Mac Conkey Agar. Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Fundamento En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares. Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras. Fórmula (en gramos por litro) Peptona Pluripeptona Lactosa Mezcla de sales biliares Cloruro de sodio Agar Rojo neutro Cristal violeta
Instr ucciones 17.0 3.0 10.0 1.5 5.0 13.5 0.03 0.001 pH final:
Suspender 50 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. Calentar suavemente y hervir 1 a 2 minutos hasta disolver. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
7.1 ± 0.2
Siembra - Sembrar en superficie. - Utilizando la técnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar aproximadamente 15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 ºC.
Incubación Durante 18-48 horas, a 35-37 ºC, en atmósfera aeróbica
esultados R es Microorgan i smos Escherich ia coli ATCC 25922 Klebsiel la pneumoni ae ATCC 700603 Salmonell a typhimuriu m ATCC 14028 Shigella flexner i ATCC 12022 Proteus mirabil is ATCC 43071 Enterococcus faecalis ATCC 29212
Colonias Rojas con halo turbio Rosadas mucosas Incoloras, transparentes Incoloras, transparentes Incoloras, transparentes Diminutas, incoloras, opacas
Características del medio Medio preparado: rojo púrpura
Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 ºC. Medio preparado: a 2-8 ºC.
AGAR EOSINA Y AZUL DE METILENO BIBLIOGRAFÍA RESULTADOS PREPARACIÓN FORMULA EXPLICACIÓN USO Blv. -20-95 · 53-84-20-70 · 53-84-20-50
ESPECIFICACIONES El Agar Eosina y Azul de Metileno es un medio utilizado para el aislamiento y diferenciación de bacilos entéricos Gram negativos. Este medio también es conocido como Agar E MB por sus siglas en inglés.
La
fórmula original del Agar EMB fue desarrollada por Holt-Harris y Teagu e. El uso de la eosina y del azul de metileno permite la diferenciación de las colonias fermentadoras de lactosa d e las no fermentadoras. La sacarosa está incluida en el medio para detectar a los miembros del grupo coliforme que fermentan más rápidamente la sacarosa que la lactosa. Este medio se considera superior al Agar ENDO, ya que resulta ser un medio más sensible, estable y seguro y permite una diferenciación mas temprana entre las colonias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa. Holt-Harris y Teague d esarrollaron posteriormente la formulación para el A gar de Levine para la diferenciación de organismos coliformes fecales y no fecales. Este medio permite diferenciar al grupo Salmonella y otros organismos lactosa negativos de organismos coliformes. El Agar EMB es una combinación de la fórmula original y la de L evine donde las peptonas proveen la fuente de nitrógeno, la eosina y el azul de metileno son colorantes que se combinan para formar un precipitado a pH ácido. Los colorantes actúan como inhibidores e indicadores. Las carbohidratos proporcionan la fuente de en ergía, las fosfatos actúan como buffer y el agar como agent e solidificante. Digerido Pancreático de Gelatina 10.0 L actosa 5.0 Sacarosa 5.0 Fosfato Dipotásico 2.0 EosinaY 0.4 Azul de Metileno 0.065 Agar Bacteriológico 15.0 pH 7.2± 0.2 Método:
Suspender 36 g d el medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121°C (15 libras de pres ión) durante 15 minutos. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-5 0°C y va ciar en placas de P etri estériles. Procedimiento:
1. Recolectar las muestras y sembrarlas tan pronto lleguen al laboratorio, sembrando las placas por estría. 2. Incubar las placas 35- 37°C durante 18 a 24 horas y obs ervar el crecimiento. Las colonias de Salmonella y Shigella son translúcidas, de color ámbar o incoloras. Los coliformes que utilizan la lactosa y/o sacarosa producen colonias de color azul a negro con centros obscuros y brillo metálico. Otros coliformes como Enterobacter pres entan colonias mucosas de color rosa. Las cepas de Enterococcus faecalis son parcialmente inhibidas. Almacenamiento: 2-30° C. Caducidad: 5 años en frasco cerrado. Presentación: Frasco con 450 g Caja con 20 sobres para un litro Medio preparado en paquete con 10 placas
Salmonella Sh igella Agar. Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.
Fundamento Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio. Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo. Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes. La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de hierro. Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo (B02-120-05). Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona 5.0 Extracto de carne 5.0 Lactosa 10.0 Mezcla de sales biliares 8.5 Citrato de sodio 8.5 Tiosulfato de sodio 8.5 Citrato férrico 1.0 Agar 13.5 Verde brillante 0.00033 Rojo neutro 0.025
Instr ucciones
Suspender 60 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta homogeneizar. Calentar a ebullición durante 2 o 3 minutos. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50°C y distribuir unos 20 ml por placa. Secar la superficie del medio unos minutos en la estufa.
pH final: 7.0 ± 0.2
Siembra Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo. Recomendac iones, se aconseja sembrar en forma conjunta una placa de agar E.M. B. (B02-101-05) o de agar Mac Conkey (B02-114-05).
