laporan pewarnaan Spora

BAB I PENDAHULUAN

A. LAT LATAR BELAKAN BELAKANG G Mikroorganisme yang ada di alam ini mempunyai morfologi, struktur dan sifat-sifat yang kas, !egitu pula dengan !akteri. Bakteri yang idup ampir tidak !er"arna dan kontras dengan air, dimana sel-sel !akteri terse!ut disuspensikan. #ala #ala satu $ara untuk untuk mengam mengamati ati !entuk !entuk sel !akteri !akteri seingg seinggaa muda muda untuk untuk diidentifikasi iala dengan metode penge$atan atau pe"arnaan. %al terse!ut &uga !erfungsi untuk mengetaui sifat fisiologisnya yaitu mengetaui reaksi dinding sel !akteri melalui serangkaian penge$atan. Be!erapa spesies !akteri tertentu dapat mem!entuk spora. #pora diasilkan di dalam tu!u 'egetatif !akteri terse!ut, dapat !erada di !agian tenga ($entral), u&ung (terminal) (terminal) ataupun ataupun tepian sel. spora merupakan merupakan tu!u !akteri !akteri yang se$ara meta!olik mengalami dormansi, diasilkan pada faselan&ut dalam pertum!uan sel !akteri yang sama seperti asalnya, yaitu sel 'egetatif. #pora !ersifat taan teradap tekanan fisik maupun kimia"i. *e"arnaan diferensial merupakan teknik pe"arnaan yang menampilkan per!edaan di antara sel-sel mikro!a atau !agian-!agian sel mikro!a. Teknik Teknik pe"arnaan ini menggunakan tidak anya satu &enis larutan +at "arna, !er!eda deng dengan an

tekn teknik ik

pe"a pe"arn rnaa aan n

sede seder ran anaa

(pe" (pe"ar arna naan an

tung tungga gal) l)

yang ang

any anyaa

menggunakan satu &enis +at "arna sa&a. *e"arnaan diferensial !anyak &enisnya, antara antara lain iala iala pe"arn pe"arnaan aan gram, gram, pe"arn pe"arnaan aan spora, spora, pe"arn pe"arnaan aan taan taan asam, asam, pe"arnaan giemsa, pe"arnaan kapsul, dan pe"arnaan flagel. *ada praktikum kali ini, digunakan digunakan teknik pe"arnaan spora. Teknik knik pe"a pe"arn rnaa aan n spor sporaa meru merupa paka kan n *e"a *e"arn rnaa aan n spor sporaa merup erupak akan an pe"arnaan dengan menggunakan mala$ite green dan safranin, yang dalam dala m asil pe"arnaannya akan mun$ul "arna i&au pada sporanya, serta "arna mera pada sel 'egetatifnya yaitu pada Bacillus pada Bacillus subtitulis. subtitulis.

Laporan Praktikum Bakteriologi 1

Page 1

#e!agai tenaga analis keseatan di!utukan keterampilan dalam mem!uat spesimen yang !erguna dalam pemeriksaan spesimen di la!oratorium. #pora !akteri umumnya tidak muda di"arnai dengan +at pe"arna pada umumnya, tetapi sekali di"arnai, +at "arna terse!ut akan sulit ilang. %al terse!ut yang melatar!elakangi penulis untuk mengangkat permasalaan ini se!agai masala yang akan di!aas dalam laporan praktikum dengan &udul *e"arnaan #pora. B. T/AN *ER01BAAN 2 3. Mem!uat sediaan untuk pe"arnaan spora !akteri. 4. ntuk melakukan proses pe"arnaan spora !akteri. 5. ntuk meliat !entuk dan letak spora pada !akteri

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

Mikroorganisme yang ada di alam ini mempunyai morfologi, struktur dan sifat-sifat yang kas !egitu pula dengan !akteri. Bakteri yang idup amper tidak !er"arna dan kontras dengan air, dimana sel-sel !akteri yang ada di suspensikan.


