )er%9r%ca. 2. Usar el ADN e<#ra:!o e$ la Reacc%($ e$ Ca!e$a !e la Fol%'erasa 5FCR6 . Co$ocer las a)l%cac%o$es !e la FCR.
MATERIALES E&TRACCI'" (E A(" (E SA"GRE PERIF)RICA > Dos '+es#ras !e 13 cc !e sa$re )er%9r%ca 8e)ar%$%7a!a > S+ero %s%ol(%co > A+a *%!es#%la!a > Rec%)%e$#e co$ cloro > Ta')($ !e l%s%s !e le+coc%#osK 5Tr%s 2M, NaCl 3M, EDTA 0,23M, A+a /+:'%ca'e$#e )+ra6 > @Cl > SDS 10? > Fro#e%$asa > NaCl 5M6 > E#a$ol a*sol+#o
<-
> E#a$ol al 0? > Tr%s>EDTA 5TE6 1K0.1 )@ H > Vor#e< > Bao 'ar:a a ° C. > F%)e#a Fas#e+r > Ce$#r:+a '+l#%#+*os > T+*os c($%cos > G+a$#es es#9r%les > Feras !e o'a > Vaso !e )rec%)%#ac%($.
REACCI'" E" CA(E"A (E LA POLIERASA *PCR+ > Ter'oc%cla!or > T+*os e))e$!or !e 0,3 'l > Gra!%lla )ara #+*os e))e$!or > Fara%l' > M%cro)%)e#as !e 200 - 20 '%crol%#ros > F+$#as )ara '%cro)%)e#as 5es#9r%les6 > T+*os e))e$!or !e 1,3 'l > @%elo )%ca!o > Mas#er M% A+a /+:'%ca'e$#e )+ra > !NTFs > Ta/ )ol%'erasa > B+er o #a')($ !e reacc%($ 10 > Fr%'ers > MCl2 > ADN a ser a')l%%ca!o > Ace%#e '%$eral
PR!E,A (E E&TRACCI'" E" GEL (E AGAROSA > Aarosa > TBE 1K > Yc%!o *(r%co > EDTA > Tr%s Base > A+a /+:'%ca'e$#e )+ra > Bro'+ro !e e#%!%o > T%$#a a7+l > A%#a!or !e "%!r%o > Mec8ero B+$se$ > Malla !e as*es#o > Tr:)o!e > Erle$'e-er !e 1000 'l > M%cro)%)e#as > F+$#as )ara '%cro)%)e#a
<,
E&TRACCI'" (E A(" E" SA"GRE PERIF)RICA 1. E<#raer )or 'e!%o !e ce$#r%+ac%($ el s+ero !e la sa$re, !+ra$#e 13 '%$+#os a 000 r)' - a ° C. 2. Aa!%r el s+ero %s%ol(%co 8as#a 30 'l "(r#e< - ce$#r%+ar 13 '%$+#os a 000 r)' - !eca$#ar el s+ero co$ )%)e#a Fas#e+r e$ +$ rec%)%e$#e co$ cloro. . Aa!%r a+a /+:'%ca'e$#e )+ra 8as#a 30 'l a%#ar +er#e'e$#e 8as#a /+e se !es)e+e el *o#($. U$a "e7 !es)ea!o a%#ar +er#e'e$#e !+ra$#e 13 a 20 '%$+#os, ce$#r%+ar 13 a 20 '%$+#os a 000 r)' a ° C. . Deca$#ar el so*re$a!a$#e !e or'a !%rec#a e$ +$ rec%)%e$#e co$ cloro, - aa!%r 23 'l !e a+a /+:'%ca'e$#e )+ra, "(r#e< 8as#a ro')er el *o#($ - ce$#r%+ar 13>20 '%$+#os a 000 r)' a ° C. 3. Deca$#ar !e or'a !%rec#a el so*re$a!a$#e e$ +$ rec%)%e$#e co$ cloro, #e$%e$!o c+%!a!o !e /+e $o se !es)e+e el *o#($ cel+lar - aa!%r #a')($ !e l%s%s !e le+coc%#os a ° C el "ol+'e$ %r& !e ac+er!o al #a'ao !el *o#($ cel+lar 5!e a 'l6. . Aa!%r 0, 'l !e SDS al 10? a ca!a #+*o !e '+es#ra. . Aa!%r 1 'l !e sol+c%($ !e )ro#e%$asa . H. V(r#e< 8as#a la r+)#+ra !el *o#($ cel+lar, !ear #o!a la $oc8e a ° C 8as#a la #o#al !%sol+c%($. . Aa!%r 2 'l !e clor+ro s(!%co M. 10. Dar +$ "(r#e< 8as#a "er es)+'a - ce$#r%+ar 0 '%$+#os a 000 r)' a #e')era#+ra a'*%e$#e. 11. Recoer el so*re$a!a$#e co$ )%)e#a Fas#e+r s%$ #o'ar la ca)a !e s+c%e!a! - )asarlo a +$ #+*o l%')%o. 12. Aa!%r H 'l !e e#a$ol a*sol+#o a #e')era#+ra a'*%e$#e. A%#ar )ara /+e )rec%)%#e el ADN e$ or'a !e 'e!+sa. 1. Fre)arar 2 #+*os co$ e#a$ol al 0? 5>20 ° C.6 - la"ar la 'e!+sa !e ADN e$ ca!a +$o !e ellos. 1. Recoer la 'e!+sa !e ADN - res+s)e$!erla e$ Tr%s>EDTA 5TE6 1K0,1 )@ H. El "ol+'e$ !e TE !e)e$!e !el #a'ao !e la 'e!+sa !e ADN 5!e 300>00 '%crol%#ros a)ro<%'a!a'e$#e6. 13. Dear /+e se !%s+el"a la 'e!+sa #o!a la $oc8e.
PREPARACI'" (E LA !ESTRA PARA PCR 1. So*re +$a c+*e#a co$ 8%elo )%ca!o colocar +$ #+*o e))e$!or es#9r%l )ara )re)arar la 'as#er '%< o 'e7cla 'aes#ra )ara FCR, +sa$!o la 8oa es)ec%al'e$#e !%sea!a )ara el o*e#o. i To!os los reac#%"os !e*e$ ser saca!os !el co$ela!or )oco #%e')o a$#es !e 8acer la 'e7cla - !e*er&$ ser 'a$#e$%!os so*re 8%elo )%ca!o a$#es - !es)+9s !e ser +sa!os. Al !esco$elarlos se !e*e c+%!ar !e /+e #o!o el reac#%"o se !%s+el"a co')le#a'e$#e.
i Fara la a!%c%($ !e ca!a reac#%"o se !e*e$ +#%l%7ar )+$#as !e )%)e#a $+e"as es#9r%les. La )re)arac%($ !e la 'e7cla se !e*e real%7ar co$ 'ascar%lla - +a$#es. i E"%#ar #ocar el e<#re'o !e las )+$#as a +sarse co$ c+al/+%er 'a#er%al, el )elo, la )%el, e#c. i La ca$#%!a! !e 'as#er '%< a )re)arar !e*e ser calc+la!a se;$ el $;'ero !e #+*os !e reacc%($.
MASTER MI 5Vol+'e$ %$al )or #+*o !e reacc%($ P 30 '%crol%#ros6
I$re!%e$#e4#+*o Ta')($ !e reacc%($ 10 !NTFs MCl2 Fr%'ers A+a *%!es#%la!a o +l#ra)+ra Ta/
Ca$#%!a!4#+*o 3 '%crol%#ros 2 '%crol%#ros 1 '%crol%#ro 2 '%crol%#ros !e ca!a )r%'er 3,H '%crol%#ros 0,2 '%crol%#ros
2. Colocar H '%crol%#ros !e 'as#er '%< e$ ca!a #+*o !e reacc%($ 5#+*os e))e$!or 0,3 '%crol%#ros6. Aa!%r a ca!a +$o 2 '%crol%#ros !el ADN e<#ra:!o. . Arear !e 2 a o#as !e ace%#e '%$eral a ca!a #+*o !e reacc%($ !e&$!olo correr )or las )are!es. Cerrar *%e$ los #+*os - lle"arlos al #er'oc%cla!or, /+e !e*e 8a*er s%!o )rora'a!o co$ a$#er%or%!a!. . U$a "e7 #er'%$a!os los c%clos res)ec#%"os, co$elar los #+*os !e reacc%($ e$ caso !e $o +sarlos %$'e!%a#a'e$#e.
GEL (E AGAROSA 1. Fesar 0,23 r !e aarosa. 2. Cale$#ar la sol+c%($ 8as#a /+e se !%s+el"a la aarosa c+%!a$!o !e /+e al 8er"%r $o se r%e+e la '%s'a. . Dear e$r%ar la sol+c%($ 8as#a a)ro<%'a!a'e$#e 33 ° C - arear 2 '%crol%#ros !e *ro'+ro !e e#%!%o al el - 'e7clar *%e$. Fre)arar el 'ol!e !el el - "er#er la sol+c%($ e$ el '%s'o 'o"%e$!o las *+r*+as 8ac%a la or%lla. . Colocar la )e%$%lla e$ el el - !ear /+e 9s#e se sol%!%%/+e, e$#o$ces re#%rar la )e%$%lla co$ c+%!a!o. 3. E$ +$ )e!a7o !e )ara%l' l%')%o colocar 3 '%crol%#ros !e #%$#a a7+l )or ca!a #+*o !e reacc%($ - 'e7clar co$ '%crol%#ros !e ADN a')l%%ca!o e$ el #er'oc%cla!or. . Colocar el el e$ la c&'ara !e elec#roores%s - c+*r%rlo co$ TBE 1. Colocar la 'e7cla o*#e$%!a e$ el )aso 3, e$ ca!a +$o !e los )oc%llos !el el )re)ara!o a$#er%or'e$#e. . Froce!er a la elec#roores%s a "ol#ae co$s#a$#e 50 "ol#%os6.
<#
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. ^Q+9 es el FCR a$%!a!o o $es#e! FCR - FCR '+l#%)le< 2. ^De /+9 !e)e$!e la #e')era#+ra !e a$$eal%$ o +$%($ !e los )r%'ers. E<)l%/+e. . ^For /+9 es reco'e$!a*le +sar 'a#er%al $+e"o - es#9r%l )ara FCR . ^Q+9 so$ los R=LF - VNTR
?I?LIOGRA6A Le($ ., Garc:a .M. 12 Ma$+al !e Ge$9#%ca Molec+lar. SINTESIS E!. Ma!r%!. NeJ#o$ C.R., Gra8a' A. 1 FCR BIOS. Sc%e$#%%c F+*l%s8ers L%'%#e! O<or!, U$%#e! %$!o'. N+ss*a+' R.L., Ro!er%c R.McI., @+$#%$#o$ =.. 2001 T8o')so$ T8o')so$ Ge$e#%cs %$ Me!%c%$e, .B. Sa+$!ers Co')a$-, F8%la!el)8%a. Fa7>->M%o C., Cre+s A., Ca*r9 O., Leo$e F.E. 2002 Ge$9#%ca To<%col(%ca - Carc%$o9$es%s. E!%c%o$es AB_A>_ALA =UNDAC_T>FUCE. Fa7>->M%o C., Ar9"alo M., M+o7 M.., Leo$e F.E. 2003 C_F1A1 e$e#%c )ol-'or)8%s's %$ Ec+a!or, So+#8 A'er%ca. D%sease Marers. 21526K3>3. S#rac8a$ T., Rea! A. 1 @+'a$ Molec+lar Ge$e#%cs. B%os Sc%e$#%%c F+*l%s8ers L%'%#e!, U. T8o')so$ N.., McI$$es R.R., %llar! @.=. 1 Ge$e#%cs %$ Me!%c%$e..B.Sa+$!ers Co')a$-, F8%la!el)8%a, U.S.A. Ver'a R., Ba*+ A. 13 @+'a$ C8ro'oso'es. Fr%$c%)les a$! Tec8$%/+es. McGraJ>@%ll. F8%la!el)8%a.
<5
Práctica 1'
POLIMOR6ISMO EN LA CON6ORMACIN DE LA CADENA SENCILLA :SSCP; INTRODUCCIN La co$or'ac%($ )ol%'(r%ca !e ca!e$a s%')le 5SSCF6 es +$ '9#o!o elec#roor9#%co /+e )er'%#e la !e#ecc%($ %$!%rec#a !e '+#ac%o$es - )ol%'or%s'os. El )r%$c%)%o !e es#e '9#o!o se *asa e$ /+e la 'o"%l%!a! elec#roor9#%ca !e +$a 'ol9c+la e$ +$ el es se$s%*le al #a'ao, cara - or'a !e la 'ol9c+la. E$ co$!%c%o$es $o !es$a#+ral%7a$#es las ca!e$as se$c%llas !el ADN #%e$e$ +$a es#r+c#+ra )lea!a !e#er'%$a!a )or s+s %$#eracc%o$es 'olec+lares - )or lo #a$#o )or s+ sec+e$c%a 5@a-as8%, 116. De es#a 'a$era al !es$a#+ral%7arse la !o*le %*ra !e ADN las ca!e$as se$c%llas #o'ar&$ +$a co$or'ac%($ #r%!%'e$s%o$al se;$ s+ sec+e$c%a $+cleo#:!%ca, las c+ales se o*ser"ar&$ a 'e!%!a /+e '%re$ e$ +$ el $o !es$a#+ral%7a$#e !e acr%la'%!aK*%sacr%la'%!a. E$ el a$&l%s%s !e la SSCF, +$a sec+e$c%a '+#a!a es !e#ec#a!a co'o +$ ca'*%o !e la 'o"%l%!a! e$ el el ca+sa!o )or s+ es#r+c#+ra o co$or'ac%($ al#era!a 5@a-as8%, 116. La SSCF !e#ec#a !el 0? al 3? !e '+#ac%o$es e$ los )ro!+c#os !e FCR !e 200 )* - !e 'e$or #a'ao. S% el a')l%%ca!o es 'a-or se lo #ra#a co$ e$7%'as !e res#r%cc%($ )ara 8acerlo '&s )e/+eo - )o!er o*#e$er +$a 'eor !e%$%c%($. A!e'&s, se )+e!e$ ca'*%ar c%er#as co$!%c%o$es !e elec#roores%s )ara !e#ec#ar ca'*%os $+cleo#:!%cos, es#as )+e!e$ serK #e')era#+ra, ca$#%!a! !e l%cerol o s+crosa.
O?ETIOS 1. A)re$!er el 'eca$%s'o !e la #9c$%ca SSCF )ara !e#ecc%($ %$!%rec#a !e '+#ac%o$es. 2. Co$ocer s+ +#%l%!a! )r&c#%ca e$ "ar%os ca')os !e la %$"es#%ac%($ *%o'9!%ca.
MATERIALES Y PROCEDIMIENTO$ Fara la a)l%cac%($ !e la #9c$%ca se real%7a$ los s%+%e$#es )asosK 1. E<#racc%($ !e ADN !e '+es#ras $or'ales - #+'orales 5'%s'o %$!%"%!+o6. 2. A')l%%cac%($ !e +$a sec+e$c%a !e#er'%$a!a )or FCR 5Reacc%($ e$ Ca!e$a !e la Fol%'erasa6. . =a*r%cac%($ !el el !e acr%la'%!a>*%sacr%la'%!a ? 5s#oc K16 5=%.21 -226. . To'ar 2,3+l !el a')l%%ca!o 'e!%a$#e FCR e %+al "ol+'e$ !el *+er o #a')($ !e cara +#%l%7a!o 53? or'a'%!a, 20'M EDTA, 0,003? a7+l !e *ro'oe$ol, 0,003? a7+l !e <-le$o c%a$ol - a+a6. Se )roce!e a !es$a#+ral%7ar la 'e7cla a ° C )or 3f e %$'e!%a#a'e$#e )asar a 8%elo.
