EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE LÍPIDOS.
Abstr Abstract act:: In the laboratory, totals lipids were extracted from de egg yolk, its determination is made by weighing difference after evaporation of the supernatant and the experimental value obtained was 0,8585 g and the percen percentag tage e value value of 10,4! 10,4!"" #he #he analys analysis is of the lecith lecithin in and choles cholester terol ol were were perfor performed med,, to phosphatidylcholine or lecithin was made the determination of phosphate, choline and glycerol, the results showed respectively a blue coloration of the solution, the formation of the pink crystals, and detachment of gases white foul$smelling and irritable% where a positive result is observed for all" #he &holesterol semi 'uanti 'uantitat tative ive analys analysis is was perfor performed med by ()$) ()$)is is spectr spectropho ophotom tometr etryy, its presenc presence e was was determ determine ined d at a wavelength wavelength of 550nm, and classical classical analysis was performed performed taking taking advantage advantage of the saponification saponification process lipids with bases, specifically *+, obtained a good outcome of the procedure because little bubbles was observed" Keywords: total lipids, lecithin, phosphatidylcholine, phosphate, glicerol, saponification" INTRODCCION. -os l.pidos son sustancias org/nicas insolubles en agua, agua, extra. extra.das das de teido teido animal animal o vegeta vegetal,l, por medio de solventes org/nicos como ter, clor clorof ofor ormo mo,, tetr tetrac aclo loru ruro ro de carb carbon ono, o, benc bencen eno, o, etctera" 2io'u.micamente hablando la importancia de estas estas sustan sustancia ciass radica radica en 'ue consti constituy tuyen en formas formas de almace almacenam namien iento to de energ. energ.a, a, adem/s adem/s forma orman n part parte e de las est estruct ructur uras as celul elular ares es,, principalmente de las membranas biol3gicas" -os l.pidos pueden ser separados por medio de caracter.sticas propias como la polaridad ya 'ue existen entre estas molculas no polares, como los trigl rigliicri crido doss y mol molcul culas as pola polare ress como como los los fosfol.pidos y esfingol.pidos, adem/s de molculas de tipo tipo terp terpen enoi oide de como como los los este estero roid ides es,, los los terpenos y algunas vitaminas" e pueden clasificar divi dividi dirr como omo /cid /cidos os gras grasos os,, trig triglilice cero rolles, es, fosfoglicridos y l.pidos no fosforilados" 6sta 7ltima categor.a se compone de gangliosidos, cere cerebr bros osid idos os,, sulf sulfon onl.l.pi pido dos, s, prot proteo eol.l.pi pido dos, s, esteroides, terpenos eicosanoides" -as lecitinas son molculas 'ue existen en formas de sales internas o witeriones, ya 'ue contienen carg carga a nega negatitiva va en el /cid /cido o fosf fosf3r 3ric ico, o, y carg carga a posi posititiva va en el trim trimet etililam amin ino o de la coli colina na"" 6l p isoe isoel lct ctri rico co es 9,:, 9,:, son son blan blanca cass de aspe aspect cto o grasoso, cuando se exponen a la lu y al aire toma toman n una una colo colora raci ci3n 3n caf caf,, debi debido do a la auto auto$$
oxid oxidac aci3 i3n n y desc descom ompo posi sici ci3n 3n"" on on solu solubl bles es en solven solventes tes org/ni org/nicos cos para para l.pido l.pidos, s, except excepto o en la acetona" o higrosc3picas por lo 'ue en meclas con agua forman soluciones coloidales nebulosas" (na caracter.stica 7til para la separaci3n de los diversos tipos de l.pidos est/ en 'ue el colesterol 'ue es el esteroide m/s abundante en la naturalea, el cual al ser insaponificable se puede ext extraer raer con con del del sol solvent vente e apol apolar ar lueg luego o de ;1< tratamiento con hidr3xido de potasio"
