Facultad Facultad de Ciencias Aplicadas Departamento de Ciencias de la Vida Ingeniería en Biotecnología
Laboratorio de Enzimología INTEGRANTES: Cynthia Andrade Anahí Boada Carlos Ortiz 2015-0505-13 13 FECHA : 2015-
ASIGNATURA: Enzimología
1 TITULO TITULO E LA LA !R"C !R"CTIC TICA: A: Actividad en detergentes de lavadora en polvo comerciales # O$%E O$%ETI TI&O &OS S 1 Ob'eti 'eti(o (o Gene eneral eterminar la actividad amilasa sig!iendo la reacci"n de hidr"lisis del almid"n
# Ob'eti( Ob'eti(o) o) E)*e+í, E)*e+í,i+o i+o))
Compro#ar la presencia de la amilasa a partir del m$todo de %&-'altosa(
- INTROUCCION &eg)n *Cristancho y Monroy, 2014 + ,as enzimas optimizan la eiciencia de detergentes. permitiendo el limpiar a #a/as temperat!ras y períodos ms cortos. red!ciendo el cons!mo de energía y las emisiones de CO2( no de los m$todos m$todos ms acordes y con me/or res!ltados res!ltados en la determinaci"n determinaci"n de los az!cares con carct carcter er red!ct red!ctor or.. es el m$todo m$todo *%&+. *%&+. para el anlisi anlisiss de dieren dierentes tes material materiales es y con alta alta sensi#ilidad y prod!ctividad de#ido a !e es !n m$todo espectrootom$trico el procedimiento se #asa en !na reacci"n redo4 !e oc!rre oc!rre entre el %& y los az)cares red!ctor red!ctores es presentes presentes en la m!estra( El presente inorme desarrollara el procedimiento respectivo para la determinaci"n de az!cares red!ctores a partir de !na sol!ci"n patr"n de maltosa de concentraci"n m'. !e permitir realizar y a/!star !na c!rva de cali#raci"n. y !na sol!ci"n desconocida por el m$todo del cido 3.5 dinitro salicílico *%&+(
. /ARCO TEORICO ,as enzimas son #iodegrada#les y reemplazan a los comp!estos !ímicos !e se vienen li#erando al am#iente desde hace m!chos a6os. son !sadas en los detergentes de lavado de ropa act)an so#re los materiales !e orman parte de las manchas. desintegrndola y7o desprendi$ndola de la tela d!rante el lavado( *Cristancho y Monroy, 2014 + ,as amilasas degradan mol$c!las grandes como el almid"n en otras ms pe!e6as. de orma !e p!edan ser a#sor#idas en el intestino( ,as mol$c!las de almid"n. son demasiado grandes para ser a#sor#idas. son degradadas por enzimas a mol$c!las ms pe!e6as como la maltosa. y a gl!cosa. la c!al sí p!ede ser a#sor#ida a trav$s de las c$l!las del intestino( *8!zmn. 8arcía y ,arios. 2013+ degradaci"n de los resid!os resid!os de almid"n almid"n de alimentos alimentos como papa. chocolate. etc( %o Amila)a: para la degradaci"n son componentes esenciales de los detergentes ya !e tienen !na acci"n limitada so#re los car#ohidratos
y $stos son sol!#les en ag!a *por lo tanto son de cil remoci"n por los lavados corrientes+( &e emplean las amilasas de Bacill!s licheniormis( *8!zmn. 8arcía y ,arios. 2013+
/alto)a: ,a maltosa. o malto#iosa o az)car de malta. es !n disacrido ormado por dos gl!cosas !nidas por !n enlace gl!cosídico. presenta el O9 hemiacetlico siendo !n az)car red!ctor( &e p!ede o#tener mediante la hidr"lisis del almid"n y gl!c"geno( *Cristancho y Monroy, 2014 +