Page 2

#ala satu $ara unutk mengamati !entuk sel !akteri seingga muda di identifikasi adala dengan $ara metode pengen$eran atau pe"arnaan. %al terse!ut !erfungsi untuk mengetauisifat fisiologisnya yaitu mengetaui reaksi dinding sel !akteri melalui serangkaian penge$etan atau pe"arnaan (6"id&oseputro, 4778). Bakteri merupakan organisme prokariot. mumnya ukuran !akteri sangat ke$il, !entuk tu!u !akteri !aru dapat diliat dengan menggunakan mikroskop dengan pem!esaran 3.777 9 atau le!i. #el !akteri memiliki pan&ang yang !eragam, sel !e!erapa spesies dapat !erukuran 377 kali le!i pan&ang daripada sel spesies yang lain. Bakteri merupakan makluk idup dengan ukuran antara 7,3 sampai 7,5 :m. Bentuk !akteri !erma$am ; ma$am yaitu elips, !ulat, !atang dan spiral. Bakteri le!i sering diamati dalam olesan ter"arnai dengan suatu +at pe"arna kimia agar muda diamati atau diliat dengan &elas dalam al ukuran, !entuk, susunan dan keadaan struktur internal dan !utiran (*el$+ar, 477<). Be!erapa spesies !akteri tertentu dapat mem!entuk spora. #pora diasilkan di dalam tu!u 'egetati'e !akteri terse!ut, dapat !erada di !agian tenga ($entral), u&ung (terminal) atau pun tepian sel. spora merupakan tu!u !akteri yang se$ara meta!oli$ mengalami dormansi, diasilkan pada fase lan&ut dalam pertum!uan sel !akteri yang sama seperti asalnya, yaitu sel 'egetatif. #pora !ersifat taan teradap tekanan fisik maupun kimia"i (*el$+ar, 3=>?). Bakteri pem!entuk spora le!i taan teradap desinfektan, sinar, kekeringan, panas, dan kedinginan. Ke!anyakan !akteri pem!entuk spora tinggal di tana, namun spora !akteri dapat terse!ar di mana sa&a (6"id&oseputro, 4778).

#pora !akteri adala !entuk !akteri yang sedang dalam usaa mengamankan diri teradap pengaru !uruk dari luar. #egera setela keadaan luar !aik lagi !agi mereka, maka pe$ala !ungkus spora dan tum!ula !akteri. #pora la+im dise!ut endospora iala karena spora itu di!entuk di dalam sel. Endospora &au le!i taan teradap pengaru luar yang !uruk dari pada !akteri !iasa yaitu


