LAPORAN PRAKTIKUM ANALISIS FARMASI PERCOBAAN V IDENTIFIKASI SEDIAAN OBAT YANG MENGANDUNG ASPIRIN, KAFEIN DAN PARACETAMOL DENGAN METODE M ETODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (KLT)
NAMA
: MUH. ZULFIKAR TAHIR TAHIR
NIM
: F1F1 11 014
KELAS
:A
KELOMPOK
: III (TIGA)
ASISTEN
: AGUNG WIBAWA YODHA, S.Si
JURUSAN FARMASI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS HALUOLEO KENDARI 2013
IDENTIFIKASI SEDIAAN OBAT YANG MENGANDUNG ASPIRIN, KAFEIN DAN PARACETAMOL DENGAN METODE KROMATOGRAFI KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (KLT)
A. Tujuan
Tujuan dari percobaan ini adalah untuk mengidentifikasi kandungan aspirin, kafein dan paracetamol dalam sediaan obat.
B. Landasan Teori
Kimia analitik adalah cabang dari ilmu kimia yang mempelajari tentang karakteristik suatu zat, meliputi analisis kuantitatif dan kualitataif. Analisis kualitatif adalah analisis yang bertujuan untuk mengetahui senyawa-senyawa yang terkandung dalam sampel, sedangkan analisis kuantitatif adalah analisis yang bertujuan untuk mengetahui kadar suatu senyawa dalam sampel. Dalam kimia analitik terdapat beberapa tahap pada proses analisis yaitu penentuan masalah, penetapan metode, perolehan sampel, persiapan sampel untuk analisis, pemisahan, pengukuran, perhitungan hasil, dan pelaporan. Tahapan penetapan metode merupakan tahapan untuk menentukan banyaknya sampel, preparasi sampel, dan metode analisis yang digunakan. Metode analisis dibagi menjadi dua macam yaitu metode analisis konvensional dan modern. Metode analisis modern lebih mengarah pada penggunaan instrumen. Prinsip dari metode
analisis
modern
dikelompokkan
menjadi
tiga
yaitu
metode
elektrokimia, metode spektrofotometri, dan metode kromatografi (Sabrina et al , 2011). Kromatografi merupakan teknik pemisahan tertentu, pada dasarnya kromatografi menggunakan dua fase yaitu fase tetap (stationary) dan fase bergerak (mobile), pemisahan tergantung pada gerakan relatif dari dua fase ini. Dari beberapa jenis kromatografi, satu di antaranya adalah Kromatografi Lapis Tipis (KLT), kromatografi jenis ini membutuhkan waktu yang lebih cepat dan diperoleh pemisahan yang lebih baik (Susilo, 2005). Kromatografi
lapis tipis (KLT) dikembangkan oleh Izmailoff dan Schraiber pada tahun 1938. Pada kromatografi lapis tipis, fase diamnya berupa lapisan yang seragam (uniform) pada permukaan bidang datar yang didukung oleh lempeng kaca, pelat aluminium, atau pelat plastik. Meskipun demikian, kromatografi ini dapat dikatakan sebagai bentuk terbuka dari kromatografi kolom (Mulya dan Suherman, 1995). KLT merupakan metode yang efisien karena senyawa bias langsung dipisahkan
bahkan
dapat
diketahui
golongannya.
