MODELO DEMANDA DE EJECUCION DE ACTA DE CONCILIACION DE ALIMENTOSDescripción completa
Fotometría de reflectancia: Química seca 1.
Introducción 2. Espectrofotometría de reflectancia 2.1. Concepto y tipos de reflexión 2.2. Fundamentos matemáticos 2.3. Instrumentación básica 3. Utilidades 4. Instrumentos de medida 1.
Introducción
La química seca es un sistema de análisis en que los reactivos se encuentran en estado seco o deshidratado en una matriz porosa. Los reactivos de química seca son reactivos unidad preparados de antemano para una determinación única y no requieren preparación previa al análisis. Hay dos tipos de sistemas de reactivos, que son: Las tiras reactivas • Las películas multicapa o “slides” • Los sistemas de lectura que se pueden emplear son: La inspección visual. • La espectrofotometría espectrofotometría de reflectancia. • Hoy en día la química seca se emplea para determinaciones de orina y también se puede utilizar para bioquímica sanguínea.
Ventajas Los reactivos se pueden almacenar mucho más tiempo porque tienen un período mayor de caducidad. Y los reactivos vienen preparados.
Desventajas • • •
Son muchos más caros Se depende de la casa comercial para todo No se suelen emplear tanto
2. Espectrofotometría de reflectancia 2.1 Concepto y tipos de reflexión La reflexión es un fenómeno óptico que se produce cuando un haz de luz que se propaga en un medio homogéneo e isotrópico incide sobre la superficie de separación con otro medio de propiedades físicas diferentes, de manera que, una porción del haz se trasmite al segundo medio en forma de haz reflectado y la otra porción vuelve vuelve al mismo m ismo medio en forma de haz reflejado. Según las leyes que rigen la reflexión el haz incidente y haz reflejado forman el mismo ángulo con la superficie de separación. Existen dos tipos de reflexión: La reflexión especular, en la que el ángulo del haz incidente es igual al ángulo del haz reflejado. • La reflexión difusa, que se produce en superficies rugosas o no tan pulidas en la cual el ángulo del • haz incidente va a ser diferente al del haz reflejado. Forma como una semiesfera. En una misma superficie pueden combinarse estos dos tipos de reflexión y para la espectrofotometría de reflectancia la que nos importa es la reflexión difusa.
2.2. Fundamentos matemáticos
La fotometría de reflectancia mide la intensidad de la radiación reflejad y difusa en relación a la intensidad del haz incidente. Para p der relacionar la concentración de un deter minado parámetro de una muestra con la luz reflejada de manera difusa necesitamos la relación de una serie de ecuaciones matemáticas. Se define la reflectancia (R como el cociente de la intensidad de la luz reflejada difusa y la intensidad de la luz del haz incidente . R
=
I r I o
% R
=
I r I o
× 100
La R al igual que la T no guarda una relación directa y lineal con la conc entración. La densidad de reflectancia o densidad de reflexión s igual al –log K. DR= -log R Pero esta densidad de reflectancia no guarda una relación directa y lin al, por tanto para hacerla directa y casi lineal hay que relacio arla con una serie de ecuaciones matem ticas que son la KubelkaLlunk y Williams-Claper.
2.3 Instrumentación básica A los instrumentos que se emplean en esta técnica se les denomina espe ctrofotómetros, fotómetros de reflectancia o reflectómetros. Sus componentes son: • Fuente de luz.- Las má empleadas son o bien lámparas de haluros de tung teno o lámparas de arco de xenón y los LED (diodos emi ores de luz, son láseres de diodos, son emisiones discretas monocromáticas). Sistemas ópticos.- Compuestos por lentes, espejos, • filtros o monocromadores o or una esfera integradora o esfera de Ulbricht. Dependiendo de cada aparato en concreto se usarán unos u ot os de estos componentes.
•
•
Detectores.- Varían en función del aparato tipo y colocación, pueden er fototubos o diodos en serie. Sistemas para contener la muestra.- La muestra se deposita sobre l s reactivos de fase sólida disponibles en varios formatos.
La composición básica es: una parte que forma el soporte, una parte reflectante y una parte reactiva y además las hay que tienen otras capas para otras funciones. 1. La capa soporte.- V a actuar como soporte para colocar sobre ella las restantes capas. A veces ésta está cubie ta de una sustancia reflectante y va a actuar como capa reflectante. 2. La capa reflectante . Tiene como función reflejar la luz que lleg a a ella. La característica más importante que debe tener es que no debe absorber a la longitud de onda del análisis. 3. La capa reactiva.- Contiene en forma deshidratada los reactivos necesarios para que se produzca la reacción. Los reactivos se hidratarán al depositar sobre ellos la muestra. A veces esta capa no es única porque hay reactivos incompatibles, sustancias interferentes. •
•
Tiras reactivas .- Están constituidas básicamente por una lámina ígida que sirve de soporte a una matriz formad generalmente por fibras de celulosa. E ta matriz es la que está impregnada por los reactivos. Hay dos tipos de tiras que se añade a una capa difusora que permite la distribución homogénea de la muestra sobre esa matriz. Otras tiras que presentan una capa s paradora de plasma que generalmente es e fibra de vidrio. Se usan para determinaciones de sangre total (retiene células). Reactivos multicapa o slides.- Este sistema sólo se utiliza para bioquímica sanguínea y no para orina. El más utilizado es de la casa Kodak. Tiene la apar iencia de una diapositiva y están constituidas bá icamente por 4 capas de naturaleza gelat inosa enmarcadas por un soporte de poliéster. La capa difusora es dónde se coloca l muestra y a ella se le incorporan sustancias capaces de reflejar la luz de forma que act úa como capa reflectante. Esta misma capa pue e actuar reteniendo células u otras partícul s que eliminarán posibles interferencias. La capa reactiva que es en la que están los reactivos en fase sólida que puede ser uno o vari s según las necesidades incluso puede te er capas accesorias para eliminar posibles inter erencias. La capa soporte que es de plásti o transparente y es sobre la que se depositan las demás capas. También las hay para determinar electrolitos empleando otras técnicas.
3. Utilidades Se utilizan para análisis de or inas bien por inspección visual o por fotome ría de reflectancia. Para bioquímica sanguínea existen aparatos que nos permiten la d terminación de múltiples parámetros (glucosa, colesterol, TG …) Hay aparatos que nos dan un análisis rápido de un solo parámetro, por e emplo los que determinan la glucosa.