Page 3

!akteri dalam !entuk 'egetatif. #porulasi dapat di$ega, &ika selalu diadakan pemindaan piaraan ke medium yang !aru (%adioetomo, 3==5). Be!erapa spesies !akteri mengasilkan spora eksternal. #treptomy$es misalnya, megasilkan serantaian spora (dise!ut konidia), yang disangga di u&ung ifa, suatu filamen 'egetatif. *roses ini serupa dengan proses pem!entukan spora pada !e!erapa $enda"an(Ball. 3==<). #pora !akteri dapat !er!entuk !ulat, lon&ong atau silindris. Berdasarkan letaknya spora di dalam sel kuman, dikenal letak sentral,su!terminal dan terminal. Ada spora yang garis tenganya le!i !esar dari garis tenga sel kuman, seingga menye!a!kan pem!engkakan sel !akteri (*rati"i,#. 477>). /enis-&enis !akteri tertentu, terutama yang tergolong dalam genus Ba$illus dan 0lostridium mampu mem!entuk spora. #pora yang diasilkan di luar sel 'egetatif (eksospora) atau di dalam sel 'egetatif (endospora). Bakteri mem!entuk spora !ila kondisi lingkungan tidak optimum lagi untuk pertum!uan dan perkem!angannya, misalnya2 medium mengering, kandungan nutrisi menyusut dan se!againya (Ball, 3==<). #uatu !adan yang refraktil terdapat dalam induk sel dan merupakan suatu stadium isrtiraat dari sel terse!ut. Endospora memiliki tingkat meta!olisme yang sangat renda seingga dapat idup sampai !ertaun-taun tanpa memerlukan sum!er makanan dari luar (Tarigan 3=>>). 6ua &enis !akteri yang dapat mem!entuk spora misalnya Clostridium dan Bacillus. Clostridium adala !akteri yang !ersifat anaero!i$, sedangkan Bacillus pada umumnya !ersifat aero!i$. #truktur endospora mungkin !er'ariasi untuk setiap &enis spesies, tapi umumnya amper sama. Endospora !akteri merupakan struktur yang taan teradap keadaan lingkungan yang ekstrim misalnya kering, pemanasan, dan keadaan asam (*rati"i,#. 477>). *em!entukan spora dapat dianggap se!agai suatu proses diferensiasi dari suatu siklus idup dalam keadaan-keadaan tertentu. %al ini !er!eda dari peristi"a pem!elaan sel karena tidak ter&adi replikasi kromosom (*el$+ar, 3=>?).


Page 4

Kemampuan mengasilkan spora mem!eri keuntungan ekologis pada !akteri, karena memungkinkan !akteri itu !ertaan dalam keadaan !uruk. Langka-langka utama di dalam proses pem!entukan spora se!agai !erikut 2 3. *en&a&aran kem!ali !aan 6NA men&adi filamen dan in'aginasi mem!rane sel di dekatsatu u&ung sel untuk mem!entuk suatu struktur yang dise!ut !akal spora. 4. *em!entukan sederet lapisan yang menutupi !akal spora, yaitu korteks spora diikuti dengan selu!ung spora !erlapis !anyak. 5. *elepasan spora !e!as seraya sel induk mengalami lisis (*el$+ar, 3=>?). Endospora adala struktur spesifik yang ditemukan pada !e!erapa &enis !akteri. Karena kandungan air endospora sangat renda !ila di!andingkan dengan sel 'egetatifnya, maka endospora !er!entuk sangat padat dan sangat refraktil !ila diliat di !a"a mikroskop. Endospora sangat sukar di"arnai dengan pe"arna !iasa, seingga arus digunakan pe"arna spesifik dan yang !iasa digunakan adala mala$ite green (%adioetomo, 3==5). *e"arnaan diferensial merupakan teknik pe"arnaan yang menampilkan per!edaan di antara sel-sel mikro!a atau !agian-!agian sel mikro!a. Teknik pe"arnaan ini menggunakan tidak anya satu &enis larutan +at "arna, !er!eda dengan

teknik

pe"arnaan

sederana

(pe"arnaan

tunggal)

yang

anya

menggunakan satu &enis +at "arna sa&a. *e"arnaan diferensial !anyak &enisnya, antara lain iala pe"arnaan gram, pe"arnaan spora, pe"arnaan taan asam, pe"arnaan giemsa, pe"arnaan kapsul, dan pe"arnaan flagel. *ada praktikum kali ini, digunakan teknik pe"arnaan spora (*el$+ar @ 0an, 477<). Teknik

pe"arnaan

spora

merupakan

*e"arnaan

spora

merupakan

pe"arnaan dengan menggunakan mala$ite green dan safranin, yang dalam asil pe"arnaannya akan mun$ul "arna i&au pada sporanya, serta "arna mera pada sel 'egetatifnya yaitu pada Bacillus subtitulis (olk dan leer, 3=>C). Endospora di!uat irisan dapat terliat terdiri atas pem!ungkus luar, korteks dan inti yang mengandung struktur nukleus. Apa!ila sel 'egetatif mem!entuk endospora, sel ini mem!uat en+im !aru, memproduksi dinding sel yang sama sekali !aru dan !eru!a !entuk. 6engan kata lain sporulasi adala !entuk