<)
3. Colocar las '+es#ras a')l%%ca!as - )re"%a'e$#e !es$a#+ral%7a!as e$ el el !e )ol%acr%la'%!a.
PREPARACIN DE GELES DE POLIACRILAMIDA Los eles !e sec+e$c%ac%($ !e*er ser 8ec8os al 'e$os 2 8oras a$#es !e s+ +so - se )+e!e$ 'a$#e$er l%s#os 2 8oras a$#es !e $eces%#arse. 1. Se !e*e$ )re)arar las s%+%e$#es sol+c%o$es s#ocK
A. Sol+c%($ !e Acr%la'%!a al 0? acr%la'%!a H0. 5co$ al#a )+re7a )ara sec+e$c%ac%($ !e ADN6 N,Nf> 'e#%le$e*%sacr%la'%!a 20. A+a !es#%la!a c.s.). 00 'l Cale$#ar la sol+c%($ a ° C. )ara !%sol"er los /+:'%cos. A+s#ar el "ol+'e$ a 1 l%#ro co$ a+a !es#%la!a. =%l#rar la sol+c%($ co$ +$ %l#ro !e $%#rocel+losa - al'ace$ar e$ rascos osc+ros a #e')era#+ra a'*%e$#e. El )@ !e la sol+c%($ !e acr%la'%!a !e*e es#ar e$ ,0 o 'e$os.
?. 3< TBE Tr%s *ase Yc%!o *(r%co 0,3 M EDTA 5)@ H,06 A+a !e%o$%7a!a c.s.).
3 . 2,3 . 20 'l. 1 l%#ro
El )@ !el #a')($ !e*e es#ar e$ a)ro<%'a!a'e$#e H,. La '%s'a sol+c%($ s#oc !e 3 TBE !e*er ser +sa!a )ara )re)arar #a$#o el el co'o los #a')o$es !e corr%!a.
C. 10? !e Fers+la#o !e A'o$%o 5FSA6 Fers+la#o !e a'o$%o 1. A+a c.s.). 10 'l Es#a sol+c%($ )+e!e ser al'ace$a!a a ° C. )or "ar%as se'a$as. 2. Fre)arar los "%!r%os /+e "a$ a ser"%r !e 'ol!e )ara la )re)arac%($ !el el, los c+ales !e*er es#ar *%e$ la"a!os - l%')%os. Se reco'%e$!a el +so !e e#a$ol )ara el%'%$ar los res#os !e rasa /+e )+e!a$ e<%s#%r 5=%. 2 - 26. . Colocar los 2 es)ac%a!ores !e )l&s#%co le<%*le 5+s+al'e$#e !e 0, ''6 )ara or'ar +$ sello e$#re los "%!r%os - as: e"%#ar /+e se r%e+e el l:/+%!o. Se )+e!e +sar "asel%$a as: co'o cl%)s !e 'e#al a!ec+a!os )ara ac%l%#ar el )roce!%'%e$#o. . Colocar el )e%$e /+e "a a or'ar los )oc%llos e$ +$o !e los e<#re'os !el el - o*ser"ar s% cal7a correc#a'e$#e. Re#%rar l+eo el )e%$e - sacar los res#os !e el /+e all: se e$c+e$#re$. 3. Fara )re)arar el el l+eo !e /+e es#9 correc#a'e$#e ar'a!o el 'ol!e, se !e*e$ 'e7clar las sol+c%o$es s#oc -a !escr%#as. De ac+er!o a los o*e#%"os !e #ra*ao - a la e<)er%e$c%a !el <9
%$"es#%a!or se )+e!e$ or'ar eles e$ "ar%as co$ce$#rac%o$es, la +sa!a e$ es#a )r&c#%ca es la s%+%e$#eK Gel !e )ol%acr%la'%!a al ? Fara es#e el se !e*e$ 'e7clarK 'l !e la sol+c%($ !e )ol%acr%la'%!a 5sol. A6 'l !e l%cerol 0 'l !e 3< TBE 5sol. B6 +l. !e TEMED 5N,N,Nf,Nf> #e#ra'e#%le$e!%a'%!a6 30 +l. !e FSA 5sol. C6 . Colocar c+%!a!osa'e$#e es#a )re)arac%($ e$ el 'ol!e - es)erar 8as#a /+e el el se sol%!%%/+e. . L+eo se coloca$ e$ ca!a )oc%llo +l. !e la '+es#ra !e ADN a a$al%7arse 'e7cla!o co$ +l. !el colora$#e !e elecc%($. H. Co$ec#ar el e/+%)o !e elec#roores%s )ara )er'%#%r la '%rac%($ !e las '+es#ras a +$ "ol#ae co$s#a$#e !+ra$#e a)ro<%'a!a'e$#e 8oras, lo /+e )o!r:a "ar%ar !e ac+er!o a las co$!%c%o$es !e la*ora#or%o. . Fasa!o es#e #%e')o sacar el el !el 'ol!e - s+'er%rlo e$ +$a sol+c%($ !e *ro'+ro !e e#%!%o o e$ +$a sol+c%($ !e )la#a )re)ara!a se;$ los o*e#%"os !e la %$"es#%ac%($. Es#e )aso )er'%#%r& la #%$c%($ !el el. 10. A$al%7ar *ao l+7 +l#ra"%ole#a el el )ara )o!er o*ser"ar la 'a$era e$ /+e '%raro$ las '+es#ras e$ es#+!%o. Re%s#rar los !a#os. 11. To'ar +$a o#o !el el res+l#a$#e +sa$!o el e/+%)o !e o#ora:a a!ec+a!o )ara es#e o*e#%"o.
DETECCIN DE MUTACIONES E$ el a$&l%s%s !e la SSCF, el ca'*%o !e +$ solo $+cle(#%!o es s+%c%e$#e )ara al#erar la es#r+c#+ra #r%!%'e$s%o$al !e la 'ol9c+la 5=%.26. For lo #a$#o, el )a#r($ !e *a$!as !e la '+es#ra '+#a!a "ar%ar& al co')ararlo co$ el )a#r($ !e *a$!as !e la '+es#ra $or'al, lo /+e )ro)orc%o$ar& %$or'ac%($ !e la )rese$c%a !e al;$ )ol%'or%s'o o '+#ac%($, es !ec%r +$ ca'*%o $+cleo#:!%co e$ la sec+e$c%a a')l%%ca!a. S% el )a#r($ !e *a$!as !e la '+es#ra )ro*le'a co%$c%!e co$ la '+es#ra $or'al se )o!r& co$cl+%r /+e $o 8a e<%s#%!o $%$;$ ca'*%o e$ es#a sec+e$c%a 5=%. 26.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. ^De /+9 !e)e$!e la se$s%*%l%!a! 5ca)ac%!a! !e !e#ec#ar +$a '+#ac%($6 !e es#a #9c$%ca 2. ^C+&l es la +$c%($ !el l%cerol e$ la )re)arac%($ !el el !e )ol%acr%la'%!a
<<
. ^C+&les so$ los ac#ores :s%cos /+e aec#a$ a la 'o"%l%!a! elec#roor9#%ca . ^Q+9 reacc%($ se )ro!+ce al 'e7clarse la acr%la'%!a co$ la *%sacr%la'%!a
?I?LIOGRA6A @a-as8% . 11 FCR>SSCFK A S%')le a$! Se$s%#%"e Me#8o! or De#ec#%o$ o M+#a#%o$s %$ #8e Ge$o'%c DNA. FCR Me#8o!s a$! A))l%ca#%o$s. 1K>H. Gro')e M. 1 T8e ra)%! !e#ec#%o$ o +$$oJ$ '+#a#%o$s %$ $+cle%c ac%!s. Na#+re Ge$e#%cs.Vol 3K111>11. Leo$e F.E. 1 Fa)el !e los Cro'oso'as 1, 1 - 22 - !el Ge$ 6F e$ Me$%$%o'as - Ne+r%$o'as Es)or&!%cos. Tes%s Doc#oral. U$%"ers%!a! A+#($o'a !e Ma!r%!. =ac+l#a! !e C%e$c%as. D)#o. !e B%o/+:'%ca. Ma!r%!>Es)aa. Fa7>->M%o C., Leo$e F.E., %'9$e7 F., Colla$#es .C. 2003 A$&l%s%s o @=E e$e '+#a#%o$s 5C2H2_, @D, a$! S3C6 %$ #8e Ec+a!or%a$ )o)+la#%o$. A$$als @e'a#olo- H 526K10>103. Sa'*roo ., =r%#sc8 E.=., Ma$%a#%s T. 1H Molec+lar Clo$%$. A La*ora#or- Ma$+al. Seco$! E!%#%o$. 2. S#rac8a$ T., Rea! A. 1 Molec+lar Clo$%$. A La*ora#or- Ma$+al.Seco$! E!%#%o$.Ca). 1K1.3>1.3. Or%#a M. e# al. 1H Ra)%! a$! Se$s%#%"e De#ec#%o$ o Fo%$# M+#a#%o$s a$! DNA Fol-'or)8%s's Us%$ #8e Fol-'erase C8a%$ Reac#%o$. Ge$o'%cs 3K H>H. S#rac8a$ T., Rea! A. 1 @+'a$ Molec+lar Ge$e#%cs. B%os Sc%e$#%%c F+*l%s8ers L%'%#e!, U.
<=
Figura 1$ Fa(ricaci&n !e un ge" !e secuenciaci&n$ Para "a #a(ricaci&n !e" ge" !e acri"ami!a>(isacri"ami!a se sigue un proce!imiento simi"ar$ 5To'a!o !eK Sa'*roo, =r%#sc8, Ma$%a#%s, 1H6
<7
Figura $ Fa(ricaci&n !e un ge" !e secuenciaci&n$ Para "a #a(ricaci&n !e" ge" !e acri"ami!a>(isacri"ami!a se sigue un proce!imiento simi"ar$ 5To'a!o !eK Sa'*roo, =r%#sc8, Ma$%a#%s, 1H6
=-
Figura '$ EsAuema !e "a !etecci&n in!irecta !e mutaciones me!iante SSCP$ Comparaci&n entre "a con#ormaci&n po"im&r#ica "as ca!enas senci""as !e un =36 norma" y un =36 muta!o$
Figura 0$ Cam(io !e mo)i"i!a! !etecta!a por SSCP$
=,
Práctica 10
COLECCIN DE MUESTRAS DE RESTOS HUMANOS Y ESTUDIO DE STRs EN PRUE?AS 6ORENSES INTRODUCCIN El ADN !e*e ser recolec#a!o, a%sla!o - )+es#o e$ el or'a#o a!ec+a!o )ara s+ carac#er%7ac%($. El ADN es#a )rese$#e e$ #o!a c9l+la $+clea!a - )or e$!e, es#e 'a#er%al *%ol(%co /+e!a e$ +$a esce$a !el cr%'e$. Se )+e!e e<#raer ADN !e +$a ra$ "ar%e!a! !e 'a#er%ales *%ol(%cos. S% la recolecc%($ !e '+es#ra es %!($ea se )+e!e ara$#%7ar *+e$os res+l#a!os e$ las )r+e*as !e ADN. Me!%a$#e la FCR es )os%*le a$al%7ar '+es#ras !e ADN !e 'a#er%al escaso - '+!era!a!o. El la*ora#or%o !e ADN co$ a)l%cac%($ ore$se se e$cara )r%$c%)al'e$#e !e !os #%)os !e es#+!%oK la %!e$#%%cac%($ cr%'%$al - la %$"es#%ac%($ !e %l%ac%($. E$ el &rea cr%'%$al:s#%ca se %$"es#%a s% +$ "es#%%o *%ol(%co 5sa$re, se'e$, )elos, sal%"a, e#c.6 rec+)era!o e$ la esce$a !el cr%'e$ )+!o 8a*erse or%%$a!o !e +$ %$!%"%!+o relac%o$a!o co$ los 8ec8os, -a sea el sos)ec8oso5a6 o la ":c#%'a. E$ la %$"es#%ac%($ !e %l%ac%($ se *+sca s% +$ %$!%"%!+o )osee c%er#os loc% /+e )+!%ero$ ser 8ere!a!os !e /+%e$ se sos)ec8a /+e es s+ )a!re *%ol(%co 5)a#er$%!a!, 'a#er$%!a! o casos !e %!e$#%%cac%($ !e res#os 8+'a$os6. La %$"es#%ac%($ e$ el &rea cr%'%$al:s#%ca se real%7a e$ #res e#a)asK > B;s/+e!a e$ la esce$a !e los 8ec8os > Recolecc%($ a!ec+a!a, e'*alae - e$":o al la*ora#or%o > Real%7ac%($ !e la )r+e*a e$9#%ca e %$#er)re#ac%($ El 9<%#o !e la )r+e*a !e)e$!e !e las !os )r%'eras e#a)as. La recolecc%($ el e'*alae )reser"ac%($ !e es#os ele'e$#os "a$ !e ac+er!o co$ s+ $a#+rale7a, !e*er ser real%7a!o c+%!a!osa'e$#e - se !e*e es#a*lecer +$a ca!e$a !e c+s#o!%a a!ec+a!a )ara #e$er )er%les !e ADN /+e sea$ s%$%%ca#%"os - leal'e$#e ace)#a!os e$ +$a cor#e. U$a "e7 colec#a!a la '+es#ra se real%7a la e<#racc%($ !e ADN e$ el la*ora#or%o, )ara l+eo )roce!er co$ la FCR !e re%o$es re)e#%#%"as !el e$o'a /+e so$ '+- %$or'a#%"as )ara la %!e$#%%cac%($ !e seres 8+'a$os. El e$o'a 8+'a$o es#& lle$o !e sec+e$c%as re)e#%!as !e ADN. Es#as sec+e$c%as re)e#%!as )+e!e$ ser !e #o!os los #a'aos, - so$ #:)%ca'e$#e !es%$a!as )or el laro !e la re)e#%c%($. C+a$!o so$ +$%!a!es re)e#%#%"as laras /+e co$#%e$e$ "ar%os c%e$#os !e *ases )or re)e#%c%($ se las lla'a sa#9l%#es. Fara +$a +$%!a! re)e#%#%"a 'e!%a$a !e e$#re 10 a 100 )ares !e *ases se las lla'a '%$%sa#9l%#es o VNTRs 5Var%a*le Ta$!e' Re)ea#s6. S% la +$%!a! re)e#%#%"a es )e/+ea, '&s o 'e$os 2 )ares !e *ases !e laro se las lla'a '%crosa#9l%#es, SSRs 5s%')le se/+e$ce re)ea#s6, STR 5S8or# Ta$!e' Re)ea#s6 o e$ es)aol sec+e$c%as re)e#%!as e$ #a$!e'. Los STRs so$ '&s !%+$!%!os e$ los a$&l%s%s )or/+e so$ '&s &c%les !e #ra*aarlos e$ la*ora#or%o, se a')l%%ca$ 'e!%a$#e FCR, so$ )e/+eos, so$ )ol%'(r%cos, #%e$e$ *aa #asa !e '+#ac%($, se 'a$#%e$e$ es#a*les !e )or "%!a - so$ '+- )ol%'(r%cos e$ las )o*lac%o$es. A!e'&s el $;'ero !e 'arca!ores !e STRs es '+- "ar%a*le e$#re %$!%"%!+os, lo c+al los 8ace eec#%"os )ara %!e$#%%cac%($. E$ la %+ra 23 se o*ser"a +$ es/+e'a !el )roceso !e %!e$#%%cac%($ !el )er%l e$9#%co !e STRs e$ +$a %$"es#%ac%($ ore$se.
=/
Figura $ EsAuema !e" proceso !e i!enti#icaci&n !e una muestra #orense
U$a "e7 /+e se o*#%e$e el )er%l e$9#%co !e las '+es#ras, es#as !e*e$ ser co')ara!as. E$ la %+ra 2 se co')ara$ los )er%les 8alla!os e$ +$a esce$a !el cr%'e$. Figura 2$ Comparaci&n !e "os per#i"es genéticos !e S/4s ha""a!os en "a escena !e" crimen con e" per#i" !e "a )íctima y "os sospechosos
L
S, E
S/ L
L$ ladde! escale!a alelicaJ S,$ sos0ec4oso ,J S/$ sos0ec4oso /J E$ e1ide*ciaJ $ 1+c&i%a S% e<%s#e co%$c%!e$c%a e$#re la '+es#ra o*#e$%!a e$ la esce$a !el cr%'e$ co$ la !e +$ sos)ec8oso 5e$ es#e caso sos)ec8oso 16. Se !e*e co')arar los res+l#a!os co$ la *ase !e !a#os !e la
=#
)o*lac%($. S% el )er%l e$9#%co o*#e$%!o #%e$e +$a *aa )ro*a*%l%!a! !e co%$c%!e$c%a co$ la )o*lac%($ 5es !ec%r es '+- *aa la )ro*a*%l%!a! /+e o#ro %$!%"%!+o e$ la )o*lac%($ )+!%era #e$er el '%s'o )er%l6 e$#o$ces !ec%'os /+e la e"%!e$c%a %$cl+-e al sos)ec8oso. Es !ec%r el sos)ec8oso 1 es el cr%'%$al. Se !escar#a la %$cl+s%($, c+a$!o !os o '&s STRs, !e*%!a'e$#e )ro*a!os, $o co%$c%!e$. Figura 5$ En esta #igura se representan "os 1' S/4s con su respecti)a "oca"izaci&n cromos&mica$
Tabla #( I*'o!%aci3* de los ,# STRs Locs CS=1FO =GA T@01 TFO VA DS13H D3SH1H DSH20 DHS11 D1S1 D1S3 D1HS31 D21S11d
Locali@aci3* c!o%os3%ica
Mo&i1o !e0e&ido
Acceso Ge*?a*
Alelo e* Ge*?a*
Ra*go del alelo
NB%e!o de alelos
3/.1
TAGA
120
12
3>1
20
/1.