Incubación Durante24-48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis. R esultados
Microorgan i smos Salmonell a typhimuriu m ATCC 14028 Shigella flexner i Shigella sonnei Proteus mirabil is ATCC 43071 Escherich ia coli ATCC 25922 Klebsiel la pneumon iae ATCC 700603 Enterococcus faecalis ATCC 29212
Colonias Transparentes, centro negro Incoloras Incoloras Transparentes, centro negro Rosadas a rojas Rosadas cremosas y mucosas Incoloras, de muy escaso crecimiento
Características del medio Medio preparado: rojo naranja.
Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 ºC. Presentac ión
x 100g :Código: B02-138-05
Nutritivo
X 500g :Código: B02-138-06
Agar
Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos. Su uso está descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.
Fundamento Por las características de sus componentes es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrógeno para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos exigentes. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona Extracto de carne Cloruro de sodio
Agar
Instr ucciones Suspender 31 g de polvo por litro de agua destilada. Mezclar y dejar reposar 5 minutos. Calentar suavemente agitando y hervir 1 o 2 minutos hasta su disolución. Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15.0 15 minutos. pH final: 7.3 ± 0.2 5.0 3.0 8.0
Siembra En superficie o por la técnica de pour plate, según el uso a que se destine.
Incubación En aerobiosis, a 35-37 ºC durante 24 horas. R esultados
a-Agar n utritivo:
Microorgan ismos
Crecimiento
P. mirabilis ATCC 43071
Bueno-excelente
E. coli ATCC 25922 S. aureus ATCC 25923 B. cereus ATCC 10876 E. faecalis ATCC 29212 P. aeruginosa ATCC 27853
Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-exce lente Bueno-excelente
b-Agar nutritivo s upl ementado con 5% de sangre de carnero:
Microorgan i smos S. pyogenes ATCC 19615 S. pneumoniae ATCC 6305 S. pneumoniae ATCC 49619
Crecimiento Abundante Abundante Abundante
Hemólisis Beta Alfa Alfa
Características del medio Medio preparado: ámbar claro a medio ligeramente opalescente.
Almacenamiento Medio deshidratado: a 10-35 ºC. Medio preparado: a 2-8 ºC. Presentac ión x 500g :Código: B02-122-06
x 100g :Código: B02-122-05
Verde
6 x 50 ml: B04-122 -84
Brillante Agar.
Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella spp., excepto S. typhi y S. paratyphi, a partir de muestras clínicas, alimentos, y otros materiales de importancia sanitaria. No se recomienda para el aislamiento de Shigella spp. Es de un valor excepcional cuando se investiga un gran número de muestras de heces o alimentos, por su alta capacidad de diferenciación de las colonias sospechosas.
Fundamento En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay producción de ácido a partir de la fermentación de azúcares, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el verde brillante actúa como agente selectivo. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona Extracto de levadura Cloruro de sodio Lactosa Sacarosa Rojo fenol Verde brillante Agar
Instr ucciones 10.0 3.0 5.0 10.0 10.0 0.08 0.0125 20.0 pH final:
Suspender 58 g de polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullición durante 2 o 3 minutos. Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121°C durante 15 minutos. Secar la superficie del medio por unos minutos en la estufa.
6.9 ± 0.2
Siembra Sembrar en superficie por estriado a partir de una dilución del material a investigar o de un cultivo previo en un medio de enriquecimiento selectivo, como Selenito caldo (B02-120-05) o Tetrationato caldo (B02-145-05). Para el tratamiento de materia fecal se recomienda hacer cultivo primario en medios menos selectivos, como Salmonella Shigella agar (B02-138-05), o Mac Conkey agar (B02-114-05).
Incubación Incubar 24 horas a 35-37°C. R esultados
Microorgan i smos Escherichia coli ATCC 25922 Salmonel la enteritidis ATCC 13076 Salmonella typhi Salmonel la typhimuriu m ATCC 14028 Shigella flexneri. ATCC 12022 Staphylococcus aureus ATCC 25923
Característi cas de las colon ias Amarillo-verdos as sobre fondo amarillent o Rosas, blancas o transparentes sobre fondo rojo Crecimiento inhibido Rosas, blancas o transparentes sobre fond o rojo Crecimiento inhibido Crecimiento inhibido
Características del medio Medio preparado: verde.
Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 ºC. Medio preparado: a 2-8 ºC. Presentac ión
x 100g :Código: B02-124-05
x 500g :Código: B02-124-06
AGAR METODOS ESTANDAR BIBLIOGRAFÍA RESULTADOS PREPARACIÓN FORMULA EXPLICACIÓN USO
Blv. Centro Industrial Nº 1017, Fracc. Ind. Puente de Vigas, C.P. 54070, Tlalnepantla, Edo. de México Teléfono y Fax: 53-84-20-95 · 53-84-20-70 · 53-84-20-50
ESPECIFICACIONES El Agar Métodos Estandar es un medio utilizado para el recuento de bacterias aeróbicas a partir de agua, aguas residuales, alimentos y productos lácteos. Este medio también es conocido como Agar Cuenta Estandar. El Agar Métodos Estandar fue desarrollado por Buchbinder Baris and Goldstein en 1953 como un requerimiento de la American Public Health Association. Este medio se formula con los ingredientes originales. El extracto de levadura y la pepto na de caseína han sido utilizados en medios diseñados para estudiar la presencia de microorganismos termofílicos en pro ductos lácteos desde 19 28. La peptona de g elatina y el extracto de levadura proporcionan la fuente de carbono y nitrógeno. La dextrosa es el carbohidrato fermentable y el ag ar es adicionado como agente solidificante. Peptona de Caseína 5.0 Dextrosa 1.0 Extracto de L evadura 2.5 Agar Bacteriológico 15.0 pH 7.0 ± 0.2 Método:
Suspender 23.5 g d el medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121° C (15 libras de presión) durante 15 minutos. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50 °C y vaciar en placas de Petri estériles. Procedimiento:
1. Consultar las referencias apropiadas respecto a los procedimientos para procesar y sem brar muestras de alimentos, agua y otros materiales. 2. Colocar alícuotas de la muestra en las placas Petri y vaciar el medio enfriado a 45 °C. Mezclar, dejar solidificar e incubar. Este medio también puede utilizarse para hacer la siembra por filtración de membrana. 3. Incubar las placas a 35 ±2 °C durante 18-24 horas. Después del período de incubación se hace el conteo d e colonias ya sea en la superficie del filtro o en el seno del medio, dependiendo de la técnica utilizada. Almacenamiento: 2-30°C. Caducidad: 4 años en frasco cerrado. Presentación: Frasco con 450 g Caja con 20 sobres para un litro Medio preparado en paquete con 10 placas
AGAR SOYA TRIPTICASEINA BIBLIOGRAFÍA RESULTADOS PREPARACIÓN FORMULA EXPLICACIÓN USO
Blv. Centro Industrial Nº 1017, Fracc. Ind. Puente de Vigas, C.P. 54070, Tlalnepantla, Edo. de México Teléfono y Fax: 53-84-20-95 · 53-84-20-70 · 53-84-20-50
ESPECIFICACIONES El Agar Soya Tripticaseína es un medio utilizado para promov er el crecimiento de microorganismos fastidiosos y adicionado de sangre p ara observa reacciones hemolíticas. El Agar de Soya Tripticaseína provee un excelente soporte de crecimiento para organismo aerobios y anaerobios, según lo demostró Leavit en 1955. Este medio es recomendado en los procedimientos microbiológicos de control de aguas , cosméticos y en la industria farmaceútica. De aguerdo con la Farmacopea. Clínicamente se utiliza para diferenciar especies de Haemophylus debido a que no contiene los factores X y V requeridos para su crecimiento. Así mismo este medio puede ser utilizado como base para preparar medios suplementados como el Agar Sangr e y Agar Glosa Ch ocolate. En este medio las peptonas proveen la fuente d e nitrógeno y minirales. El azúcar de la Peptona de Soya provee la fuente de carbohidratos. El Cloruro de Sodio tiene su función en el balance osmótico y el Ag ar es incorporado como agente solidificante. Peptona de Caseína 15.0 Peptona de Soya 5.0 Cloruro de Sodio 5.0 Agar Bacteriológico 15.0 pH 7.3 ± 0.2 Método:
Suspender 40 g d el medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121°C ( 15 libras de presión) durante 15 minutos. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-5 0°C y va ciar en placas de P etri estériles. Para preparar Agar Sangre, adicionar ascéticamente sangre desfibrinada estéril al 5% después de esterilizar y enfriar el medio. Almacenamiento: 2-30°C. Caducidad: 5 años en frasco cerrado. Presentación: Frasco con 450 g Caja con 20 sobres para un litro Medio preparado en paquete con 10 placas Medio preparado en caja con 10 Tubos