Page 5

sederana diferensiasi sel, karena itu, proses ini diteliti se$ara mendalam untuk mempela&ari peristi"a apa yang memi$u peru!aan en+im dan morfologi. #pora !iasanya terliat se!agai !adan-!adan refraktil intrasel dalam sediaan suspensi sel yang tidak di"arnai atau se!agai daera tidak !er"arna pada sel yang di"arnai se$ara !iasa. 6inding spora relatif tidak dapat ditem!us, ini pula yang men$ega ilangnya +at "arna spora setela melalui pen$u$ian dengan alkool yang $ukup lama untuk mengilangkan +at "arna sel 'egetatif. #el 'egetatif akirnya dapat di!eri +at "arna kontras. #pora !iasanya di"arnai dengan i&au mala$it atau $ar!ol fu$sin (*el$+ar @ 0an, 477<). Endosopora tidak muda di"arnai dengan +at pe"arna pada umumnya, tetapi sekali di"arnai, +at "arna terse!ut akan sulit ilang. %al inila yang men&adi dasar dari metode penge$atan spora se$ara umum. *ada metode #$aeffer-Dulton yang !anyak dipakai dalam penge$atan endospora, endospora di"arnai pertama dengan mala$ite green dengan proses pemanasan. Larutan ini merupakan pe"arna yang kuat yang dapat !erpenetrasi ke dalam endospora. #etela perlakuan mala$ite green, !iakan sel di$u$i dengan air lalu ditutup dengan $at safranin. Teknik ini akan mengasilkan "arna i&au pada endospora dan "arna mera muda pada sel 'egetatifnya (olk dan leer, 3=>C). #ala satu $iri endospora !akteri adala susunan kimia"inya. #emua endospora !akteri mengandung se¨a !esar asam dipikolinat yaitu suatu su!stansi yang tidak terdeteksi pada sel 'egetatif. #esunggunya, asam terse!ut merupakan 8-37  !erat kering endospora. #e¨a !esar kalsium &uga terdapat dalam endospora, dan diduga !a"a lapisan korteks ter!uat darim kompleks 0a4F asam dipikolinat peptidoglikan (*el$+ar, 3=>?). 6iameter spora dapat le!i !esar atau le!i ke$il dari diameter sel 'egetatifnya. 6i!andingkan dengan sel 'egetatif, spora sangat resisten teradap kondisi-kondisi fisik yang kurang menguntungkan seperti suu tinggi dan kekeringan serta !aan-!aan kimia seperti desinfektan. 6alam pengamatan spora !akteri diperlukan pe"arnaan tertentu yang dapat menem!us dinding te!al spora. *e"arnaan terse!ut adala dengan penggunaan larutan i&au malakit 8, dan


Page 6

untuk memper&elas pengamatan, sel 'egetati'e &uga di"arnai dengan larutan safranin 7,8 seingga sel 'egetati'e ini !er"arna mera. Namun ada &uga +at "arna kusus untuk me"arnai spora dan di dalam proses pe"arnaannya meli!atkan treatment pemanasan, yaitu spora dipanaskan !ersamaan dengan +at "arna terse!ut seingga memudakan +at "arna terse!ut untuk meresap ke dalam dinding pelindung spora !akteri (olk @ eeler, 3=>C). Be!erapa !akteri mampu mem!entuk spora meskipun tidak dalam keadaan ekstrem ataupun medium yang kurang nutrisi. %al ini dimungkinkan karena !akteri