Kelebihan
KLT
dibandingkan metode lain adalah pemakaian pelarut dan cuplikan yang relatif sedikit. Bila dibandingkan dengan kromatografi gas dan KCKT , KLT menggunakan alat yang lebih sederhana dan murah (Kusumaningtyas, murah (Kusumaningtyas, 2008). KLT KL T merupakan cara cepat dan mudah untuk melihat kemumian suatu sampel maupun karakterisasi
sampel dengan menggunakan standar. Cara
ini praktis untuk analisis skala kecil karena hanya memerlukan bahan yang sangat sedikit dan waktu yang dibutuhkan singkat. Kemumian
suatu
senyawa bisa dilihat dari jumlah bercak yang terjadi pada plat KLT atau jumlah puncak pada kromatogram KLT. Uji kualitatif dengan KLT dapat dilakukan dengan membandingkan waktu retensi kromatogram sampel dengan deng an kromatogram kromatogram senyawa senyawa standar (Sri Handa Handayani yani et al , 2005). Obat yang bersifat analgesik (penahan rasa sakit/nyeri) dan antipiretik (penurun panas/demam) adalah obat yang paling banyak dikonsumsi masyarakat, karena obat ini dapat berkhasiat menyembuhkan demam, sakit kepala dan rasa nyeri. Umumnya obat yang bersifat analgesik dan antipiretik ini mengandung zat aktif yang disebut asetaminofen atau yang lebih dikenal dengan parasetamol (Rachdiati, 2008). Acetaminophen atau Parasetamol adalah obat analgetik dan antipiretik yang digunakan untuk melegakan sakit kepala, sengal-sengal atau sakit ringan dan demam. Parasetamol merupakan derivate dari asetanilida yang efek enalgetiknnya dapat diperkuat dengan koffein dengan kira-kira 50% dan codein. Penggunaan parasetamol dalam dosis besar dan dalam jangka waktu yang lama dapat menyebabkan kerusakan pada hati, untuk itu parasetamol
dikontraindikasikan untuk pasien dengan gangguan fungsi hati berat (Rusmayanti, 2011). Parasetamol merupakan obat yang aman tetapi bukan berarti tidak berbahaya. Sejumlah besar asetaminofen akan melebihi kapasitas kerja hati, sehingga hati tidak dapat lagi menguraikannya menjadi bahan yang tidak berbahaya (Nasution, 2009). Aspirin merupakan obat anti-inflamasi non-steroid yang memiliki kemampuan menghambat biosintesis prostaglandin yang merupakan salah satu mediator inflamasi (Vane dan Botting, 1996). Mediator inflamasi tersebut disintesis dari asam arakidonat dalam berbagai tahap dan dikatalisis oleh berbagai enzim dalam setiap tahapnya, antara lain glutation S-transferase (GST) yang terlibat dalam pembentukan prostaglandin D2, E2,
F2
dari
prostaglandin H (Istyastono, 2002). Kafein (1,3,7-trimetil xantin) merupakan salah satu derivat xantin yang mempunyai daya kerja sebagai stimulan sistem saraf pusat, stimulan otot jantung, relaksasi otot polos dan meningkatkan diuresis, dengan tingkatan berbeda. Efek kafein dapat meningkat apabila berinteraksi dengan beberapa jenis obat, antara lain : obat asma (epinefrin/teofilin), pil KB, antidepresan, antipsikotika, simetidin. Akibatnya mungkin terjadi kofeinisme disertai gejala gelisah dan mudah terangsang, sakit kepala, tremor, pernapasan cepat dan insomnia (Hartono, 2011). Sediaan farmasi yang beredar di pasaran kebanyakan berupa campuran berbagai zat berkhasiat. Campuran ini bertujuan untuk meningkatkan efek terapi dan kemudahan dalam pemakaian. Salah satu campuran zat aktif yang sering digunakan adalah
parasetamol dan kafein yang yang berkhasiat sebagai
analgetik dan antipiretik. Campuran parasetamol dan kafein banyak ditemukan dalam produk antiinfluenza dengan berbagai merek dagang. Parasetamol merupakan metabolit fenasetin dengan efek analgetik ringan sampai sedang, dan antipiretik yang ditimbulkan oleh gugus aminobenzen, sedangkan kafein adalah basa lemah yang merupakan turunan xantin, memiliki gugus metil dan berefek stimulasi susunan saraf pusat serta dapat memperkuat efek analgetik parasetamol (Naid et al , 2011).
C. Alat dan Bahan
1. Alat Alat yang digunakan pada percobaan ini, yaitu: -
Bejana KLT (Chamber (Chamber )
-
Penyemprot
-
Pipa kapiler
-
Oven
-
Gelas kimia
-
Pipet tetes
-
Pipet ukur
-
Filler
-
Batang pengaduk
2. Bahan Bahan yang digunakan pada percobaan ini, yaitu: -
Silica gel
-
Kloroform
-
Methanol
-
Asam asetat
-
Dietil eter
-
Benzen
-
Sampel obat (mengandung parasetamol, aspirin, dan kafein)
-
Zat pembanding (parasetamol, aspirin dan kafein murni)
3. Uraian bahan a. Kloroform (Dirjen POM, 1979) Nama resmi
: CHLOROFORNUM CHLOROFORNUM
Nama lain
: Kloroform, Tricholomethan
RM/BM
: CHCI3/ 119,38 gr/mol
Struktur
:
Pemerian
: Cairan mudah menguap, tidak berwarna, manis, bau khas, membakar
Kelarutan
: Larut dalam kurang lebih 200 bagian air, mudah larut dalam etanol mutlak
Penyimpanan : Dalam wadah wadah tertutup baik tersumbat kaca, terlindung cahaya Kegunaan
: Membantu proses kristalisasi
b. Methanol (Dirjen POM, 1979) Nama Resmi
: METIL ALKOHOL
Nama Lain
: Metanol, Hidroksimetana, Metil alkohol, Metil hidrat, Alkohol kayu, Karbinol.
