Extendido Cromosómico
Nicolás Carrero Muñoz
Ingeniería Biológica, Facultad de de ciencias, Universidad Nacional de Colombia Colombia Sede Medellín
[email protected] 06/Septiembre/ 2016
RESUMEN La citogenética es el estudio de los cromosomas y de las aberraciones que pueden presentar en una especie de interés. El extendido cromosómico es un procedimiento que se lleva a cabo para observar estos cromosomas en la metaase de la mitosis y anali!arlos. En esta pr"ctica se llevó a cabo un barrido en el que se contaron #$$$ n%cleos entre mitóticos y activos con el ob&etivo de calcular el 'ndice mitótico( adem"s de observar ) metaases de interés a partir de las cuales se pueden *acer varias inerencias. Se estudió una muestra potencial de *umano en donde se calculó un 'ndice mitótico de ).+,( éste 'ndice mitótico est" dentro del el rango esperado para una persona sana -) a ,/.
alabras Clave cromoso mosoma mas, s, cario arioti ti!o !o,, meta meta"a "ase se,, índi índice ce mitó mitóti tico co,, citog itogeen#ti n#ticca. !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! #. 0ntroducción
"a cito cito#e #en$ n$ti tica ca es el estu estudi dio o de los los cromos cromosoma omass % de las aberrac aberracion iones es &ue estos pueden tener' "os cromosomas son estructuras comple(as donde se con#lomeran se#mentos de )*N condensado % comprimido con la a%uda de prote+nas llamadas ,istonas' *urante la di-isión celular se condensan lo su.iciente como para poder ser .ácilmente
anal analiz izad ados os a 1'00 1'000 0 aum aument entos en un microscopio óptico 1' Cuan Cuando do el ncl ncleo eo celul celular ar comie comienza nza el proceso de di-isión cariocinesis34 esa maraña de ,ilos inicia un .enómeno de condensación pro#resi-o &ue .inaliza en la .orm .ormaci ación ón de entid entidad ades es disc discre reta tass e independiente independientes s los cromosomas' cromosomas' 5or lo tanto4 tanto4 cromat cromatina ina % cromos cromosoma oma son dos
aspectos mor.oló#icamente distintos de una misma entidad celular 2' ) partir del análisis de la meta.ase obser-ada4 se puede ,acer un conteo de cromosomas donde se identi.ica el nmero de cromosomas % las aberraciones &ue pueden presentar' 5ara poder -er los cromosomas con un microscopio4 es necesario teñirlos' Cuando se los tiñe4 los cromosomas parecen tiras con 7bandas7 claras % oscuras' "a representación #rá.ica la .oto#ra.+a real de una c$lula3 de todos los 86 cromosomas4 en sus respecti-os pares4 recibe el nombre de 7cariotipo7 El cariotipo normal de la mu(er se escribe 864 994 mientras &ue el cariotipo normal del ,ombre se escribe 864 9:' El análisis estándar del material cromosómico e-ala tanto el nmero como la estructura de los cromosomas con una #ran precisión' "os análisis cromosómicos en #eneral se realizan a partir de una muestra de san#re #lóbulos blancos34 muestras prenatales4 biopsia de piel o al#una otra muestra de te(ido 8' *urante la obser-ación al microscopio es comn obser-ar n$cleos activos, n$cleos inactivos % ncleos en meta"ase. Se di.erencian unos de otros por la coloración &ue ad&uieren tras la preparación de la muestra' Es decir4 los ncleos acti-os se -en de color rosado o ma#enta claro4 mientras &ue los ncleos inacti-os se les apreciarán con un color morado o prpura' "as meta.ases se identi.ican por&ue los cromosomas son -isibles claramente' ) la relación ente el nmero de mitosis % las c$lulas totales se le llama %ndice Mitótico &IM', cu%o cálculo es rele-ante como un indicati-o de posibles problemas patoló#icos ;' El
cuenta los ncleos inacti-os' Se calcula de la si#uiente manera ℑ=
Cantidad demitosis Núcleos totales
x 100 ( 1 )
Ecuación #. =órmula para el cálculo del +ndice mitótico
1. Materiales y métodos 1.# Materiales
> Microscopio > 5laca con extendido cromosómico > 5lantillas
1.1 2bservación cromosómicos.
