MAKALAH MIKROBIOLOGI ISOLASI & IDENTIFIKASI
DISUSUN OLEH : RAHMAT BAYU NIAWAN (1311E2041) PERI PRAMUDIA (1311E2043) SELLYTHA TANARI (1311E2044) CENDY SANTIA KS (1311E204) NO!ITA ALEN FATMAWATI (1311E204")
P#$%#' D3 S$*+ T,-%%, A-*,. B/, A.,+ B--% 2014201
KATA PENGANTAR
Alhamdulillah, puji syukur kehadirat Allah SWT disertai shalawat dan salam kepada junjungan Nabi besar Muhamad SAW, yang telah memberikan rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan Makalah dengan judul IDENTIFIKASI & ISOLASI5 Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada yang terhormat bu is !urniawati, S"Pd",M"!es selaku dosen mikrobiologi yang telah memberi arahan dalam penyusunan makalah ini" Penulis menyadari bahwa pembuatan Makalah ini jauh dari sempurna" Namun, semoga dapat berman#aat dan menjadi amal ibadah kita semua, Amiin"
$andung, %anuari &'()
Penulis
DAFTAR ISI
*alaman judul"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
i
!ata Pengantar""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
ii
+a#tar si"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
iii
$A$" Pendahuluan""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
(
("( atar $elakang""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""" ("& Tujuan""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
( &
$A$" Tinjauan Pustaka"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
&"( Prinsip isolasi mikroba""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""" &"& .ara mengisolasi mikroba"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""" &" Metode menanam biakan""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""" &"/ Teknik isolasi mikroba0000000000000000" &") Tahap sebelum menanam bakteri000000000000" &"1 Si#at 2 si#at koloni""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
/ )
&&
$A$ " Metodologi Percobaan"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
&1
"( Waktu dan tempat""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""" "& Alat dan bahan0000000000000000000""
&1
"&"( Alat 0000000000000000000000" /
$ah 0000000000000000000000
$A$ 3 .ara !erja"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
&1
+a#tar Pustaka"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
&4
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang Flora mikroba di lingkungan mana saja pada umumnya terdapat dalam populasi campuran. Boleh dikatakan amat jarang mikroba dijumpai sebagai satu spesies mikroorganisme tunggal di alam. Untuk mencirikan atau mengidentifikasi suatu spesies mikroorganisme tertentu, pertama spesies harus dapat dipisahkan dari organisme lain yang umum dijumpai dalam habitatnya, lalu ditumbuhkan menjadi biakan murni, (biakan murni adalah biakan yang sel-selnya berasal dari pembelahan satu sel tunggal. !ebab dalam biakan murni semua metode mikrobiologi yang digunakan untuk menelaah dan mengidentifikasi mikroorganisme, termaksud penelaahan ciri-ciri kultural, morfologis, fisiologis maupun selogis. "emerlukan suatu populasi yang terdiri dari satu macam mikroorganisme saja. #eknik yang digunakan dan tipe medium yang dipilih tergantung dari sifat penelitian yang pertama menumbuhkan sel spesies tertentu, yang mikroorganisme yang teramati secara mikroskopik dan yang tambah dalam lingkungan alam yang terbukti sangat sukar untuk tambah secara murni pada medium buatan. $emeriksaan mikrobiologi bahan-bahan alami tentu mengandung berbagai lingkungan mikro yang berbeda masing-masing menyediakan tempat untuk spesies yang berbeda. %solasi tipe tertentu mikroorganisme, jika ditanam dengan tepat, akan menghasilkan tipe organisme yang berbeda untuk tiap lingkungan mikro yang ada. &leh karena itu dalam mengisolasi galur murni perlu dilakukan secara bertingkat. #ingkat pertama dilakukan secara manual dengan cara mengencerkannya. #ingkat kedua digunakan media yang bersifat selektif yang masih satu golongan. #ingkat ketiga dari koloni yang seolah'olah sudah murni. ara bertingkat tersebut adalah cara kon)ensional yang sampai saat ini masih banyak dilakukan. %solasi adalah dengan cara menggoreskan, dan isolasi juga cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba tertentu dari lingkungannya. $ada praktikum %solasi dan %dentifikasi *asar "ikroba ini dilakukan untukmemberikan pemahaman kepada praktikan tentang hal yang berkaitan dengan isolasi pada mikroba dan identifikasi dasar mikroba. +arena itu, yang melatarbelakangi percobaan praktikum isolasi dan identifikasi dasar mikroba ialah untuk memelihara sejumlah mikroorganisme yaitu bakteri dan jamur dari media yang ada atau digunakan.