terse!ut

se$ara

genetis,

dalam

taapan

pertum!uan

dan

perkem!angannya memang memiliki satu fase sporulasi (*rati"i,#. 477>). /ika medium selalu diadakan pem!aruan dan kondisi lingkungan disekitar !akteri selalu di&aga kondusif, !e!erapa &enis !akteri dapat keilangan kemampuannya dalam mem!entuk spora. %al ini dimungkinkan karena struktur !akteri yang sangat sederana dan sifatnya yang sangat muda !ermutasi, seingga perlakuan pada lingkungan yang terus menerus dapat mengaki!atkan !akteri mengalami mutasi dan keilangan kemampuannya dalam mem!entuk spora (Tarigan, 3=>>). #pora !akteri ini dapat !ertaan sangat lama, ia dapat idup !ertaun taun !akan !era!ad - a!ad &ika !erada dalam kondisi lingkungan yang normal. Ke!anyakan sel 'egetatif akan mati pada suu ?7-<7o0, namun spora tetap idup, spora !akteri ini dapat !ertaan dalam air mendidi !akan selama 3 &am le!i. #elama kondisi lingkungan tidak menguntungkan, dan akan tetap men&adi spora, sampai kondisi lingkungan dianggap menguntungkan, satu sel !akteri yang !aru dan !erkem!ang!iak se$ara normal (olk @ eeler, 3=>C). Respon Bakteri *engasil #pora dan yang Tidak Taan *enge$atan *e"arnaan #pora menggunakan reagensia yang !er!eda, menurut ple$+ar yaitu2 a.

Hat arna *rimer2 Mala$ite Green. #pora tidak !isa di"arnai seperti me"arnai sel 'egetatif, dise!a!kan karena

adanya spore $oat yang tidak muda mengikat +at "arna primer. ntuk penetrasi +at "arna, diperlukan pemanasan. #etela di!eri +at "arna primer, kemudian preparat dipanasi, sel 'egetatif dan spora akan !er"arna i&au.


Page 7

!. Hat *eluntur2 Air. #ekali mala$ite green masuk ke dalam spora, tidak !isa lagi dilunturkan dengan air mengalir, yang anya melunturkan sisa-sisa +at "arna primer. $.

#pora tetap 0at !er"arna i&au. se!aliknya +at "arna tidak menun&ukkan affeniteit yang

kuat dengan komponen sel 'egetatif, air !isa melunturkannya, yang kemudian men&adi tidak !er"arna. d. Hat arna Kontras2 #afranin atau larutan Du$sin. Hat "arna kontras yang !er"arna mera ini digunakan untuk me"arnai sel 'egetatif yang suda dilunturkan, yang kemudian akan menga!sor!si +at "arna kontras dan akan !eru!a men&adi !er"arna mera. #pora tetap !er"arna i&au seperti "arna +at primer. 0onto yang paling muda adala untuk spesies Bacilllus subtilis dan E. Coli. B. Subtilis akan !er"arna i&au setela penge$atan. %al ini !erarti B. Subtilis memiliki endospora. Endospora le!i taan lama meski dalam keadaan lingkungan ekstrim seperti kering, panas, atau !aan kimia yang !era$un. Eschericia coli setela penge$atan akan !er"arna mera muda dari safranin. E.coli !erarti tidak memiliki endospora, anya memiliki sel 'egetatif. Karena E.coli anya memiliki sel 'egetatif, sel 'egetatif tidak taan teradap pe"arnaan. #aat di"arnai denga mala$ite, sel 'egetatif tidak dapat mengikat mala$ite seingga saat dilunturkan, "arna mala$ite dapat ilang. Kemudian saat di!eri safranin, sel 'egetatif dapat mengikat "arna kem!ali seingga "arna sel men&adi mera muda (Tarigan, 3=>>).

BAB III

METODE PRAKTIKUM

A. ALAT 6AN BA%AN 3. Alat a. Ka$a *reparat 3 !ua. !. *ipet Tetes 5 !ua.


Page 8

$. d. e. f. g. . i. &.

Lampu spiritus. Rak pe"arnaan. *en&epit. 1se !ulat. *inset. Mikroskop. Korek api. *ensil "arna (mera,!iru, dan ungu).