CTTT
MH2
21
12.2>31.2
H0
11)13.3
TCAT
D002
>1
20
2)23.
GAAT
MH31
11
>1
13
12)1.1
TCTGdTCTAd
M23H3H
1H
10>23
2H
)21.1
TCTGdTCTAd NTW003
1H
H>21
2
3/2.2
AGAT
G0H
11
>1H
13
/21.11
GATA
G0H1
12
3>1
0
H/2.1
TCTAdTCTGd
G0H10
12
>20
1
1/1.1
TATC
G001
1
3>1
1
1/2.1
GATA
G023
11
3>1
1
1H/21.
AGAA
L1H
1
>.2
31
21/21.1
Co')le< TCTAdTCTG
AF000
2
12>1.2
H2
=5
O?ETIOS 1. Co$ocer la or'a a!ec+a!a !e colec#ar +$a '+es#ra. 2. A)or#ar las reco'e$!ac%o$es '&s ;#%les e$ c+a$#o al 'a$eo !e res#os )ro*a#or%os relac%o$a!os a la esce$a !e +$ cr%'e$. . O*#e$er el )er%l e$9#%co !e las '+es#ras *%ol(%cas e$ c+es#%($.
MATERIALES − +a$#es − orro /+%r;r%co − 'ascar%lla − 8oas !e )a)el *la$co − l&)%7 − %so)os !e alo!($ − a+a es#9r%l − )%$7as − #%era − alco8ol − #er'oc%cla!or - e/+%)o !e elec#roores%s PROCEDIMIENTO Colecci3* de e1ide*cia 2 0!ese!1aci3* La %')or#a$c%a !e +$a colecc%($ a!ec+a!a es ese$c%al. S% el ADN es#a co$#a'%$a!o !es!e el )r%$c%)%o, se o*#%e$e %$or'ac%($ a'*%+a /+e se #ra$sor'a e$ +$ o*s#&c+lo - +$a %')or#a$#e %$"es#%ac%($ )+e!e "erse co')ro'e#%!a. Las '+es#ras a colec#ar !e*e$ ser c+%!a!osa'e$#e esco%!as )ara )re"e$%r allos e$ la e"%!e$c%a. Es#& )or !e'&s !ec%r /+e la recolecc%($ !e '+es#ras !e*e c+')l%r #o!os los )asos 9#%cos - leales, )ara /+e $o sea$ %$"al%!a!as. 1. To!o ele'e$#o !e or%e$ *%ol(%co !e*e ser 'a$%)+la!o e$ co$!%c%o$es !e ase)s%a. USAR +a$#es, 'ascar%lla, orro - )ro#ec#or !e cal7a!o 5!e ser )os%*le #o!o el 'a#er%al !e*e ser $+e"o6. 2. Se !e*e e"%#ar 8a*lar, es#or$+!ar o #oser so*re la e"%!e$c%a. . L%')%ar - es#er%l%7ar el 'a#er%al 5)%$7as, *%s#+r:, e#c.6. Meor #ra*aar co$ e/+%)os es#9r%les !escar#a*les. . Clas%%car la e"%!e$c%a !e ac+er!o al #%)o !e so)or#e !o$!e se e$c+e$#reK a. *. c. !.
$o a*sor*e$#e, $o !es)re$!%*le 5*al!osa, "%!r%o, 'e#al $o o<%!a!o6 $o a*sor*e$#e, !es)re$!%*le 5)are!, 'esa !e 'a!era6 se'%>a*sor*e$#e 5)a)el *o$!6 a*sor*e$#e 5#ela, )a)el a*sor*e$#e6
Lle$ar la #a*la K
=)
Tabla 5( Ti0os de so0o!&e 0a!a colecci3* de %es&!as 2 *o%e*cla&!a( TIEMPO :d+as;
SOPORTES IDRIO
PARED
PAPEL
TELA
:so0o!&e a; :so0o!&e b; :so0o!&e c; :so0o!&e d; 0
'+es#ra a1 '+es#ra *1 '+es#ra c1 '+es#ra !1
'+es#ra a2 '+es#ra *2 '+es#ra c2 '+es#ra !2
Ele%e*&os &!a*s0o!&ables .
@a- /+e #o'ar e$ c+e$#a s% la e"%!e$c%a re)osa so*re +$ ele'e$#o #ra$s)or#a*le, s% es as:, es#e o*e#o $o )rese$#a 'a-or !%%c+l#a! )ara s+ #ra$s)or#e es 'eor e$"%arlo co')le#oK )re$!as !e "es#%r, ar'as cor#o )+$7a$#es, ar'as !e +eo, col%as !e c%arr%llo, c8%cles, )a)eles /+e )rese$#e$ e"%!e$c%a !e al+$ #%)o !e l+%!o, e#c.
.
Los ele'e$#os a$#es !escr%#os, !e*e$ ser e'*ala!os %$!%"%!+al - a!ec+a!a'e$#e e$ +$ so*re !e )a)el )re"%a'e$#e e#%/+e#a!o.
Ele%e*&os *o &!a*s0o!&ables H.
C+a!o la 'a$c8a re)osa so*re so)or#es !e !%:c%l #ra$s)or#e co'o )+er#as, )are!es, )%sos, alo'*ras, e#c., es#as '+es#ras se !e*e$ rec+)erar !e)e$!%e$!o !el #%)o !e so)or#e - !el #a'ao !e la 'a$c8a.
.
C+a$!o se #ra#e !e 'a$c8as !e l+%!os *%ol(%cos /+e a;$ $o se 8a$ seca!o e$ la esce$a, es#os se rec+)era$ %')re$a$!o +$ co)%#o !e alo!($, asa es#9r%l o +$a #ela !e alo!($ *la$ca - l%')%a.
10. Dear secar a #e')era#+ra a'*%e$#e, e'*alar e$ +$ so*re !e )a)el, ro#+lar %$!%ca$!o el s%#%o !e !o$!e se #o'( la '+es#ra - s+ co$!%c%($ 5'a$c8a resca6. 11.
A!e'&s se !e*e #o'ar +$a '+es#ra *la$co, /+e co$s%s#e e$ ro#ar +$ esco*%ll($ o ra'e$#o !e asa 8;'e!o so*re la s+)er%c%e ale!aa a la 'a$c8a.
12. C+a$!o la 'a$c8a es#a seca se !e*e$ #o'ar las s%+%e$#es )reca+c%o$esK 1. E$ s+)er%c%es $o a*sor*e$#es - $o !es)re$!%*lesK Se ras)a co$ *%s#+r: $+e"o so*re +$ )a)el l%')%o $o %')reso. Ma$c8as e$ or'a !e cos#ras - la s+)er%c%e !o$!e se e$c+e$#ra $o se !es)re$!e +$#o co$ la '+es#ra 5so)or#e a6. 1. Se !e*e #o'ar +$a '+es#ra *la$co. 13. E$ s+)er%c%es $o a*sor*e$#es - !es)re$!%*les - 4 o '+es#ras '+- )e/+easK Se colec#a la '+es#ra co$ +$ co)%#o !e alo!($ 8+'e!ec%!o co$ a+a es#9r%l o s+ero %s%ol(%co. =9
1. La '+es#ra se !e*e !ear secar al a'*%e$#e, l+eo e'*alar e$ +$ so*re !e )a)el )re"%a'e$#e e#%/+e#a!o, %$!%ca$!o !o$!e se #o'( la '+es#ra. 1. E$ es#os casos #a'*%9$ se !e*e #o'ar +$a '+es#ra *la$co. 1H. U$a "e7 /+e la '+es#ra sea )rocesa!a correc#a'e$#e - e'*ala!a, es#a !e*e ser #ra$s)or#a!a al la*ora#or%o )ara la e<#racc%($ !e ADN. 1. E$ el la*ora#or%o se )roce!er& a la e<#racc%($ - )rocesa'%e$#o !el ADN 5reerer%rse a )r&c#%ca 126. 20. Se es#+!%a$ 1 STRs 5'e!%a$#e FCR6, /+e so$ los reco'e$!a!os %$#er$ac%o$al'e$#e, - se real%7a +$ el !e )ol%acr%la'%!a! !es$a#+ral%7a$#e, se cara$ las '+es#ras - se !ea correr el el 5reer%rse a )r&c#%ca 12 - 16. 21. U$a "e7 real%7a!a la corr%!a se real%7a la #%$c%($ !e )la#a )ara re"elar los res+l#a!os 5reer%rse a )r&c#%ca 16.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. ^Q+9 #%)o !e e<#racc%($ !e ADN real%7ar:a a las '+es#ras !escr%#as e$ es#e la*ora#or%o 2. ^Es )os%*le e<#raer ADN !e las '+es#ras !e ca*ello . ^For /+9 se +#%l%7a$ so*res !e )a)el )ara e'*alar las '+es#ras - $o +$!as )l&s#%cas . ^Q+9 es el c8ele< 3. ^Q+9 o#ros #%)os !e 'arca!ores e$9#%cos se )+e!e$ +#%l%7ar . I$"es#%+e so*re los !a#os !e STRs )ara la )o*lac%($ ec+a#or%a$a. . Rela#e +$ caso ore$se a'oso e$ la 8%s#or%a, !o$!e se 8a-a$ +#%l%7a!o las )r+e*as !e ADN.
?I?LIOGRA6A B+!oJle B., S'%#8 ., More##% T., D%X%$$o . 2000. DNA #-)%$ )ro#ocolsK Molec+lar B%olo- a$! =ore$s%c A$al-s%s. Ea#o$ F+*l%s8%$. USA B+#ler .M. 2001. =ore$s%c DNA #-)%$. Aca!e'%c Fress. USA I$s#%#+#o Nac%o$al !e Me!%c%$a Leal - C%e$c%as =ore$ses. 1H. G+:a )ara la recolecc%($ - 'a$eo !e "es#%%os *%ol(%cos s+sce)#%*les !e a$&l%s%s e$9#%cos. La*ora#or%o !e DNA. Gr+)o !e B%olo:a =ore$se. D%recc%($ re%o$al Boo#a. Colo'*%a. Fe$ac%$o G. A. 2000 E$ l:$ead I$"es#%ac%($ e %')le'e$#ac%($ !e s%s#e'as !e %!e$#%%cac%o$ !e %$!%"%!+os )or #9c$%cas !e *%olo:a 'olec+lar, co$ es)ec%al reere$c%a a los es#+!%os )os#>'or#e'. 8##)K44JJJ.JJ%ecor).co'4a!$. U$%"ers%!a! !e B+e$os A%res. Are$#%$a
=<
a!e C., Tro77% _.E. 200. @a$!*oo o ore$s%c ser"%ces. =BI La*ora#or- F+*l%ca#%o$. Q+a$#%co. V%r%$%a. USA.
Práctica 1 MAL6ORMACIONES CONGÉNITAS INTRODUCCIN De$#ro !el co$ce)#o !e 'alor'ac%o$es se !e*e %$cl+%r #a'*%9$ los #ras#or$os +$c%o$ales, )or lo /+e se )+e!e !e%$%r +$a 'alor'ac%($ co$9$%#a co'o +$a a$or'al%!a! !e es#r+c#+ra, +$c%($ o 'e#a*ol%s'o, -a sea e$9#%ca'e$#e !e#er'%$a!a o el res+l#a!o !e la %$#erere$c%a a'*%e$#al !+ra$#e la "%!a e'*r%o$ar%a, e#al o )os#$a#al, - /+e )+e!e 'a$%es#arse e$ el 'o'e$#o !el $ac%'%e$#o o )os#er%or'e$#e. O#ros a+#ores )re%ere$ lla'arlas anoma"ías congénitas, )or/+e es#a !e$o'%$ac%($ %$cl+-e #a$#o las 'alor'ac%o$es co'o las al#erac%o$es cro'os('%cas 'e#a*(l%cas, e$lo*a$!o #o!a %rre+lar%!a! o !%scre)a$c%a e$ el !esarrollo $or'al. Las a$or'al%!a!es +$c%o$ales so$ ee')l%%ca!as )or errores %$$a#os !el 'e#a*ol%s'o, 8e'olo*%$o)a#:as, o re#raso 'e$#al. El es#+!%o !e las 'alor'ac%o$es co$9$%#as s+ele !es%$arse co'o Tera#olo:a )ero es )reer%*le +#%l%7ar el #9r'%$o DISMOR=OLOGjA, )ro)+es#o )or S'%#8, /+e se re%ere al es#+!%o !e las a$or'al%!a!es !el !esarrollo 'orol(%co, %$cl+-e$!o las )e/+eas 'alor'ac%o$es. La rec+e$c%a !e las 'alor'ac%o$es co$9$%#as es *as#a$#e ele"a!a s% se #%e$e e$ c+e$#a los $ac%!os '+er#os, los $%os /+e '+ere$ e$ el )er:o!o $eo$a#al, - los /+e so*re"%"e$ '&s all& !el )r%'er ao !e "%!a, se o*#%e$e +$a c%ra !e +$ ? !e los rec%9$ $ac%!os. Colec#%"a'e$#e, #o!os los !es(r!e$es e$9#%cos - !eec#os !el $ac%'%e$#o #%e$e$ +$a )re!o'%$a$c%a ':$%'a !e 30 )or 1000, e$ el $ac%'%e$#o. La )re!o'%$a$c%a )ro'e!%o !e 'alor'ac%o$es co$9$%#as, e$ el $ac%'%e$#o, e$ los )a:ses e$ !esarrollo es a)ro<%'a!a'e$#e !e 2>?, !a#o s%'%lar al !e los )a:ses %$!+s#r%al%7a!os 5M+#c8%$% e# al., 1HH %ao e# al., 1HH Cas#%lla &Lo)e7>Ca'elo, 10 ICBDMS, 11 Sa*or%o, 12 @ere!ero, 12 Del)or# e# al., 13 Ve$#er e# al., 13 @O /EMRO, 16. Al+$as 'alor'ac%o$es '+es#ra$ a')l%as "ar%ac%o$es eor&%cas. For ee')lo, los !eec#os !el #+*o $e+ral, al $ac%'%e$#o, so$ '+- )re"ale$#es e$ E%)#o 5@as8e', 1H6, C8%$a 5%ao e# al., 1H6, M9<%co 5M+#c8%$%, 1HH6 A'9r%ca Ce$#ral 5Sa*or%o, 126, '%e$#ras /+e la %s+ra la*%al - )ala#%$a so$ rec+e$#es e$#re las )o*lac%o$es A'er%$!%as - As%&#%cas 5%ao e# al., 1HH ICBDMS, 116 - '%cro#%a e$ Ec+a!or 5Cas#%lla & Or%ol%, 1H6. Las %$#eracc%o$es e$#re el a'*%e$#e - los ac#ores co$s#%#+c%o$ales +$!a'e$#a$ las "ar%ac%o$es o*ser"a!as e$ la rec+e$c%a e$#re )o*lac%o$es. E$ al+$os casos, s%$ e'*aro, los ac#ores a'*%e$#ales c+')le$ +$ rol %')or#a$#e, #al co'o el S:$!ro'e !el Alco8ol =e#al e$ Yr%ca !el S+r 5Bale#a, 1H6. Se e$#%e$!e )or etio"ogía el )+$#o !e )ar#%!a !e la ca!e$a !e aco$#ec%'%e$#os /+e lle"ar&$ %$al'e$#e a la a)ar%c%($ !e +$o o "ar%os !eec#os co$9$%#os e$ +$ e#o. La ca!e$a !e aco$#ec%'%e$#os es la patogenia - el c+a!ro %$al ser& la mani#estaci&n c"ínica !e" proceso. Los !eec#os co$9$%#os se !%"%!e$ e$ #res ra$!es r+)os se;$ s+ e#%olo:aK e$9#%ca 1? 5'o$o9$%ca ? o cro'os('%ca 10?6, a'*%e$#al 3? - !esco$oc%!a H2?. A)ro<%'a!a'e$#e !e ca!a 1000 $ac%!os "%"os #%e$e a$or'al%!a!es cro'os('%cas /+e co$!+ce$ a 'alor'ac%o$es co$9$%#as, re#raso 'e$#al - /o !es(r!e$es !e la !%ere$c%ac%($ se<+al. A+$/+e la 'a-or:a !e c+a!ros !%s'(r%cos !e e#%olo:a e$9#%ca se )ro!+ce$ co'o co$sec+e$c%a !e errores $o re)ara!os e$ la re)l%cac%($ !el ADN, se !e*e co$s%!erar #a'*%9$ /+e la e#%olo:a !e al+$os casos )ro!+c%!os )or la )rese$c%a !e +$ e$ o +$ cro'oso'a al#era!o )+e!e ser #a'*%9$ a'*%e$#al 5ae$#es '+#a9$%cos, c+-a acc%($ 8a*r:a /+e *+scarla a "eces e$ e$erac%o$es a$#er%ores6. E$ es#os casos, la al#erac%($ e$9#%ca $o es '&s /+e el %$%c%o !e la )a#oe$%a. ==