1.2 Tujuan
a. b. c.
"engetahui fungsi dari isolasi mikroba "engetahui teknik dasar dan metode dalam isolasi "engetahui faktor-faktor yang mempengaruhi isolasi mikroba
BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1
Prinsip Isolasi Mikroba
$ada prinsipnya isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lain yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba. al ini dapat dilakukan dengan menumbuhkannya pada media padat, karena dalam media padat selsel mikroba akan membentuk suatu koloni sel yang tetap pada tempatnya (!andjaja, 1. /ika sel-sel tersebut tertangkap oleh media padat pada beberapa tempat yang terpisah, maka setiap sel atau kumpulan sel yang hidup akan berkembang menjadi suatu koloni yang terpisah, sehingga memudahkan pemisahan selanjutnya. Bila digunakan media cair, sel-sel mikroba susah dipisahkan secara indi)idu karena terlalu kecil dan tidak tetap tinggal ditempatnya. 0kan tetapi apabila sel-sel tersebut dipisahkan dengan cara pengenceran, kemudian ditumbuhkan pada media padat dan dibiarkan membentuk koloni, maka sel-sel tersebut selanjutnya dapat diisolasi dalam tabung-tabung reaksi atau caan petri yang terpisah.
2.2
ara M!n"isolasi Mikroba
$emindahan bakteri dari medium lama ke medium yang baru atau dikenal dengan istilah inokulasi bakteri ini memerlukan banyak ketelitian. #erlebih dahulu kita harus mengusahakan agar semua alat-alat yang akan digunakan untuk pengerjaan medium dan pengenceran inokulasi benar-benar steril. al ini untuk menghindari terjadinya kontaminasi, yaitu masuknya mikroba lain yang tidak diinginkan sehingga biakan yang tumbuh di dalam medium adalah benar-benar biakan murni.%solasi mikroba dapat dilakukan dengan beberapa cara, yaitu2 1. $engenceran ara ini pertama kali dilakukan oleh Lister pada tahun 1345. %a berhasil memelihara Streptococcus Laktis dalam piaraan murni yang diisolasi dalam sempel susu yang sudah masam. !uatu sempel dari suatu suspensi yang berupa campuran bermacam-macam spesies diencerkan dalam suatu tabung yang tersendiri. *ari hasil pengenceran ini kemudian diambil kira-kira 1 ml untuk diencerkan lebih lanjut. /ika dari pengenceran yang ketiga ini diambil 6,1 ml untuk disebarkan pada suatu
medium padat, kemungkinan besar akan didapatkan beberapa koloni yang akan tumbuh dalam medium tersebut, akan tetapi mungkin juga hanya akan memperoleh satu koloni saja. *alam hal yang demikian ini dapat dijadikan piaraan murni. /ika belum yakin, baha koloni tunggal yang diperoleh tersebut merupakan koloni yang murni, maka dapat mengulang pengenceran dengan menggunakan koloni sebagai sampel. . $enuangan 7obert +och (1389-165 mempunyai metode lain, yaitu dengan mangambil sedikit sampel campuran bakteri yang mudah diencerkan dan sampel ini kemudian disebarkan di dalam suatu medium yang terbuat dari kaldu dan gelatin encer. *engan demikian akan diperoleh suatu piaraan adukan. !etelah medium tersebut mengental maka selang beberapa jam kemudian nampaklah koloni-koloni yang masing-masing dapat dianggap murni. *engan mengulang pekerjaan di atas maka akhirnya akan diperoleh piaraan murni yang lebih terjamin (!chiegel, 14.