de
extendidos
Se tomó la placa con el extendido cromosómico % se inició un barrido tal como se muestra en la .i#ura 1' *urante este recorrido4 se .ueron identi.icando los ncleos acti-os de los inacti-os % las meta.ases4 se contaron 1000 ncleos acti-os % mitóticos' Se eli#ieron ; meta.ases &ue se analizaron4 contando el nmero de cromosomas' Se calculó el +ndice mitótico'
3igura #. ?epresentación #rá.ica de cómo se debe lle-ar a cabo el barrido a tra-$s de la placa
+. Resultados
No' Ncleos No' Ncleos No' Ncleos )cti-os en Meta.ase @otales mitosis3 A8B
;
1000
4abla #. Conteo de ncleos acti-os % en meta.ase
ℑ=
53 1000
x 100 =5.3
Meta.as e
No' Cromosoma s
1
8
2
86
88
8
8;
;
86
4abla 1. Conteo de cromosomas en las meta.ases esco#idas4 % la presunta especie usada se#n el nmero promedio de cromosomas contados'
4abla +.
5. 6iscusión
"a obser-ación del extendido cromosómico en el microscopio depende muc,o de cómo se ,a tratado la muestra. En ocasiones se pueden lle-ar a cabo p$rdidas de in.ormación #en$tica dentro del radio del ocular o por&ue los cromosomas se dispersan muc,o' *urante la obser-ación de las meta.ases esco#idas4 % durante su posterior análisis4 .ue arduo contar los cromosomas %a &ue por la mencionada dispersión se pierden en el ocular o a lo lar#o de la placa'
Con respecto a la especie tomada para este experimento4 no se ase#ura &ue sea un ,umano %a &ue puede e-idenciarse una -ariación en el nmero de cromosomas contados4 pero se puede decir con cierta con.ianza &ue es un ,umano pues las imá#enes de las mitosis 2 % ; tienen una me(or distribución de los cromosomas4 además de una me(or resoluciónD se recomienda entonces utilizar un soporte para la cámara con el .in de obtener imá#enes de me(or calidad'
•
Se#n el nmero de cromosomas contados4 se intu%e &ue la especie es un ,umano'
•
El cálculo del
). 7onclusiones •
Se debe contar con ,erramientas de bbuena calidad en el labotatorio4 &ue #aranticen un óptimo desarrollo del experimento de inter$s'
1
Mc*onald *'4 200F' Citogen#tica B(sica 4 Seattle' G)4 HS) en l+nea' *isponible en ,ttp//III2'ua,'es/biomodel/cito#ene/d%nacare/#enin .o',tm
2
5anzera4 ='4 ?uben 5$rez % :anina 5anzera'
Identi"icación cromosómica, carioti!o' =acultad de Ciencias Jeterinarias4 Hni-ersidad Nacional de "a
•
•
El monta(e de extendido cromosómico es una tarea cu%a realización debe lle-arse a cabo de manera cuidadosa4 de tal .orma &ue la muestra se pueda obser-ar adecuadamente en el microscopio' "a obser-ación del extendido cromosómico es una tarea ardua &ue re&uiere de una cantidad considerable de tiempo % de la paciencia del in-esti#ador para obser-ar con detalle las me(ores meta.ases % esco#er a&uellas &ue sean más .áciles de analizar para su posterior análisis'
5lata'
5i&ueras4 K'='4 =ernández 5eralta4 )'M'4 Lernández4 K'S'4 onzález )#uilera4 K'K' 2002' )en#tica' )riel Ciencia4 España4 8B8 pp'
88>F0;6>;'
8
o. Hta,' *studios cromosómicos+ carioti!o, bandeo, etendido, -ibridación "luorescente in situ &FIS' / an(lisis de microarreglo cromosómico. en l+nea' *isponible Hni-ersit%
en ,ttp//,ealt,care'uta,'edu/,ealt,librar%/related/doc' p,pOt%pePA0QidP50;228
;
"ópez Kuan ' Manual de )en#tica. Hni-ersidad Nacional de Colombia' Sede Medell+n'