Rea+ti(o NS: :eactivo *%&+ !e tiene capacidad de o4idar a los az)cares red!ctores dando res!ltados colorim$tricos !e se p!eden medir con !na longit!d de onda de 50nm en el espectroot"metro( *Cristancho y Monroy, 2014 +
F0ndamento NS/alto)a Los azucares reductores poseen un grupo carbonilo libre formando un grupo hemiacetal que le confiere la característica de poder reaccionar con otros compuestos !l m"todo de Miller o #$% &'cido dinitrosalicílico como reacti(o tiene la capacidad de o)idar los azucares reductores mostrando un comportamiento diferencial hacia mono y disac'ridos, dando resultados colorim"tricos que se puede medir con una longitud de onda de *+* nm *Cristancho y Monroy, 2014 +
2 /ATERIALES /0e)tra): Almid"n. detergentes comerciales de lavado de ropa /ateriale) de !rote++i3n !er)onal
'andil 8!antes ;estimenta apropiada
Rea+ti(o)
;arios detergentes de lavado de ropa en polvo *aseg!rarse !e en s! composici"n aparezcan enzimas. y a sr posi#le !e sean glicosidasas+ :eactivo %&. dinitrosalicílico *1 g( de cido 3.5-dinitrosalicílico en 20 m, de %aO9 2 %. y 50 m, de ag!a( A6adir 30 g( de tartrato s"dico-potsico 92O y llevar a 100 m,(
/ateriale) e In)0mo)
Balanza Espectroot"metro Agitador magn$tico Ba6o 'aría >!#os de ensayo y gradilla
4 /ETOOLOG5A 'ientras se realiza#a la reacci"n enzimtica y se orma#an las m!estras. se realiz" la recta de cali#rado del m$todo %& !tilizando la disol!ci"n patr"n de maltosa(
T0bo N 1
T0bo N #
T0bo N -
0.0 0.3 0.? i)ol0+i3n de malto)a 6ml7 1.0 0.@ 0. Ag0a de)tilada 6ml7 1.0 1.0 1.0 Rea+ti(o NS 6ml7 &ol0men Total 6ml7 2.0 2.0 2.0 Tabla No81 atos para la preparaci"n de sol!ciones
T0bo N . 1.0 0.0 1.0 2.0
na vez mezclados los t!#os se inc!#aron en !n #a6o a 0 o C d!rante 15 min!tos inalmente estos t!#os se midieron tam#i$n en el espectroot"metro a 50nm(
9 RESULTAOS
Esta es la ec!aci"n %o( 1. despe/ando de esta ec!aci"n la C2. la !e se desea o#tener y se o#tiene= C 2 =
V 1∗C 1 V 2
e esta ec!aci"n se conoce la C1 !e es la concentraci"n de la sol!ci"n patr"n de maltosa m' en ag!a. y el y el vol!men inal *;2+ !e es 2 m, !e es el vol!men total de todas las sol!ciones( A partir de esta ec!aci"n se determinar las concentraciones de la sig!iente manera a#la %o2
T0bo)
Con+entra+i3n 6m/7
0 m' T0bo N 1 0.? m' T0bo N # 1.2 m' T0bo N 2.0 m' T0bo N . Tabla No8#: Concentraci"n de maltosa de las sol!ciones esp!$s de preparar las sol!ciones. se midi" la a#sor#ancia con el espectroot"metro y se o#tiene la ta#la %o(3. !e m!estra las a#sor#ancias medidas con el espectroot"metro. tomando como 0 el #lanco de reactivos !e se lo coloc" antes de todas las sol!ciones para encerar la m!ina(
NS /ALTOSA TIE/!OS A$SOR$ANCIAS 0(020 T1 0(0?0 T# 0(00 T0(1? T. Tabla No8- atos de a#sor#ancia tomados con el espectroot"metro A partir de estos datos tomados d!rante la prctica se constr!y" la c!rva de cali#raci"n. !e relaciona las concentraciones de las dierentes sol!ciones y la a#sor#ancia medida en cada !na de ellas( ,a >a#la %o( nos relaciona estos datos(