2.#
M!$o%! M!nana& Biakan
0da beberapa metode yang biasanya dilakukan untuk menanam biakan di dalam medium diantaranya adalah2 1. "etode aan :ores "etode ini memiliki dua keuntungan yaitu menghemat bahan dan aktu, namun untuk memperoleh hasil yang baik diperlukan keterampilan yang lumayan yang biasanya diperoleh dari pegalaman. "etode caan gores yang dilakukan dengan baik kebanyakan akan menyebabkan terisolasinya mikroorganisme yang diinginkan. *ua macam kesalahan yang umum dilakukan adalah tidak memanfaatkan permukaan medium dengan sebaik-baiknya untuk digores sehingga pengenceran mikroorganisme menjadi kurang larut dan cenderung untuk menggunakan inokolum terlalu banyak sehingga menyulitkan pemisahan sel-sel yang digores. . "etode aan #uang ara lain untuk memperoleh biakan koloni murni dari populasi campuran mikroorganisme ialah dengan mengencerkan eksperimen dalam medium agar yang telah dicairkan dan didinginkan yang kemudian dicaankan. +arena konsentrasi sel-sel mikroba di dalam eksperimen pada umumnya tidak diketahui sebelumnya, maka pengenceran perlu dilakukan beberapa tahap sehingga sekurang-kurangnya satu diantara caan-caan tersebut mengandung koloni-koloni terpisah di atas permukaan maupun di dalam agar. "etode ini memboroskan aktu dan bahan namun tidak memerlukan keterampilan yang terlalu tinggi (:andjar, 664.
2.'
T!knik Isolasi Mikroba
$roses pemisahan;pemurnian dari mikroorganisme lain perlu dilakukan karena semua pekerjaan mikrobiologi, misalnya telaah dan identifikasi mikroorganisme, memerlukan suatu populasi yang hanya terdiri dari satu macam mikroorganisme saja. #eknik tersebut dikenal dengan isolasi mikroba. #erdapat berbagai cara mengisolasi mikroba, yaitu2 1. %solasi $ada aan 0gar $rinsip metode isolasi pada agar caan adalah mengencerkan mikroorganisme sehingga diperoleh indi)idu spesies yang dapat dipisahkan dari mikroorganisme lain. !etiap koloni yang terpisah yang tampak pada caan tersebut setelah inkubasi berasal dari satu sel tunggal. #erdapat beberapa cara dalam metode isolasi pada caan agar, yaitu2 metode gores kuadran dan metode agar caan tuang. "etode gores kuadran bila metode ini dilakukan dengan baik akan menghasilkan terisolasinya mikroorganisme dimana setiap koloni berasal dari satu sel. "etode agar tuang berbeda dengan metode gores kuadran, caan tuang menggunakan medium agar yang dicairkan dan didinginkan 56 o, yang kemudian dicaankan. $engenceran tetap perlu dilakukan sehingga pada caan yang terakhir mengandung koloni-koloni yang terpisah di atas permukaan;di dalam caan. . %solasi $ada "edium air "etode ini dilakukan bila mikroorganisme tidak dapat tumbuh pada agar caan (medium padat, tetapi hanya dapat tumbuh pada kultur cair. "etode ini juga perlu dilakukan pengenceran dengan beberapa serial pengenceran. !emakin tinggi pengenceran, peluang untuk mendapatkan satu sel semakin besar.
9. %solasi !el #unggal "etode ini dilakukan untuk mengisolasi sel mikroorganisme berukuran besar yang tidak dapat diisolasi dengan metode caan atau medium cair. !el mikroorganisme dilihat dengan menggunakan perbesaran sekitar 166 kali. +emudian sel tersebut dipisahkan dengan menggunakan pipet kapiler yang sangat halus ataupun mikromanipulator yang dilakukan secara aseptis. !elain itu, cara lain yang dapat digunakan untuk mengisolasi mikroba adalah sebagai berikut2 1. "etode aan !ebar ( Spread Plate #eknik (caan sebar adalah suatu teknik di dalam menumbuhkan mikroorganisme di dalam media agar dengan cara menuangkan stok kultur bakteri atau menghapuskannya di atas media agar yang telah memadat, sedangkan pour plate kultur dicampurkan ketika media masih cair (belum memadat. +elebihan teknik ini
adalah mikroorganisme yang tumbuh dapat tersebar merata pada bagian permukaan agar. . #eknik *ilusi #ujuan dari teknik ini adalah melarutkan atau melepaskan mikroba dari substratnya ke dalam air sehingga lebih mudah penanganannya. !ampel yang telah diambil kemudian disuspensikan dalam akuades steril. #eknik dilusi sangat penting dalam analisa mikrobiologi karena hampir semua metode penelitian dan perhitungan jumlah sel mikroba menggunakan teknik ini, seperti #$ ( Total Plate Counter . &leh karena itu, metode ini umum digunakan dalam isolasi bakteri (!andjaja, 1.