Berat Molekul
: 32.04 g/mol
Rumus Molekul
: CH3OH
Struktur
:
Pemerian
: Pada “keadaan atmosfer” ia berbentuk cairan yang ringan, mudah menguap, tidak berwarna, mudah terbakar, dan beracun dengan bau yang khas (berbau lebih ringan daripada etanol).
Kegunaan
: sebagai bahan pendingin anti beku, pelarut, bahan bakar dan sebagai bahan aditif bagi etanol industri.
c. Asam asetat (Dirjen POM, 1979) Nama resmi
: ACIDUM ACETICUM
Nama lain
: Cuka
Berat molekul
: 60,05 g/mol
Rumus molekul
: C2H4O2
Struktur
:
Pemerian
: cairan jernih; tidak berwarna, bau menusuk, rasa asam, tajam
Kelarutan
: dapat campur dengan air, dengan etanol (95%), dan dengan gliserol.
Penyimpanan
: dalam wadah tertutup rapat
Khasiat
: zat tambahan.
d. Dietil eter (Dirjen POM, 1979) Nama resmi
: DIETIL ETER
Nama lain
: Dieti, eter
Rumus molekul
: C2H5O
RJ
: 0,714 gram – gram – 0,78 0,78 gram
Struktur
:
Jarak didih
: Tersuling sempurna pada suhu antara 340C dan 360C.
e. Benzen (Dirjen POM, 1979) Nama Resmi
: BENZENA
Nama lain
: Cyclohextriena
Rumus molekul
: C6H6
Berat molekul
: 78,0 g/mol
Struktur
:
Kelarutan
: Mudah larut dalam air
Pemerian
: Cairan transparant, tidak berwarna dan mudah menyala.
f.
Penyimpanan
: Dalam wadah tertutup rapat.
Kegunaan
: Sebagai inti (induk) senyawa nitrobenzene.
Paracetamol (Dirjen POM, 1979) Nama resmi
: ACETAMINOPHENUM
Nama sinonim
: Asetaminofen, parasetamol
Rumus molekul
: C8H9 NO2
Barat molekul
: 151,16 gr/mol
Struktur
:
Pemerian
: Hablur atau serbuk hablur putih, tidak berbau, rasa pahit.
Kelarutan
: Larut dalam 70 bagian air, dalam 7 bagian etanol (95%) P, dalam 13 bagian aseton p, dalam 40 bagian gliserol p dan dan dalam 9 bagian propilenglikol p,
larut
dalam
larutan
alkali
hidroksida Penyimpanan
: Dalam wadah tertutup baik, terlindung dari cahaya
K/P
:
Analgetikum
(obat
yang
digunakan
untuk
menghilangkan rasa nyeri tanpa menghilangkan kesadaran), Antipiretikum (obat yang digunakan untuk menurunkan suhu tubuh / demam).
g. Kafein (Dirjen POM, 1979) Nama resmi
: Kofeina, 1,3,7-trimetilxantin, 1,2,3,6 tetrahidropurine tetrahidropurine
Nama lain
: Coffeinum
Struktur
:
Pemerian
: Serbuk atau
hablur bentuk jarum mengkilat,
biasanya, biasanya menggumpal, putih tidak berbau, rasa pahit Kelarutan
: Agak sukar larut dalam air, dan dalam etanol (95%) P, mudah larut dalam klorofom P, sukar larut dalam eter P
Penyimpanan
: Dalam wadah tertutup baik
Kegunaan
: sebagai bahan hasil isolasi
h. Asetosal (Dirjen POM, 1979) Nama resmi
: ACIDUM ACETYLSALICYLICUM ACETYLSALICYLICUM
Nama lain
: Asetosal
RM/BM
: C9H8O4/ 180,16 gr/mol
Struktur
:
Pemerian
: Hablur tidak berwarna atau serbuk hablur putih, tidak berbau atau hampir tidak berbau, rasa asam
Kelarutan
: Agak sukar larut dalam air, mudah larut dalam etanol 95 % P, larut dalam kloroform P dan dalam eter P
Penyimpanan
: Dalam wadah tertutup baik
Kegunaan
: Analgetik dan antipiretik
D. Prosedur Kerja
1. Penyiapan lempeng 3 gram silica gel Dimasukkan ke dalam gelas kimia Ditambahkan 6 ml air Diaduk Dilapiskan pada plat kaca dengan ketebalan 0,1-0,3 mm - Dikeringkan - Dimasukkan ke dalam oven pada suhu 100,5oC selama 1 jam
-
Lempeng KLT 2. Penyiapan pengembang Methanol, asam asetat, dietil eter, dan bensen
- Dimasukkan kedalam chamber dengan perbandingan 1:18:60:120 - Ditutupkan dan digoyangkan - Dijenuhkan Eluen
3. Penotolan sampel dan zat pembanding Poldanmig Digerus Dimasukkan kedalam gelas kimia Dilarutkan dengan kloroform Ditotolkan pada lempeng KLT sebanyak 3 kali - Dikeringkan - Diulangi pada zat pembanding