No8 Sol0+i3n Con+entra+i3n 6m/7 Ab)orban+ia 6nm7 0 0.020 T0bo No 1 0.? 0.0?0 T0bo No # T0bo No 1.2 0.00 2.0 0.1? T0bo No . Tabla No8.: atos para la constr!cci"n de la c!rva de cali#raci"n Con la *>a#la %o(+ se o#tiene la *8rica %o( 1+ !e es la c!rva de cali#raci"n o#tenida de ac!erdo con los datos tomados d!rante la prctica(
CUR&A E CALI$RACI;N A$SOR$ANCIA &S CONCENTRACION 6NS/ALTOSA7
CURVA DE CALIBRACIÓN (DN!"AL#$A% 0.2 f(x)==0.99 R² 0 .08x + 0.02
0.15
A'sor'ancia (nm%
0.1
0.05
0 0
0.5
1
1.5
2
2.5
Concentraci&n de "altosa (m"%
Gr<,i+a No8 1: C!rva de cali#raci"n Con la c!rva o#tenida se realiza !na grica de tendencia lineal !e se a/!sta a los datos. el : 2 o#tenido para la ec!aci"n de la recta es de 0(1( >eniendo en c!enta !e el : 2 es mayor a 0(5 los datos no tienen m!cha dispersi"n y por lo tanto son acepta#les( T. 30
T. 15
T. 0
Gr<,i+a No8 #: Cam#io de coloraci"n a ca$ osc!ro en las m!estras colocadas en la inc!#adora a 0 o C de %&-'altosa
= ISCUSI;N Método DNS-Maltosa
%e comprob. en el laboratorio la presencia de azucares reductores como la maltosa aplicando el m"todo #$% como reacti(o o)idando a azucares reductores como la maltosa en el grupo hidro)ilo del carbono 1, al calentar la muestra en la incubadora a /0,* o C *Cristancho y Monroy, 2014 + obteniendo un color caf" oscuro que se midi. a una longitud de onda de *40 nm %e utiliz. el m"todo matem'tico utilizando la ecuaci.n lineal de la cur(a patr.n, realizando una cur(a de calibraci.n para azucares reductores como la maltosa determinando su respecti(a absorbancia y así llegando a su concentraci.n
> CONCLUSIONES
Método DNS-Maltosa
&e logr" compro#ar la presencia de la amilasa a partir del m$todo de %&-'altosa !tilizando el reactivo *%&+ !e permite o4idar a los az)cares red!ctores en este caso la maltosa o#teniendo !na coloraci"n ca$ osc!ro. y se analiz" s! concentraci"n midiendo s! longit!d de onda de 50nm en el espectroot"metro. indicando !e la c!rva de cali#raci"n presenta res!ltados acepta#les por!e no se encontra#an dispersos(
1? ANE@OS C0e)tionario: 18 0B *ermite rela+ionar la gr<,i+a de la re+ta +alibrada ecta de calibrado %eleccionando la longitud de onda m')ima a la que absorbe mi sustancia y utilizando unas muestras patr.n, de concentraci.n conocida puedo obtener los datos de absorbancia frente a concentraci.n, (s 3, que debidamente representados dan lugar una recta &!c Lambert5eer6 de calibrado tra("s de una recta de calibrado este m"todo nos sir(e como an'lisis cuantitati(o de una sustancia determinada &iu, y 5oqu", 20106
7ara una muestra de concentraci.n desconocida tan solo hay que medir su absorbancia a la longitud de onda del m')imo y e)trapolar en la cur(a de calibrado el (alor de la concentraci.n &iu, y 5oqu", 20106
11 $I$LIOGRAFIA 18 <( 8!zmn 8( 8arcía. E( ,arios( *2013+ eterminaci"n de az)cares red!ctores m$todo %&( 2.
3.
!ndaci"n niversidad de Am$rica Camp!s de los Cerros= Avda Circ!nvalar %o( 20-53( >el= 5@ 133@??0( a4( 5@ 1 33?21( 8 iu, 5oqu" &20106 Calibraci.n Lineal 9"cnicas de Laboratorio #epartamento de :uímica nalítica y :uímica ;rg'nica mperial 9?rraco, 1 400*9arragona 2*- &20006 +4*+4+ L M Cristancho, Monroy 2014 Manual de m"todos generales para determinaci.n de carbohidratos <79C