2.(
Ta)ap S!b!lu& M!nana& Bak$!ri
0da beberapa tahap yang harus dilakukan sebelum melakukan teknik penanaman bakteri (inokulasi yaitu 2 1. "enyiapkan ruangan 7uang tempat penanaman bakteri harus bersih dan keadannya harus steril agar tidak terjadi kesalahan dalam pengamatan atau percobaaan. *alam laboratorium pembuataan serum )aksin dan sebagainya. %nokulasi dapat dilakukan dalam sebuah kotak kaca ( encast udara yang leat dalam kotak tersebut dileatkan saringan melalui suatu jalan agar terkena sinar ultra)iolet. . $emindahan dengan dengan pipet ara ini dilakukan dalam penyelidikan air minum atau pada penyelidikan untuk diambil 1 mL. ontoh yang akan diencerkan oleh air sebanyak mL murni. 9. $emindahan dengan kaat inokulasi Ujung kaat inokulasi sebaliknya dari platina atau nikel ujungnya boleh lurus juga boleh berupa kolongan yang diameternya 1-9 mm. *alam melakukuan penanaman bakteri kaat ini terlebih dahulu dipijarkan, sedangkan sisanya tungkai cukup dileatkan nyala api saja setelah dingin kembali kaat itu disentuhkan lagi dalam nyala api, karena pada suhu yang tinggi bakteri atau mikroorganisme akan terdenaturasi dan alat menjadi steril dari mikroba pengkontaminan.
Si+a$,si+a$ Koloni 2.* !ifat-sifat koloni yang tumbuh pada agar-agar lempengan, pada agar-agar miring dan pada tusukan gelatin adalah sebagai berikut2 1. !ifat-sifat koloni pada agar-agar lempengan mengenai bentuk, permukaan dan tepi. Bentuk koloni dilukiskan sebagai titik-titik, bulat berbenang, tak teratur, serupa akar, serum kumparan. $ermukaan koloni dapat datar, timbul mendatar, timbul melengkung, timbul mencembung, timbul membukit dan timbul berkaah. #epi koloni
ada yang utuh, ada yang berombak, ada yang berbelah-belah, ada yang bergerigi, ada yang berbenang-benang dan ada yang keriting. . !ifat-sifat koloni pada agar-agar miring. !ifat ini berkisar pada bentuk dan tepi koloni dan sifat itu dinyatakan dengan kata-kata seperti serupa pedang, serupa duri, serupa tasbih, serupa titik-titik, serupa batang dan serupa akar. 9. !ifat koloni tusukan dalam gelatin. 0da bakteri yang dapat mengencerkan gelatin. +arena itu, maka bentuk-bentuk koloninya juga berbeda-beda. Lagipula bentuk koloni yang tidak dapat mengencerkan gelatin. Bila dilihat dari samping koloni yang tidak mengencerkan gelatin dapat serupa pedang, tasbih, bertonjol-tonjol dan berjonjot. /ika bakteri mampu mengencerkan gelatin, maka bentuk koloninya dapat serupa kaah, serupa mangkuk, serupa corong, pundi-pundi dan berlapis. al tersebut bisa diamati di sekitar gelatin. !etelah mikroba ditumbuhkan pada media agar tabung maupun caan dan setelah inkubasi akan terlihat pertumbuhan bakteri dengan berbagai macam bentuk, ukuran, sifat, dan berbagai ciri khas yang lain. iri-ciri ini akan mengarahkan ke sifat-sifat mikroba tersebut pada media pertumbuhan, sehingga pengamatan morfologi ini sangat penting untuk diperhatikan (!chiegel, 14.
BAB III -NT-H MET-D-L-I PE/-BAAN IS-LASI DAN IDENTI0IKASI
#.1
ak$u %an T!&pa$
$raktikum tentang isolasi dan identifikasi yang dilaksanakan pada hari +amis tanggal 13 0pril 619 pada pukul 15.96 ' 1<.96 =%#0 di Laboratorium 7ekayasa Lingkungan Fakultas #eknik Uni)ersitas "ulaarman !amarinda. +emudian pengamatan hasil isolasi dan identifikasi dasar mikroba dilaksanakan pada tanggal 6 0pril 619 dimulai dari pukul 11.66 ' 1.66 =%#0 di Laboratorium 7ekayasa Lingkungan Fakultas #eknik Uni)ersitas "ulaarman !amarinda.