E<%s#e 8e#eroe$e%!a! #a$#o e#%ol(%ca co'o cl:$%ca e$ el )roceso !%s'oro9$%coK +$ '%s'o ac#or e#%ol(%co )+e!e !ar l+ar a c+a!ros cl:$%cos !%"ersos 5!e)e$!%e$!o !e la !os%s, el 'o'e$#o - la s+sce)#%*%l%!a! e$9#%ca !el e'*r%($6, - +$ '%s'o c+a!ro cl:$%co )+e!e ser )ro!+c%!o )or la acc%($ !e ac#ores e#%ol(%cos !%s#%$#os. El es+er7o co$+$#o !e la #era#olo:a - la e'*r%olo:a es#& a-+!a$!o a la co')re$s%($ !el e$('e$o !%s'oro9$%co. Es#e co$oc%'%e$#o, %')or#a$#e !es!e el )+$#o !e "%s#a *%o>'9!%co, )+e!e a!e'&s a*r%r $+e"as ":as e$ el reco$oc%'%e$#o !e ae$#es #era#o9$%cos !esco$oc%!os. E$ la s%+%e$#e #a*la se !e#alla$ al+$os !e los ae$#es reco$oc%!os co'o #era#(e$os 8+'a$os - e$#re )ar9$#es%s los eec#os a!"ersos /+e )ro!+ce$ es)ec%al'e$#e e$ el e#oK
Fact-r.$ /at.r#-$ • I$ecc%o$es • R+*9ola 5a*or#o, 'alor'ac%o$es ';l#%)les, ce+era, car!%o)a#:as, )re'a#+r%!a!6 • C%#o'ealo"%r+s 5re#ar!o 'e$#al, '%croceal%a, calc%%cac%($ %$#racra$eal, cor%ore#%$%#%s, )9r!%!a !e la a+!%c%($, !%%c+l#a! !el a)re$!%7ae6 • Far"o"%r+s 5e!e'a e#al6 • Fol%o"%r+s 5a*or#os es)o$#&$eos, e$ al+$os casos 'alor'ac%o$es co$9$%#as, )eso *ao, $%os )re'a#+ros6 • To7os#er 5les%o$es !e la )%el, 8%)o)las%a !e los '%e'*ros, a#ro%a cor#%cal, re#ar!o 'e$#al, '%croceal%a, cor%ore#%$%#%s, '%cro#al'os, $%s#a'+s - ca#ara#as6 • S:%l%s 5%$ecc%($ co$9$%#a, '+er#e $eo$a#al, 8e)a#o)le$o'eal%a, l%$oa!e$o)a#:a, )se+!o)ar&l%s%s6 • Fa)eras 5a*or#os es)o$#&$eos6 • E$er'e!a!es cr($%cas • D%a*e#es 'ell%#+s • =e$%lce#o$+r%a • @%)o#%ro%!%s'o • @%)er)las%a s+)rarre$al
Fact-r.$ .t.r#-$ • Ae$#es :s%cos • Ra!%ac%o$es %o$%7a$#es 5%$er#%l%!a!, '%croceal%a, re#raso 'e$#al, a*errac%o$es es#r+c#+rales cro'os('%cas, 'osa%c%s'o, '+#ac%o$es 9$%cas, )re!%s)os%c%($ al c&$cer, $&+sea, "('%#o, !ao a la "e%a o al #rac#o as#ro%$#es#%$al. E$ !os%s al#asK !es#r+cc%($ !el s%s#e'a %$'+$e, !el #e%!o $er"%oso - !el cere*ro6 • Ra-os +l#ra"%ole#a 5'+#ac%o$es )+$#+ales, c&$cer !e )%el6
=7
@%)er#er'%a 5e$ ora$%s'os e<)er%'e$#ales 8a re"ela!o e'*r%o#o<%c%!a!, )ar#%c+lar'e$#e !+ra$#e el es#a!:o !e )re%')la$#ac%($, eec#os :s%cos s%'%lares a a/+ellos !e %e*re al#a - la %$!+cc%($ !e ca#ara#as6 • =+er7as 'ec&$%cas • Ul#raso$%!o 5)+e!e aec#ar 'a#er%al *%ol(%co )or 8%)er#er'%a ca"%#ac%($, /+e )+e!e !aar es#r+c#+ras s+*cel+lares o es#r9s 'ec&$%co !%rec#o6 •
• Me!%ca'e$#os • Tal%!o'%!a 5!eor'%!a!es !e los '%e'*ros, a$o'al:as a+!%#%"as, a$or'al%!a!es $asales,
• • • • •
• • • • •
!eec#os !el l(*+lo 'e!%o !el )+l'($ !erec8o, 'alor'ac%($ car!%aca, es#e$os%s !+o!e$al o )%l(r%ca - a#res%as as#ro%$#es#%$ales6 Es#re)#o'%c%$a 5!e%c%e$c%as a+!%#%"as - !ao e$ el oc#a"o $er"%o cra$eal, o#o#o<%c%!a! e#al !el al 11?6 Te#rac%cl%$a 5aec#a al color !e la !e$#a!+ra6 C%cloosa'%!a 5!eec#os e$ las e<#re'%!a!es6 A$#ao$%s#as !el &c%!o (l%coK a'%$o)#er%$a, 'e#o#re
• @&*%#os • Alco8ol 5El S:$!ro'e !el Alco8ol%s'o =e#al %$cl+-e !%s'%$+c%($ !el coe%c%e$#e %$#elec#+al,
• • • •
re#raso !el crec%'%e$#o %$#ra+#er%$o, a$o'al:as oc+lares, a$o'al:as !e las ar#%c+lac%o$es )ro*le'as car!:acos6 Coca:$a 5!%s'%$+c%($ !el co')or#a'%e$#o %$#erac#%"o - )o*re res)+es#a ora$%7ac%o$al a los es#:'+los !el 'e!%o a'*%e$#e C%arr%llo 5re#raso !el crec%'%e$#o %$#ra+#er%$o6 S+s#a$c%as %$!+s#r%ales - oc+)ac%o$ales Merc+r%o or&$%co 5#o<%c%!a! e#al, !ao !el s%s#e'a $er"%oso ce$#ral6
@a*%#+al'e$#e los !eec#os co$9$%#os se clas%%ca$ e$ !os r+)osK al#erac%o$es %$!%"%!+ales !e la or'a o la es#r+c#+ra, - )a#ro$es o e$#%!a!es )ol%'alor'a#%"os.
ALTERACIO"ES I"(II(!ALES Se;$ la #er'%$olo:a !e S)ra$er 51H26 o*#e$%!a !el Co'%#9 !e E<)er#os !e la OMS 51H26 se #%e$e$ los s%+%e$#es co$ce)#osK
7-
1. a-r/aci#$ Deec#o es#r+c#+ral 'acrosc()%co !e +$ (ra$o, )ar#e !e +$ (ra$o o +$a re%($ !el ora$%s'o, /+e res+l#a !e +$ )roceso !e !esarrollo %$#r:$seca'e$#e a$or'al. E. ec#ro):a !e la "e%a, ra/+%s/+%s%s. 2. (.-r/aci#$ A$o'al:a !e la or'a o la )os%c%($ !e +$a )ar#e !el ora$%s'o, ca+sa!a )or +er7as 'ec&$%cas %$#ra+#er%$as, /+e !%s#ors%o$a$ las es#r+c#+ras $or'ales. E. !eor'ac%($ !el ol%o8%!ra'$%os. . (i$r%ci#$ Deec#o 'orol(%co o es#r+c#+ral !e +$ (ra$o, )ar#e !e +$ (ra$o o +$a re%($ !el ora$%s'o, res+l#a$#e !e +$a %$#erere$c%a e$ +$ )roceso !e !esarrollo /+e or%%$al'e$#e era $or'al. E. A'%o)las%a co$9$%#a, !%sr+)c%($ !e #e%!os $or'al'e$#e !esarrolla!os )or *a$!as a'$%(#%cas. S% *%e$ el co$ce)#o !e !eor'ac%($ $o orece !+!as, e$ al+$os casos )+e!e $o ser e"%!e$#e la !%ere$c%a e$#re 'alor'ac%($ - !%sr+)c%($. El co$ce)#o !e !%sr+)c%($ s+re )ara e<)l%car c+a!ros co'o los )ro!+c%!os )or *r%!as a'$%(#%cas o )or %$#err+)c%o$es e$ el a)or#e sa$+:$eo a +$a 7o$a e'*r%o$ar%a !e#er'%$a!a, )ero s% se es es#r%c#o co$ la !e%$%c%($, c+al/+%er !eec#o co$9$%#o )ro!+c%!o )or la acc%($ !e +$ ae$#e #era#o9$%co, sea c+al +ere s+ 'eca$%s'o )a#o9$%co, ser& +$a !%sr+)c%($. O#ros co$ce)#os !e %')or#a$c%a so$K ariaci#$ Des"%ac%($ o l+c#+ac%($ !e$#ro !e lo /+e se co$s%!era $or'al, es !ec%r ca'*%os /+e $o co')ro'e#e$ $% la 'orolo:a, $% la +$c%($. For ee')loK $ar%7 c8a#a o a+%lea #alla )e/+ea o #alla al#a.
(..ct-$ Es la %')erecc%($ o la al#a !e c+al%!a!es $or'ales, es !ec%r #o!o lo /+e se a)ar#a !e lo $or'al - !e s+s "ar%ac%o$es. Se re%ere #a'*%9$ a las !es"%ac%o$es cel+lares o 'e#a*(l%cas /+e al#era$ la +$c%($. Ee')losK el al*%$%s'o, los /+%s#es *ra$/+%ales, la alca)#o$+r%a. -#$tr-$ia - -#$tr%-$ Deor'ac%($ %$s(l%#a o ra"e, e$eral'e$#e %$co')a#%*le co$ la "%!a. For ee')loK acr&$eo, acar!%o, a$e$c9alo. La rec+e$c%a !e las a$o'al:as es 'a-or !e la /+e se )+e!e %'a%$ar se es#%'a /+e las )os%*%l%!a!es !e 'alor'ac%o$es e$ el rec%9$ $ac%!o so$ !e alre!e!or !el 1 )or 13 es#a %$c%!e$c%a es '+c8o 'a-or s% se area$ las a$o'al:as 'e$ores - al#erac%o$es co$9$%#as !el 'e#a*ol%s'o. S%$ e'*aro las es#a!:s#%cas $o so$ co$cor!a$#es - !e)e$!e$ !e '+c8os ac#ores co'o los rac%ales, eor&%cos, a'*%e$#ales, e#c., lo /+e ocas%o$a /+e '%e$#ras )ara al+$os %$"es#%a!ores el $;'ero !e a$o'al:as co$9$%#as al 'o'e$#o !el $ac%'%e$#o es !el or!e$ !el 1 )or 13, )ara o#ros lle+e al 1 )or - s% a es#as c%ras se s+'a$ las 8alla!as e$ los a*or#os, las )os#er%ores al $ac%'%e$#o - las /+e se )rese$#a$ !+ra$#e el !esarrollo, las c%ras se ele"a$ al ? - 8as#a el 1? 5Cor!ero, 13 6.
E"TI(A(ES POLIALFORATIAS S% se )+!%ese se+%r #o!o el )roceso )a#o9$%co, !es!e la acc%($ !el ae$#e e#%ol(%co 8as#a la 'a$%es#ac%($ cl:$%ca, ;$%ca'e$#e e<%s#%r:a +$ #%)o !e e$#%!a! 'alor'a#%"aK la sec+e$c%a. Se )+e!e$ !%ere$c%ar !os #%)os !e sec+e$c%asK la 'o$o#r()%ca - la )le%o#r()%ca, !e)e$!%e$!o !e s% la 'ol9c+la, c9l+las o #e%!o al#era!o e$ )r%'era %$s#a$c%a )or la acc%($ !el ae$#e ca+sal )rese$#a$ !+ra$#e el )er:o!o e'*r%o$ar%o +$a acc%($ local 5e$ c9l+las, #e%!os + (ra$os )r(<%'os e$#re s:6 o '+l#%ocal.
7,
Los c+a!ros co$ ';l#%)les !eec#os co$9$%#os 5!os o '&s6 )+e!e$ ser clas%%ca!os e$ al+$a !e las s%+%e$#es se%s e$#%!a!es )ol%'alor'a#%"as /+e $o so$ co')le#a'e$#e e I$cl+-e #o!os los c+a!ros cl:$%cos e$ los /+e se 8a )o!%!o %!e$#%%car +$a ca+saK S:$!ro'es #era#o9$%cos 5e'*r%oe#o)a#:as )or ae$#es e<#er$os6K el e'*r%($ 8a es#a!o e<)+es#o a +$ ae$#e #era#o9$%co !+ra$#e +$ )er:o!o s+sce)#%*le !e la es#ac%($. S:$!ro'es cro'os('%cos 5cro'oso'o)a#:as6K e<%s#e +$a al#erac%($ e$ el $;'ero o la or'a !e al+$o !e los cro'oso'as !el )ro!+c#o !e la es#ac%($. S:$!ro'es 9$%cos 5e$o)a#:as6K se !e#ec#a 5a$&l%s%s !e ADN6 -4o se !e!+ce 5a$&l%s%s e$eal(%co6 -4o se %$%ere 5%!e$#%%cac%($ cl:$%ca )or s%'%l%#+! co$ casos )+*l%ca!os6 +$a '+#ac%($ 9$%ca. *6 S:$!ro'es !e e#%olo:a 8e#ero9$ea.> Se #ra#a !e e$#%!a!es )+ra'e$#e cl:$%cas. Es#e r+)o - el s%+%e$#e co$#%e$e$ c+a!ros /+e se acerca$ '+c8o a la !e%$%c%($ !e !%a$(s#%co. c6 S:$!ro'es !e e#%olo:a !esco$oc%!a.> Se #ra#a !e e$#%!a!es cl:$%cas. C+a$!o se #e$a$ !a#os so*re s+ )os%*le e#%olo:a )asar&$ a or'ar )ar#e !e al+$o !e los !os r+)os a$#er%ores !e s:$!ro'es, !e)e$!%e$!o !e s% s+ e#%olo:a es co';$ 5s:$!ro'es !e e#%olo:a co$oc%!a6 o $o )+e!e as+'%rse /+e lo sea )ara #o!os los c+a!ros 5s:$!ro'es !e e#%olo:a 8e#ero9$ea6.