-
Lempeng yang telah ditotol
4. Elusi dengan pengembang dan lokasi noda Lempeng yang telah ditotol
Rf parasetamol Rf kafein kafein Rf asetosal asetosal
Dimasukkan kedalam chamber Ditutup Dielusi Dikeluarkan Diamati noda yang terbentuk dibawah sinar UV Disemprot dengan penampak noda Dioven Diamati noda yang terbentuk Dihitung nilai Rf = 0,12 = 0,07 = 0,5
E. Hasil Pengamatan
1. Gambar hasil pengamatan
2. Perhitungan Diketahui: Jarak eluen
= 4 cm
Jarak Parasetamol = 0,5 cm
Ditanya:
Jarak kafein
= 0,3 cm
Jarak asetosal
= 2 cm
Nilai Rf…………..?
Jawab: Rf =
Nilai Rf parasetamol Nilai Rf kafein kafein =
=
Nilai Rf asetosal asetosal =
=
=
=
= 0,07
= 0,5
= 0,12
F. Pembahasan
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan bentuk kromatografi planar, selain kromatografi kertas dan elektroferesis. Berbeda dengan kromatografi kolom yang mana fase diamnya diisikan atau dikemas di dalamnya, pada kromatografi lapis tipis, fase diamnya berupa lapisan yang seragam (uniform (uniform)) pada permukaan bidang datar yang didukung oleh lempeng kaca, pelat aluminium atau pelat plastik. Meskipun demikian, kromatografi planar ini dapat dikatakan sebagai bentuk terbuka dari kromatografi kolom. Percobaan ini bertujuan untuk mengidentifikasi adanya kandungan senyawa paracetamol, aspirin dan kafein dalam suatu sediaan obat analgetik antipiretik. Langkah awal dari praktikum ini adalah membuat lempeng KLT, dengan menggunakan silica gel dan air lalu dipanaskan di oven selama 1 jam yang kemudian dilapisi pada plat kaca dengan ketebalan 0,1-0,3 mm. Lempeng KLT ini merupakan silica yang berfungsi sebagai fase diam yang merupakan lapisan yang memisahkan, yang terdiri atas bahan berbutir-butir ditempatkan pada penyangga berupa pelat gelas, logam, atau lapisan yang cocok. Selanjutnya adalah dibuat larutan pengembang yang nantinya berfungsi sebagai eluen. Eluen disini berfungsi sebagai fase gerak yang merupakan medium angkut dan terdiri atas satu atau beberapa pelarut. Campuran eluen yang digunakan pada praktikum ini terdiri dari methanol, asam asetat, dietil eter, dan benzen dengan perbandingan 1 : 18 : 60 : 120, dimana methanol sebanyak 0,1 ml, asam asetat 0,9 ml, dietil eter 3 ml dan benzen 6 ml, yang kemudian ditutup dan digoyangkan, lalu dilakukan proses penjenuhan. Eluen yang dihasilkan ini bersifat non polar. Selanjutnya dilakukan penotolan sampel dengan zat pembanding. Sebelumnya, sampel terlebih dahulu digerus dan dicampurkan dengan methanol dan kloroform lalu dikocok, agar dapat terlarut sempurna. Sedangkan zat pembanding yang digunakan adalah parasetamol, asetosal dan kafein murni dengan perlakuan yang sama dengan sampel. Penotolan
dilakukan pada plat KLT, dengan terlebih dahulu memberikan tanda pada plat tersebut. Penotolan harus dilakukan seteliti mungkin, agar dapat dicapai hasil yang diinginkan. Lempeng yang telah ditotol kemudian dimasukkan dalam chamber dan dielusi. Setelah eluen telah mencapai puncak pada plat, plat kemudian dimasukkan dalam oven beberapa saat, lalu dikeluarkan dan disemprotkan penampak noda dan dilihat hasilnya hasilnya di bawah sinar UV. Setelah diamati dibawah sinar UV 254 nm, terlihat 5 noda yang terbentuk yakni 3 noda yang menandakan senyawa pembanding (parasetamol, asetosal dan kafein) dan 2 noda yang menandakan sampel. Noda-noda yang menandakan sampel tersebut berada sejajar dengan noda senyawa pembanding. Hal ini menunjukkan bahwa sampel