Existen multitud de fijadores en los manuales de técnicas histológicas. Aquí sólo trataremos aquellos que consideramos de uso más común para la observación de tejidos al microscopio, es decir, aquellos que mejor preserven la estructura celular. Los fijadores líquidos químicos son los más frecuentemente empleados, bien con un solo tipo de sustancia fijadora o con mezclas de varias de ellas.
EL ALCOHOL ABSOLUTO. LA ACETONA FRIA . EL FORMALDEHIDO. EL GLUTARALDEHIDO. GLUTARALDEHIDO. EL ACIDO ACETICO. EL TETROXIDO DE OSMIO. EL ACIDO PICRICO. EL DICROMATO DE POTASIO. EL CLORURO DE MERCURIO. EL ACIDO CROMICO.
Fija por deshidratación y se usa entre el 95 y 99 %. Es un buen elemento para preservar moléculas, como ciertas enzimas, propiedades antigénicas, glucógeno, pigmentos y para las extensiones citológicas. Debido a que deshidrata, a la vez que fija, se puede usar también como un conservante de las muestras. Tiene inconvenientes como el endurecimiento y la retracción de los tejidos.
Es preferida cuando se efectúan ciertos estudios histoquímicos para enzimas, especialmente lipasas y fosfatasas. No se usa como fijador de rutina porque causa distorsión nuclear y compresión del citoplasma, además no preserva el glucógeno.
La formalina neutra al 10% estabilizada esta considerada como el mejor fijador general para todos los espsìmenes patológicos porque preserva el número más grande de estructuras, requiere un período de fijación relativamente corto, puede ser usada para conservar tejidos a largo plazo sin endurecer el tejido.
. Forma puentes entre las moléculas de los tejidos. Se usa a una proporción de entre el 0,5 y el 3 %. Tiene una alta capacidad para preservar la estructura celular, por lo que es el fijador de referencia para observación de ultraestructuras celulares con el microscopio electrónico.
Forma puentes entre moléculas. Se emplea al 1 % en soluciones tamponadas. Es buen fijador de la ultraestructura de la célula por lo que se emplea habitualmente para las observaciones con el microscopio electrónico. Es un buen fijador para grasas y membranas celulares.
La fijación la produce porque las sales del tipo picrato coagulan con las proteínas de los tejidos. Se suele usar el 2 % de una solución saturada de ácido pícrico. Preserva bien la estructura celular, no produce retracciones cuando el tiempo de fijación es óptimo, preserva bien glucógeno y lípidos. Es un buen fijador para tinciones generales puesto que favorece la unión de los colorantes. Hay que eliminarlo completamente antes de proceder a la inclusión en ceras como la parafina.
Su proceso de fijación consiste en cambiar el estado coloidal de las proteínas. Se utiliza a una concentración que varía entre el 1 y el 5 %. Es el fijador ideal para ácidos nucleícos y nucleoproteínas. Como inconvenientes cabe destacar la destrucción de las mitocondrias y mala fijación de membranas y citoplasma. Se suele usar en combinación con otros fijadores.
Para resumir, la formalina neutra estabilizada con fosfatos de sodio es el fijador mas versátil y practico, su formula: Formaldehido al 37%..........................100.0 ml. Agua destilada…………………………..900.0 ml. Fosfato de sodio, monobásico…………….4.0 g. Fosfato de sodio, dibásico………………….6.5 g. Metanol…………………………………………20 ml.
Los tres pasos del procesamiento de tejidos son: deshidratación, aclaramiento, e infiltración. Pasos secuenciales designados para remover toda el agua que se pueda extraer del tejido y reemplazarla con un medio que solidifique y nos permita realizar cortes de los tejidos.
Para la deshidratación se prefieren los alcoholes etílico e isopropìlico, los cuales no están en la lista de sustancias controladas . El uso de alcoholes graduados que vayan de la concentración mas baja hasta la mas alta es de rutina. El uso de procesadores automáticos perfeccionan el procesamiento, utilizando calor, vacio, presión y agitación.
El xileno es agente aclarante mas utilizado. Es generalmente usado para la inclusión ruti naria en parafina. Otros medios de inclusión como la celoidina y procesamientos en plástico también son utilizados con los mismos solventes.
Formol al 10% buferado 1 hora. Formol al 10% buferado 1 hora. Alcohol 8O°, 1 hora. Alcohol 99°, 1 hora. Alcohol absoluto I, 1 horas. Alcohol absoluto II, 1 horas. Alcohol absoluto III, 1 horas. Alcohol absoluto IV, 1 hora. Xilol I, 1 hora. Xilol II,1 1/2 hora. Parafina I, 1 1/2 horas. Parafina II, 1 horas.
El horno microondas (HM) fue introducido en Anatomía Patológica en los años 80, siendo utilizado en varios procesos dentro del laboratorio. Se realizó la comparación de algunos parámetros histológicos, histoquímicos e inmunohistoquímicos, en muestras de tejido normal, procesados paralelamente de manera convencional y en HM. Se seleccionaron muestras en duplicado de diversos tejidos; se procesaron convencionalmente (PC) en un procesador automático y en HM utilizando un protocolo estandarizado previamente
. Se realizaron tinciones histológicas e histoquímicas (H-E, PAS y Azul Alcian) e inmunohistoquímicas (CD45, CD3, CD20 Citoqueratinas AE1/AE3, 5/18, 20, S-100, Receptores de Estrógeno y Progesterona). Las técnicas se escogieron según tipo de tejido. Se evaluó la calidad de los preparados (tinción nuclear, tinción citoplasmática y calidad general), la intensidad de las tinciones histológicas, histoquímicas e inmunohistoquímica de marcadores escogidos
La histología de hueso requiere de la remoción de sales de calcio sin alterar los detalles celulares. Fijar los tejidos en formalina al 10% neutra estabilizada por lo menos 5 días. Se realizan secciones adecuadas al tamaño del cassette, seguidamente se colocan los especímenes en un recipiente con solución diaria de acido clorhídrico-acido fórmico al 8% si no son tan duras y al 16% sin son huesos muy duros.
SOLUCION MATRIZ DE FORMOL-ACETATO DE SODIO(SOLUCION A). Formaldehido al 37%.............................10 ml. Acetato de sodio………………………………………….2.0 g. Agua corriente……………………………………..90 ml
SOLUCION DIARIA DE FORMOL-GLICEROL Solución acetato de sodio-formol………90 ml. Glicerina (glicerol)…………………………10 ml. Colocar los tejidos en solución no mas de 8 horas para no tener efectos adversos. Procesar los tejidos en la forma normal usual.