!ETODOLO"IA. -a metodolog.a empleada y los reactivos fueron acor acorde dess a las las espe especi cifficac icacio ione ness de la gu. gu.a correspondiente a la pr/ctica"
AN#LISIS DE RESLTADOS. Peso de $e%a e&tera $e%a $e%a %acerada 'co& ()e se traba*+, traba*+,
19,=1: g 8,1099 g
Tab-a . >esos yema de huevo" Eta/a L2/1dos tota-es
A&3-1s1s de Lec1t1&a
A&3-1s1s de
Pr)ebas
Obser0ac1o&es e obtuvieron 0,8585 g $$$$$$$ de l.pidos e dio una coloraci3n ?osfol.pidos verde oscura e formaron cristales &olina rosados brillantes e observa la formaci3n @licerol de vapores blancos e observa coloraci3n &olesterol aulada Aesid Aesiduo uoss de e obs observ erva a la form formac aci3 i3n n
co-estero-
abones
de burbuas en el agua donde se disolvi3 el precipitado
molculas de molibdato unidas a un centro de fosfato como se observa en la siguiente figura"
Tab-a 4. +bservaciones pruebas realiadas" 1. Lípidos Totales. LipidosTotales =
0,8585 glipidos 8,2295 gyema
x 100 =10,43
6l porcentae de l.pidos totales encontrado en literatura para la composici3n de la yema en su parte s3lida BsecaC es de 95, !, el cual es mucho m/s alto del obtenido en la pr/ctica, aun'ue en el mismo texto se reconoce la dificultad 'ue representa extraer los l.pidos de la yema ya 'ue en esta se encuentran unidos a lipoprote.nas, por lo cual se forman grumos los cuales se pueden ver en la yema cocida, tambin se observ3 en el s3lido desechado en las filtraciones y en los restos s3lidos 'ue se perd.an en la transferencia de la soluci3n a diferentes envases, es muy dif.cil separar cuantitativamente los l.pidos por extracci3n con solventes org/nicos ya 'ue sus caracter.sticas de solubilidad no son tan diferentes, solamente son parciales por lo 'ue el mtodo aplicado en esta pr/ctica ser/ de car/cter cualitativo" ;=< 2. ANÁLISIS DE LECITINA 2.1.
Prueba de Fosfato
-a reacci3n de la prueba de fosfatos con /cido molibdico BH 2 o! "C es la siguiente 3 −¿+ 12 H 2 O 3−¿+ 12 H 2 Mo O4 ⇋ PMo 12 O40
¿
PO 4¿
-a reacci3n con el /cido asc3rbico y el ani3n de molibdato con fosforo resulta en 7−¿ ( azul ) 3−¿ → 2 Furfural + PMo12 O 40
¿
¿
2 ac . ascorbico + PMo12 O 40
-a oxidaci3n de /cido asc3rbico se muestra en los anexos" 6l compleo aul es D$keggin ion tambin denominado heteropol/cido, posee una estructura tridimensional de alta simetr.a con enlace entre
F15)ra . Eodelo tridimensional de un D$keggin ion Bsin carga indicadaC, 'ue representa el compleo >Eo1=+40:$ en el cual los /tomos de oxigeno est/n en roo, los /tomos de molibdeno est/n en purpura y el /tomo de fosforo esta en narana oscuro" 6l color verde oscuro y la consistencia turbia de la soluci3n son uno de los resultados probable para la prueba ya 'ue los fosfatos como tal aparecen como puntos aul$verdes, lo cual pudo deberse a una hidrolisis parcial del fosfoster de colina ya 'ue el compleo de molibdeno como tal es de color aul, aun'ue este se forma solo con el ani3n fosfato, por lo 'ue de no estar libre no se dar/ esta coloraci3n" >ara lograr la hidrolisis completa se usan soluciones fuertemente acidas, adem/s 'ue seg7n las tcnicas 'ue consultadas se re'uiere de /cido asc3rbico fresco lo cual no es f/cil asegurar, sin embargo seg7n las pruebas realiadas se confirma la presencia de fosfato en la yema de huevo, lo cual es de esperarse en la fracci3n 'ue contiene lecitina ya 'ue esta es un fosfol.pido" ;< 2.2.
Prueba de Coli#a.