POLIALFORA(OS "O E"C!A(RA,LES (> E$ es#e r+)o se %$cl+-e$ a #o!os a/+ellos )ol%'alor'a!os /+e $o )+e!e$ ser clas%%ca!os e$ $%$+$o !e los r+)os a$#er%ores. 7/
La l%#era#+ra !e%$e co'o !%a$(s#%co aK `+$ c+a!ro !e !eec#os co$9$%#os )rese$#es e$ +$ '%s'o %$!%"%!+o /+e, co$s%!era!os lo*al'e$#e, %$or'a %$e/+:"oca'e$#e so*re s+ e#%olo:a ;$%ca 5s% la e#%olo:a es !esco$oc%!a, !e*e e<%s#%r +$ a')l%o co$se$so e$ la l%#era#+ra so*re s+ +$%or'%!a! !e )rese$#ac%($ cl:$%ca6 - )er'%#e el acceso a %$or'ac%($ 5s%e')re /+e e<%s#a6 so*re )ro$(s#%co )os%*%l%!a!es !e re)e#%c%($ - !e !e#ecc%($ )re$a#al.` Se;$ es#a !e%$%c%($, se !%s)o$!r& !e +$ !%a$(s#%co ;$%ca'e$#e c+a$!o se )+e!a e$c+a!rar +$ c+a!ro !e !eec#os ';l#%)les e$ +$ s:$!ro'e !e e#%olo:a co$oc%!a. S% se lora %!e$#%%car +$ s:$!ro'e !e e#%olo:a 8e#ero9$ea o !esco$oc%!a, se es#ar& '+- cerca !e +$ !%a$(s#%co, '%e$#ras /+e s% solo se co$s%+e e$c+a!rarlo e$ al+$a !e las e$#%!a!es res#a$#es, se #e$!r& ;$%ca'e$#e +$a *+e$a reere$c%a !escr%)#%"a.
DIAGNSTICO GENÉTICO A$#e +$ )ac%e$#e co$ +$ c+a!ro !e !eec#os co$9$%#os solo 8a- +$a 'a$era !e %$#e$#ar o*#e$er +$ !%a$(s#%coK ac+'+lar #o!a la %$or'ac%($ !escr%)#%"a $ecesar%a. La '%s'a /+e !e*e %$cl+%r !a#os so*re la 8%s#or%a a'%l%ar, la 8%s#or%a es#ac%o$al, la )ro)%a !escr%)c%($ )or'e$or%7a!a !el c+a!ro - los res+l#a!os !e los a$&l%s%s co')le'e$#ar%os 5car%o#%)o, $ecro)s%a, serolo:a, e#c.6. U$a !e las or'as !e ora$%7ar es#a %$or'ac%($ se )+e!e o*ser"ar e$ el s%+%e$#e c+a!ro s%$()#%coK Fac%e$#e co$ !eec#os co$9$%#os @%s#or%a a'%l%ar @%s#or%a es#ac%o$al E
Descr%)c%($
Clas%%cac%($
Re"%s%($ !e la l%#era#+ra
R%eso !e re e#%c%($
D%a$(s#%co re$a#al
De#ecc%($ re$a#al
Fro$(s#%co
Tra#a'%e$#o
Es#r+c#+rac%($ !e r+)os 8o'o9$eos E)%!e'%olo:a Co')or#a'%e$#o )o*lac%o$al
=ac#ores !e r%eso Fre"e$c%($ )r%'ar%a
Fre"e$c%($ sec+$!ar%a
Fre"e$c%($ #erc%ar%a
7#
=+e$#eK Sal"a!or ., Carrera .M. 13. S:$!ro'es Co$9$%#os Malor'a#%"os
L+eo !el )roceso !e !%a$(s#%co, los 8ec8os '9!%cos !%s)o$%*les so$ !%sc+#%!os co$ el )ac%e$#e - /o la a'%l%a, e$ el )roceso !el co$seo e$9#%co, el c+al !e*e ser $o sola'e$#e re#ros)ec#%"o, s%$o #a'*%9$ )ros)ec#%"o. =%$al'e$#e s% el caso as: lo re/+%ere se 8ar& la %$#er"e$c%($ #era)9+#%ca a!ec+a!a - el res)ec#%"o a)o-o )s%cosoc%al. E$#re los es#+!%os !e 'alor'ac%o$es co$9$%#as real%7a!os e$ el Ec+a!or se )+e!e c%#ar el lle"a!o a ca*o e$ la 'a#er$%!a! !el @os)%#al Doce$#e `Sa$ V%ce$#e !e Fa;l` !e la c%+!a! !e C+e$ca - c+-os !a#os +ero$ )+*l%ca!os e$ 13. D+ra$#e los 13 aos !e reco)%lac%($ !e %$or'ac%($ se a#e$!%ero$ .0 )ar#os, se e$co$#r( 'or#al%!a! )er%$a#al !e 10 $%os 10 !e ellos +ero$ $ecro)s%a!os, !e 9s#os, 3 +ero$ 'or#%$a#os - 1 allec%ero$ !+ra$#e los c%$co )r%'eros !:as !e "%!a. E$ los 10 casos es#+!%a!os se e$co$#raro$ 20 'alor'ac%o$es, !e las c+ales, 1 +ero$ !e %')or#a$c%a - !e 'e$or s%$%%cac%($, s%')les "ar%ac%o$es o 'alor'ac%o$es /+e $o co')ro'e#:a$ la +$c%($ or&$%ca, )or lo /+e +ero$ !escar#a!as. Des)+9s !e al+$os a$&l%s%s se lle( a la co$cl+s%($ /+e la 8%)o$+#r%c%($ - la a$o<%a +ero$ los !os ac#ores e#%ol(%cos !e 'a-or %')or#a$c%a. Se co$oce /+e e$ los )a:ses e$ !esarrollo 8a$ $ac%!o '&s !e !os #erc%os !e $%os e$ el &'*%#o '+$!%al. S% la %$c%!e$c%a !e los !eec#os !e $ac%'%e$#o e$ es#os )a:ses es al 'e$os %+al a a/+ella !e los )a:ses %$!+s#r%al%7a!os, se )+e!e es#%'ar /+e al 'e$os . '%llo$es !e $%os, co$ !eec#os !e $ac%'%e$#o, $ace$ a$+al'e$#e e$ los )a:ses e$ !esarrollo. For lo /+e es %$!%s)e$sa*le /+e los o*%er$os, ONGs, - o#ras %$s#%#+c%o$es !e sal+!, reco$o7ca$ la $eces%!a! !e es#a*lecer ser"%c%os %$#era!os !e e$9#%ca, %$cl+-e$!o "%%la$c%a !e !eec#os !e $ac%'%e$#o, e$ #o!os los s%s#e'as !e c+%!a!o !e la sal+! 5@O /AOFBD, 16. Co$ el o*e#o !e "alorar el es#a!o !e los ser"%c%os !e e$9#%ca e$ los )a:ses e$ ":as !e !esarrollo, la Ora$%7ac%($ M+$!%al !e la Sal+! 5@O, orl! @eal#8 Ora$%7a#%o$6 - la Al%a$7a !e las Ora$%7ac%o$es M+$!%ales )ara a Fre"e$c%($ !e Deec#os !el Nac%'%e$#o 5AOFD6 re+$%ero$ a +$ r+)o !e e<)er#os e$ e$9#%ca '9!%ca /+%e$es #ra*aa$, o es#&$ a'%l%ar%7a!os co$ los )ro*le'as soc%ales, eco$('%cos - !e sal+! !e los )a:ses e$ !esarrollo. S+ )ro)(s%#o +e 8acer reco'e$!ac%o$es )ara la +#+ra %')le'e$#ac%($ !e )rora'as )ara el 'a$eo - )re"e$c%($ !e !es(r!e$es e$9#%cos !eec#os !el $ac%'%e$#o e$ la a#e$c%($ )r%'ar%a !e sal+! - $%"eles co'+$%#ar%os e$ a/+ellos )a:ses 5@O/AOFBD, 16. Es#e Gr+)o !e Co$s+l#ores reco'%e$!a es)ec:%ca'e$#e /+e los M%$%s#er%os !e Sal+! !e los )a:ses e$ !esarrollo !%s#r%*+-a$ rec+rsos )ara los )rora'as !e e$9#%ca - es#a*le7ca$ +$a O%c%$a !e Ser"%c%os Ge$9#%cos !e$#ro !e s+ es#r+c#+ra a!'%$%s#ra#%"a, co$ el %$ !e !e#er'%$ar la e<%s#e$c%a !e !es(r!e$es e$9#%cos, !eec#os !el $ac%'%e$#o e$ la )o*lac%($ - el es#a!o !e los )rora'as e<%s#e$#es )ara s+ co$#rol. La %$"es#%ac%($ !e*er ser %$ce$#%"a!a )ara )ro"eer 'eores !a#os !e la )re!o'%$a$c%a - los #%)os !e !eec#os !el $ac%'%e$#o, e$er'e!a!es e$9#%cas - )re!%s)os%c%o$es a e$er'e!a!es co'+$es a $%"el $ac%o$al. A!%c%o$al'e$#e, !e*e co$s%!erarse la %$or'ac%($ acerca !el %')ac#o /+e los !es(r!e$es e$9#%cos - los !eec#os !el $ac%'%e$#o #%e$e$ e$ los %$!%"%!+os, e$ s+ a'%l%a - e$ las co'+$%!a!es. El c+rr:c+lo a $%"el !e )rera!o !e*e 'o!er$%7arse - la e$9#%ca !e*e %$cl+%rse e$ la or'ac%($ '9!%ca. La e!+cac%($ e$ es#e as)ec#o !e*er:a co'e$7ar e$ el cole%o 5@O /AOFBD, 16.
O?ETIOS 1. Co$ocer el or%e$ - los #%)os !e a$o'al:as co$9$%#as.
75
2. A)re$!er a reco$ocer al+$os s:$!ro'es a #ra"9s !el es#+!%o !e las 'alor'ac%o$es co$9$%#as '&s rec+e$#es e$ $+es#ro 'e!%o.
PROCEDIMIENTO A$al%7ar las s%+%e$#es o#ora:as o sl%!es - reco$ocer al+$os !e los !eec#os co$9$%#os +%&$!ose e$ la *%*l%ora:a !%s)o$%*le. A$o#ar el $o'*re !e las 'alor'ac%o$es.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO E$ los s%+%e$#es casos !%a$os#%/+e el s:$!ro'e corres)o$!%e$#e se;$ los !a#os cl:$%cos /+e )rese$#eK 1. U$a )ac%e$#e se acerca )or %')os%*%l%!a! !e #e$er 8%os - a*or#os re)e#%!os, el a$&l%s%s !er'a#ol:%co %$!%ca +$ $;'ero !ac#%lar #o#al !e 1, $o '+es#ra s%$os !e re#ar!o 'e$#al. E$#re s+s carac#er:s#%cas :s%cas se )+e!e$ 'e$c%o$ar las s%+%e$#esK #alla *aa, c+ello cor#o e %')la$#ac%($ *aa !e oreas. Al real%7ar el car%o#%)o corres)o$!%e$#eK ^Q+9 res+l#a!o c%#oe$9#%co se es)erar:a 2. U$ 8o'*re s%$ $%$+$a o#ra carac#er:s#%ca /+e el )l%e+e )al'ar #ra$s"erso e$ la )al'a !e s+s 'a$os se acerca a co$s+l#a '9!%caK ^Se )o!r:a )e$sar e$ la )rese$c%a !e al;$ s:$!ro'e
?I?LIOGRA6A Bale#a A. 1HH =e#al alco8ol s:$!ro'e r%e %$ So+#8 Ar%ca. La$ce# 32K23. Cas#%lla E.E., Or%ol% I.M. 1H Fre"ale$ce ra#es o '%cro#%a %$ So+#8 A'er%ca. I$# E)%!e'%ol. 13K>H. Cas#%lla E.E., Lo)e7>Ca'elo .S. 10 T8e S+r"e%lla$ce o B%r#8 Deec#s %$ So+#8 A'er%caK I. T8e Searc8 or T%'e Cl+s#ersK E)%!e'%cs. A!. M+#ae$es%s 10 )11>210. Cor!ero L. 13 A$o'al:as Co$9$%#as. =ac+l#a! !e Me!%c%$a. De)ar#a'e$#o !e Fa#olo:a. U$%"ers%!a! !e C+e$ca. C+e$ca. Del)or# S.D., C8r%s#%a$so$ A.L. 13 Co$e$%#al a$o'al%es %$ *lac So+#8 Ar%ca$ l%"e*or$ $eo$a#es a# a$ +r*a$ aca!e'%c 8os)%#al. S Ar Me! H3K11>13. Eo7c+e ., A$#%c8 ., Balles#a =., Go-a$es V., I7/+%er!o L., Ta')ar%llas M., Ta"ares A. 1H Ge$9#%ca M9!%ca. E!%#or%al ESFAS. Barcelo$a. @as8e' N. 1H Fo)+la#%o$ %$!%ces a$! 'arers o "al+e as )ros)ec#%"e 'o$%#ors or )re"e$#%o$ o e$e#%c 'or*%!%#-. Frocee!%$s =%rs# I$#er$a#%o$al Co$ress o$ Fre"e$#a*le As)ec#s o Ge$e#%c Mor*%!%#-. Ca%ro, Al>A8ra' Fress, 1H Ca%ro.
7)
@ere!ero L. 12 Co')re8e$s%"e $a#%o$al e$e#%c )rora' %$ a !e"elo)%$ co+$#r->C+*a. I$K +l%e" A, Gree$!ale , Fe$c8as7a!e8 VB, Fa+l N 5E!s6K Ge$e#%c Ser"%ces Fro"%s%o$K A$ I$#er$a#%o$al Fers)ec#%"e. B%r#8 Deec#s Or% Ar# Ser. 2H56K32>3. @+s#a!# A..C. 1H1 Malor'ac%o$es Co$9$%#as. SERIE ONIS. Me!%c%$a )ara )os#ra!+a!os . E!%#or%al El Ma$+al Mo!er$o, S.A. M9<%co. ICBDMS 11 Co$e$%#al 'alor'ac%#o$s orl!J%!e. A Re)or# ro' #8e I$#er$a#%o$al Clear%$8o+se or B%r#8 Deec#s Mo$%#or%$ S-s#e's, Else"%er, A's#er!a'. L-o$s o$es . 1 S'%#8s Reco$%7a*le Fa##er$s o @+'a$ Malor'a#%o$. .B. Sa+$!ers Co')a$-. F8%la!el)8%a. M+#c8%$%c O., L%ser R., Ra*%$s- V. 1HH T8e Me<%ca$ Frora' o Re%s#ra#%o$ a$! E)%!e'%olo%c S+r"e%lla$ce o E<#er$al Co$e$%#al Malor'a#%o$s 5SFA6. Sal+! F;*l%ca Me< 1HH 0KHH>100. Sa*or%o M. 12 E<)er%e$ce %$ )ro"%!%$ e$e#%c ser"%ces %$ Cos#a R%ca. I$K +l%e" A, Gree$!ale , Fe$c8as7a!e8 VB, Fa+l N 5E!s6K Ge$e#%c Ser"%ces Fro"%s%o$K A$ I$#er$a#%o$al Fers)ec#%"e. B%r#8 Deec#s Or% Ar# Ser 12 2H56> 102. Sal"a!or ., Carrera .M. 13 S:$!ro'es Co$9$%#os Malor'a#%"os. Colecc%($ !e Me!%c%$a Ma#er$o>=e#al. De)ar#a'e$#o !e O*s#e#r%c%a - G%$ecolo:a. I$s#%#+#o U$%"ers%#ar%o De20. @O/EMRO 1 Co''+$%#- Co$#rol o Ge$e#%c a$! Co$e$%#al D%sor!ers. Tec8$%cal F+*l%ca#%o$s Ser%es, No. 2. Ale11. %ao . e# al. 1HH Co$sec+#%"e #8ree>-ear *%r#8 !eec#s 'o$%#or%$ %$ S%c+a$% )ro"%$ce. @ere!%#- a$! D%sease 1HH 3526K3>H.