yang digunakan mengandung parasetamol, asetosal dan kafein. Noda kafein dan paracetamol berada pada jarak yang dekat dengan titik titi k penotolan pada plat KLT. Hal ini menandakan bahwa kedua senyawa tersebut bergerak lambat, sehingga dapat disimpulkan bahwa kafein dan paracetamol bersifat non polar sama seperti eluen yang juga bersifat non polar. Sedangkan noda asetosal berada jauh dari titik pentolan dan menandakan bahwa asetosal bergerak naik pada plat KLT. Sehingga diperoleh dip eroleh bahwa asetosal bersifat polar sama seperti jenis j enis plat KLT yangh digunakan yakni silica s ilica gel. Dapat ditarik kesimpulan bahwa metode KLT juga menggunakan prinsip like dissolve like, dimana polar akan larut pada pelarut polar dan zat non polar akan larut pada pelarut non polar. Langkah terakhir adalah penentuan nilai R f f. Nilai R f didapatkan dengan mengukur perbandingan ketinggian noda yang ditinggalkan pada plat yang disebut jarak sampel dengan jarak eluen tersebut. Nilai R f untuk paracetamol adalah 0,12, nilai R f f untuk asetosal adalah 0,5, sedangkan nilai R f untuk kafein adalah 0,07.
F. Kesimpulan
Kesimpulan yang dapat diambil dari percobaan ini adalah sediaan obat yang dipraktekkan positif mengandung paracetamol, asetosal dan kafein. Dengan nilai R f paracetamol adalah 0,12, nilai R f asetosal adalah 0,5, dan nilai R f kafein adalah 0,07.
DAFTAR PUSTAKA
Dirjen POM. 1979. Farmakope 1979. Farmakope Indonesia edisi III. III. Depkes RI. Jakarta. Handayani, S., Sunarto, dan Susila, K. 2005. Kromatografi Lapis Tipis Untuk Penentuan Kadar Hesperidin Dalam Kulit Buah Jeruk. Jurnal Penelitian Saintek. 10(1). Hartono, E. 2011. Penetapan Kadar Kafein Dalam Biji Kopi Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Fakultas Tinggi. Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi. Budi. Istyastono, EP., Martono, S., dan Supardjan, AM. 2002. Pengaruh Aspirin Pada Aktivitas Glutation S-Transferase Kelas Hati Tikus. Majalah Farmasi Indonesia. 13(2). Kusumaningtyas, E., Esti, E., dan Darmono. 2008. Sensitivitas Metode Bioautografi Kontak dan Agar Overlay dalam Penentuan Senyawa Antikapang. Jurnal Antikapang. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia. Indonesia. 6(2). Mulya, M., dan Suherman. 1995. Analisis Instrumen. Airlangga University Press. Surabaya. Naid, T., Syaharuddin, K., dan Mieke, P. 2011. Penetapan Kadar Parasetamol Dalam Tablet Kombinasi Parasetamol Dengan Kofein Secara Spektrofotometri Ultraviolet-Sinar Tampak. Majalah Farmasi dan Farmakologi. Farmakologi. 15(2). Nasution, YA. 2009. Penetapan Kadar Kafein Dalam Biji Kopi Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Rachdiati, H., Ricson, PH., dan Erna, R. 2008. Penentuan Waktu Kelarutan Parasetamol Pada Uji Disolusi. Nusa Disolusi. Nusa Kimia Jurnal. 8(1). Rusmayanti. 2011 . Analisis Berbagai Merk tablet parasetamol 500mg Digunakan di Maiduguri, Menggunakan Violet Ultra Spektrofotometri dan Kinerja Tinggi Liquid kromatografi (HPLC). Internasional Penelitian Jurnal Farmasi. ISSN 2230 – 8407 8407 Sabrina, A., Surjani, W., dan Neena Z. 2011. Perbandingan Metode Spektrofotometri UV-Vis dan KCKT (Kromatografi Cair Kinerja Tinggi) pada Analisis Kadar Asam Benzoat dan Kafein dalam Teh Kemasan. Universitas Negeri Malang . Susilo, J. 2005. Penetapan Kadar Co-Trimoksazol Yang Dilakukan Dengan Menggunakan Spektrofotometer Ultraviolet Secara Simultan – KLT. Jurnal KLT. Jurnal Litbang . Universitas Muhammadiyah Semarang.