#.2
Ala$ %an Ba)an
#.2.1 Ala$ 1. Labu >rlenmeyer . #abung 7eaksi 9. 7ak #abung 7eaksi 8. Magnetic stirrer 5. Hot Plate 4. !patula <. ?eraca 0nalitik 3. aan $etri . &)en 16. Incubator 11. Batang $engaduk 1. $ipet #etes 19. $ipet @olume 18. Lampu Bunsen 15. Bulp 14. $inset 1<. Yellow tip 13. Sprayer 1. "ikro $ipet 6. Labu Ukur 1. Medical Sterilizer #.2.2 1.
Ba)an
Potato Dextrose gar ($*0
. !utrient gar (?0 9. Larutan ?al 6,A 8. +etombe 5. +ue Lapis Basi 1 gram 4. 0ir Bersih 1566 ml <. "uadest 1566 ml #$ lu%uniu% &oil '$ Tissue 16. !abun uci $iring 11. +ertas Label
#.# #.#.1
ara K!rja P!&bua$an Biakan Bak$!ri Pa%a M!%ia NA
1. *isterilkan tangan terlebih dahulu dengan menggunakan alco(ol . . *itimbang sampel berupa kue lapis basi sebanyak 1 gram. 9. *imasukkan sampel ke dalam tabung reaksi 16 -1 yang berisi larutan ?al 6,A. 8. *ikocok hingga bercampur. 5. *ipipet 1 ml larutan dari tabung reaksi 16 -1 ke tabung reaksi 16 -, kemudian homogenkan. 4. *ipipet 1 ml larutan dari tabung reaksi 16 - ke tabung reaksi 16 -9, kemudian homogenkan. <. *ipipet 1 ml larutan dari tabung 16 -9 ke dalam caan petri. 3. *itambahkan 6 ml larutan ?0, homogenkan dengan membentuk angka delapan, dan beri label. . *iinkubasi dalam inkubator selama 8 jam dengan suhu 9< o.
#.#.2 1. . 9.
P!&bua$an Biakan Ja&ur Pa%a M!%ia PDA
*iambil media $*0 yang sudah beku. *itotolkan ketombe pada caan petri, dan beri label. *iinkubasi dalam inkubator selama 83 jam dengan suhu 9< o.
BAB I HASIL DAN PEMBAHASAN
'.1
Hasil P!n"a&a$an
#abel $engamatan %dentifikasi *asar "ikroba ?o .
:ambar
1.
"edia ?0 16 -9
%dentifikasi
#erdapat bakteri, hanya terdapat
kontaminan. +eterangan gambar2 1. aan petri. . +ontaminan.
.
"edia $*0 #erdapat jamur, hanya terdapat kontaminan.
+eterangan gambar2 1. aan petri. . +ontaminan.