79
Práctica 12
CONSULTA GENÉTICA Y ELA?ORACIN DE LA HISTORIA GENÉTICA INTRODUCCIN M+c8os s:$!ro'es so$ rela#%"a'e$#e raros - la Ge$9#%ca es +$a ra$ a-+!a !+ra$#e el !%a$(s#%co - el asesora'%e$#o e$9#%co !e los %$!%"%!+os aec#a!os - !e s+ a'%l%a. Es )or es#o la %')or#a$c%a !e co$s+l#ar al '9!%co e$e#%s#a co'o +$a a-+!a )ara el 'a$eo !e )ac%e$#es co$ s:$!ro'es /+e )rese$#a$ ';l#%)les a$o'al:as. Fara !ar +$ asesora'%e$#o e$9#%co correc#o es %$!%s)e$sa*le #e$er el !%a$(s#%co e
7<
No#aK el %$#erroa#or%o !e*e ser *%!%recc%o$al, es !ec%r !e*e reca*ar %$or'ac%($ !e a'*os la!os !e la a'%l%a, lo /+e )+e!e re"elar %$or'ac%($ ;#%l - e"%#a se$#%!o !e c+l)a*%l%!a! o ac+sac%o$es !%r%%!as a +$a )erso$a. Es %')or#a$#e )o$er c%er#o 9$as%s e$ e$co$#rar c+al/+%er a$o'al:a /+e )+e!a #e$er +$ co')o$e$#e e$9#%co o /+e )+e!a ser s+es#%"a !e +$ s:$!ro'e o asoc%ac%($ rele"a$#es. E$ la s%+%e$#e #a*la se !e#alla +$ #%)o !e a$a'$es%s )or a)ara#os )ara la ela*orac%($ !e la 8%s#or%a e$9#%caK
ANAMNESIS POR APARATOS Sistema/aparato
Detalles a indagar
Car!%o"asc+lar
car!%o)a#:as co$9$%#as, 8%)er#e$s%($, 8%)erl%)%!e'%a, e$er'e!a!es "asc+lares, car!%o)a#:a %s/+9'%ca, %c#+s
Res)%ra#or%o
%$ecc%o$es res)%ra#or%as rec%!%"a$#es, as'a, *ro$/+%#%s
Gas#ro%$#es#%$al
a#res%a 5a c+al/+%er $%"el6, :s#+las 5E. #ra/+eo eso&%ca6, !%arrea rec%!%"a$#e, es#re%'%e$#o cr($%co
Ge$%#o+r%$ar%o
e$%#ales a'*%+os, a$o'al:as !e la +$c%($ re$al
M;sc+lo es/+el9#%co
ca/+e<%a o !e*%l%!a! '+sc+lar
Ne+rol(%co
al#erac%o$es !el !esarrollo, a+!%c%($, "%s%($, coor!%$ac%($ co$"+ls%o$es WWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWW =+e$#eK o$es E., Morr%s A. 1. Lo ese$c%al e$ C9l+la - e$9#%ca Far#e IIK Ge$9#%ca M9!%ca.
U$ as)ec#o %')or#a$#e !e$#ro !el asesora'%e$#o e$9#%co es el relac%o$a!o co$ la !e#ecc%($, #ra#a'%e$#o - )re"e$c%($ !el c&$cer. Es#e )roceso rec+e$#e'e$#e se %$%c%a co$ el rela#o )or )ar#e !el )ac%e$#e !e la k8%s#or%a !el c&$cerk e$ el &'*%#o %$!%"%!+al co'o a'%l%ar, es !ec%r los s:$#o'as /+e le lle"aro$ a sos)ec8ar !e c&$cer, la or'a e$ la c+al el !%a$(s#%co %$al'e$#e +e real%7a!o, el 9<%#o o el racaso !el #ra#a'%e$#o. El )ro)(s%#o !e o*#e$er es#a %$or'ac%($ es !e#er'%$ar la )ro*a*%l%!a! !e /+e el )ac%e$#e #e$a +$ s:$!ro'e 8ere!%#ar%o !e c&$cer. A+$/+e la %$or'ac%($ '&s rele"a$#e e$ #9r'%$os !e r%eso, #%e$e /+e "er co$ la )rese$c%a !e c&$cer e$#re )ar%e$#es !e )r%'ero - se+$!o ra!o !e co$sa$+%$%!a!, la 8%s#or%a e$9#%ca e$ c&$cer #:)%ca'e$#e se e<#%e$!e #res o '&s e$erac%o$es - rec+e$#e'e$#e %$cl+-e$ )ar%e$#es !e #ercer ra!o !e co$sa$+%$%!a!. Al+$as es#ra#e%as e$erales )ara ela*orar +$a 8%s#or%a !e c&$cer so$ las s%+%e$#esK
O*#e$er la co$%r'ac%($ !el !%a$(s#%co !el #+'or I$cl+%r 8alla7os ca#aloa!os co'o $o 'al%$os E<#e$!er el &r*ol e$eal(%co !e#alla$!o e$ lo )os%*le ca!a !%a$(s#%co !e c&$cer No !esc+%!ar a los )ar%e$#es $o aec#a!os To'ar e$ co$s%!erac%($ la e
7=
A-+!ar a los %$!%"%!+os a %!e$#%%car es#ra#e%as )ara a')l%ar la 8%s#or%a U#%l%7ar la 8%s#or%a co'o +$a 8erra'%e$#a )s%cosoc%al Es#a$!ar%7ar la $o'e$cla#+ra !el &r*ol e$eal(%co e$oca!o e$ casos !e c&$cer Dec%!%r /+e %$or'ac%($ $o ser& %$cl+%!a e$ el &r*ol e$eal(%co Re"%sar las e$ealo:as co$ los )ac%e$#es o s+s a'%l%ares
O?ETIOS 1. Co$ocer los )asos )r%$c%)ales !+ra$#e la co$s+l#a e$9#%ca 2. A)re$!er a ela*orar +$a 8%s#or%a e$9#%ca co')le#a
PROCEDIMIENTO Ela*ore +$a 8%s#or%a e$9#%ca !e ac+er!o a los s%+%e$#es )ar&'e#rosK
=ec8a No'*re - =%l%ac%($ 5!%recc%o$es e
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. D+ra$#e +$a co$s+l#a e$9#%ca /+9 )r+e*as !e la*ora#or%o 'a$!ar:a a real%7ar )ara o*#e$er +$ !%a$(s#%co se+ro - )or /+9 2. Ela*ore +$a l%s#a !e #res #ras#or$os e$9#%cos !el oo, o:!o, 8+esos - el #e%!o co$+$#%"o, el s%s#e'a $er"%oso ce$#ral, el a)ara#o as#ro%$#es#%$al, el a)ara#o e$%#o+r%$ar%o - la sa$re.
?I?LIOGRA6A Cass%!- S.B., Alla$so$ .E. 2001 Ma$ae'e$# o Ge$e#%c S-$!ro'es. A o8$ %le- So$s, I$c. F+*l%ca#%o$. NeJ _or. ).. o$es E., Morr%s A. 1 Lo ese$c%al e$ C9l+la - e$9#%ca. Far#e IIK Ge$9#%ca '9!%ca. Ca):#+lo . La co$s+l#a e$9#%ca. @arco+r#, I$c. Ma!r%!. )). 1>131. Sc8$e%!er . 2002 Co+$sel%$ a*o+# Ca$cer. S#ra#e%es or Ge$e#%c Co+$sel%$. C8a)#er K Collec#%o$ a$! I$#er)re#a#%o$ o Ca$cer @%s#o%res. Seco$! E!%#%o$. A o8$ %le- So$s, I$c. F+*l%ca#%o$. NeJ _or. )). 1, 12>1.
77
Práctica 15
SEPARACIN DE PROTENAS INTRODUCCIN Fara o*#e$er %$or'ac%($ acerca !e la es#r+c#+ra o +$c%($ !e +$a )ro#e:$a )ar#%c+lar es $ecesar%o a%slarla - )+r%%carla a$#es !e real%7ar a$&l%s%s a!%c%o$ales. Los '9#o!os !e )+r%%cac%($ !e )ro#e:$as se )+e!e$ !%"%!%r e$ !os ca#eor:asK preparatorios y ana"íticos.
Ce*&!i'gaci3*$ Ce$#r%+ac%($ !%ere$c%alK Nor'al'e$#e, el )la$#ea'%e$#o '&s se$c%llo es la se)arac%($ )or ce$#r%+ac%($, co'e$7a$!o co$ "alores *aos !e g 5)rece$#r%+ac%($6. E$ la )r&c#%ca, s(lo se )+e!e$ se)arar as: c9l+las /+e '+es#re$ ra$!es !%ere$c%as !e #a'ao, al 'e$os !e 10 "eces 5)or ee')lo, )la/+e#as, '+c8o '&s )e/+eas /+e las res#a$#es c9l+las sa$+:$eas6. E$ el caso !e sa$re co$ a$#%coa+la$#e, a 200 g los er%#roc%#os se!%'e$#a$ e$ la 7o$a %$er%or, los le+coc%#os a)arece$ e$ la %$#erase - /+e!a co'o so*re$a!a$#e +$ )las'a r%co e$ )la/+e#as 5 P4P 6. Se )+e!e )re)arar )las'a )o*re e$ )la/+e#as 5FFF6 e')lea$!o 'a-or "eloc%!a! 5alre!e!or !e .000 g 6. Ce$#r%+ac%($ 7o$al o !e "eloc%!a! !e se!%'e$#ac%($K Se +sa$ 'e!%os /+e or'a$ +$ ra!%e$#e !e !e$s%!a!, lo /+e a"orece la co$ce$#rac%($ !e ca!a #%)o cel+lar e$ +$a *a$!a o 7o$a es#rec8a. El ra!%e$#e !e !e$s%!a! se e$era, a$#es !e aa!%r la '+es#ra 5ra!%e$#e )reor'a!o6, 'e!%a$#e "ar%as !%sol+c%o$es !e !%s#%$#a co$ce$#rac%($ !e +$ co')+es#o a!ec+a!o. La )re)arac%($ )+e!e 8acerse !e or'a 'a$+al 5!a$!o l+ar a +$ ra!%e$#e !%sco$#%$+o6 o e')lea$!o +$ a)ara#o #orma!or !e gra!ientes 5ra!%e$#e co$#%$+o6. Co$ es#a #9c$%ca se co$s%+e, )or ee')lo, se)arar #o!os los #%)os cel+lares sa$+:$eos, )+r%%car es)er'a#o7o%!es "%a*les, se)arar c9l+las "%a*les - $o "%a*les !e #e%!os !esarea!os - '+es#ras co$ c9l+las e$ s+s)e$s%($, e#c. Ul#race$#r%+ac%($K Co$ el !esarrollo ac#+al !e las +l#race$#r:+as, se )+e!e$ e$erar +er7as ce$#r:+as 58as#a 300.000 "eces 'a-ores /+e la +er7a !e la ra"e!a!6, )ro"oca$!o la se!%'e$#ac%($ !e 'acro'ol9c+las.
C!o%a&og!a'+a$ Me!%a$#e es#a #9c$%ca se )+e!e racc%o$ar +$a 'e7cla !e co')o$e$#es !%s+el#os e$ +$a s+s#a$c%a, co$or'e se !es)la7a$ a #ra"9s !e al;$ #%)o !e 'a#r%7 )orosa. @a- !os ases al#er$a#%"as a las c+ales )+e!e$ asoc%arse los co')o$e$#es !e la 'e7claK =ase '("%lK co$#%e$e el sol"e$#e /+e se !es)la7a -
,--
=ase %$'("%lK co$s#a !e la 'a#r%7 a #ra"9s !e la c+al se !es)la7a el sol"e$#e. C+a$#o 'a-or sea la a%$%!a! !e +$a 'ol9c+la )ar#%c+lar )or el 'a#er%al !e +$a 'a#r%7, '&s le$#o ser& s+ )aso a #ra"9s !e la col+'$a. E<%s#e$ "ar%os #%)os !e cro'a#ora:aK )or %$#erca'*%o !e %o$es, )or %l#rac%($ e$ el, )or a%$%!a!, e#c.
Es0ec&!o'o&o%e&!+a$ El es)ec#roo#('e#ro se +sa )ara !e#er'%$ar la ca$#%!a! !e )ro#e:$a o &c%!o $+cle%co e$ +$a sol+c%($, 'e!%a$#e la ca$#%!a! !e l+7 !e +$a lo$%#+! !e o$!a es)ec:%ca a*sor*%!a )or !%c8a sol+c%($. Es#a #9c$%ca )ro)orc%o$a +$a 'e!%!a se$s%*le !e s+ co$ce$#rac%($.
Elec&!o'o!esis$ Se *asa e$ la ca)ac%!a! !e las 'acro'ol9c+las cara!as )ara !es)la7arse e$ +$ ca')o el9c#r%co, co$ "eloc%!a! )ro)orc%o$al a s+ cara e %$"ersa'e$#e )ro)orc%o$al a s+ #a'ao. La se)arac%($ !e )ro#e:$as )or elec#roores%s !e or!%$ar%o se lora 'e!%a$#e elec#roores%s e$ el !e )ol%acr%la'%!a 5EGFA6, e$ la c+al las )ro#e:$as se '+e"e$ )or acc%($ !e +$a corr%e$#e el9c#r%ca a)l%ca!a a #ra"9s !e +$ el co')+es#o !e +$a )e/+ea 'ol9c+la or&$%ca 5acr%la'%!a6 +$%!a 'e!%a$#e e$laces #ra$s"ersos )ara or'ar +$a cr%*a 'olec+lar. El 'o"%'%e$#o rela#%"o !e las )ro#e:$as a #ra"9s !e +$ el !e )ol%acr%la'%!a !e)e$!e !el #a'ao, or'a - !e$s%!a! !e cara 5cara < +$%!a! !e 'asa6 !e las 'ol9c+las. C+a$#o 'e$or sea la co$ce$#rac%($ !e acr%la'%!a 5a)ro<%'a!a'e$#e 2?6, 'e$or ser& el $;'ero !e e$laces cr+7a!os - !e#er'%$a!as 'ol9c+las !e )ro#e:$as se !es)la7ar&$ co$ 'a-or ra)%!e7. Se 8a "%s#o /+e )ro#e:$as lo*+lares co')ac#as se '+e"e$ co$ 'a-or ra)%!e7 e$ co')arac%($ co$ )ro#e:$as %*rosas, alara!as, !e )eso 'olec+lar co')ara*le.
es&e!* blo& o %a*c4a es&e!*$ Es#a #9c$%ca )er'%#e la %!e$#%%cac%($ !e *a$!as %$!%"%!+ales !e )ro#e:$as )or s+ %$#eracc%($ co$ a$#%c+er)os es)ec:%cos. Las )ro#e:$as 'arca!as co$ %s(#o)os ra!%ac#%"os, )+e!e$ ser !e#er'%$a!as )res%o$a$!o el el e$ el s%#%o !e +*%cac%($ !e la )ro#e:$a co$#ra +$ ra'e$#o !e )el:c+la ra!%or&%ca )ara )ro!+c%r +$a a+#ora!%ora:a. Ta'*%9$ se )+e!e secc%o$ar el el e$ )orc%o$es - a%slar )ro#e:$as %$!%"%!+ales, o se )+e!e )res%o$ar el el co$#ra +$ )e!a7o !e )a)el %l#ro !e $%#rocel+losa - 8acer +$a elec#roores%s a!%c%o$al )ara !es)la7ar las )ro#e:$as +era !el el - a*sor*erlas so*re la s+)er%c%e !e $%#rocel+losa.
O?ETIOS 1. Co$ocer las #9c$%cas +#%l%7a!as )ara o*#e$er las )ro#e:$as %$#racel+lares - e<#racel+lares. 2. A$al%7ar las #9c$%cas !e B%olo:a 'olec+lar '&s +#%l%7a!as e$ la )r&c#%ca '9!%ca.
MATERIALES > 3 'l !e sa$re )er%9r%ca > #+*os c($%cos 13 'l > sol+c%($ !e sacarosa al 10?, 13?, 20?, 23? - 0? > alo!($ > alco8ol a$#%s9)#%co > #or$%/+e#e > er%$a !e 3 'l
,-,
> ce$#r:+a
PROCEDIMIENTO 1. O*#e$er 3 'l !e sa$re )er%9r%ca co$ +$a er%$a s%$ a$#%coa+la$#e. 2. Fre)arar sol+c%o$es !e sacarosa al 10?, 13?, 20?, 23? - 0? - colocar 1 'l !e ca!a +$a e$ +$ #+*o c($%co )ara ce$#r:+a. Co$ es#o se or'a +$ ra!%e$#e 5Gra!%e$#e )reor'a!o6 )ara lo c+al se !e)os%#a$ ca)as s+ces%"as !e !%s#%$#a co$ce$#rac%($ !e sacarosa 5- !%s#%$#a !e$s%!a!6K 5?)eso4"ol6 10? 13? 20? 23? 0?