4. Baan a. Biakan Bakteri pada agar miring. !. Larutan Air fu$sin. $. Minyak emulsi. d. Larutan air garam fisiologis. e. Larutan mala$ite green. f. AIuadest. g. Kertas saring atau tissue.

B. *RJN#J* *RAKTJKM Adapun prinsip praktikum pada per$o!aan kali ini yaitu didasarkan pada sel 'egetatif akan !er"arna mera dan spora !er"arna i&au dengan latar !elakang mera muda , apa!ila spora di$at dengan penge$atan s$aeffer fulton. 0. 0ARA KER/A 3. Am!il se!ua ka$a !enda dan !ersikan lalu, 4. Buat preparat yang tipis dan rata pada !akteri.

5. Keringkan preparat pada suu kamar dan fiksasi. C. Letakkan ka$a !enda  preparat mendatar di atas rak preparat dan tuangi masing - masing dengan larutan mala$ite green. 8. *anaskan selama 4-5 menit dan &aga agar pe"arna tidak menguap. ?. Buang +at "arna, dan $u$i dengan air mengalir. <. Tetesi seluru preparat dengan larutan fu$sin, !iarkan selama 57 detik.


Page 9

>. Buang +at "arna dan $u$i dengan aIuadest atau air mengalir. =. Keringkan dengan tissue atau kertas perkamen. 37. *eriksala di!a"a mikroskop dengan penam!aan

oil

mersi

menggunakan pem!esaran 377. 33. Gam!arkan apa yang anda liat.

BAB J %A#JL *RAKTJKM

A. TABEL *ENGAMATAN

*erlakuan

arna Bakteri

arna

arna latar

'egetatif

#pora

!elakang

ngu

%i&au

Letak #pora

1lesan #ampel Bakteri F fiksasi F Mala$ite green F dipanaskan F 6i!ilas dengan aIuades F larutan air fu$sin F di diamkan 57 detik F 6i!ilas

dengan

aIuades

Bening (transparan)

F

6ikeringkan dengan kertas saring F

6itetesi

6iamati

minyak dengan

imersi

F

mikroskop,


Page 10

#u!terminal

dengan pem!esaran 3779

B. GAMBAR

A

B

BAB  *EMBA%A#AN

*ada praktikum kali ini dilakukan pe"arnaan !akteri !erupa pe"arnaan spora. #pora pada !akteri !er!eda dengan spora pada &amur, pada !akteri sporanya tidak mempunyai fungsi se!agai alat reproduksi tetapi se!agai perlindungan dari kondisi yang tidak menguntungkan !agi !akteri terse!ut. Endospora !akteri taan teradap kondisi lingkungan ekstrim seperti suu yang tinggi, kekeringan, senya"a kimia !era$un (desinfektan , anti!iotik), dan radiasi sinar . Biasanya !akteri yang mem!entuk endospora merupakan fase tidur dari !akteri. Endospora ini mampu !ertaan sampai kondisi lingkungan kem!ali menguntungkan !agi !akteri. Tetapi setela keadaan lingkungan menguntungkan !agi !akteri maka !ungkus spora akan pe$a dan tum!u !akteri. *e"arnaan spora merupakan pe"arnaan yang tidak dapat di "arnai dengan pe"arnaan !iasa, diperlukan teknik pe"arnaan kusus. Endospora tidak muda di"arnai dengan +at pe"arna pada umumnya, tetapi sekali di"arnai, +at "arna terse!ut akan sulit ilang. *e"arnaan yang dilakukan dalam praktikum ini dengan