-a prueba de colina dio positiva lo cual concuerda con el hecho de 'ue en la parte de los fosfol.pidos 'ue es un =8 ! de los l.pidos totales, un : ! de estos es ?osfatidilcolina lo 'ue representa un =0,44 ! de los l.pidos totales en la yema, por lo 'ue aun'ue la cantidad de l.pidos totales extra.dos se encuentre por debao de lo reportado aun as. es l3gico 'ue la prueba arroe un resultado positivo ya
'ue la hidr3lisis acida la ?osfatidilcolina produce la &olina 'ue reacciona con el reineckato o al de Aeinecke BN678Cr'N69,4'SCN,7.64OC de amonio formando el compuesto rosa iridiscente BbrillanteC .87
compleo presenta absorci3n en la longitud de onda de verde$amarillo Baproximadamente entre 540$5:0 nmC lo cual concuerda con lo esperado seg7n el experimento 'ue deb.a absorber en una longitud de onda de 550 nm" ;5<
F15)ra 9. Aeacci3n de prueba de la acrole.na, prueba para glicerina" $.2.
F15)ra 4. 6structura ?osfatidilcolina BarribaC y &olina BabaoC" e forman cristales rosados iridiscentes como resultado de la formaci3n del compleo reineckato$ colina el cual precipita y forma los cristales rosados, el grupo metilamina cuaternario es 'uien interact7a con el ani3n reineckato como contra$ion precipitando en un solvente no tan polar como lo es el etanol ya 'ue su disociaci3n en este entorno ser/ menos favorecida" 2.$.
Prueba de %li&erol.
6sta prueba dio positiva ya 'ue es compuesto base estructural de los fosfol.pidos por lo 'ue su presencia era esperada, en la soluci3n se observa la formaci3n de dos fases y la reacci3n de esta soluci3n desprende vapores claros de olor desagradable no muy intenso"
9. AN#LISIS DE COLESTEROL. 9..
Colesterol
-a prueba espectromtrica dio positiva ya 'ue al disolver unos pocos gramos del colesterol obtenido en los procesos de extracci3n con disolventes por etapas disolvindolos con etanol y adicionando cloruro frrico se form3 un compleo de coloraci3n violeta aulado mas seg7n la teor.a esta coloraci3n mostrada es el color complementario por lo 'ue el
'esiduos (abo#osos
6l residuo 'ue 'ueda en el papel filtro es poco m/s la soluci3n resultante de los lavados de este con agua presentaba un poco de espuma al ser agitada por lo 'ue se afirma la presencia de restos abonosos, los cuales provienen de la hidr3lisis b/sica de triglicridos en la yema, los cuales se encuentran en un 99 ! de los l.pidos totales" -o 'ue muestra 'ue existe un error en el proceso de extracci3n de estos o en su proceso de saponificaci3n, el encapsulamiento de l.pidos dentro de agregados de prote.nas desnaturaliadas puede ser una de las raones de 'ue los triglicridos no se liberaran de manera esperada adem/s 'ue las condiciones de hidrolisis de os triglicridos son dbilmente b/sicas para procesos indicados en normas de determinaci3n en la cual se usa soluci3n concentrada de *+ B90gF40m-C para el tratamiento de la muestra y la separaci3n de las fracciones" ;9<
PRE"NTAS. . ;A ()< se debe -a co-orac1+& 0erdosa=5r1s de a-5)&as ye%as de >)e0os coc1das? -a coloraci3n verde$gris/cea presente en las yemas de algunos huevos cocidos no es t3xica, esta se observa alrededor de la yema y se debe a la descomposici3n de prote.nas presentes en la clara 'ue contienen aufre 'ue se libera en forma de 64S, este proceso se acelera gracias a la