'.2
P!&ba)asan
%solasi mikroba adalah proses yang dilakukan bertujuan untuk memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya yang terdapat di alam dan menumbuhkannya dalam satu medium buatan, sehingga diperoleh kultur murni. +ultur murni ialah kultur yang selsel mikrobanya berasal dari pembelahan dari satu sel tunggal. "anfaat dilakukannya isolasi adalah untuk mengidentifikasi mikroba, termasuk menelaah ciri-ciri kultural, morfologis, fisiologis, maupun serologis, yang memerlukan suatu populasi yang terdiri dari satu macam mikroorganisme saja. $rinsip isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dari mikroba lainnya yang berasal dari bermacam-macam spesies mikroba $ada percobaan pembuatan biakan dengan media $*0 dilakukan isolasi dengan cara caan tuang (pour-plate method, pertama-tama disiapkan media $*0 ( Potato Dextrose gar yang telah beku di dalam caan petri. +emudian diambil sampel ketombe lalu ditotolkan pada caan petri dan dimasukkan ke dalam inkubator pada suhu 9<6 selama 83 jam. !elain itu, pada percobaan pembuatan biakan dengan media ?0 dilakukan dengan cara pengenceran ( dilution %et(od , disiapkan 9 buah tabung reaksi yang telah diisi ?al ml dan diberi label masing-masing 16 -1, 16- dan 16 -9. !uatu sampel yaitu kue lapis basi yang mengandung campuran bermacam-macam spesies mikroba diambil gram kemudian diencerkan dalam tabung reaksi 16-1 dan dihomogenkan. *ari hasil pengenceran ini kemudian diambil 1 ml untuk diencerkan lagi dalam tabung reaksi 16 - lalu dihomogenkan. asil pengenceran diambil kembali 1 ml dan dimasukkan dalam tabung reaksi 16 -9 dan dihomogenkan. asil pengenceran kemudian diambil 1 ml lalu dimasukkan ke dalam caan petri dan ditambahkan 6 ml media ?0 ( !utrient gar dan dihomogenkan membentuk angka 3 lalu dimasukkan ke dalam inkubator pada suhu 9< 6 selama 83 jam. Faktor yang dapat mempengaruhi isolasi mikroba untuk dapat tumbuh antara lain adalah2 1. !uhu !uatu mikroorganisme tidak akan mampu bertahan pada suhu yang tinggi, karena pada suhu yang terlalu tinggi protein dalam selnya akan mudah untuk terdenaturasi. . +elembapan relatif *alam suatu kondisi lembap, terdapat mikroorganisme yang akan mudah hidup. 0kan tetapi, kelembapan harus disesuaikan dengan karakteristik mikroorganisme yang akan ditumbuhkan.
9. ahaya *alam suatu intensitas cahaya tertentu mikroorganisme tidak dapat tumbuh karena, $ada intensitas cahaya yang lebih tinggi, mikroorganisme tidak akan mampu mempertahankan diri dari sinar ultra )iolet 8. 7adiasi !eperti yang kita ketahui, jika makhluk hidup terkena radiasi, maka radiasi tersebut akan berdampak pada struktur sel suatu makhluk hidup sehingga akan mengalami kelainan. al tersebut juga berdampak pada bakteri atau mikroorganisme lainnya. 5. p !etiap mikroorganisme mempunyai p yang spesifik, sehingga dalam pertumbuhannya harus disesuaikan dengan p yang dibutuhkannya. $engenceran pertama kali dilakukan oleh Lister pada tahun 1345. %a berhasil memelihara Streptococcus lactis dalam piaraan murni yang diisolasi dalam sampel susu yang sudah masam. !uatu sampel dari suatu supensi yang berupa campuran bermacam-macam spesies diencerkan dalam suatu tabung yang tersendiri. *ari hasil pengenceran ini kemudian diambil kira-kira 1 mL untuk diencerkan lebih lanjut. /ika dari pengenceran yang ketiga ini diambil 6,1 mL untuk disebarkan pada suatu medium padat, kemungkinan besar akan didapatkan beberapa koloni yang akan tumbuh dalam medium tersebut. 0kan tetapi, mungkin juga hanya akan memperoleh satu koloni saja. *alam hal yang demikian ini dapat dijadikan piaraan murni. /ika belum yakin, baha koloni tunggal yang diperoleh tersebut merupakan koloni yang murni, maka dapat mengulang pengenceran dengan menggunakan koloni sebagai sampel. ang didasarkan pada prinsip pengenceran dengan maksud untuk memperoleh spesies indi)idu. *engan anggapan baha setiap koloni dapat terpisah dari satu jenis sel yang dapat diamati. Fungsi perlakuan pada percobaan penanaman mikroba pada $*0 yaitu, pengambilan sampel dengan jarum ose yang telah dipanaskan di atas bunsen sampai membara dengan tujuan mengindari kontaminasi pada alat. +emudian sampel ditempelkan pada caan petri yang berisi $*0 untuk dibiakkan. !elanjutnya dilakukan inkubasi dengan suhu 9