Page 11

menggunakan pe"arnaan Klein. *e"arnaan Klein merupakan pe"arnaan spora yang paling !anyak digunakan dengan menggunakan pe"arna mala$ite green se!agai pe"arna utama dan kar!ol fu$sin se!agai pe"arna sekundernya.. #pora !akteri sangat sulit sekali !ila di"arnai dengan pe"arnaan gram. ntuk pe"arnaan spora, perlu dilakukan pemanasan supaya pe"arna !isa masuk ke dalam spora, seperti pada pe"arnaan taan asam dimana pe"arna mala$ite green arus dipanaskan untuk !isa menem!us lapisan lilin asam suatu !akteri !a$sillus dan E. 0oli. Langka pertama adala dengan mem!uat suspense !akteri. #uspensi !akteri yang akan di!uat diusaakan tidak terlalu te!al seingga !akteri tidak !ertumpuktumpuk karena akan mempengarui pengamatan di!a"a mikroskop. *em!uatan suspense pada pe"arnaan ini sama dengan pe"arnaan ; pe"arnaan se!elumnya yaitu ka$a preparat disterilkan terle!i daulu dan diteteskan air garam fisiologis pada ka$a !enda yang tela disterilkan terse!ut. Kemudian mengam!il !akteri dari !iakan !akteri pada agar miring dan diletakkan di atas tetesan air garam fisiologis. #etela itu !akteri diratakan dengan menggunakan ose !ulat. Kemudian ka$a !enda terse!ut difiksasi dengan mele"atkannya diatas api. Tu&uan proses fiksasi ka$a !enda ini adala agar !akteri dapat melekat pada ka$a !enda serta mem!uat !akteri mem!entuk spora, karena merasa dalam keadaan teran$am. 6alam setiap pem!uatan suspensi digunakan Na0l fisiologis dikarenakan *enggunaan Na0l fisiologis ini !erperan se!agai penyangga p% agar sel !akteri tidak rusak aki!at menurunnya p% lingkungan. Langka kedua yaitu ditetesi dengan larutan mala$ite green dan diratakan pada ka$a !enda seingga tertutup semua setela ditetesi kemudian dipanaskan diatas pem!akar spiritus selama 4 - 5 menit, pada pemanasan ini diusaakan agar pe"arna mala$ite green tidak sampai mendidi ataupun mengering. Tu&uan pemanasan ini agar $at "arna mala$ite green dapat menem!us masuk ke dalam spora, seperti pada pe"arnaan taan asam dimana pe"arna $ar!ol fu$sin arus dipanaskan untuk !isa menem!us lapisan lilin asam suatu !akteri. *er!edaan *e"arnaan taan asam dan *e"arnaan spora iala pada pe"arnaan taan asam !ertu&uan untuk melunturkan pe"arnaan !akteri yang taan asam.


Page 12

#edangkan pe"arnaan spora !ert&uan untuk me"arnai spora pada !akteri yang dapat mem!entuk spora. Langka selan&utnya adala dengan mem!asu "arna i&au malakit dengan aIuades atau air mengalir ingga "arnanya luntur, kemudian di!eri pe"arna safranin atau $ar!ol fu$sin. *e"arnaan dengan safranin !ertu&uan se!agai $ounterstain yang digunakan untuk melumuri !agian "arna dari sel 'egetatif selain endospora. #etela ditetesi di!iarkan selama 57 detik, tu&uannya agar "arna dapat meresap pada sel 'egetatif !akteri. Kemudian, setela didiamkan selama 57 detik kemudian di!ilas dengan air mengalir atau aIuadest. 1!&ek yang tela di!asu aIuades kemudian dikeringkan dengan menggunakan kertas saring atau tissue, tidak ditiup-tiup karena dika"atirkan ada kontaminasi !akteri lain yang menempel pada o!&ek glass.