54c'6 1.0H 1.03 1.0H1 1.10 1.12
. De)os%#ar +$ )e/+eo "ol+'e$ 5'l6 !e sa$re so*re el ra!%e$#e !e sacarosa . E$ o#ro #+*o c($%co colocar 3 'l !e sa$re s%$ sacarosa. 3. Ce$#r%+ar las '+es#ras co$ el res)ec#%"o co$#ra)eso !+ra$#e 20 '%$+#os a al#a "eloc%!a!. . O*ser"ar - co')arar los #+*os co$ sa$re - sacarosa. A$o#ar los res+l#a!os.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. E<)l%/+e e$ /+9 co$s%s#e la #9c$%ca !e I$'+$ol+oresce$c%a - s+s a)l%cac%o$es e$ el ca')o '9!%co. 2. Q+9 so$ los '9#o!os )re)ara#or%os - a$al:#%cos /+e se +sa$ )ara a$al%7ar la es#r+c#+ra -4o +$c%($ !e las )ro#e:$as
?I?LIOGRA6A Ber .M., T-'oc7o .L., S#r-er L. 2002 B%oc8e'%s#r-. .@. =ree'a$ a$! Co')a$-, NeJ _or. Co< T.M., S%$cla%r . 1H B%olo:a Molec+lar e$ Me!%c%$a. E!%#or%al M9!%ca Fa$a'er%ca$a, Ma!r%!. ar) G. 1 B%olo:a cell+lar - 'olec+lar. Co$ce)#os - e<)er%'e$#os. McGraJ>@%ll I$#era'er%a$a, M9<%co. Le($ ., Garc:a .M. 12 Ma$+al !e Ge$9#%ca Molec+lar. SINTESIS E!., Ma!r%!. L+/+e ., a$! @err&e7 A. 2001 B%olo:a Molec+lar e I$e$%er:a Ge$9#%ca. @arco+r#, Ma!r%!. Sa'*roo ., =r%#sc8 E.=., Ma$%a#%s T. 1H Molec+lar Clo$%$. A La*ora#or- Ma$+al. Col! S)r%$ @ar*or La*ora#orFress, NeJ _or.
,-/
S#rac8a$ T., Rea! A. 1 @+'a$ Molec+lar Ge$e#%cs. B%os Sc%e$#%%c F+*l%s8ers L%'%#e!, U.
Práctica 17
ACCIN DE LAS HORMONAS INTRODUCCIN Las 8or'o$as so$ s+s#a$c%as /+e re+la$ los )rocesos cor)orales !e crec%'%e$#o, 'e#a*ol%s'o, re)ro!+cc%($ - +$c%o$a'%e$#o !e !%s#%$#os (ra$os. La +$%($ !e la 8or'o$a ca'*%a la co$or'ac%($ !el rece)#or, /+e ac#;a co'o ac#or !e #ra$scr%)c%($ al a+'e$#ar s+ a%$%!a! )or c%er#os )ro'o#ores !%s#ales, !e$o'%$a!os ele'e$#os !e res)+es#a a 8or'o$as 5@RE6. Co'o co$sec+e$c%a, se ac#%"a o se *lo/+ea, se;$ los casos, la #ra$scr%)c%($ !e e$es es)ec:%cos los )ro!+c#os )ro#e%cos !e es#os e$es re)rese$#a$ )ara la c9l+la el 'eca$%s'o !e res)+es#a a la 8or'o$a.
I*sli*a$ La %$s+l%$a es +$a 8or'o$a /+e re+la +$a ra$ "ar%e!a! !e )rocesos 'e#a*(l%cos. A!e'&s !e s+s eec#os )r%'ar%os e$ la 8o'eos#as%s !e la l+cosa, )ro'+e"e !%"ersos )rocesos cel+lares, co'o la re+lac%($ !el #ra$s)or#e !e %o$es - a'%$o&c%!os, el 'e#a*ol%s'o !e los l:)%!os, la s:$#es%s !e l+c(e$o, la #ra$scr%)c%($ !e e$es es)ec:%cos, la s:$#es%s - !era!ac%($ )ro#e%ca - la s:$#es%s !e ADN. For #a$#o +ea +$ )a)el '+- %')or#a$#e e$ el al'ace$a'%e$#o !e la e$er:a - e$ el crec%'%e$#o - !%ere$c%ac%($ cel+lar. La #ra$s'%s%($ !e las seales ac#%"a!as )or la %$s+l%$a se %$%c%a )or la +$%($ !e 9s#a a s+ rece)#or !e 'e'*ra$a, co')+es#o )or !os s+*+$%!a!es α - !os β. La α )osee el !o'%$%o !e +$%($ a la %$s+l%$a - la β )osee ac#%"%!a! !e #%ros%$a /+%$asa. La s+*+$%!a! α es #a'*%9$ la )orc%($ re+la!ora. La +$%($ !e la %$s+l%$a a s+ rece)#or )ro"oca la a+#oosor%lac%($ !e la s+*+$%!a! β, - la r&)%!a osor%lac%($ !e s+s#ra#os e<(e$os, %$%c%a$!o +$a casca!a !e osor%lac%o$es4 !esosor%lac%o$es. La %$s+l%$a ac#;a a $%"el !e la #ra$scr%)c%($, la es#a*%l%!a! !el RNA' - la #ra!+cc%($.
P!oges&e!o*a 2 es&!3ge*os$ Los rece)#ores !e es#r(e$os so$ rece)#ores $+cleares !el r+)o I /+e reco$oce$ los la$cos 3 - !e los ele'e$#os !e res)+es#a !el ADN. Los rece)#ores !e )roes#ero$a so$ rece)#ores $+cleares !el r+)o II /+e reco$oce$ el la$co 3 !el ADN. La sec+e$c%a !e *ases e$ la '%#a! !el ADN )arece ser %')or#a$#e, )+es la al#erac%($ !e 1 ( 2 *ases !e$#ro !e es#e s%#%o, es s+%c%e$#e )ara co$"er#%r +$ ele'e$#o !e res)+es#a al es#r(e$o e$ +$ ele'e$#o !e res)+es#a !el r+)o II. La 'a-or:a !e %$#eracc%o$es es#ero%!e rece)#or oc+rre !e$#ro !el $;cleo, e
,-#
'e$saero !+ra$#e la #ra$scr%)c%($, se+%!o )or la s:$#es%s )ro#e%ca !+ra$#e la #ra!+cc%($, - e$ es#a or'a )ro!+c%r los eec#os %s%ol(%cos.
O?ETIOS 1. A$al%7ar la acc%($ !e s+*s#a$c%as s+*s#a$c%as %$"ol+cra!as e$ el co$#rol !el )roceso !e !%"%s%($ -
)rol%erac )rol%erac%($ %($ cel+l cel+lar. ar.
MATERIALES > 8+e"os !e co!or$%7 > oco > sol+c%($ !e %$s+l%$a %$-ec#a*le > sol+c%($ !e )roes#ero$a > sol+c%($ !e es#r(e$o > er%$a !e 1'l > caas )e#r%
> )lacas )or#ao*e#os > c+*reo*e#os > sol+c%($ !e roo co$o > '%crosco)%o ()#%co > ace%#e !e %$'ers%($ > )%)e#as )as#e+r > *+l*o )ara )%)e#as )as#e+r
PROCEDIMIENTO 1. Colocar Colocar !os 8+e"os 8+e"os !e co!or$% co!or$%77 e$ +$ s%#%o a!ec+a! a!ec+a!oo )ara 'a$#e$er 'a$#e$erlos los !+ra$#e !+ra$#e !:as e<)+es#os a la l+7 !e +$ oco !e *ao "ol#ae. 2. I$-ec#ar I$-ec#ar a +$o !e los 8+e"o 8+e"oss 0,1 'l !e sol+c%($ sol+c%($ !e %$s+l%$a %$s+l%$a ca!a ca!a !:a !+ra$#e !+ra$#e los !:as. !:as. El o#ro 8+e"o 'a$#e$erlo !e co$#rol s%$ %$-ec#ar $%$+$a s+s#a$c%a. . L+eo L+eo !e es#e es#e )roceso )roceso,, coloca colocarr ca!a ca!a +$o !e los 8+e"os 8+e"os e$ +$a caa )e#r% )e#r% !e*%! !e*%!a'e a'e$#e $#e ro#+la ro#+la!a !a.. _ o*ser o*ser"ar "ar )ara )ara es#a* es#a*lec lecer er co')a co')arac rac%o$ %o$es es e$#re e$#re el 8+e 8+e"o "o e<) e<)+es +es#o #o a la 8or'o$a - el 8+e"o co$#rol. . Colo Coloca carr co$ co$ +$a +$a )%)e )%)e#a #a )as#e )as#e+r +r +$a o#a o#a !e la -e'a e'a - +$a +$a !e la clar claraa e$ +$a )laca )laca )or#ao*e#os - aa!%r aa!%r !os o#as !el !el colora$#e roo co$o. co$o. 3. So*re la '+es#ra '+es#ra colocar colocar co$ c+%!a!o c+%!a!o +$ c+*reo* c+*reo*e#os e#os - o*ser"ar o*ser"ar e$ el '%crosco) '%crosco)%o %o )ara es#a*lecer co')arac%o$es. co')arac%o$es.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. E<)l%/+e E<)l%/+e e$ /+9 co$s%s# co$s%s#ee el 'eca$%s'o 'eca$%s'o !e osor%lac osor%lac%($ %($ !esosor%la !esosor%lac%($ c%($ e$ la ac#%"%!a! ac#%"%!a! !e las )ro#e:$as. 2. C+&l es el el )a)el )a)el !e los es#r(e es#r(e$os $os e$ el !esar !esarrollo rollo !el !el c&$cer c&$cer 'a'ar%o 'a'ar%o
?I?LIOGRA6A ,-5
Ber .M., T-'oc7o .L., S#r-er L. 2002 B%oc8e'%s#r-. .@. =ree'a$ a$! Co')a$-, NeJ _or. Co< T.M., T.M., S%$cla%r . 1H B%olo:a Molec+lar e$ Me!%c%$a. E!%#or%al E!%# or%al M9!%ca Fa$a'er%ca$a, Ma!r%!. ar) G. 1 B%olo:a cell+lar - 'olec+lar. Co$ce)#os - e<)er%'e$#os. McGraJ>@%ll I$#era'er%a$a, M9<%co. Le($ ., Garc:a .M. 12 Ma$+al !e Ge$9#%ca Molec+lar. Molec+lar. SINTESIS E!., Ma!r%!. L+/+e ., a$! @err&e7 A. 2001 B%olo:a Molec+lar e I$e$%er:a Ge$9#%ca. Sa'*roo ., =r%#sc8 E.=., Ma$%a#%s T. 1H Molec+lar Clo$%$. A La*ora#or- Ma$+al. Col! S)r%$ @ar*or La*ora#orFress, NeJ _or. S#rac8a$ T., T., Rea! A. 1 @+'a$ Molec+lar Ge$e#%cs. B%os Sc%e$#%%c F+*l%s8ers L%'%#e!, U.
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Práctica Práctica 18
APOPTOSIS CELULAR INTRODUCCIN La a)o)#os%s es +$ )roceso )roceso %s%ol(%co, co$#rola!o e$9#%ca'e$#e, e$9#%ca'e$#e, /+e se !a e$ #o!o #%)o !e c9l+las !e ora$%s'os '+l#%cel+lares - )or #a$#o e$ #o!os los (ra$os - s%s#e'as, 'e!%a$#e el c+al las c9l+las !aa!as o $o !esea!as, !esea!as, es !ec%r /+e 8a$ c+')l%!o s+ c%clo "%#al, ac#%"a$ 'eca$%s'os /+e co$!+ce$ a s+ )ro)%a !es#r+cc%($ o s+%c%!%o cel+lar. El )roceso !e a)o)o#os%s !%s'%$+-e e$ co$!%c%o$es %s%ol(%cas carac#er%7a!as )or +$a ra$ )rol%erac%($ cel+lar 5!esarrollo e'*r%o$ar%o )os$a#al #e')ra$o, 'e#a'oros%s, 'eca$%s'o !e acc%($ !e 8or'o$as - ac#ores )aracr%$os, e#c.6, as: co'o e$ s%#+ac%o$es )a#ol(%cas co'o el c&$cer, e$er'e!a!es a+#o%$'+$es o %$ecc%o$es ":r%cas. For ee')lo las c9l+las e)%#el%ales !e la )r(s#a#a e$#ra$ e$ a)o)#os%s c+a$!o se s+)r%'e la 8or'o$a se<+al 'asc+l%$a #es#os#ero$a. Es#a es la ra7($ !e /+e el c&$cer )ros#&#%co )ro)aa!o a o#ros #e%!os se )+e!a #ra#ar co$ &r'acos /+e %$#er%era$ co$ la s:$#es%s !e #es#os#ero$a. La a)o)#os%s es +$ #%)o !e '+er#e cel+lar !%s)+es#a o )rora'a!a e$ la c+al la c9l+la res)o$!e a c%er#as seales %$%c%a$!o +$ )roceso $or'al /+e la co$!+ce a la '+er#e. La '+er#e )or a)o)#os%s se carac#er%7a )or co')ac#a co')ac#ac%($ c%($ #o#al !e la c9l+la c9l+la - s+ $;cleo, $;cleo, !%secc%( !%secc%($$ or!e$a!a or!e$a!a !e la cro'a#%$ cro'a#%$aa e$ ra'e$# ra'e$#os os eec#+a!a )or +$a e$!o$+cleasa es)ec%al !es!o*la!ora !e ADN - ca)#+ra r&)%!a !e la c9l+la '+er#a )or los aoc aoc%#os. %#os.
E&a0as 2 co*&!ol del 0!oceso de a0o0&osis$ I$!+cc%($K E$ es#a e#a)a %$#er"%e$e$ seales )os%#%"as, #a$#o e<#racel+lares co'o )roce!e$#es !e la )ro)%a c9l+la. Ta'*%9$ Ta'*%9$ e<%s#e$ seales seales $ea#%"as )ara re$ar la a)o)#os%s. Eec+c Eec+c%($ %($KK Carac# Carac#er% er%7a! 7a!aa )or "ar%a "ar%ass al#era al#erac%o c%o$es $es /+e co$!+ co$!+c%r c%r&$ &$ a la '+er# '+er#ee cel+l cel+lar ar.. Es#as Es#as al#era al#erac%o c%o$es $es so$ )ro!+c )ro!+c%!a %!ass )or la ac#%"a ac#%"ac%( c%($$ !e "ar%as "ar%as )ro#ea )ro#easas sas 5Cas)a 5Cas)asas sas /+e )ro!+c )ro!+ce$ e$ la )ro#eol%s%s !e )ro#e:$as !%a$a o s+s#ra#o, co'o +$a )ro#e:$a $+clear co$ ac#%"%!a! !e re)arac%($ !el ADN - +$ ac#or !e #ra$scr%)c%($. Las cas)a7as #a'*%9$ ac#%"a$ a o#ras cas)asas.6 - $+cleasas 5ro')e$ el ADN cro'os('%co e$eral'e$#e e$ s+s )os%c%o$es '&s acces%*les6. =ase %$alK Las )ro#+*era )ro#+*era$c%a $c%ass e<#er$as e<#er$as !e la c9l+la, c9l+la, or'a!as or'a!as !+ra$#e la e#a)a e#a)a !e eec+c%( eec+c%($, $, se se)ara$ or'a$!o los c+er)os a)o)#(#%cos, los c+ales so$ reco$oc%!os - aoc%#a!os )or o#ras c9l+las. Es#e )roceso "a aco')aa!o aco')aa!o !e o#ros ca'*%os *%o/+:'%cos. Farece /+e el )roceso e$ el c+al la a)o)#os%s se !ese$ca!e$a )or seales e<#er$as, es#& 'e!%a!o )r%$c%)al'e$#e )or l%*erac%($ !e Ca 2 al %$#er%or !el c%#o)las'a - la ac#%"ac%($ !e )ro#e%$c%$asas.
O?ETIOS 1. Co')re$!e Co')re$!err el 'eca$%s'o 'eca$%s'o !e #ra$sor' #ra$sor'ac%( ac%($$ cel+lar cel+lar e$ el !esarrollo !esarrollo !el c&$cer c&$cer..