temperatura de cocci3n 'ue deber.a ser un poco m/s baa de 100 G& y al tiempo 'ue en 'ue esta se realice, el cual se recomienda sea de 1=$15 min dependiendo de tamaHo del huevo%;< la yema contiene hierro 'ue al reaccionar con el sulfuro de hidrogeno produce FeS Bmarr3n oscuroC y Fe4S9 B verde$amarilloC" 6l aire presente en el huevo logra 'ue el FeS se oxide a FeO BverdeC, los huevos frescos contienen menos aire por lo 'ue esta coloraci3n verde m/s oscura puede indicar 'ue tan fresco est/ el huevo" (na ve finalia el proceso se para esta descomposici3n de prote.nas con agua a temperatura ambiente% aun'ue, la parte positiva de esta coloraci3n est/ en 'ue puede indicar una cocci3n es completa por lo cual el huevo no deber.a presentar una importante actividad bacteriana" ;10<
4. ;@)< >)b1ese /asado s1 -a etracc1+& de co-estero- &o se >)b1era rea-1Bado e& co&d1c1o&es a&>1dras? ;@)< res)-tados es/erar2a? Jue el an/lisis de la -ecitina fuese casi nulo o mucho menor de lo esperado ya 'ue este l.pido gracias a su cabea polar logra una meor interacci3n con el agua formando micelas BprobablementeC lo 'ue impedir.a su extracci3n exitosa por caracter.sticas de solubilidad, gracias a esta interacci3n con el agua es 'ue se usa como agente emulsionante en muchos productos Bcomplementado en preinformeC" ;11<
9. ;@)< se co&oce co%o %ater1a 5rasa sa/o&11cab-e y &o sa/o&11cab-e? E& ()< /)&to se a/-1c+ esto e& -a /r3ct1ca. -os l.pidos saponificables son a'uellos 'ue pueden sufrir saponificaci3n y 'uienes no presentan esta reacci3n se denominan insaponificables" &omo tal la saponificaci3n es una hidr3lisis cataliada por bases" -os /lcalis hidrolian las grasas f/cilmente para producir ab3n y glicerina en este grupo se encuentran los Kcilglicridos, ?osfoglicridos, 6sfingol.pidos, -ipoprote.nas, &eras" 6l material insaponificable es un conunto de sustancias 'ue se encuentran frecuentemente disueltas en el aceite o en la grasa 'ue no sufren saponificaci3n gracias a 'ue no presentan grupos de /cidos grasos 3sea 'ue no se puede hidroliar para producir estas bases conugadas 'ue se conocen
como ab3n, en este grupo se encuentran los >rostaglandinas, leucotrienos y tromboxanos, Lerivados del isopreno, 6steroides" ;1=<
7. ;Por ()< se aco&se*a a&a-1Bar e- co-esteroe& >)e0os /or t
CONCLSIONES. -a separaci3n de los l.pidos por medio de extracci3n discontinua con disolventes es un mtodo con un car/cter m/s cualitativo 'ue cuantitativo por lo 'ue es raonable el hecho 'ue las determinaciones cuantitativas posean una mala precisi3n" K pesar de 'ue la extracci3n de l.pidos totales no fue satisfactoria, se logr3 obtener buenos resultados para los diferentes an/lisis" -a determinaci3n de fostato, colina y glicerol es un buen medio para la determinaci3n de la presencia de lecitina el l.pidos puesto 'ue estos son los componentes principales de la misma"
RECO!ENDACIONES. 6n literatura consultada y seg7n procedimientos implementados en el an/lisis de l.pidos en huevo se tiene 'ue la porci3n de etanol 'ue se adiciona a la yema sirve para desnaturaliar las prote.nas presentes en esta porci3n del huevo, m/s estas probablemente ya fueron desnaturaliadas por el calor as. 'ue no deber.a adicionarse tanto etanol adem/s 'ue como solvente de l.pidos no es muy bueno ya 'ue es bastante polar, en los procedimientos de an/lisis se usa cloroformo Bun poco m/s polar 'ue el terC pero en la soluci3n de extracci3n de los l.pidos totales debe estar en mayor proporci3n ya 'ue se usa como solvente
principal, adem/s se aplican tcnicas como el ultrasonido para la liberaci3n de los l.pidos al hacer la muestra m/s homognea y de menor tamaHo de part.cula;:<" &abe mencionar 'ue se trabaa normalmente con huevo crudo ya 'ue es m/s f/cil extraer de a'u. los l.pidos con metodolog.as diferentes a la extracci3n solamente con solventes" &uando se usa yema seca m/s esta re'uiere un tratamiento m/s compleo para determinar contenido de colesterol" ;8<
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