#etiap akir pem!erian reagen atau pe"arna, selalu dilakukan pem!ilasan teradap ka$a o!&ek dengan menggunakan aIuades. *em!ilasan ini !ertu&uan untuk mengurangi kele!ian setiap +at "arna yang sedang di!erikan. #ampel yang suda di keringkan, di tetesi dengan emersi oil. Minyak emersi adala minyak yang di pakai untuk olesan pada mikroskop, yang fungsinya untuk memper&elas o!&ek, dan melindungi mikroskop dari de!u atau kotoran. Minyak emersi memiliki indeks refraksi yang tinggi di!andingkan dengan air, seingga o!&ek yang kita amati dapat terliat le!i &elas di!andingkan dengan tanpa minyak emersi. Lalu diamati dengan mikroskop, dengan pem!esaran 379 dan 3779. 6ari asil pe"arnaan spora terliat !akteri 'egetatif !er"arna ungu terdapat titik mera dan spora !er"arna i&au, dengan !entuk !asil (6iplo!a$illus). Letak sporanya !erada pada su!terminal dengan latar !elakang !er"arna !ening. Letak endospora !er!eda dengan spesies !akteri yang lain. Tipenya ada yang $entral yaitu lokasi dari sel 'egetatifnya di tenga, terminal letak sel 'egetatifnya !erada di u&ung atau pinggir dan tipe su!terminal !erarti lokasi endosporanya !erada di


Page 13

antara tenga dan pinggir dari sel 'egetatif. Bakteri yang !er!entuk !asil memiliki endospora yang terletak di su!terminal. Menurut pear$e (477=) *enge$atan endospora dengan larutan mala$ite green, !akteri pengasil endospora akan menun&ukkan reaksi positif yaitu larutan mala$ite green akan !erikatan dengan spora seingga saat pen$u$ian akan tetap !er"arna i&au dan $at penutup atau safranin tidak !isa diikat ole endospora. #edangkan pada !akteri yang tidak mengasilkan endospora maka larutan i&au malasit tidak dapat diikat. #edangkan *reparat dipanaskan di atas pem!akar spirtus yang !ertu&uan untuk mem!antu "arna menem!us dinding endospora

BAB J KE#JM*LAN

Berdasarkan asil pengamatan dan pem!aasan, maka dapat ditarik kesimpulan 2 3. *e"arnaan spora merupakan sala satu pe"arnaan differensial dengan menggunakan pe"arna mala$ite green dan safranin (air fu$sin), yang dalam asil pe"arnaannya akan mun$ul "arna i&au pada sporanya, serta "arna mera pada sel !akteri 'egetatifnya. 4. 6alam pe"arnaan ada !e!erapa faktor yang turut mempengarui pe"arnaan yaitu fiksasi, peluntur +at "arna, interakasi pe"arnaan, su!strat dan +at "arna penutup ($oontesstain). 5. Berdasarkan pada asil pengamatan dengan mikroskop lensa o!&ektif pem!esaran 3779 ditemukan !akteri 'egetatif !er"arna ungu dan spora !er"arna i&au dengan latar !elakang !er"arna !ening dan letak spora pada su!terminal (!akteri diplo!a$illus).


Page 14

6ADTAR *#TAKA

Ball, A.#. 3==<. Bacterial Cell Culture : Essential Data. /on iley @ #ons, Ne" ork. 6"id&oseputro,6. 4778. Dasar - Dasar Mikrobiologi. Malang2 6&am!atan. %adiutomo. 3==7. Mikrobiologi Dasar Jilid I . /akarta2 Erlangga. *rati"i, #. 477>. Mikrobiologi Farmasi. /akarta 2 Erlangga. *el$+ar, and 0an M./.477<. Dasar-Dasar Mikrobiologi. /akarta 2 J *ress. *el$+ar, M./ dan E.0.# 0an. 3=>?. 6asar-6asar Mikro!iologi 3. J ; *ress. /akarta. Tarigan, /eneng. 3=>>. *engantar Mikro!iologi. /akarta2 6JR/EN 6JKTJ *royek *engem!angan L*TK olk @ eeler. 3=>C. Mikrobiologi Dasar Edisi Kelima Jilid I . /akarta 2 Erlangga.


Page 15

laporan pewarnaan Spora

Recommend Documents