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MATERIALES > > > > > > > >
2 )la$#as %+ales sol+c%($ !e )es#%c%!a al 1? )lacas )or#ao*e#os c+*reo*e#os 8oa !e ae%#ar o !e *%s#+r: ace%#e !e %$'ers%($ '%crosco)%o ()#%co sol+c%($ !e a7+l !e 'e#%le$o
PROCEDIMIENTO 1. E<)o$er a +$a !e las )la$#as a la sol+c%($ !e )es#%c%!a al 1?, +$a "e7 al !:a !+ra$#e !:as. La o#ra )la$#a 'a$#e$erla co'o co$#rol, co$ los c+%!a!os 8a*%#+ales. 2. Cor#ar !e or'a #ra$s"ersal +$ )e!a7o lo '&s %$o )os%*le !e 8oa - !e #allo !e a'*as )la$#as 5co$#rol - e<)+es#a6 - colocar e$ )lacas )or#ao*e#os !e*%!a'e$#e ro#+la!as. . Fo$er 2 o#as !e la sol+c%($ !e a7+l !e 'e#%le$o - colocar el c+*reo*e#os. . O*ser"ar e$ el '%crosco)%o.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. C+&l es la !%ere$c%a e$#re a)o)#os%s - $ecros%s 2. E<)l%/+e e$ /+9 co$s%s#e el co$#rol )os%#%"o - el co$#rol $ea#%"o e$ el )roceso !e a)o)#os%s. . C+&l es el )a)el !el e$ )3 e$ el )roceso !e a)o)#os%s
?I?LIOGRA6A Ber .M., T-'oc7o .L., S#r-er L. 2002 B%oc8e'%s#r-. .@. =ree'a$ a$! Co')a$-, NeJ _or. Co< T.M., S%$cla%r . 1H B%olo:a Molec+lar e$ Me!%c%$a. E!%#or%al M9!%ca Fa$a'er%ca$a, Ma!r%!. ar) G. 1 B%olo:a cel+lar - 'olec+lar. Co$ce)#os - e<)er%'e$#os. McGraJ>@%ll I$#era'er%a$a, M9<%co. Le($ ., Garc:a .M. 12 Ma$+al !e Ge$9#%ca Molec+lar. SINTESIS E!., Ma!r%!. L+/+e ., - @err&e7 A. 2001 B%olo:a Molec+lar e I$e$%er:a Ge$9#%ca. Sa'*roo ., =r%#sc8 E.=., Ma$%a#%s T. 1H Molec+lar Clo$%$. A La*ora#or- Ma$+al. Col! S)r%$ @ar*or La*ora#orFress, NeJ _or. S#rac8a$ T., Rea! A. 1 @+'a$ Molec+lar Ge$e#%cs. B%os Sc%e$#%%c F+*l%s8ers L%'%#e!, U.
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Práctica ;
ESTRUCTURA Y DETERMINANTES GENÉTICOS DEL OO INTRODUCCIN El oo !e +$ %$sec#o es +$ (ra$o co')leo /+e re/+%ere la ac#%"%!a! co'*%$a!a !e +$os 2.300 !%ere$#es )ro!+c#os !e e$es. For 'e!%o !e e<)er%'e$#os se 8a !e'os#ra!o /+e los 'a':eros, %$cl+-e$!o ra#o$es - el 8o'*re, co$#%e$e$ +$ e$ 8o'(loo a eye"ess9 el c+al se 8a !e'os#ra!o /+e )ar#%c%)a e$ la or'ac%($ !el oo. A+$/+e las 'oscas - los 'a':eros !esarrolla$ #%)os '+- !%ere$#es !e oos, los !a#os s+%ere$ /+e el !esarrollo !el oo es#& co$#rola!o )or +$ #%)o s%'%lar !e e$ 'aes#ro - /+e los !os #%)os !e oos e$ real%!a! es#&$ e"ol+#%"a'e$#e relac%o$a!os. E$ el )roceso )ara la or'ac%($ !el oo es#&$ %')l%ca!os +$ r+)o !e ac#ores !e #ra$scr%)c%($ 5Si*'9 Pa*2 y 4*16 /+e se e<)resa$ e$ el e<#re'o a$#er%or !e la )laca $e+ral. Fos#er%or'e$#e, el !o'%$%o !e e<)res%($ !e es#os ac#ores !e #ra$scr%)c%($ se *%+rca e$ !os re%o$es s%'9#r%cas ca!a +$a !e las c+ales or%%$a +$a "es:c+la ()#%ca. La )ro#e:$a FA es es)ec%al'e$#e rele"a$#e e$ la or'ac%($ !e las le$#es - la re#%$a )or lo /+e s+ a+se$c%a aec#a se$s%*le'e$#e e$ los oos. M+#a$#es 8e#eroc%(#%cos )ara es#e ac#or e$ 8+'a$os )rese$#a$ oos '&s )e/+eos, '%e$#ras /+e e$ los '+#a$#es 8o'oc%(#%cos 8a- +$a a+se$c%a !e oos. S%$ e'*aro, so$ o#ros los ac#ores /+e %$#er"%e$e$ e$ la se)arac%($ !e +$ ;$%co ca')o ()#%co e$ !os ca')os *%la#erales. Fr%$c%)al'e$#e, !e)e$!e !e la secrec%($ !e +$a )ro#e:$a lla'a!a So$%c @e!e8o 5S@@6. Es#a )ro#e:$a es#& %')l%ca!a !%rec#a'e$#e e$ el )a#r($ !e %$!+cc%($ "e$#ral !el )rose$c9alo e %$!+ce la e<)res%($ !e "ar%os e$es !e !esarrollo 5 Shh - 6D*-$6 e$ la re%($ "e$#ral !el #+*o $e+ral. M+#ac%o$es e$ el e$ So$%c 8e!e8o 5 Shh6 o +$a %$8%*%c%($ e$ el )rocesa!o !e s+ )ro#e:$a or'a$ +$a )e/+ea )orc%($ !e casos /+e )rese$#a$ 8olo)rose$ceal%a es#os casos )+e!e$ es#ar aco')aa!os %$cl+so !e c%clo):a. Se )%e$sa /+e la )ro#e:$a S@@ s+)r%'e la e<)res%($ !e Pa*2 e$ la re%($ ce$#ral !el e'*r%($ !%"%!%e$!o el ca')o !e e<)res%($ !e Pa*2 e$ !os. Da!o /+e el e$ FA es el res)o$sa*le !el %$%c%o !e la or'ac%($ !el oo, se co$oce /+e e$ los 8+'a$os la '+#ac%($ !el e$ FA )ro"oca la a$%r%!%a, +$ #%)o !e ce+era co$9$%#a, /+e es +$a rara e$er'e!a! 8ere!%#ar%a /+e se carac#er%7a )or la a+se$c%a !e %r%s. E$ al+$os casos, s%$ e'*aro, al+$os )ac%e$#es )rese$#a$ +$ %r%s a$or'al - so$ rec+e$#es al#erac%o$es e$ la c(r$ea e$ or'a !e ca#ara#as o la+co'a. E$ es#+!%os !e Droso)8%la, es#e e$ se 8a "%s#o #a'*%9$ %')l%ca!o e$ el !esarrollo !e o#ras )ar#es !el s%s#e'a $er"%oso.
O?ETIOS 1. O*ser"ar la es#r+c#+ra !el oo - las relac%o$es /+e es#a*lece$ las c9l+las !el oo !e Droso)8%la. 2. E$#e$!er el )roceso !e seales cel+lares. . E$#e$!er los !e#er'%$a$#es e$9#%cos )ara el !esarrollo !el oo
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MATERIALES > > > > > > > > >
'oscas Droso)8%la 'ela$oas#er 8oa !e ae%#ar o !e *%s#+r: )%$7as - es#%le#es caa )e#r% )lacas )or#ao*e#os c+*reo*e#os es#ereosco)%o ace%#e !e %$'ers%($ '%crosco)%o ()#%co
PROCEDIMIENTO 1. Colocar +$a 'osca -a '+er#a e$ +$a caa )e#r%, - co$ la a-+!a !e los es#%le#es se)arar los oos co')+es#os. Es#e )aso se lo )+e!e real%7ar e$ +$ es#ereosco)%o. 2. Real%7ar cor#es #ra$s"ersales !e los oos, - colocarlos e$ )lacas )or#ao*e#os. . Aa!%r o#as !e a+a - colocar el c+*reo*e#os. . O*ser"ar e$ el '%crosco)%o ()#%co.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. ^C+&l es el 'eca$%s'o 'olec+lar !el )roceso !e la "%s%($ e$ 8+'a$os 2. ^Q+9 o#ros e$es es#&$ %$"ol+cra!os e$ la or'ac%($ !el oo 8+'a$o
?I?LIOGRA6A Ber .M., T-'oc7o .L., S#r-er L. 2002 B%oc8e'%s#r-. .@. =ree'a$ a$! Co')a$-, NeJ _or. Co< T.M., S%$cla%r . 1H B%olo:a Molec+lar e$ Me!%c%$a. E!%#or%al M9!%ca Fa$a'er%ca$a, Ma!r%!. ar) G. 1 B%olo:a cel+lar - 'olec+lar. Co$ce)#os - e<)er%'e$#os. McGraJ>@%ll I$#era'er%a$a, M9<%co. Le($ ., Garc:a .M. 12 Ma$+al !e Ge$9#%ca Molec+lar. SINTESIS E!., Ma!r%!. L+/+e ., - @err&e7 A. 2001 B%olo:a Molec+lar e I$e$%er:a Ge$9#%ca. Sa'*roo ., =r%#sc8 E.=., Ma$%a#%s T. 1H Molec+lar Clo$%$. A La*ora#or- Ma$+al. Col! S)r%$ @ar*or La*ora#orFress, NeJ _or. S#rac8a$ T., Rea! A. 1 @+'a$ Molec+lar Ge$e#%cs. B%os Sc%e$#%%c F+*l%s8ers L%'%#e!, U. 8##)K44!*.!o-'a.es4c%>*%$4J!*c%.e01401401>14)a%$a2.8#'
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8##)K44JJJ.le"a$#e>e$".es4le"8o-012134soc%e!a!4soc%e!a!.8#'l
Práctica 1
POLIMOR6ISMOS GUSTATIOS INTRODUCCIN Los se$#%!os !el +s#o - !el ola#o $os )er'%#e$ !%s#%$+%r los al%'e$#os $o a)e#ec%*les o %$cl+so le#ales !e a/+ellos /+e so$ $+#r%#%"os. A'*os se$#%!os es#&$ es#rec8a'e$#e l%a!os a las +$c%o$es e'oc%o$ales - co$!+c#+ales )r%'%#%"as !e $+es#ro s%s#e'a $er"%oso. El es)ec#ro !e la res)+es#a !e los seres 8+'a$os al sa*or es#& co')+es#o $o s(lo )or $+es#ra *%olo:a, s%$o #a'*%9$ )or as)ec#os )s%col(%cos e$ los /+e %$#er"%e$e la 8%s#or%a )erso$al, el es#a!o !e &$%'o la a')l%a "ar%e!a! !e al%'e$#os e %$re!%e$#es /+e es#&$ a $+es#ra !%s)os%c%($. U$ ac#or !e '+c8a %')or#a$c%a es s%$ !+!a, el e$9#%co. Se sa*e /+e +$a )erso$a )+e!e )erc%*%r l%#eral'e$#e c%e$#os !e sa*ores !%s#%$#os. Se s+)o$e a!e'&s /+e #o!os ellos so$ co'*%$ac%o$es !e las se$sac%o$es ele'e$#ales, !el '%s'o 'o!o /+e #o!os los colores /+e )o!e'os "er so$ co'*%$ac%o$es !e los #res colores )r%'ar%os. Co'o se co$oce el sa*or se !e#ec#a a #ra"9s !e las )a)%las +s#a#%"as /+e se +*%ca$ e$ la le$+a. Las )a)%las co$#%e$e$ c9l+las co$ s%#%os +*%ca!os e$ la s+)er%c%e, res)o$sa*les !e !e#ec#ar !ese$ca!e$ar la er+)c%($ !el +s#o es#os se$sores so$ )ro#e:$as /+e +$c%o$a$ co'o rece)#ores. A $%"el e$9#%co )or ee')lo la "ar%ac%($ e$o#:)%ca e$ la se$s%*%l%!a! al sa*or !e la e$%l#%ocar*a'%!a 5FTC6 )+e!e ser e<)l%ca!a )or la !%"ers%!a! e$ la sec+e$c%a !el ADN !el e$ TAS2RH e$ el cro'oso'a / 5%' e# al., 200 - Dra-$a e# al., 2006.
U%b!al del sabo! Sa*or ar%o )or el &c%!o clor8:!r%co 0,000 N Sa*or sala!o )or clor+ro s(!%co . 0,01 M Sa*or !+lce )or sacarosa 0,01 M Sa*or a'aro )or /+%$%$a .. 0,00000H M
Sabo! Salado$ Es#& )ro"oca!o )or sales %o$%7a!as. Las )ro)%e!a!es !el sa*or "ar:a$ !e +$a sal a o#ra, -a /+e las sales !es)%er#a$ #a'*%9$ o#ras se$sac%o$es !el +s#o a)ar#e !el sala!o. Los ca#%o$es !e las sales so$ los res)o$sa*les )r%$c%)ales !el sa*or sala!o, )ero los a$%o$es #a'*%9$ co$#r%*+-e$, a+$/+e e$ 'e$or 'e!%!a. Sabo! Ag!io$ Es#& )ro!+c%!o )or &c%!os - la %$#e$s%!a! !e la se$sac%($ !e +s#o es a)ro<%'a!a'e$#e )ro)orc%o$al al loar%#'o !e la co$ce$#rac%($ !e 8%!roe$%o$es. Es !ec%r, c+a$#o '&s +er#e sea el &c%!o, '&s %$#e$sa ser& la se$sac%($. Sabo! Dlce$ Se !e#ec#a a #ra"9s !e la %$#eracc%($ !e la s+s#a$c%a !+lce co$ +$a )ro#e:$a rece)#ora e$ las c9l+las !e la )a)%la +s#a#%"a +$a se+$!a )ro#e:$a, /+e ac#;a co'o #ra$s!+c#or, se +$e a es#e co')leo ca+sa$!o +$ ca'*%o e$ el )o#e$c%al el9c#r%co !e la c9l+la - !%s)ara as: +$a seal $er"%osa /+e llea 8as#a el cere*ro - ca+sa la se$sac%($ !el sa*orK '%e$#ras 'a-or sea la co$ce$#rac%($ !e es#e co$lo'era!o s+s#a$c%a !+lce>rece)#or>#ra$s!+c#or, '&s !+lce se )erc%*e la s+s#a$c%a. ,,-
Sabo! A%a!go$ Se 8a$ %!e$#%%ca!o '&s !e 23 e$es res)o$sa*les !e la s:$#es%s !e )ro#e:$as l%a!as a la !e#ecc%($ !e co')+es#os a'aros, co'o )+e!e$ ser la /+%$%$a o la cae:$a. E<%s#e$ a)ro<%'a!a'e$#e e$#re 30 - H0 e$es )ara s%$#e#%7ar )ro#e:$as rece)#oras /+e le )er'%#a$ reco$ocer sa*ores a'aros. Sabo! U%a%i$ Es +$ sa*or '+- )ar#%c+lar, s%'%lar al /+e se )+e!e asoc%ar co$ la car$e roa o el /+eso )ar'esa$o, )ero /+e )+e!e ser ac#%"a!o e$ las )a)%las !%rec#a'e$#e )or el l+#a'a#o !e so!%o. O?ETIOS 1. Es#a*lecer !%ere$c%as e$ la ca)#ac%($ !e los sa*ores e$ "ar%as co$ce$#rac%o$es. 2. O*ser"ar !%ere$c%as !e ca)#ac%($ !e sa*ores e$#re 8o'*res - '+eres.
MATERIALES > Clor+ro !e so!%o > Yc%!o c:#r%co > S+crosa > Q+%$%$a o *e$7oa#o !e so!%o > Gl+#a'a#o !e so!%o
PROCEDIMIENTO 1. Fre)arar sol+c%o$es al 0,001 M, 0,003 M - 0,01 M !e ca!a +$a !e las s+s#a$c%as selecc%o$a!as, es !ec%r !e clor+ro !e so!%o, &c%!o c:#r%co, s+crosa, /+%$%$a o *e$7oa#o !e so!%o - l+#a'a#o !e so!%o. 2. Fro*ar +$as o#as !e ca!a s+s#a$c%a - a$o#ar s% se )+!o o $o !e#ec#ar el sa*or corres)o$!%e$#e. . Re%s#rar los !a#os e$ 'a#r%ces )re)ara!as )ara #al eec#o. . A$al%7ar los res+l#a!os.
RESULTADOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. E$+'ere los rece)#ores 'olec+lares /+e 'e!%a$ las res)+es#as a los !%ere$#es co')+es#os 5!+lce, sala!o, a'aro, ar%o - a'%$o&c%!os6 - los e$es relac%o$a!os. 2. E<)l%/+e los #9r'%$osK AGEUSIA E @IFOGEUSIA.
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