tersebut yaitu agar diperoleh biakan murni mikroba. !elanjutnya dilakukan inkubasi pada suhu 9< o karena pada suhu tersebut merupakan suhu optimal bagi pertumbuhan mikroba. "edia ?0 ( !utrien gar adalah medium umum untuk uji air dan produk dairy . ?0 juga digunakan untuk pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme yang tidak selektif, dalam artian mikroorganisme heterotrof. "edia ini merupakan media sederhana yang dibuat dari bee) extract* peptone* dan agar . ?0 merupakan salah satu media yang umum digunakan dalam prosedur bakteriologi seperti uji biasa dari air, sewage, produk pangan, untuk membaa stok kultur, untuk pertumbuhan sampel pada uji bakteri, dan untuk mengisolasi organisme dalam kultur murni. "edium ?0 berfungsi untuk membiakan berbagai macam mikroorganisme serta kultur bakteri. "edia $*0 ( Potatos Dexstose gar adalah merupakan media yang umum digunakan dalam kulturasi bakteri. "edia $*0 terdapat macam Cat nutrisi organik yang digunakan dalam media biakan untuk menumbuhkan atau mengidentifikasi yeast dan kapang. *alam suatu sampel atau produk makanan. "edia $*0 mengandung sumber karbohidrat dalam jumlah cukup yaitu terdiri dari 6A ekstrak kentang dan A glukosa sehingga baik untuk pertumbuhan kapang dan khamir tetapi kurang baik untuk pertumbuhan bakteri. "edium $*0 berfungsi untuk menumbuhkan fungi jenis kapang. $enggunaan ?al 6,A dalam praktikum ini adalah sebagai sumber mineral mikroba yang mana dibutuhkan untuk menjaga sel mikroba tetap dalam keadaan yang isotonis. /ika hipotonis maka sel mikroba akan pecah. Faktor kesalahan karena praktikan kurang hati-hati dan teliti pada percobaancontohnya pada praktikum kali ini yaitu ketika kita melakukan teknik pengambilan yellow tip yaitu ketika pada saat yellow tip terjatuh pada tabung sampel, hal tersebut dapat menyebabkan kontaminasi pada bahan. $ada praktikum isolasi dan identifikasi dasar mikroba yang telah dilakukan didapat hasil adanya kontaminan pada media ( Potato Dextrose gar $*0 dan ( !utrient gar ?0, sehingga tidak menghasilkan jamur dan bakteri pada media tersebut. 0danya kontaminan ini karena kurangnya sterilisasi yang dilakukan saat melaksanakan prosedur isolasi, seperti saat mengambil larutan dengan menggunakan yellow tip dan pipet )olume. Yellow tip yang masuk ke dalam tabung reaksi saat mengambil larutan dapat mengontaminasi larutan, sedangkan pipet )olume yang tidak disterilkan juga akan mengontaminasi larutan ?0 yang akan digunakan sebagai media. /uga pada saat menghomogenkan media dengan menggunakan angka 3, karena tidak hati-hati menyebabkan media tumpah dan terkontaminasi.
Berikut ini adalah gambar media $*0 dengan jamur2
:ambar 8.1 "edia $*0 dengan jamur /amur yang terdapat pada gambar caan petri di atas tumbuh pada media Potato Dextrose gar ($*0, jamur berarna putih dengan ukuran kecil ( s%all , bentuk )ila%entous* ele)asi con+ex* dan %argin )ila%entous ini merupakan pembiakan mikroba menggunakan bahan lain berupa jamur roti yang ditotolkan pada media $*0 beku dan dimasukkan ke dalam inkubator pada suhu 9< 6 selama 83 jam
BAB
PENUTUP (.1
K!si&pulan
*ari praktikum yang telah dilakukan yaitu praktikum isolasi dan identifikasi dasar mikroba yang telah dilakukan di laboratorium kita dapat membuat kesimpulan baha2 a. Fungsi dari isolasi mikroba yaitu untuk memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba. b. #eknik dasar dalam isolasi yaitu2 "etode tuang ( Pour plate, "etode sebar (Spread plate, "etode goresan ( Streak plate, "etode pengenceran ( Dilution %et(od , "ikromanipulator ( te(%icro%anipulator %et(od . c. Faktor yang dapat mempengaruhi isolasi mikroba yang dapat tumbuh antara lain adalah2 1. !uhu . +elembaban relatif 9. ahaya 8. 7adiasi 5. p
(.2
Saran
*iharapkan pada praktikum selanjutnya dapat menggunakan sampel yang berbeda seperti digunakan sampel air hujan, air rendaman beras atau air kamar mandi praktikan masing-masing agar praktikan dapat mengetahui mikroba yang terdapatpada sampel tersebut yang kita gunakan dalam kehidupan sehari-hari.